專利名稱：：生產(chǎn)l(+)-酒石酸及其鹽的方法以及該方法中所用的微生物菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種新的生產(chǎn)L(+)-酒石酸或其鹽的方法，以及該方法中所用的能將順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽轉(zhuǎn)化為L(+)-酒石酸或其鹽的舉生物。具體地，本發(fā)明涉及利用所述微生物生產(chǎn)L(+)-酒石酸或其鹽的方法。進一步地，本發(fā)明還涉及所述微生物在生產(chǎn)L(+)-酒石酸或其鹽中的用途，
背景技術(shù)：
酒石酸可以用于諸如以下行業(yè)在食品行業(yè)可作為諸如食品添加劑、增味劑以及食用色素成分之一；在醫(yī)藥行業(yè)諸如用于抗結(jié)核藥乙胺丁醇的生產(chǎn)，作為不可替代的光學(xué)異構(gòu)體拆分刑，用來拆分其中間體2-氨基丁醇;在化學(xué)工業(yè)及其它工業(yè)，諸如用于印染的防染劑、照相顯影刑、金屬離子隱蔽劑，電鍍、制革及制鏡行業(yè)，目前酒石酸的需求正在逐年遞增，因此迫切需要擴大酒石酸生產(chǎn)規(guī)模，提高產(chǎn)品質(zhì)量，以滿足國內(nèi)、國際巿場需求,.L(+)-酒石酸(2R,3R)-2,3—二羥丁烷-1，4-二羧酸]是一種天然結(jié)構(gòu)的有機酸，在某些植物果實如葡萄、羅望子果等中有較高的含量。過去，生產(chǎn)L("U-酒石酸的主要方法是利用葡萄酒的副產(chǎn)物酒石或羅望子果為原料經(jīng)加工制得，或者從酒石中提取，或者以葡萄糖為主要原料通過一步發(fā)酵法提取。而采用具有順式環(huán)氧琥珀酸水解酶的微生物生產(chǎn)"+)-酒石酸是目前U+)-酒石酸生產(chǎn)的發(fā)展方向，其原理如下順丁烯二酸酐—順丁烯二酸一一順式環(huán)氧琥珀酸—L(+)-酒石酸以順丁烯二酸酐為原料經(jīng)加水得到順丁烯二酸溶液，再以鵠酸或鎢酸鹽為催化劑使順丁錄二酸與過氧化氳反應(yīng)制得順式環(huán)氧琥珀酸，最后利用微生物順式環(huán)氧琥珀酸水解酶將順式環(huán)氧琥珀酸水解為L(+〗-酒石酸。真有L(+)-酒石酸合成酶的微生物主要是細菌，目前報道的有無色杵菌屬(Achromobacter)*醋酸桿菌屬(Acetobacter)、土壤桿菌屬《Agrobacterium)、產(chǎn)堿桿菌屬(Aicaligenes)、不動桿菌屬(Acin改obacter),諾卡氏菌屬(Nocardia)、根瘤菌屬(Rhizobhim)、假單胞菌屬(Pseudomonas)和棒桿菌屬(Coryncbacterium),采用紅球菌屬微生物制取L(+)-酒石酸有見報道，如US4,(H0，072采用RhodococcusraberDSM44319菌種、US.6，379,938采用Rhodococcusrhodochrous菌株等。但未見采用本發(fā)明所述的微生物菌抹Rhodoeoccussp,USA-AN(H2生產(chǎn)L(+)-酒石酸的報道^本發(fā)明所采用的微生物菌抹是發(fā)明者從土壤中分離獲得的一個新菌株，該菌抹能將順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽轉(zhuǎn)化為L(+)-酒石酸或其鹽，滿足了國內(nèi)、國際市場不斷增長的L(+)-酒石酸或其鹽的需求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)稱人經(jīng)過長期和深入細致的研究，從土壤中分離獲得了一種新的微生物菌抹，它能夠?qū)㈨樖江h(huán)氧琥珀酸或其鹽轉(zhuǎn)化為L(+)-酒石酸或其鹽。該微生物菌株被確認為是紅球菌USA-AN012的又一個新種命名為紅球菌USAAN-012BK-98(Rhodococciissp.USA-AN012BK-鄰)，該菌抹已經(jīng)于2006年7月13日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心，保藏號為CGMCCNo.HS6。本發(fā)明的目的之一是提供一種能將順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽轉(zhuǎn)化為L(+)-酒石酸或其鹽的微生物；本發(fā)明的另一目的是提供一種具有與SEQiDNO:l序列一致的16Sr)NA序列的微生物。本發(fā)明提供的微生物優(yōu)選為紅球菌USA-AMH2BK-98a本發(fā)明提供的微生物優(yōu)選是具有保藏號為CGMCCNo.1756的紅球菌。本發(fā)明還提供具有SEQlDNO:2，SEQIDNO:3和SEQ!DNO:4的核苷酸序列本發(fā)明還提供與SEQIDNO:1-4具有同源性的序列，同源性優(yōu)選為至少50%，優(yōu)選至少60%,優(yōu)選至少70%,優(yōu)選至少80%,優(yōu)選為至少卯%,優(yōu)選至少95%,更優(yōu)選至少99%的同源性。本發(fā)明還提供一種核苷酸序列，其包括逸自SEQ1DNO:l-4中的序列.，本發(fā)明還提供具有選自SEQIDNO:l-4中的序列，其中一個或多個，優(yōu)選1-15個，優(yōu)選1-10，優(yōu)選1-5個核苷酸=皮取代、刪除和/或添加而得到的經(jīng)修飾的序列。進--步地，本發(fā)明還涉及本發(fā)明所述微生物在生產(chǎn)L(+)-酒石酸或其鹽中的用途。本發(fā)明還涉及所述的微生物的突變體或變種及其生物學(xué)培養(yǎng)物，所述的微生物突變體或變種及其生物學(xué)培養(yǎng)物能將順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽轉(zhuǎn)化為L(+)-酒石酸或其鹽,，本發(fā)明還涉及一種生產(chǎn)L(+)-酒石酸或其鹽的方法，該方法包括將上面所述的微生物，微生物的突變體或變種或生物學(xué)培養(yǎng)物與順式環(huán)氣琥珀酸或其鹽接觸。所述的順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽可以從巿場上購得，也可以裉據(jù)本領(lǐng)域已知的技術(shù)制備。諸如我們可以由順丁烯二酸和碳酸鉤以及雙氡水反應(yīng)制得順式環(huán)氧琥珀酸鉤，再經(jīng)酶反應(yīng)獲得酒石酸鈣，酸解后得到酒石酸溶液，離子交換除去雜質(zhì)后獲得精制的酒石酸溶液，再經(jīng)諸如濃縮，結(jié)晶，烘干包裝成成品。所述的順丁烯二酸可由市場購得，亦可以由本領(lǐng)域常規(guī)的方法制得，諸如由順丁烯二酸肝制得，本發(fā)明所述的原料物質(zhì)均可以從市場購得或由本領(lǐng)域常規(guī)的方法制得。本發(fā)明所述的順式環(huán)氧琥珀酸鹽優(yōu)選為順式環(huán)氧琥珀酸二鈉，或順式環(huán)氣琥珀酸4丐。本發(fā)明的其它目的見于本發(fā)明的詳細描述之中。本發(fā)明所利用的培養(yǎng)基可以是本領(lǐng)域常規(guī)的培養(yǎng)基。所述的培養(yǎng)可以在本領(lǐng)域的常規(guī)或已知的條件下進行，例如，可以在實驗室或者工業(yè)發(fā)酵罐中，在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中以及適當?shù)臈l件下，通過搖瓶培養(yǎng)、小規(guī)模或大規(guī)模發(fā)酵(包括連續(xù)的、分批的、補料-分批的、或者固態(tài)發(fā)酵)來培養(yǎng)細胞。在包含碳源和氮源以及無機鹽的適當營養(yǎng)培養(yǎng)基中以本領(lǐng)域已知的方法進行培養(yǎng)，本發(fā)明所用的培養(yǎng)基的成分及其含量諸如下述液體種子培養(yǎng)基葡萄糖1%,蛋白胨0.50/。，牛肉骨0.50/0，Naai%，pH7.5,,12rc滅菌20分4申，產(chǎn)酶培養(yǎng)基葡萄糖1%，蛋白胨0.5%，牛肉骨0.5%,順式環(huán)氧琥珀酸二鈉1.0%pH7.5,12lr滅菌20分鐘。合適的培養(yǎng)基可以從供應(yīng)商處獲得，或者可以用本領(lǐng)域已知的方法制備。適用于本發(fā)明的培養(yǎng)基并不限于上面所述的那些。在細菌培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)時間和溫度亦可以按本領(lǐng)域常規(guī)的培養(yǎng)時間和溫度進行.，對于菌種鑒定的方法，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。諸如經(jīng)典的分類鑒定法，化學(xué)分類法，遺傳學(xué)分類法等等。本發(fā)明所采用的菌種鑒定法,采用的是近年來發(fā)展起來的16sr腿A序列分析法，其鑒定技術(shù)路線包括(l)菌基因組抽提;(2)引物設(shè)計合成;(3)PCR擴增;(4)PCR產(chǎn)物純化;(5)測序；(6)在線BUST分析，測序的原理為本領(lǐng)域所熟知(參見附圖1):雙脫氧核糖核酸在PCR擴增過程中的隨機終止，會產(chǎn)生不同長度的3'熒光標記片斷，在電泳中它們因位移率不同而分開，因而，可基于此原理進行序列測序。本發(fā)明所述的生產(chǎn)酒石酸及其鹽的方法，可以利用本發(fā)明所述微生物采用常規(guī)的步驟、裝置和條件進行，本發(fā)明應(yīng)用本領(lǐng)域常用的鑒定菌株的細菌學(xué)特征的方法來鑒定菌抹CGMCCNo.1756，其細菌學(xué)特征優(yōu)選為下述的一種或多種革蘭氏染色陽性；菌體在生長過程中，其形態(tài)經(jīng)歷由培養(yǎng)初期呈桿狀到短、小桿狀，后期呈球狀的多形態(tài)變化；無芽孢。定5L本發(fā)明中所用的術(shù)語為本領(lǐng)域常用的術(shù)語，具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常所理解的含義。1.靡爾收率摩爾是物質(zhì)的量的單位，符號為mol,是國際單位制7個基本單位之一，摩爾是一系統(tǒng)物質(zhì)的量，該系統(tǒng)中所包含的基，粒數(shù)與12g^C的原子數(shù)目相等.使用摩爾時基本微粒應(yīng)予指明，可以是原子、分子、離子及其他粒子，或這些粒子的特定組合體。以摩爾為單位的物質(zhì)的收率稱為摩爾收率。2,比旋jUL能使透過物質(zhì)的偏振光的振動面旋轉(zhuǎn)一定的角度，稱為旋光度，以^表示。能使偏振光的振動面按順時針方向旋轉(zhuǎn)，為右旋光性物質(zhì)，旋光度為正值。能使偏振光的振動面按逆時針方向旋轉(zhuǎn)，為左旋光性物質(zhì)，旋光度為負值》量度旋先度的儀器為旋光儀，同一種旋光性物質(zhì)在不同條件下測定a值時，所得的結(jié)果也不一樣。但如固定實驗條件，則測得的物質(zhì)的旋光度即為常數(shù)，它能反映該旋光性物質(zhì)的本性，叫做比旋光度，以[a]表示。附困簡迷附困1:顯示的是測序的原理；附圖2:DNAMarker3ynA伊ose電泳困；附困3:網(wǎng)上BLAST分析的結(jié)果；附圖4:顯示CGMCCNo.H56的16srDNA測序圖；附圖5:CGMCCNo.l756測序結(jié)果序列比對的結(jié)果；具體實施方式下面通過實施例的方式進一步說明械明，下面的實施例僅缺為了說明的目的，而并非限制本發(fā)明的范圍。實施例1微生物CGMCCNo,17S6的16srDNA的測序一，基興組DM抽提所用的試刑盒為購自VIOGENE的Blood&TissueGenomicI>NAExtractionKh具體抽提步驟如下1.收集達到109對數(shù)生長期的細菌(或者達到3mi培養(yǎng)物)，在7，S00HM(5，000xg)離心IO分鐘收集沉淀;2.將沉淀重新懸浮在200微升溶菌酶反應(yīng)溶液(20mMTris-HCl,pH8.0;2mMEDTA;20rag/ml溶菌酶)中；3.在371C溫育30分鐘；4.添加20微升蛋白酶K和2(H)微升EXBuffer到樣品中；通過渦旋20秒將其立即混勻；5.在6O"C溫育30分鐘以裂解細菌細胞，溫育期間每5分鐘通過渦旋或倒置來混合樣品；6.同時，在7(TC預(yù)熱10mMTris-Ha(pH9.0),ddH20，或TE緩沖液以用于)NA洗脫,，7.添加21O微升無水乙醇(absohiteethanol)或異丙醇到步驟4中獲得的樣品中，并渦旋混勻。8.將B/T基因組DNA微型柱(GenomicDNAMiniCokmn)置于收集管(CollectionTube)上，將所有的混合物(包括所有的沉淀)在不接觸邊緣(rim)下移液到柱中。在8,000ipm(6,000xg)下離心2分鐘。將柱置于新的收集管中。9.用0.5mlWSBuffer通過在8,000rpm(6，0冊xg)下離心2分鐘洗滌柱兩次。離心后棄去flow-through,10.再將柱全速離心2分鐘以除去乙醇殘留物。11.將柱置于新的L5-ml管，用200微升預(yù)熱的洗脫液洗脫DNA。12.將柱直立l-5分鐘，并離心1-2分鐘以洗脫DNA。13.將洗脫的DNA于4。C或-20。C儲藏。若經(jīng)常使用，則可在4。C儲存DNA。二.PCR擴增PCR擴增中所使用的引物湯5,AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3'(SEQDNO:2):訓(xùn)3R:5，GGTTACCTTGTTACGACTT3，(SEQIDNO:3);反應(yīng)體系如下<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>反應(yīng)條件:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>將經(jīng)過上述程序所得的PCR產(chǎn)物按照如下程序進行鑒定.三.PCR產(chǎn)物鑒定、割膠純化所用的標記物是DNAMaricei"DL2冊0,CodeD501A，LotCD340h得自TaKaRa公司，割膠所用的試劑盒是北京博大泰克生物基因技術(shù)有限責任公司的小量膠回收試劑盒。1.割下含DNA的瓊脂糖塊，使它盡可能小u放入！.5ml離心管中。2.按每100mg瓊脂糖加入300微升溶膠液的比例加入溶膠液，置5(TC水??！0分鐘，使瓊脂糖塊完全溶化。每2分鐘顛倒混勾--次》3.將溶化后的Agarose液移入吸附柱，離心30秒。倒掉收集管中液體，再將吸附柱放入收集管。4.在吸附柱中加入500微升漂洗液，離心15秒。倒掉收集管中液體，將吸附柱放入收集管。5.在吸附柱中加入500微升漂洗液，靜置1分鐘后，離心15秒》倒掉收集管中液體，將吸附柱放入收集管，6.高速離心1分鐘。7.將吸附柱放入一個干凈的1.5mi的離心管中，在吸附膜中央加入30微升洗脫液，靜置1分鐘后，離心1分鐘。將1.5mi離心管(DNA)貯存于-4t:..四.測序1.測序所用引物:1OF:5，AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3，(SEQIDNO:2)1500R:5，GGTTACCTTGTTACGACTT3，(SEQIDNO:3)16S,:5，TAACTGTTCAGGTATTGACG3，(SEQIDNO:4)共3個測序反應(yīng)-2.測序反應(yīng)步驟(1)按照樣品板(samplesheet)將需要進行反應(yīng)的樣品和引物排列好；(2)取8聯(lián)PCR反應(yīng)管，在96孔板上排列好。為避免將反應(yīng)管弄混，在排列時請注意將96孔板的缺角置于右上方，同時8聯(lián)管也可以根據(jù)管壁上標明的數(shù)字使其全部按照相同的方向排列；(3)加入模板DNAl-3微升到PCR反應(yīng)管底部。所有的樣品加完后，可以仔細檢查反應(yīng)管的底部，確定所有櫸品都已加好后，再進行下面的步驟,，PCR產(chǎn)物模板的使用量由瓊脂糖電泳看到的條帶亮度確定；(4)5%甘油水溶液補充體積到12微升；(5)加入4微升3.2pM測序引物；(6)加入4微升BigDyeterminator;(7)上l，CR儀，通用引物循環(huán)條件如下98-Cf2min)^^〉96'C(30sec)-〉60X^4minV^〉4。C(00)25循環(huán)(8)將產(chǎn)物進行酒精二次沉淀純化l.每一反應(yīng)管中加入25微升NaAc/酒精溶液(3N麵C2.5nil+P，37.5ml),混勾后在臺式離心機(SORVALLRRT)上4"C以4000rmp離心30mi!i;倒置96孔板，墊干凈吸水紙，離心不大于800r即時停機；li.再在每管中加入(W凍酒精(-20t;保存)50或100微升，4000,離心15min;倒置96孔板，墊干凈吸水紙，離心不大于8(Hk即時停機；川.重復(fù)第2步1次；IV.將沉淀好的DNA產(chǎn)物加入25微升的去離子甲酰胺(來自ABi公司)。(9)上3700D織分析儀跑電泳，進行序列分析其中所用儀器GeneAmpRPCRSystem9700(PEAppliedBiosystems)SORVALLRRT7(酒精沉淀時冷凍離心)3700DNAAnalysisSystem(PEAppliedBiosystems)3.BLAST分析(1)登陸網(wǎng)站http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/選擇BLASTn,(2)在彈出窗口的文本框中輸入拼接后的菌種序列，點擊BLAST按鈕，(3)在隨后出現(xiàn)的頁面中點擊Format按鈕。(4)在BLAST結(jié)果網(wǎng)頁中分析鑒定菌種。對本發(fā)明獲得的微生物菌株的基因組進行如上所述的DNA抽提、PCR擴增16Srl)NA,PCR產(chǎn)物純化、測序(運用ABI3700測序儀)，并與數(shù)據(jù)庫Blast比對，結(jié)果表明該菌林16SrDNA序列與紅球菌USA-ANO2(Rhodococcussp.USA-AN012)DNA序列一致，但本發(fā)明分離獲得的紅球菌具有將順式環(huán)氧琥珀酸及其鹽水解為L(+)-酒石酸及其鹽的特性，因此，該微生物菌抹被確認為是紅球菌USA-AN012的又一個新種命名為紅球菌USAAN-012BK-98(Rhodococcussp.USA-八N012BIC-98)。該菌株已經(jīng)于2006年7月13日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心，保藏號為CGMCCNo.1756。實施例2利用順式環(huán)氧琥珀酸二鈉和本發(fā)明所述的CGMCCNo.1756萌株生產(chǎn)L(+)-酒石酸將培養(yǎng)24小時的上述紅球菌CGMCCNo.1756的斜面接種于裝有30ml液體種子培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，30。C振蕩培養(yǎng)24小時，吸取10ml上述種子液接種于裝有200ml產(chǎn)酶培養(yǎng)基的1000ml三角瓶中，30'C振蕩培養(yǎng)24小時，逐漸向三角瓶中加入順式環(huán)氧琥珀酸二鈉35克，經(jīng)72小時振蕩培養(yǎng)和反應(yīng)后，加入CaC!2水溶液，過濾和水洗沉淀得46克酒石酸鈣，再經(jīng)疏酸酸解、陰和陽離子交換柱精制、濃縮、結(jié)晶、分離和烘千得到"+)-酒石酸25克，摩爾收率為84.76%.經(jīng)分析該L(+)-酒石酸的比旋光度為[a智--+12.1。，含量為99.75%實施例3利用順式環(huán)氧琥珀酸鉤和本發(fā)明所述的CGMCCNo.1756菌林生產(chǎn)L(+)-酒石酸將培養(yǎng)24小時的上迷紅球菌CGMCCNo.1756的斜面接種于裝有30ml液體種子培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，30"C振蕩培養(yǎng)24小時，吸取iOml上述種子液接種于裝有200ml產(chǎn)酶培養(yǎng)基的1000ml三角瓶中，30。C振蕩培養(yǎng)24小時，向三角瓶中加入順式環(huán)氧琥珀酸4丐35克，經(jīng)100小時振蕩培養(yǎng)及反應(yīng)后，過濾水洗得35克酒石酸鉤，再經(jīng)疏酸酸解、陰和陽離子交換柱精制，濃縮、結(jié)晶，分離和烘千得到L(+》-酒石酸i6克。摩爾收率為80.5%。經(jīng)分析該L(+)-酒石酸的比旋先度為[a]暨=+12.2°，含量為將.78%。實施例4利用順式環(huán)氧琥珀酸二鈉和由K-卡拉膠包埋的本發(fā)明所述的CGMCCNal756菌抹細胞生產(chǎn)L(+)-酒石酸將培養(yǎng)24小時的上述紅球菌CGMCCNo.1756的斜面接種于裝有30mi液體種子培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，3(TC振蕩培養(yǎng)24小時，吸取10mi上述種子液接種于裝有200ml產(chǎn)酶培養(yǎng)基的1000ml三角瓶中，30t!振蕩培養(yǎng)24小時離心收集菌體，用K-卡拉膠包埋得到固定化紅球菌CGMCCNo.1756生物催化劑100克。將此100克固定化紅球菌CGMCCNo.1756生物催化劑放入！000mlLOM的順式環(huán)氣琥珀酸二鈉的溶液中，37。C反應(yīng)40小時后，過濾回收生物催化劑，過濾液中加入CaC〗2水溶液，經(jīng)攪拌后過濾洗滌沉淀，得225克L(+)-酒石酸鏑。將該酒石酸鏑加^s危酸酸解、陰和陽離子交換柱精制、濃縮、結(jié)晶、分離和烘干得到L(+》-酒石酸120克，摩爾收率為8(P/o。經(jīng)分析該L(+)-酒石酸的比旋光度為[a招=+12.0。,含量為99.6%將回收的固定化生物催化刑再放入1000mil.OM的順式環(huán)氣琥珀酸二鈉的溶液中，37°C反應(yīng)40小時后，過濾回收生物催化劑，過濾液中加入CaCl2水溶液，經(jīng)攪拌后，過濾洗滌沉淀得235克酒石酸鉤。將該酒石酸倆加減*酸酸解、陰和陽離子交換柱精制、濃縮、結(jié)晶、分離和烘千得到L(+)-酒石酸125克，摩爾收率為83.33%.經(jīng)分析該L(+)-酒石酸的比旋光度為fa]哲-+12,25。，含量為99.80%。該固定化生物催化劑可以反復(fù)使用。綜上可知，本發(fā)明分離獲得的紅球菌具有將順式環(huán)氧琥珀酸及其鹽水解為L(+)-酒石酸及其鹽的特性。生物材料保藏依據(jù)布達佩斯條約的條款，下述的生物材料已經(jīng)保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心(北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，中國科學(xué)院微生物研究所，100080)，給出了下述的保藏號<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>可以理解的是，上面的描述^l是本發(fā)明的示例，因而本發(fā)明權(quán)利要求所保護的范圍并不僅僅以此處公開的特定實施方案來限定。任何等同的實施方案將^皮認為在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，事實上，才艮據(jù)前面的描述，對本發(fā)明進行有關(guān)的f^改和變化對于本領(lǐng)域l支術(shù)人員來講都將是可能的，因而，這種修改和變化也將落在本發(fā)明所附的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。序列表<110>杭州寶晶生物化工有限公司生產(chǎn)酒^酸及其鹽的方法以及該方法中所用的微生物菌株<歸4<Hfl>Paienilnversion3-1<2U>1422<212>鵬<213>紅球菌菌種USA-AW12<柳>〗egigc"aacacaigcaagtCg&8C;gatgaagcccagc"gcigggigga60tiagtggcgaacgggtgagiaacacglgggigaictgccetgcacucgggalaagcclg120ggaaacigggtctaataccgcgggag"CC鵬glggaaagg"liccggigcaggaigggeecgCggCCtiHC8gcttg;"ggtggggtaaeggcecaccji!igg240t8gCCggCCtgagagggcgaccggctgggacig8gacacggccea!'.aeicc'』'、'gggaggcagcmgtggggMt8UgC8tc福gggcgcsagccIgaigcagcg3Macgccgcgtgagggatgacggec"egggltgtastttcaguccg8CgMgCgC420,tgacgglagcg"gtccgasgesccggcc癒ggcgigccagcagccgctxgtaggcggmgicgc48&54tigctcaactgegggci二tgC8ggcg"aegggcagacugag咖':aetgcag認gagaelggaa"cctggtgtagcggigaaatgcgcagataica卿ggaagaaggc鵬tcicigggcngtgaegctgaggagcgaaagegtgggt721!alUgataccc',ggiagtcc3CgC(:giaaacgglgggcgctaggtgtggg780cggg"ccgtgccglagctacgccccgcciggggagtacg841.)gggg!;cccgcacaageggcggagcatgigg90tgcaacgegactggicawc8ccggaccgccccag96(';ipig鵬Utccc"gtgglcggtgt織ggtggtgcatggcigiegtc3gClCglglCl咖eggttggggaggg"aagte"cgcaggagccgcaacgagactgccggggcgcwtCMI1CCC":tcggagtcctgtg"ggaaggi路ggacgacglca1,歸ccccUaigl織gggettc8CCtCi"gclacaaiggccggtacagagggc12卯igcgatacL'gcgaggtggsgCgMlCCCttM8gl:cggietcag"cggsteggggtctg脂t:aacicgaccccglgaagicggagti;gctagiaatcgcagatcagcaacgctgcgglgaa〗320iacguccegggcc"gtacacaccgcccgtcacglcalgaaagicggta織cccgaagl則t'cgglggc"aacccctcgtggg鄉(xiāng)gagccgtcgaagglggH22<210>2<211>2U<212>眺<213>引物<柳>2apg"lgaiccnggctcag20<210>3<211>19<212>,<213>引物<柳>3ggtiacc"g"acgactt19<210>4<211>20<212>鵬<213>引物<4uaclgueaggiaugacg20權(quán)利要求1.一種微生物，其特征在于具有將順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽轉(zhuǎn)化為L(+)-酒石酸或其鹽的能力，并且該微生物的特征還在于其具有選自下述的一個或多個特征革蘭氏染色陽性；菌體在生長過程中，其形態(tài)經(jīng)歷由培養(yǎng)初期呈桿狀到短小桿狀，后期呈球狀的多形態(tài)變化；無芽孢。2.權(quán)利要求l的微生物，以SEQIDNO:2和SEQIDNO:3為引物，PCR擴增l6SrDNA，運用AB!3700測序儀測序，測序引物為SEQIDNO:4，并與數(shù)據(jù)庫Blast比對，其16SrDNA的序列具有SEQlDNO:！所示的序列。3.權(quán)利要求1或2中所述的微生物菌林，其為紅球菌。4.權(quán)利要求1-3中任一項所述的微生物菌株，其為具有保藏號CGMCCNo.1756的紅球菌。5.—種生產(chǎn)L(+)-酒石酸或其鹽的方法，該方法包括將權(quán)利要求1-4中任一項所述的微生物菌株與順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽接觸。6.權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的順式環(huán)氧琥珀酸鹽為順式環(huán)氧琥珀酸二鈉或順式環(huán)氧琥珀酸4丐。7.權(quán)利要求l-4任一項所述的微生物在生產(chǎn)L(+)-酒石酸或其鹽中的用途'.8.權(quán)利要求l-4中任一項所述的微生物的突變體及其生物培養(yǎng)物，其能將順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽轉(zhuǎn)化為L(+)-酒石酸或其鹽。9.一種生物催化劑，其包括權(quán)利要求1-4中任一項所述的微生物。全文摘要本發(fā)明涉及能將順式環(huán)氧琥珀酸或其鹽轉(zhuǎn)化為L(+)-酒石酸的微生物。本發(fā)明還涉及利用微生物生產(chǎn)L(+)-酒石酸或其鹽的方法。進一步地，本發(fā)明還涉及所述微生物在生產(chǎn)L(+)-酒石酸或其鹽中的用途。文檔編號C12N1/20GK101215530SQ20071000215公開日2008年7月9日申請日期2007年1月4日優(yōu)先權(quán)日2007年1月4日發(fā)明者張建國申請人:杭州寶晶生物化工有限公司