本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種金線蓮組培方法。

背景技術(shù)：

金線蓮，又稱金線蘭、金絲草，為蘭科開唇植物花葉蘭屬多年生珍稀中草藥，素有“藥王”、“金草”、“神藥”、“烏人參”等美稱。主要分布在我國(guó)的福建、臺(tái)灣、廣西、廣東等地。具有清熱涼血，除濕解毒，平衡陰陽、扶正固本，陰陽互補(bǔ)、生津養(yǎng)顏、調(diào)和氣血、五臟、養(yǎng)壽延年等功用。主要用于治療肺熱咳嗽，肺結(jié)核咯血，尿血，小兒驚風(fēng)，破傷風(fēng)，腎炎水腫，風(fēng)濕痹痛，跌打損傷，毒蛇咬傷、支氣管炎、膀胱炎、糖尿病、血尿、急慢性肝炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎腫瘤等疑難病癥，目前主要作為煲湯、茶飲等保健食品材料使用。

由于金線蓮療效確切，利用價(jià)值高，經(jīng)濟(jì)效益好，所以近年來金線蓮的野生資源被瘋狂采挖，到目前為止，野生金線蓮資源已經(jīng)基本絕跡。但在自然條件下，金線蓮的資源更新非常緩慢，無法滿足市場(chǎng)的需要。而且金線蓮種子不具胚乳，無發(fā)芽能力，只有在真菌共生下，才促進(jìn)種子萌發(fā)生長(zhǎng)，但發(fā)芽率非常低。雖然還可以通過分根法式扦插方式繁殖，則所需時(shí)間很長(zhǎng)，而且繁殖倍率也不高，生產(chǎn)上難以實(shí)現(xiàn)大面積栽培。采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效快速地提高金線蓮種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)金線蓮優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種金線蓮組培方法，采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效快速地提高金線蓮種苗的繁殖速度和質(zhì)量。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種金線蓮組培方法，包括如下：

（1）選擇野生金線蓮莖段或莖尖為種源，使用10-20wt.%的樂果乳劑稀釋600-700倍液浸泡15-30min，取出后，放入超凈工作臺(tái)使用5-6wt%的復(fù)合維生素溶液浸泡10-20min，再用0.05%的氯化汞溶液消毒3-5min，無菌水清晰3-5次，用濾水紙吸干水分備用；

（2）將步驟（1）獲得的金線蓮莖段或莖尖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，在17-20℃下培養(yǎng)5-10天，光照強(qiáng)度為300-1000LX，避免直射，光照時(shí)間為2-3h/天；

（3）將步驟（2）培養(yǎng)獲得的不定芽切成具有1-3個(gè)不定芽的小塊，接種在增殖培養(yǎng)基上，20-25天轉(zhuǎn)接一次；培養(yǎng)溫度為15-20℃，光照強(qiáng)度為300-1000LX，避免直射，光照時(shí)間為2-3h/天；

（4）當(dāng)苗長(zhǎng)到2-4cm時(shí)，將苗切成單株，接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20-25天，光照強(qiáng)度為500-1500LX，避免直射，光照時(shí)間為3-5h/天，培養(yǎng)溫度為15-20℃；

（5）選取具葉4-5張、發(fā)根3-5條的苗，進(jìn)行移栽，移栽至有遮陰棚的基質(zhì)中栽培，溫度為20-23℃，相對(duì)濕度為80-90%，自然散色光，基質(zhì)要求疏松透氣。

所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+蕓苔素0.1-0.3mg/L+DA-6 0.2-0.5mg/L+激動(dòng)素0.1-0.4mg/L，pH5.5-6.0。

所述的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.1-0.3mg/L+多效唑0.05-0.1mg/L+椰子汁 2-5g/L+蔗糖10-15g/L+瓊脂粉2-3g/L，pH5.0-5.3。

所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS+萘乙酸 0.1-0.3mg/L+賴氨酸10-15g/L+赤霉素0.1-0.4mg/L+瓊脂10-20g/L+西紅柿汁5-10g/L+白糖2-4g/L，pH5.3-5.5。

所述基質(zhì)由以下重量份原料組成：麩皮6-10份、紅糖1-3份、草木灰5-10份、腐殖土3-8份、田園土10-15份、蘋果渣5-9份、山竹殼2-6份、杏鮑菇菌渣6-11份。按常規(guī)方法制備。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

1．本發(fā)明選用野生金線蓮莖段或莖尖作為培養(yǎng)對(duì)象，成活率高，不定芽增殖率高。

2．在基質(zhì)中加入麩皮、紅糖、草木灰、腐殖土、田園土、蘋果渣、山竹殼、杏鮑菇菌渣等成分對(duì)于促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)非常有利，葉片凈增量、發(fā)根數(shù)和鮮重凈增量高。

3．經(jīng)過組培試驗(yàn)，增殖率可達(dá)6倍以上，成活率達(dá)百分百。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種金線蓮組培方法，包括如下：

（1）選擇野生金線蓮莖段或莖尖為種源，使用15wt.%的樂果乳劑稀釋650倍液浸泡25min，取出后，放入超凈工作臺(tái)使用6wt%的復(fù)合維生素溶液浸泡15min，再用0.05%的氯化汞溶液消毒4min，無菌水清晰4次，用濾水紙吸干水分備用；

（2）將步驟（1）獲得的金線蓮莖段或莖尖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，在18℃下培養(yǎng)8天，光照強(qiáng)度為600LX，避免直射，光照時(shí)間為2h/天；

（3）將步驟（2）培養(yǎng)獲得的不定芽切成具有2個(gè)不定芽的小塊，接種在增殖培養(yǎng)基上，23天轉(zhuǎn)接一次；培養(yǎng)溫度為18℃，光照強(qiáng)度為600LX，避免直射，光照時(shí)間為2h/天；

（4）當(dāng)苗長(zhǎng)到2-4cm時(shí)，將苗切成單株，接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)23天，光照強(qiáng)度為1000LX，避免直射，光照時(shí)間為4h/天，培養(yǎng)溫度為18℃；

（5）選取具葉5張、發(fā)根4條的苗，進(jìn)行移栽，移栽至有遮陰棚的基質(zhì)中栽培，溫度為22℃，相對(duì)濕度為85%，自然散色光，基質(zhì)要求疏松透氣。

所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+蕓苔素0.2mg/L+DA-6 0.3mg/L+激動(dòng)素0.3mg/L，pH5.7。

所述的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.2mg/L+多效唑0.07mg/L+椰子汁 4g/L+蔗糖12g/L+瓊脂粉3g/L，pH5.2。

所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS+萘乙酸 0.2mg/L+賴氨酸12g/L+赤霉素0.2mg/L+瓊脂15g/L+西紅柿汁8g/L+白糖3g/L，pH5.4。

所述基質(zhì)由以下重量份原料組成：麩皮8份、紅糖2份、草木灰8份、腐殖土5份、田園土12份、蘋果渣7份、山竹殼4份、杏鮑菇菌渣9份。按常規(guī)方法制備。

經(jīng)過試驗(yàn)，增殖率可達(dá)7倍，成活率達(dá)百分百。

實(shí)施例2

一種金線蓮組培方法，包括如下：

（1）選擇野生金線蓮莖段或莖尖為種源，使用10wt.%的樂果乳劑稀釋600倍液浸泡15min，取出后，放入超凈工作臺(tái)使用5wt%的復(fù)合維生素溶液浸泡10min，再用0.05wt.%的氯化汞溶液消毒3min，無菌水清晰3次，用濾水紙吸干水分備用；

（2）將步驟（1）獲得的金線蓮莖段或莖尖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，在17℃下培養(yǎng)5天，光照強(qiáng)度為300LX，避免直射，光照時(shí)間為2h/天；

（3）將步驟（2）培養(yǎng)獲得的不定芽切成具有1個(gè)不定芽的小塊，接種在增殖培養(yǎng)基上，20天轉(zhuǎn)接一次；培養(yǎng)溫度為15℃，光照強(qiáng)度為300LX，避免直射，光照時(shí)間為2-3h/天；

（4）當(dāng)苗長(zhǎng)到2-4cm時(shí)，將苗切成單株，接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20天，光照強(qiáng)度為500LX，避免直射，光照時(shí)間為3h/天，培養(yǎng)溫度為15℃；

（5）選取具葉4張、發(fā)根3條的苗，進(jìn)行移栽，移栽至有遮陰棚的基質(zhì)中栽培，溫度為20℃，相對(duì)濕度為80%，自然散色光，基質(zhì)要求疏松透氣。

所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+蕓苔素0.1mg/L+DA-6 0.2mg/L+激動(dòng)素0.1mg/L，pH5.5。

所述的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.1mg/L+多效唑0.05mg/L+椰子汁 2g/L+蔗糖10g/L+瓊脂粉2g/L，pH5.0。

所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS+萘乙酸 0.1mg/L+賴氨酸10g/L+赤霉素0.1mg/L+瓊脂10g/L+西紅柿汁5g/L+白糖2g/L，pH5.3。

所述基質(zhì)由以下重量份原料組成：麩皮6份、紅糖1份、草木灰5份、腐殖土3份、田園土10份、蘋果渣5份、山竹殼2份、杏鮑菇菌渣6份。按常規(guī)方法制備。

經(jīng)過試驗(yàn)，增殖率可達(dá)6倍，成活率達(dá)百分百。

實(shí)施例3

一種金線蓮組培方法，包括如下：

（1）選擇野生金線蓮莖段或莖尖為種源，使用20wt.%的樂果乳劑稀釋700倍液浸泡30min，取出后，放入超凈工作臺(tái)使用6wt%的復(fù)合維生素溶液浸泡20min，再用0.05wt.%的氯化汞溶液消毒5min，無菌水清晰5次，用濾水紙吸干水分備用；

（2）將步驟（1）獲得的金線蓮莖段或莖尖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，在20℃下培養(yǎng)10天，光照強(qiáng)度為1000LX，避免直射，光照時(shí)間為3h/天；

（3）將步驟（2）培養(yǎng)獲得的不定芽切成具有3個(gè)不定芽的小塊，接種在增殖培養(yǎng)基上， 25天轉(zhuǎn)接一次；培養(yǎng)溫度為20℃，光照強(qiáng)度為1000LX，避免直射，光照時(shí)間為2h/天；

（4）當(dāng)苗長(zhǎng)到2-4cm時(shí)，將苗切成單株，接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)25天，光照強(qiáng)度為1500LX，避免直射，光照時(shí)間為3h/天，培養(yǎng)溫度為20℃；

（5）選取具葉5張、發(fā)根5條的苗，進(jìn)行移栽，移栽至有遮陰棚的基質(zhì)中栽培，溫度為23℃，相對(duì)濕度為90%，自然散色光，基質(zhì)要求疏松透氣。

所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+蕓苔素0.3mg/L+DA-6 0.5mg/L+激動(dòng)素0.4mg/L，pH6.0。

所述的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.3mg/L+多效唑0.1mg/L+椰子汁5g/L+蔗糖15g/L+瓊脂粉3g/L，pH5.3。

所述的生根培養(yǎng)基為1/2MS+萘乙酸0.3mg/L+賴氨酸15g/L+赤霉素0.4mg/L+瓊脂20g/L+西紅柿汁10g/L+白糖4g/L，pH5.5。

所述基質(zhì)由以下重量份原料組成：麩皮10份、紅糖3份、草木灰10份、腐殖土8份、田園土15份、蘋果渣9份、山竹殼6份、杏鮑菇菌渣11份。按常規(guī)方法制備。

經(jīng)過試驗(yàn)，增殖率與現(xiàn)有的培養(yǎng)方法相比可達(dá)6.5倍以上，成活率達(dá)百分百。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。