本發(fā)明涉及白穗柯無性繁殖技術(shù)，尤其是一種白穗柯組培苗生根誘導(dǎo)方法。
背景技術(shù)：
白穗柯（Lithocarpus craibianus Barn. ），系殼斗科（Fagaceae）柯屬（Lithocarpus）喬木，喬木，高達(dá)20米。當(dāng)年生枝、葉背及雌花序軸均有棕黃色或灰白色蠟鱗層。葉革質(zhì)，卵形或卵狀橢圓形，長12-19厘米，有時較短或更長，寬4-7厘米，稀更寬，頂部長尖，基部短尖至寬楔形，全緣，中脈的下段在葉面厚，葉脈約有8-12條，在葉面常呈裂槽狀凹陷，支脈不顯或隱約可見，嫩葉干后葉面常有油潤光澤，二年生葉則蒼暗；葉柄長1-2.5厘米。雄穗狀花序腋生，稀為圓錐花序，長達(dá)15厘米；雌花序的上部常著生少數(shù)雄花，長達(dá)30厘米，雌花3-5-7朵集生成簇，花柱長1-1.2毫米。殼斗圓球形或略扁，頂端常呈乳頭狀短凸起，徑15-20毫米，全包堅果，偶有頂部邊緣開裂并反卷，故堅果部分外露，小苞片三角形，鉆尖狀，伏貼于殼壁，覆瓦狀排列，分明，位于殼斗頂部的略狹長且向殼斗口部下彎，被黃棕色、細(xì)片狀、稍緊貼的蠟鱗；堅果近圓球形，徑13-18毫米，被甚稀疏的細(xì)伏毛，頂部的毛較密，果臍凸起，占堅果面積的1/3?；ㄆ?-9月，果次年同期成熟。產(chǎn)四川西南部、云南南部及西南部各地。生于1 500-2 700米山地雜木林中，多見于較干燥坡地，常因被砍伐，故生成灌木狀，通常為10 米上下的小喬木。老撾、泰國北部也有。
目前，白穗柯資源仍處于野生分布狀態(tài)，但隨著保持植物多樣性的需求，規(guī)?；斯ぴ耘喟姿肟沦Y源勢在必行。組織培養(yǎng)技術(shù)是一種快速無性繁殖技術(shù)，選擇白穗柯優(yōu)良家系或者無性系為材料，通過組織培養(yǎng)方法繁殖苗木，既可以滿足生產(chǎn)上的數(shù)量要求，又可保持母本性狀。然而在組培過程中，常常出現(xiàn)生根率低、生根不統(tǒng)一、根系數(shù)量少以及根系不粗壯的問題。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種能提高白穗柯組培苗的生根率，根系數(shù)量以及根系萌發(fā)整齊度的白穗柯組培苗生根誘導(dǎo)方法。
為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
一種白穗柯組培苗生根誘導(dǎo)方法，選取增殖繼代白穗柯小苗，先進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)，然后再進(jìn)行生根培養(yǎng)，置于適宜環(huán)境中培養(yǎng)，獲得帶根組培苗，主要操作步驟如下：
（1）取材：選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)35～40d的白穗柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄，備用；
（2）預(yù)生根培養(yǎng)：將步驟（1）修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,在特定的光溫環(huán)境中進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)；
（3）生根培養(yǎng)：待步驟（2）中的單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，在特定的光溫環(huán)境中進(jìn)行生根培養(yǎng)。
以上所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 1.0～2.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 1.0～2.0mg/L+ABT2#0.5～2.0 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 950 mg/L；NH4NO3 790 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 330 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。
以上步驟（2）和步驟（3）所述的光溫環(huán)境為：溫度20±1℃，濕度40～45%，光照強度2000～2500lux，光照15～16h/d。
本發(fā)明具有的優(yōu)點及有益效果如下：
1、本發(fā)明采用1/2改良MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，同時重點調(diào)整了與白穗柯生根的相關(guān)的微量元素和有機成分，使得培養(yǎng)基更科學(xué)，更有針對性，更易促使白穗柯繼代芽生根，效果顯著。
2、本發(fā)明在生根誘導(dǎo)前采用低濃度NAA和抗壞血酸（VC）對繼代單芽進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)，然后再進(jìn)行生根培養(yǎng)，可使組培苗發(fā)根統(tǒng)一，發(fā)根速度快，根系粗壯且數(shù)量較多。
3、本發(fā)明在增殖繼代單芽經(jīng)過30～35d時間預(yù)生根培養(yǎng)后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)，即可達(dá)到預(yù)生根培養(yǎng)效果，又避免了小苗在預(yù)生根培養(yǎng)階段長出根系而使后期生根培養(yǎng)發(fā)根不整齊。
4、本發(fā)明的在特定的光溫條件下進(jìn)行預(yù)生根和生根培養(yǎng)，適應(yīng)白穗柯組培苗的生長特性，促進(jìn)苗木的生長。
5、本發(fā)明縮短了白穗柯繼代芽生根周期，生根率高，根系多，質(zhì)量好，生根組培苗移栽成活率高，可實現(xiàn)白穗柯組培產(chǎn)業(yè)化育苗，為人工無性系林的建設(shè)提供優(yōu)質(zhì)種苗，具有較好的經(jīng)濟效益、社會效益和生態(tài)效益。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實施例1：
選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)35～36d的白穗柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,置于溫度20±1℃，濕度40%，光照強度2000lux，光照16h/d的條件下進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)。其中所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 1.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，置于溫度20±1℃，濕度40%，光照強度2000lux，光照16h/d的條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)。所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 1.0mg/L+ABT2#0.5 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 950 mg/L；NH4NO3 790 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 330 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。
實施例2：
選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)36～37d的白穗柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,置于溫度20±1℃，濕度40%，光照強度2500lux，光照15h/d的條件下進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)。其中所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 1.5mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，置于溫度20±1℃，濕度40%，光照強度2500lux，光照15h/d的條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)。所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 1.0mg/L+ABT2#1.0 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 950 mg/L；NH4NO3 790 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 330 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。
實施例3：
選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)37～38d的白穗柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,置于溫度20±1℃，濕度45%，光照強度2000lux，光照16h/d的條件下進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)。其中所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 2.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，置于溫度20±1℃，濕度45%，光照強度2000lux，光照16h/d的條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)。所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 2.0mg/L+ABT2#1.5 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 950 mg/L；NH4NO3 790 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 330 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。
實施例4：
選取經(jīng)常規(guī)組培中壯芽培養(yǎng)39～40d的白穗柯繼代芽，消毒瓶子外表后，在超凈工作臺上的無菌空間內(nèi)，選取繼代芽叢中生長健壯、高度1～2cm的單芽，于節(jié)下2～3mm處剪切，清除基部葉片和葉柄。將修剪后的單芽接種于預(yù)生根培養(yǎng)基中,置于溫度20±1℃，濕度45%，光照強度2500lux，光照15h/d的條件下進(jìn)行預(yù)生根培養(yǎng)。其中所述的預(yù)生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+NAA 2.0mg/L+維生素C6g/L++VC 15mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
單芽經(jīng)過30～35d預(yù)生根培養(yǎng)后，將單芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基，置于溫度20±1℃，濕度45%，光照強度2500lux，光照15h/d的條件下進(jìn)行生根培養(yǎng)。所述的生根培養(yǎng)基其原料含量為：1/2改良MS培養(yǎng)基+IAA 2.0mg/L+ABT2#2.0 mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂5.0g/L。
以上所述的改良MS培養(yǎng)基的基本組成為：KNO3 950 mg/L；NH4NO3 790 mg/L；CaCl2·2H2O 260 mg/L；MgSO4·7H2O 400 mg/L；Ca(NO3)2·4H2O 600 mg/L；KH2PO4 330 mg/L；MnSO4·H2O 22.3 mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6 mg/L；CuSO4·5H2O 0.025 mg/L；H3BO3 6.2 mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.025 mg/L；KI 0.83 mg/L；CoCl2·6H2O 0.025 mg/L；維生素B1 1.0 mg/L；維生素B6 0.5 mg/L；煙酸 0.5 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L；肌醇 90 mg/L。