本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種麗江白塊菌的大樹接種方法。

背景技術(shù)：

1、塊菌，也稱松露，隸屬盤菌目（pezizales）、塊菌科（tuberaceae），是一類著名的野生食用菌，其中以意大利白塊菌和法國的黑孢塊菌最為名貴，被譽(yù)為“廚房里的鉆石”“地下黃金”等，常被我國西南各地百姓叫做“豬拱菌”，商業(yè)上多稱為松露。具有獨(dú)特的香味、口感和營養(yǎng)價值，人類食用塊菌已有上千年的歷史。在歐美等發(fā)達(dá)國家，塊菌號稱“黑色金剛石”，是野生菌的極品，它與魚子醬、鵝肝醬同被稱為三大珍品。塊菌有多種療效，富含17種氨基酸、8種維生素、適量的蛋白質(zhì)、以及雄性酮、甾醇、鞘脂、脂肪酸、氨基酸及微量元素等50余種生理活性成分。并且含有人體自身不能合成的8種氨基酸、鋅、錳、鐵、鈣、磷、硒等必需營養(yǎng)素，具有增強(qiáng)免疫力、抗衰老、益胃、清神、止血、療痔等藥用價值；具有抗癌活性，對癌細(xì)胞有一定的抑制作用，可以激發(fā)腦細(xì)胞活力。

2、塊菌清香可口，是歐美地區(qū)喜食的菌類之一，主要鮮食、制成飲食調(diào)料或提取所需成分用于化妝品。目前，黑塊菌在日本、歐美的市場價格處于每公斤50-1000美元之間，國內(nèi)黑塊菌市場價格處于每公斤500-1000元之間，上等的意大利白塊菌的售價可達(dá)每公斤5000多歐元，是價格昂貴的菌種之一。

3、麗江白塊菌于2011年被正式命名，是生長于云南省麗江市永勝縣的一種白色塊菌，直徑0.5-3cm，為亞球形或不規(guī)則球形，幼嫩期為白色，隨著成熟度的增加，表皮逐漸變?yōu)榛野咨?，完全成熟時香味濃郁，孢子為灰褐色，間雜白色至灰白色脈絡(luò)，子囊大小為：60-90×50-80μm，孢子大小為25-42.5μm。麗江白塊菌與黑塊菌相比，口感更加細(xì)膩綿密軟糯，商品價值是黑塊菌的5-8倍，具有巨大的開發(fā)利用前景。但目前除了麗江當(dāng)?shù)剞r(nóng)民采集野生麗江白塊菌售賣以外，還未見任何開發(fā)研究報道。野生麗江白塊菌資源稀少，產(chǎn)量極低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們的需求。

4、塊菌由于營養(yǎng)物質(zhì)豐富、功能成分含量高、香味濃郁，價值較高，所以野生資源常被過度采挖，且野生塊菌菌塘被大量破壞，造成產(chǎn)量逐年減少。目前實(shí)現(xiàn)塊菌產(chǎn)量增加、質(zhì)量提升的方法有兩種：1、野生塊菌保育促繁技術(shù)，該技術(shù)的必要條件是針對林地里原來就有塊菌菌塘，進(jìn)行保護(hù)和生態(tài)條件的改善，使菌塘產(chǎn)出更多數(shù)量的塊菌。但是，該技術(shù)對原來菌塘數(shù)量極少的林地效果低微，對沒有菌塘的林地完全無法實(shí)施。2、塊菌菌根苗培育及種植技術(shù)。該技術(shù)要從樹木的種子培育成無菌苗，再接種塊菌孢子液形成菌根苗，培育完成后種植管理，5至8年后樹苗長大，樹根附近形成菌塘自然長出塊菌，整個過程需要較長周期，耗費(fèi)大量人力物力和時間成本。

5、因此如何克服現(xiàn)有技術(shù)的不足是目前生物技術(shù)領(lǐng)域亟需解決的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種麗江白塊菌的大樹接種方法。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

3、一種麗江白塊菌的大樹接種方法，包括如下步驟：

4、步驟一，環(huán)境及接種樹木要求：

5、環(huán)境要求為：海拔范圍為1500-2800m的坡地或平地森林；年平均氣溫13-20℃，年降雨量600-1800mm，年日照時數(shù)1600-3000h；旱季、雨季分明，日溫差8-22℃；土壤類型為紅壤、棕壤或褐土，森林土層厚度>40cm；

6、接種森林樹木要求：成年云南松樹林，或以成年云南松為主，混合華山松、槲櫟、錐連櫟、板栗、化香樹、榛子、滇楊和滇青岡中的一種或多種的混交林，林木郁閉度6.5-7.5；

7、步驟二，接種時間選擇：

8、每年3-4月或6-7月接種；

9、3-4月接種前須灑水保證3-5cm深的表皮土壤濕潤，接種后須按照每1m2為3-5kg的澆水量，每三天澆水一次，直至雨水降臨；

10、6-7月需在雨水剛剛落地或者雨水浸透土層40cm后進(jìn)行接種；

11、步驟三，接種前準(zhǔn)備：

12、鏟除林地矮小灌木和雜草，然后把林地表皮腐殖質(zhì)鏟開；再鏟開腐殖質(zhì)下面2-4cm厚的土壤；接著將此時地下10-20cm厚的土壤進(jìn)行疏松處理，以暴露出云南松及其他大樹的部分表皮根系；然后撒生石灰進(jìn)行消毒殺菌；消毒殺菌后第二天進(jìn)行接種；

13、步驟四，菌種制作：

14、使用熟石灰將無菌水的ph值調(diào)節(jié)為7.5-8.0之間作為溶劑；

15、選擇直徑1cm以上無蟲蛀、無霉?fàn)€且成熟度大于等于95%的麗江白塊菌子實(shí)體，每99-101g子實(shí)體加入溶劑595-605ml，然后放入攪拌機(jī)中粉碎，制成孢種原液；于0℃-4℃保存；

16、接種前使用孢種原液加所述的溶劑稀釋為體積濃度為0.5%-1.0%的孢種液，然后加熟石灰將ph調(diào)節(jié)為7.0-7.5待用；

17、步驟五，大樹接種：

18、在經(jīng)步驟三處理好的林地上，采用步驟四制得的孢種液對林地表面進(jìn)行噴灑，每畝地噴灑孢種液500-600kg；噴灑完后先撒一層石粉，每平方米撒石粉3-5kg；再撒一層熟石灰，每平方米撒0.5-1.0kg的量；接著將步驟三鏟開的土壤均勻回填，后再將步驟三鏟開的腐殖質(zhì)均勻的鋪在上面；

19、接種完成后，檢測土壤交換性鈣ca2+含量及土壤ph值，土壤交換性鈣ca2+含量應(yīng)達(dá)到30-80cmol/kg，土壤ph值應(yīng)為7.5-8.5；

20、步驟六，接種后管理：

21、接種后，禁止動物和閑雜人員進(jìn)入接種區(qū)，

22、接種6個月后檢查塊菌菌根形成情況；未形成菌根的需進(jìn)行樹干標(biāo)記，以便來年二次補(bǔ)接種；

23、接種后每年7-8月份，對林地內(nèi)的螞蟻和蠼螋進(jìn)行集體誘殺；

24、步驟七，塊菌采收：

25、采收時間為接種后第三年的1-2月份采收，待塊菌成熟度大于等于95%時進(jìn)行采收。

26、進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟一中，環(huán)境要求地貌為喀斯特地貌。

27、進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟一中，接種森林中，60%以上的林木為10-35年樹齡，樹木直徑10-40cm，樹間距長和寬均為2-5米。

28、進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟二中，6-7月份接種，若接種后連續(xù)20天不下雨，須用噴淋方式澆水，澆水量每1m2為3-5kg，每三天澆水一次。

29、進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟三中，把林地表皮腐殖質(zhì)鏟開，每5米×5米堆成一堆；再鏟開腐殖質(zhì)下面2-4cm厚的土壤，每3米×3米堆成一堆。

30、進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟三中，每667m2林地撒生石灰的量為200-300kg。

31、進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟四中，在12月底至次年2月獲取麗江白塊菌子實(shí)體，洗凈塊菌子實(shí)體表面泥土和雜物，密封包裝后，放在-20℃冰箱中冷凍保存待用；配制孢種原液時取出子實(shí)體；

32、配制孢種原液時攪拌機(jī)的速度為8000rpm/min-15000rpm/min，粉碎時間為15s-30s。

33、進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟五中，腐殖質(zhì)厚度為3.0-5.0cm。

34、進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟六中，二次補(bǔ)接種方法為接種后第二年的3-4月或5-6月進(jìn)行二次補(bǔ)接種；以未形成菌根大樹為圓心，半徑1.0-1.5m的面積為接種區(qū)域，先鏟開回填的腐殖質(zhì)，再鏟開回填的土壤及撒了熟石灰和石粉的土層，然后按照0.85-0.90kg/m2的量噴灑孢種液；然后再次將鏟開土壤及撒了熟石灰和石粉的土層回填，接著將鏟開腐殖質(zhì)回填；接種后須按照每1m2為3-5kg的澆水量，每三天澆水一次，直至雨水降臨。

35、進(jìn)一步，優(yōu)選的是，步驟七中，采收時，耙挖的深度不得超過10cm。

36、本發(fā)明的技術(shù)是直接通過人為干預(yù)改良土壤，進(jìn)行成片的大樹接種，技術(shù)精確度高，接種成功率高，麗江白塊菌接種后當(dāng)年就形成了塊菌子實(shí)體，見效快。

37、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果為：

38、（1）本發(fā)明提供一種麗江白塊菌的大樹接種方法，該方法為整片樹林進(jìn)行麗江白塊菌接種，經(jīng)過石粉和石灰的覆蓋等方式人為改良土壤，使得土壤的ph值和交換性ca2+含量能夠達(dá)到塊菌的生長需求，所以本發(fā)明不需要確保接種林地原來就有大量塊菌菌塘，即在沒有塊菌菌塘的情況下依然可以實(shí)施本發(fā)明方法；本發(fā)明方法與塊菌的保育促繁技術(shù)相比實(shí)施范圍大大增加；

39、（2）本發(fā)明與塊菌保育促繁技術(shù)和菌根苗培育種植技術(shù)相比，周期較短，大樹接種的當(dāng)年冬天就發(fā)現(xiàn)有少量的塊菌子實(shí)體形成，且大樹接種成功率高達(dá)80%以上，效果明顯；

40、（3）本發(fā)明同時對印度塊菌、中華夏塊菌和麗江白塊菌實(shí)施了大樹接種技術(shù)，接種成功率印度塊菌21%，中華夏塊菌15%，麗江白塊菌大于80%。發(fā)現(xiàn)只有麗江白塊菌表現(xiàn)優(yōu)異，接種成功率最高，且麗江白塊菌大樹接種技術(shù)為首創(chuàng)技術(shù)，至今未見任何報道。

41、本發(fā)明方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具體見表1。

42、表1

43、。