本發(fā)明屬于甘草組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種甘草子葉的高誘導(dǎo)率誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

背景技術(shù)：

甘草，（學(xué)名：Glycyrrhiza uralensis Fisch）別名：國老、甜草、烏拉爾甘草、甜根子。豆科、甘草屬多年生草本，根與根狀莖粗壯，是一種補益中草藥。對人體很好的一種藥，藥用部位是根及根莖，藥材性狀根呈圓柱形，長25～100厘米，直徑0.6～3.5厘米。外皮松緊不一，表面紅棕色或灰棕色。根莖呈圓柱形，表面有芽痕，斷面中部有髓。氣微，味甜而特殊。功能主治清熱解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜陰暗潮濕，日照長氣溫低的干燥氣候。甘草多生長在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠邊緣和黃土丘陵地帶。根和根狀莖供藥用。傳統(tǒng)的甘草獲取方法是采挖葉生植物資源，造成水土流失和嚴(yán)重土壤沙漠化。另外，甘草種子主要來自野生甘草，其品種混雜，種子稀缺，發(fā)芽率極低，野生資源不適應(yīng)規(guī)?；蜆?biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)的需要。同時由于人們破壞性地對葉生甘草采挖，使野生植物幾乎滅絕，對甘草的保護性利用迫在眉睫，但由于甘草種植發(fā)芽率不高和人們對其此生代謝物的需求，從而使甘草的組織培養(yǎng)對研究和生產(chǎn)具有重要作用。

稀土元素是17種特殊的元素的統(tǒng)稱，它的得名是因為瑞典科學(xué)家在提取稀土元素時應(yīng)用了稀土化合物，所以得名稀土元素。然而稀土是歷史遺留下來的名稱，稀土是從18世紀(jì)末開始陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時人們常把不溶于水的固體氧化物稱為土，例如，將氧化鋁稱為“陶土”，氧化鈣稱為”堿土“等。稀土一般是以氧化物狀態(tài)分離出來的，當(dāng)時比較稀少，因而得名為稀土（Rare Earth，簡稱RE或R），然而經(jīng)過大量的科學(xué)研究，在組織培養(yǎng)當(dāng)中添加了稀土元素會大大地提高組織培養(yǎng)的質(zhì)量。

鈰是周期系第ΙΙΙ族副族鑭系元素，一種稀土元素。原子序數(shù)58。穩(wěn)定同位素：136、138、140、142?；疑饘?，有展性。密度：正方晶體6.9，立方晶體6.7。熔點799℃，沸點3426℃。鈰是一種銀灰色的活潑金屬，粉末在空氣中易自燃，易溶于酸。鈰的名稱來源于小行星谷神星的英文名。鈰在地殼中的含量約0.0046%，是稀土元素中豐度最高的。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

基于現(xiàn)有技術(shù)中甘草的需求量巨大但供給品質(zhì)參差不齊，且現(xiàn)有培養(yǎng)基的誘導(dǎo)效率低的問題，本發(fā)明提供一種甘草子葉的高誘導(dǎo)率誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸鈰、維生素、瓊脂粉和白砂糖，其以甘草的無菌苗的子葉作為外植體，避免了外植體帶有病毒而影響植物品質(zhì)的問題，同時將子葉進行廢物利用，本發(fā)明具有萌發(fā)率高和成本低的優(yōu)點。

一種甘草子葉的高誘導(dǎo)率誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、活性炭、硝酸鈰、維生素、瓊脂粉和白砂糖。

優(yōu)選地，6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.3-0.8mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為2-4 mg/L、活性炭的濃度為0.05-0.2 mg/L、硝酸鈰的濃度為1-5g/L，維生素的濃度為0.1-0.5mg/L，瓊脂粉的濃度為8-12g/L、白砂糖的濃度為20-40g/L。

優(yōu)選地，6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.4-0.7mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為2.5-3.5 mg/L、活性炭的濃度為0.1-0.15 mg/L、硝酸鈰的濃度為2-4g/L，維生素的濃度為0.2-0.4mg/L，瓊脂粉的濃度為9-11g/L、白砂糖的濃度為25-35g/L。

優(yōu)選地，所述的培養(yǎng)基的pH值為5.0-6.0。

優(yōu)選地，所述的培養(yǎng)基的pH值為5.5。

優(yōu)選地，所述的維生素是維生素C。

一種甘草子葉的高誘導(dǎo)率誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制方法，其包括以下步驟：

步驟S10，使用電子秤按照MS培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)配方配制1000倍MS培養(yǎng)基母液；

步驟S20，取MS培養(yǎng)基母液配制MS培養(yǎng)基，并按配方添加活性炭、硝酸鈰、瓊脂粉和白砂糖，使用鹽酸或者氫氧化鈉調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值；

步驟S30，使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養(yǎng)基滅菌20分鐘，取出培養(yǎng)基并在超凈工作臺中靜置冷卻；

步驟S40，按照配方配制6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和維生素溶液，并進行過濾滅菌；

步驟S50，待培養(yǎng)基冷卻到60℃時向培養(yǎng)基中加入步驟S40配制好的試劑，搖晃均勻，靜置，冷卻凝固。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的描述。

實施例一：

按以下步驟配制對照組的MS培養(yǎng)基和實驗組N6培養(yǎng)基：

步驟S10，使用電子秤按照MS培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)配方配制1000倍MS培養(yǎng)基母液；

步驟S20，取MS培養(yǎng)基母液配制MS培養(yǎng)基，并按配方添加活性炭、硝酸鈰、瓊脂粉和白砂糖，使用鹽酸或者氫氧化鈉調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至5.0；

步驟S30，使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養(yǎng)基滅菌20分鐘，取出培養(yǎng)基并在超凈工作臺中靜置冷卻；

步驟S40，按照配方配制6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和維生素C溶液，并進行過濾滅菌；

步驟S50，待培養(yǎng)基冷卻到60℃時向培養(yǎng)基中加入步驟S40配制好的試劑，搖晃均勻，靜置，冷卻凝固。

其中培養(yǎng)基的配方如下：以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.3mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為2 mg/L、活性炭的濃度為0.05mg/L、硝酸鈰的濃度為1g/L，維生素C的濃度為0.1mg/L，瓊脂粉的濃度為8g/L、白砂糖的濃度為20g/L。

將已經(jīng)消毒的外植體分別接種到實驗組的MS培養(yǎng)基進行常規(guī)組織培養(yǎng)，20天后統(tǒng)計誘導(dǎo)率得出誘導(dǎo)率為87%，高于現(xiàn)有技術(shù)中甘草子葉80%的誘導(dǎo)率。

實施例二：

實施例二與實施例一的不同之處在于，調(diào)整了培養(yǎng)基配方濃度和pH值。

步驟S10，使用電子秤按照MS培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)配方配制1000倍MS培養(yǎng)基母液；

步驟S20，取MS培養(yǎng)基母液配制MS培養(yǎng)基，并按配方添加活性炭、硝酸鈰、瓊脂粉和白砂糖，使用鹽酸或者氫氧化鈉調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至6.0；

步驟S30，使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養(yǎng)基滅菌20分鐘，取出培養(yǎng)基并在超凈工作臺中靜置冷卻；

步驟S40，按照配方配制6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和維生素C溶液，并進行過濾滅菌；

步驟S50，待培養(yǎng)基冷卻到60℃時向培養(yǎng)基中加入步驟S40配制好的試劑，搖晃均勻，靜置，冷卻凝固。

其中培養(yǎng)基的配方如下：以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.8mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為4 mg/L、活性炭的濃度為0.2 mg/L、硝酸鈰的濃度為5g/L，維生素C的濃度為0.5mg/L，瓊脂粉的濃度為12g/L、白砂糖的濃度為40g/L。

將已經(jīng)消毒的外植體分別接種到實驗組的MS培養(yǎng)基進行常規(guī)組織培養(yǎng)，20天后統(tǒng)計誘導(dǎo)率得出誘導(dǎo)率為91%，高于現(xiàn)有技術(shù)中甘草子葉80%的誘導(dǎo)率。

實施例三：

實施例三與實施例一和二的不同之處在于，調(diào)整了培養(yǎng)基配方濃度和pH值。

步驟S10，使用電子秤按照MS培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)配方配制1000倍MS培養(yǎng)基母液；

步驟S20，取MS培養(yǎng)基母液配制MS培養(yǎng)基，并按配方添加活性炭、硝酸鈰、瓊脂粉和白砂糖，使用鹽酸或者氫氧化鈉調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至5.5；

步驟S30，使用高溫高壓蒸汽滅菌鍋用121℃對培養(yǎng)基滅菌20分鐘，取出培養(yǎng)基并在超凈工作臺中靜置冷卻；

步驟S40，按照配方配制6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）和維生素C溶液，并進行過濾滅菌；

步驟S50，待培養(yǎng)基冷卻到60℃時向培養(yǎng)基中加入步驟S40配制好的試劑，搖晃均勻，靜置，冷卻凝固。

其中培養(yǎng)基的配方如下：以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加6-BA (6-芐氨基腺嘌呤)的濃度為0.6mg/L、2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）的濃度為3 mg/L、活性炭的濃度為0.1 mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L，維生素C的濃度為0.3mg/L，瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為30g/L。

將已經(jīng)消毒的外植體分別接種到實驗組的MS培養(yǎng)基進行常規(guī)組織培養(yǎng)，20天后統(tǒng)計誘導(dǎo)率得出誘導(dǎo)率為93%，高于現(xiàn)有技術(shù)中甘草子葉80%的誘導(dǎo)率。