1.一種蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,它包括以下幾個(gè)步驟:
1)材料的選擇及初代培養(yǎng):
選用生長(zhǎng)健壯、開花3-5朵、經(jīng)檢測(cè)后攜帶病毒的蝴蝶蘭開花株,切取花梗,3-5cm一節(jié),每節(jié)包含1-2個(gè)飽滿腋芽,在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精表面消毒30-40s,再用用0.1%的HgCl2震蕩消毒8-10min,無菌水沖洗3-5次,用尖頭鑷剝?nèi)ヒ秆堪~,再0.1%的HgCl2震蕩消毒2-3min,用無菌水沖洗5-8次,切除受HgCl2毒害的兩端,接種于50mL誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先暗培養(yǎng)7-10天,后轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)2-3個(gè)月,待兩片真葉展開形成叢生芽即可;
2)莖尖伸長(zhǎng)培養(yǎng):
將步驟1)所誘導(dǎo)出的展葉的叢生芽轉(zhuǎn)入50ml促莖尖伸長(zhǎng)培養(yǎng)基,培養(yǎng)40-60天,待第三片或第四片葉成熟即可,得幼苗;
3)第一次脫毒培養(yǎng):
將步驟2)獲得的幼苗,置于10X的冷光源解剖鏡下用解剖針剝?nèi)∫粋€(gè)微凸、穹形、發(fā)亮的生長(zhǎng)點(diǎn),迅速切下置于30mL脫毒培養(yǎng)基表面,進(jìn)行暗培養(yǎng)7-15天后轉(zhuǎn)入光培養(yǎng)2-3個(gè)月,中間可進(jìn)行1-2次轉(zhuǎn)接,防褐化死亡,每瓶培養(yǎng)基可接種3-5個(gè)含生長(zhǎng)點(diǎn)的莖尖,莖尖切取大小為1-2mm,留取1個(gè)葉原基;
4)第二次脫毒培養(yǎng):
將步驟3)獲得的脫毒莖尖,待其長(zhǎng)出1或2片成熟小葉后,進(jìn)行二次脫毒培養(yǎng),10X冷光源解剖鏡下剝?nèi)?-2mm大小生長(zhǎng)點(diǎn)后,迅速接于30mL脫毒培養(yǎng)基表面,每瓶培養(yǎng)基接種3-5含生長(zhǎng)點(diǎn)的莖尖,進(jìn)行暗培養(yǎng)7-15天后轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)2-3個(gè)月,每月進(jìn)行一次轉(zhuǎn)接,更換培養(yǎng)基,防止褐化死亡;
5)脫毒苗的增殖培養(yǎng):
將步驟4)獲得的脫毒苗,檢測(cè)后進(jìn)行增殖培養(yǎng),切除葉片及褐化部分接于盛100mL培養(yǎng)基的蘭花瓶,每瓶接種5株;培養(yǎng)2-3個(gè)月后,生長(zhǎng)健壯,增殖系數(shù)達(dá)2-4,即得脫毒分化苗;
6)脫毒苗的壯苗培養(yǎng):
待步驟5)獲得的脫毒分化苗長(zhǎng)至株高2-3cm,兩葉一心后轉(zhuǎn)入盛120mL壯苗培養(yǎng)基的蘭花瓶后進(jìn)行壯苗培養(yǎng),每瓶轉(zhuǎn)接16株;培養(yǎng)45-60天后,株高達(dá)3-5cm,兩葉一心壯苗完成;
7)脫毒苗的生根培養(yǎng):
將步驟6)獲得的壯苗后植株,接于150mL生根培養(yǎng)基的蘭花瓶中進(jìn)行生根培養(yǎng),每瓶轉(zhuǎn)接11-13株;培養(yǎng)3-4個(gè)月后,待植株長(zhǎng)至3-4片葉,根系達(dá)3條以上,健壯有活力,即可移入溫室馴化移栽。
2.如權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,步驟1)中所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L,pH5.4-5.8。
3.如權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,步驟1)中光照培養(yǎng)時(shí),培養(yǎng)條件為:溫度25±2℃,光照強(qiáng)度為1500~2000lx,光照時(shí)長(zhǎng)8-10小時(shí)/天。
4.如權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,步驟2)中所述的促莖尖伸長(zhǎng)培養(yǎng)基為:1/3MS+GA31~2mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0~6.5g/L,pH5.4~5.8。
5.如權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,步驟2)中培養(yǎng)40-60天時(shí)的培養(yǎng)條件為:溫度25±2℃,光照強(qiáng)度為1500~2000lx,光照時(shí)長(zhǎng)8~10小時(shí)/天。
6.如權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,步驟3)中脫毒培養(yǎng)基為:1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+5%氨基寡糖素0.2-0.3mL/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L,pH5.4~5.8;光培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)條件為:溫度25±2℃,光照強(qiáng)度為1000~1500lx,光照時(shí)長(zhǎng)8~10小時(shí)/天。
7.如權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,步驟5)中所述的增殖培養(yǎng)基為:1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+腺嘌呤3-5mg/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L,pH5.4~5.8。
8.如權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,步驟6)中所述的壯苗培養(yǎng)基為:1/2MS+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L,pH5.4~5.8;培養(yǎng)條件:溫度25±2℃,光照強(qiáng)度為1500~2000lx,光照時(shí)長(zhǎng)8~10小時(shí)/天。
9.如權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,步驟7)中所述的生根培養(yǎng)基:1/2MS+NAA1.0mg/L+香蕉30g/L+土豆40g/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L,pH5.4~5.8;培養(yǎng)條件:溫度25±2℃,光照強(qiáng)度為1500~2000lx,光照時(shí)長(zhǎng)8~10小時(shí)/天。
10.如權(quán)利要求1所述的蝴蝶蘭脫毒及快繁技術(shù),其特征在于,步驟4)中所述的脫毒培養(yǎng)基為:1/3MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+5%氨基寡糖素0.2mL/L+椰汁100mL/L+蔗糖20g/L+瓊脂6.0-6.5g/L,pH5.4~5.8;光培養(yǎng)時(shí)的培養(yǎng)條件為:溫度25±2℃,光照強(qiáng)度為1000~1500lx,光照時(shí)長(zhǎng)8~10小時(shí)/天。