Tor蛋白抑制劑抑制茄科植物晚疫病菌的新用圖
【技術領域】
[0001 ]本發(fā)明設及TOR蛋白抑制劑的新用途，尤其設及TOR蛋白抑制劑抑制茄科植物晚疫 病菌的新用途。
【背景技術】
[0002] 馬鈴馨是全球第四大糧食作物，僅次于小麥、水稻和玉米。而由致病疫霉 (Phyto地thora infestans)引起的馬鈴馨晚疫病，是一種真菌病害，可W導致馬鈴馨莖葉 死亡和塊莖腐爛，會給馬鈴馨的生產(chǎn)帶來毀滅性危害，甚至可W導致馬鈴馨嚴重減產(chǎn)甚至 絕收。致病疫霉還會導致番茄、辣椒等茄科植物發(fā)生晚疫病。晚疫病在形態(tài)上由菌絲、抱子 囊、抱子囊梗、卵抱子、游動抱子等幾部分組成。菌絲無色、無隔、多核，生長適溫20~23°C， W吸器插入植物細胞內(nèi)，通過吸取植物細胞營養(yǎng)，從而大量擴繁。
[0003] 當前，防控馬鈴馨晚疫病的方法有化學防治和生物防治，主要方法是化學農(nóng)藥防 治。在防治晚疫病方面的化學藥劑眾多，例如:波爾多液，±銅，氧化亞銅，代森鋒，克菌丹， 滅菌丹，百菌清，馨攝錫，霜脈氯，甲霜靈，霜威靈。但目前晚疫病對諸多的化學農(nóng)藥都產(chǎn)生 了抗性，最典型的代表就是甲霜靈。甲霜靈誕生于1977年，當時它對晚疫病的殺滅作用是非 常卓越的，很快在全世界推廣，但是到了 1979年就出現(xiàn)了抗藥性。生物防治能夠克服化學殺 蟲劑導致的抗藥性W及環(huán)境污染問題，目前利用生物防治的手段防控晚疫病有了一定的進 展。例如:蔣繼志等研究發(fā)現(xiàn)，洋蔥、大蒜、下香等植物的提取物對晚疫病抱子形成與萌發(fā)有 極好的抑制作用。王樹桐研究發(fā)現(xiàn)1%知母提取物對馬鈴馨晚疫病有抑制作用。姚彥坡報道 了木霉菌的代謝產(chǎn)物能夠?qū)︸R鈴馨晚疫病抱子生成，菌絲生長有一定程度的抑制效果。從 屯、黎等研究發(fā)現(xiàn)YX擬青霉菌發(fā)酵濃縮物(YFC)在濃度為2g/L時，對晚疫病菌絲生長的抑制 率可W高達63.00%。但是，生物防治作為新興的科學，也存在很多不足之處，例如：與化學 殺菌劑比較，穩(wěn)定性較低，操作較復雜，產(chǎn)量低，見效慢。
[0004] T0R(Target of Rapamycin)是一種進化上極為保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶， 在酵母、動物、植物中通過整合營養(yǎng)和能量信號來促進細胞的增殖和生長。TOR信號通路在 動物胚胎形成、分生組織激活、植物根和葉的生長、開花、衰老和生命周期的控制等中都起 著關鍵的作用。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，TOR還具有調(diào)節(jié)核糖體的生物合成、促進翻譯、新陳代謝調(diào) 節(jié)和抑制自隧的功能。在模式動物線蟲、果蛹和小鼠、酵母中，TOR基因的缺失能夠?qū)е律?體胚胎致死，說明TOR基因是生物體內(nèi)的必須基因，在生物的生長發(fā)育進程中扮演著核屯、作 用。雷帕霉素(Rapamycin)是一種新型大環(huán)內(nèi)醋類免疫抑制劑，是最典型的TOR蛋白抑制劑， 也是TOR蛋白第一代抑制劑的代表，它能夠與TOR蛋白的FRB結(jié)構(gòu)域W及FKBP12結(jié)合，抑制 TOR蛋白活性。隨著TOR信號通路研究的不斷深入，目前除了雷帕酶素外，TOR蛋白的抑制劑 還有KU-0063794，Torin 1，AZD8055等二代抑制劑。TOR蛋白抑制劑目前主要應用于臨床醫(yī) 學的研究，針對人體的腫瘤、免疫抑制等疾病，部分研究用于植物的生長發(fā)育W及代謝通路 的調(diào)控機制等，但通過抑制真菌的TOR蛋白活性來進行植物病害的防治還未見相關報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是針對W上問題提供一種TOR蛋白抑制劑抑制茄科植物晚疫病菌的 新用途。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的所采用的技術方案是:一種TOR蛋白抑制劑在抑制茄科植物晚疫 病菌中的應用。
[0007] 所述TOR蛋白抑制劑為Rapamycin、KU-0063794、Torin l、AZD8055、Rapamycin與 KU-0063794的混合物、Rapamycin與Torin 1的混合物或者Rapamycin與AZD8055的混合物。
[0008] 作為優(yōu)選地，應用方式為將所述的TOR蛋白抑制劑制備為殺菌劑。
[0009] 在上述技術方案中，所述殺菌劑中Rapamycin的濃度為0.01~3皿/L，KU-0063794 的濃度為0.1~如m/L，Tor in 1的濃度為0.1~10ym/L，AZD8055的濃度為0.005~0.2ym/L。
[0010] 作為優(yōu)選地，所述Rapamycin的濃度為0.05~3ym/L，所述KU-0063794的濃度為0.5 ~如m/L，所述Tor in 1的濃度為0.5~10皿/L，所述AZD8055的濃度為0.01~0.2皿/L。
[0011] 作為優(yōu)選地，所述Rapamycin與KU-0063794的混合物中，Rapamycin的濃度為0.05 ~3皿/L，KU-0063794的濃度為2~如m/L。
[0012] 作為優(yōu)選地，所述Rapamycin與Torin 1的混合物中，混合物的組合為：Rapamycin 的濃度為0.1~3皿/L，Torin 1的濃度為0.5~10皿/1;或者混合物的組合為:Rapamycin的 濃度為0.05~3皿/L，Torin 1的濃度為2~10皿/L。
[0013] 作為優(yōu)選地，所述Rapamycin與AZD8055的混合物中，混合物的組合為:Rapamycin 的濃度為0.1~3皿/L，AZD8055的濃度為0.01~0.2皿/1;或者混合物的組合為:Rapamycin 的濃度為0.05~3ym/L，AZD8055的濃度為0.05~0.2ym/L。
[0014] 本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明首次將用于臨床醫(yī)學的TOR蛋白抑制劑用于茄科植 物晚疫病的防治研究中，通過研究發(fā)現(xiàn)TOR蛋白抑制劑Rapamycin、KU-0063794、Torin 1、 AZD8055及Rapamycin分別與KU-0063794、Torin 1、AZD8055的混合物均能有效地抑制茄科 植物晚疫病菌，抑制率能達到90-100%，為防治晚疫病新藥研究提供了非常有意義的基礎， 應用于新型殺菌劑的前景廣闊，市場前景好，為防治晚疫病提供了一種新的選擇。
【附圖說明】
[001引圖巧空白和加 DMS0溶劑對照實驗第5、9、13天菌落生長情況。
[0016] 圖2為Rapamycin+KU-0063794組合處理晚疫病菌第9天菌落生長情況。
[0017] 圖3為Rapamycin+KU-0063794組合處理晚疫病菌第13天菌落生長情況。
[0018] 圖4為Rapamycin+Torin 1組合處理晚疫病菌第9天菌落生長情況。
[0019] 圖5為Rapamycin+Torin 1組合處理晚疫病菌第13天菌落生長情況。
[0020] 圖6為Rapamycin+AZD8055組合處理晚疫病菌第9天菌落生長情況。
[0021] 圖7為Rapamycin+AZD8055組合處理晚疫病菌第13天菌落生長情況。
【具體實施方式】
[0022] 本發(fā)明中所用主要試劑：
[0023] Rapamycin、AZD8055、KU-0063794、Torin 1 均購自美國Selleck Chemicals公司。
[0024] Rapamycin(Sirolimus，雷帕霉素）：是一種特定的mTOR抑制劑，目錄號S1039。
[00巧]AZD8055:是一種新型的ATP競爭性mTOR抑制劑，目錄號S1555。
[00%] KU-0063794:作用于mTORCl和mT0RC2的雙重mTOR抑制劑，目錄號S1226。
[0027] Torin l:mT0RCl/2抑制劑，目錄號S2827。
[0028] 馬鈴馨晚疫病菌(致病疫霉）由重慶大學生命科學學院植物分子育種實驗室提供。
[0029] 實施例1制備馬鈴馨晚疫病菌培養(yǎng)基
[0030] 馬鈴馨晚疫病菌培養(yǎng)基采用黑麥固體培養(yǎng)基，具體配置方法為:①將60g黑麥粒浸 泡在300ml蒸饋水中，4°C浸泡36小時，避免變質(zhì)。②將浸泡水倒出保存在冰箱中。③在膨脹 的黑麥粒中加入100ml蒸饋水搗碎l-2min，其懸浮液在50度水浴