一種番茄花培育種誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種番茄花培育種誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方，具體設(shè)及一種顯著提高番茄花藥 出愈率的誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方，屬于農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 番茄別名西紅柿，在分類上屬于茄科番茄屬，是一年生或多年生作物。番茄被列為 全世界年總產(chǎn)量最高的30種作物之一，是全世界栽培最為普遍的果菜之一，也是我國(guó)主要 的栽培蔬菜之一。番茄適應(yīng)性強(qiáng)、產(chǎn)量高，果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，富含維生素類和糖類，具有特殊風(fēng) 味和廣闊的用途，并在生產(chǎn)領(lǐng)域可W采取多種栽培方式，近年來逐漸發(fā)展成一種世界性的 農(nóng)作物。
[0003] 由于番茄應(yīng)用的重要性，因此番茄育種研究已成為蔬菜育種的重點(diǎn)研究對(duì)象。另 一方面，番茄也是一種模式植物，在生理生化、遺傳及分子生物學(xué)方面的研究也比其它蔬菜 作物更有意義。常規(guī)雜交育種一直是番茄育種的主要方式，但其純化材料周期長(zhǎng)、見效慢， 不能切實(shí)的滿足生產(chǎn)上對(duì)優(yōu)良品種的迫切需求。通過對(duì)番茄花藥的離體培養(yǎng)誘導(dǎo)雄核發(fā) 育、獲得單倍體或雙單倍體植株從而迅速獲得番茄純合系的花培育種技術(shù)不但可W縮短番 茄的育種周期、加快番茄的育種進(jìn)程，而且所獲得的純合系很有可能結(jié)合雙親的優(yōu)點(diǎn)，獲得 更加優(yōu)良的新種質(zhì)，因而番茄花藥離體培養(yǎng)技術(shù)的研究具有十分重要的理論意義和實(shí)際應(yīng) 用價(jià)值。
[0004] 番茄花藥培養(yǎng)始于1972年，Sharp等從番茄不成熟的花藥誘導(dǎo)獲得單倍體愈傷組 織。同年，Gresshoff和Doy經(jīng)番茄花藥培養(yǎng)的愈傷組織誘導(dǎo)出了番茄單倍體小植株，取得了 番茄花藥培養(yǎng)的首次成功。W后，在番茄花藥培養(yǎng)的方法、條件上不斷有新的進(jìn)展。
[0005] 番茄花藥培養(yǎng)研究雖取得了較大進(jìn)展，但在理論和應(yīng)用上仍存在一些問題。關(guān)于 番茄小抱子由配子體發(fā)育途徑向抱子體途徑轉(zhuǎn)變，進(jìn)而形成單倍體或雙單倍體植株的發(fā)育 調(diào)控機(jī)理尚不明確。培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件間相互作用關(guān)系不清楚，胚狀體或愈傷組織的 誘導(dǎo)率和分化率較低，離實(shí)際應(yīng)用要求有較大差距。因此，加快番茄花培育種機(jī)理研究，開 發(fā)出花藥愈傷誘導(dǎo)率分化率更高的培養(yǎng)基配方，具有重要的現(xiàn)實(shí)需求。
[0006] 培養(yǎng)基是花藥培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，直接關(guān)系到培養(yǎng)物的生長(zhǎng)與分化，培養(yǎng)基組分是 影響花培成功的一個(gè)非常重要的因素，多種番茄花培實(shí)驗(yàn)表明：培養(yǎng)基各組分的合適用量， W及它們之間一定的組合關(guān)系，可顯著影響花培效率，發(fā)現(xiàn)和優(yōu)化組合花藥培養(yǎng)有機(jī)附加 物質(zhì)，可進(jìn)一步提高花藥培養(yǎng)力。因此，培養(yǎng)基成分的優(yōu)化，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類、配比及濃度的 調(diào)節(jié)，有機(jī)附加物質(zhì)的篩選等，均是篩選出培養(yǎng)效率更高的花培培養(yǎng)基的重要研究對(duì)象。通 過多年番茄花藥培養(yǎng)的摸索和實(shí)踐，我們進(jìn)一步優(yōu)化了基本培養(yǎng)基配方，并且不斷嘗試加 入一些提高番茄花藥誘導(dǎo)力的有機(jī)添加物并組合其種類搭配及濃度，最終摸索出了一種番 茄品種培育用花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方。我們的研究技術(shù)對(duì)于推動(dòng)番茄花培育種的產(chǎn)業(yè)化推廣 無疑具有極大的現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明提供了一種番茄花培育種誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其特征在于:該培養(yǎng)基的配方如下： KN03 900~1000mg/L，NH4N〇3 800~850mg/L，KH2P〇4 650~700mg/L，MgS〇4.出0 1100~ 1300111邑/1，〔曰(：12.2此0 200~250111邑幾，化2-抓14 72~78111邑/1，尸6504.7出0 53~57111邑/1， MnS〇4.此0 16~18mg/L，ZnS〇4.7此0 17~19mg/L，曲B03 5.5~6.5mg/L，KI 0.75~0.85mg/ 1^，化504.5出0 0.02~0.03111邑/1，(：〇(：1.6出0 0.025~0.035111邑/1，胞]\1〇04.2此0 0.2~0.3111邑/ L，AgN〇3 7.5~8.5mg/L，肌醇 90~llOmg/L，維生素 Bl 0.45~0.55mg/L，維生素 B6 0.45~ 0.55mg/L，煙酸4.5~5.5mg/L，甘氨酸1.8~2.2mg/L，葉酸0.45~0.55mg/L，環(huán)憐酸鳥巧 0.25~0.35g/L，麥芽糖18~22g/L，薦糖14~16g/L，植物凝膠4.5~5.5g/L; 2.4- D 0.9~l.lmg/L，激動(dòng)素 0.35~0.45mg/L，復(fù)獻(xiàn)核酸 0.25~0.35mg/L，生物素 0.04~0.06mg/L，維生素 C 40~50皿ol/L，活性炭150~200mg/L，水解蛋白0.55~0.65g/ L。
[000引所述的培養(yǎng)基配方的最佳含量為:KN03 950mg/L，NH4N03 825mg/L，K此P04 675mg/ L，MgS04?出0 1200mg/L，CaCl2,2出0 225mg/L，Na2-EDTA 75mg/L，F(xiàn)eS04,7出0 55mg/L，MnS04-出0 17mg/L，ZnS04.7出0 18mg/L，曲B03 6.0mg/L，KI 0.8mg/L，CuS04.5出0 0.025mg/L，CoCl ?6此0 0.03111邑/1，船]\1〇04'2出0 0.25111邑/1，4邑側(cè)3 8.0111邑/1，肌醇100111邑/1，維生素810.5111邑/ L，維生素 B6 0.5mg/L，煙酸5.0mg/L，甘氨酸2.0mg/L，葉酸0.5mg/L，環(huán)憐酸鳥巧0.3g/ L，麥芽糖20g/L，薦糖15g/L，植物凝膠5.0g/l; 2.4- D l.Omg/L，激動(dòng)素0.4mg/L，復(fù)獻(xiàn)核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，維生素 C 4化 mol/L，活性炭175mg/L，水解蛋白0.6g/L。
[0009] 所述的培養(yǎng)基配方的配制抑值為:5.6~6.0，最佳配制抑值為5.8。
[0010] 本發(fā)明所述的培養(yǎng)基具有高效率地誘導(dǎo)番茄花藥產(chǎn)生花粉愈傷的優(yōu)點(diǎn)，可W顯著 提高番茄花藥培養(yǎng)效率，加快番茄良種培育進(jìn)程。下面的實(shí)施例W及對(duì)比實(shí)驗(yàn)可W清楚地 反映本發(fā)明所述培養(yǎng)基的特點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[00川實(shí)施例1 配制如下配方的培養(yǎng)基： KN03 950mg/L，NH4N03 825mg/L，KH2P04 675mg/L，MgS04.H20 1200mg/L，CaCl2.2H20 225mg/L，化2-EDTA 75mg/L，F(xiàn)eS04'7H20 日5mg/L，MnS04'H20 17mg/L，ZnS04'7H20 18mg/L， 曲803 6.0111邑/1，1(10.8111邑/1，加504'5出0 0.025111邑/1，(：0(：1'6此0 0.03111邑/1，胞]\1〇04'2此0 0.25mg/L，AgN〇3 8.0mg/L，肌醇 lOOmg/L，維生素 BI 0.5mg/L，維生素 B6 0.5mg/L，煙酸 5.0mg/L，甘氨酸2.0mg/L，葉酸0.5mg/L，環(huán)憐酸鳥巧0.3g/L，麥芽糖20g/L，薦糖15g/ L，植物凝膠5.0g/l; 2.4- D l.Omg/L，激動(dòng)素0.4mg/L，復(fù)獻(xiàn)核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，維生素 C 4化 mol/L，活性炭 175mg/L，水解蛋白 0.6g/L，pH 5.8。
[0012] 選擇番茄品種大葉早粉和桃太郎作為花藥培養(yǎng)供體，于晴天上午9:00-11:00取 盛花期花蕾，將花蕾用洗衣粉洗凈，W清洗附著在外植體上的灰塵和細(xì)菌，再用流動(dòng)的自來 水沖洗，4°C低溫預(yù)處理。2天后取出花蕾，用濾紙吸干花蕾上的水放置于超凈工作臺(tái)上，剝 出子房，70%酒精消毒3-4min，無菌水沖洗3-4次，接種至愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基，暗培養(yǎng)4周左 右，得到白色或淡綠色愈傷。計(jì)算愈傷組織誘導(dǎo)率，然后轉(zhuǎn)移入再生培養(yǎng)基。
[0013] 愈傷組織誘導(dǎo)率(％)=(愈傷組織產(chǎn)生數(shù)/接種花藥總數(shù)）X 100。
[0014] 實(shí)施例2 配制如下配方的培養(yǎng)基(AgN〇3添加濃度的優(yōu)選）： KN03 950mg/L，NH4N〇3 825mg/L，KH2P〇4 675mg/L，MgS〇4.H2〇 1200mg/L，CaCl2.2H2〇 225mg/L，化2-EDTA 75mg/L，F(xiàn)eS〇4'7H2〇 日5mg/L，MnS〇4'H2〇 17mg/L，ZnS〇4'7H2〇 18mg/L， 曲803 6.0111邑/1，1(10.8111邑/1，加504'5出0 0.025111邑/1，(：〇(：1'6此0 0.03111邑/1，胞]\1〇04'2此0 0.25mg/L，肌醇 lOOmg/L，維生素 BI 0.5mg/L，維生素 B6 0.5mg/L，煙酸 5.0mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，葉酸0.5mg/L，環(huán)憐酸鳥巧0.3g/L，麥芽糖20g/L，薦糖15g/L，植物凝膠5.0g/ L； 2.4- D l.Omg/L，激動(dòng)素0.4mg/L，復(fù)獻(xiàn)核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，維生素 C 4化 mol/L，活性炭 175mg/L，水解蛋白 0.6g/L，pH 5.8。
[0015] AgN〇3的添加濃度設(shè)置 W 下5種:0; 2. Omg/L; 4. Omg/L; 6. Omg/L; 10.0 mg/L。
[0016] 同樣選取該兩個(gè)番茄品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈 傷組織誘導(dǎo)率。
[0017] 實(shí)施例3 配制如下配方的培養(yǎng)基(甘氨酸添加濃度的優(yōu)選）： KN03 950mg/L，NH4N〇3 825mg/L，KH2P〇4 675mg/L，MgS〇4.H2〇 1200mg/L，CaCl2.2H2〇 225mg/L，化2-EDTA 75mg/L，F(xiàn)eS〇4'7H2〇 日5mg/L，MnS〇4'H2〇 17mg/L，ZnS〇4'7H2〇 18mg/L， 曲803 6.0111邑/1，1(10.8111邑/1，加504'5出0 0.025111邑/1，(：〇(：1'6此0 0.03111邑/1，胞]\1〇04'2此0 0.25mg/L，AgN〇3 8.0mg/L，肌醇 lOOmg/L，維生素 BI 0.5mg/L，維生素 B6 0.5mg/L，煙酸 5.0mg/L，葉酸0.5mg/L，環(huán)憐酸鳥巧0.3g/L，麥芽糖20g/L，薦糖15g/L，植物凝膠5.0g/ L； 2.4- D l.Omg/L，激動(dòng)素0.4mg/L，復(fù)獻(xiàn)核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，維生素 C 4化 mol/L，活性炭 175mg/L，水解蛋白 0.6g/L，pH 5.8。
[001引甘氨酸的添加濃度設(shè)置W下4種:0; 1. Omg/l; 3. Omg/l; 4. Omg/L。
[0019] 同樣選取該兩個(gè)番茄品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈 傷組織誘導(dǎo)率。
[0020] 實(shí)施例4 配制如下配方的培養(yǎng)基(環(huán)憐酸鳥巧添加濃度的優(yōu)選）： KN03 950mg/L，NH4N〇3 825mg/L，KH2P〇4 675mg/L，MgS〇4.H2〇 1200mg/L，CaCl2.2H2〇 225mg/L，化2-EDTA 75mg/L，F(xiàn)eS〇4'7H2〇 日5mg/L，MnS〇4'H2〇 17mg/L，ZnS〇4'7H2〇 18mg/L， 曲803 6.0111邑/1，1(10.8111邑/1，加504'5出0 0.025111邑/1，(：〇(：1'6此0 0.03111邑/1，胞]\1〇04'2此0 0.25mg/L，AgN〇3 8.0mg/L，肌醇 lOOmg/L，維生素 BI 0.5mg/L，維生素 B6 0.5mg/L，煙酸 5.0mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，葉酸 0.5mg/L，麥芽糖 20g/L，薦糖 15g/L，植物凝膠 5.0g/l; 2.4- D l.Omg/L，激動(dòng)素0.4mg/L，復(fù)獻(xiàn)核酸0.3mg/L，生物素0.05mg/L，維生素 C 4化 mol/L，活性炭 175mg/L，水解蛋白 0.6g/L，pH 5.8。
[0021] 環(huán)憐酸鳥巧的添加濃度設(shè)置W下5種:0;0.1 g/l;0.2g/L;0.4g/l;0.5g/L。
[0022] 同樣選取該兩個(gè)番茄品種作為花藥供體，操作方法、培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，計(jì)算愈 傷組織誘導(dǎo)率。
[0023] 實(shí)施例5 配制如下配方的培養(yǎng)基(植物凝膠添加濃度的優(yōu)選）： KN03 950mg/L，N