專利名稱：動(dòng)物細(xì)胞或器官的保存劑及其保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物細(xì)胞或器官的保存劑。詳細(xì)的說(shuō)，涉及動(dòng)物細(xì)胞、移植用器官及血液、血細(xì)胞、血小板等的保存劑，蛋白質(zhì)的穩(wěn)定劑，或在器官移植后預(yù)防、治療、改善器官障礙等的保存劑。
通常，為了保存細(xì)胞是在-196℃的極低溫度下冷凍保存，必要時(shí)將這些冷凍細(xì)胞迅速解凍得到活細(xì)胞。但是，雖然這種冷凍·熔解后的生存率依賴于細(xì)胞的種類和實(shí)驗(yàn)者的熟練程度，可是除癌以外的正常有用細(xì)胞，例如胰島及肝細(xì)胞的生存率極低，至多為10～30％。
另外，由于血細(xì)胞成分及血小板不能冷凍保存，所以其有效期為12～72小時(shí)，非常短。加上雖然器官移植的病例增加，而移植器官的保存方法卻仍為一項(xiàng)重要研究課題而被遺留，這與細(xì)胞增殖和細(xì)胞障礙有很大關(guān)系。
隨著近年來(lái)外科手術(shù)和免疫抑制劑的發(fā)展，器官移植的病例日益增加。對(duì)于這種器官移植，理想的是由供者(donor)摘除的器官直接移植給受者(recipient)，但是未必能夠直接進(jìn)行移植手術(shù)。因而伴隨移植手術(shù)的緊急性，貴重器官的保存問(wèn)題就顯得非常重要了。目前，作為器官保存的方法使用的是以抑制器官代謝為目的的低溫保存法和以維持代謝為目的的灌流保存法，為此開發(fā)了各種保存液在臨床上應(yīng)用。
在早期移植使用Euro-Collin’s液，但是器官的保存時(shí)間即使是肝臟也不超過(guò)24小時(shí)，這就需要能更長(zhǎng)時(shí)間保存的保存液。但是，最近美國(guó)Wisconsin大學(xué)的課題組開發(fā)出作為胰臟移植保存液的UW液(University of Wisconsin，Wahlberg，J.A.，et al.，Transplantation，43，pp.5-8，1987)，這種保存液不僅可以保存胰臟，也可以作為肝臟和腎臟的保存液使用，肝臟可以保存24小時(shí)。
但是，仍然不能滿足需要，因而非常需要開發(fā)一種能長(zhǎng)時(shí)間保持器官生存能力(viability)、具有更優(yōu)良的器官保存效果的保存液。
各種器官共同之處在于由于缺血以及血流再灌注時(shí)產(chǎn)生的自由基，促進(jìn)生物膜的脂質(zhì)過(guò)氧化，引起生物膜障礙，結(jié)果造成移植器官的功能障礙。所以，如果能夠防止由于產(chǎn)生這種過(guò)氧化脂質(zhì)而出現(xiàn)的細(xì)胞障礙，就可以開發(fā)出更有效的保存液。
近年來(lái)，報(bào)道了大量關(guān)于自由基對(duì)生物體影響的研究，對(duì)于抗氧化物質(zhì)也逐漸清楚。作為目前已知的主要抗氧化物質(zhì)有酶類的超氧化物歧化酶(SOD)，以及非酶類的維生素E、維生素C、谷胱甘肽、類胡蘿卜素、黃酮類、糖類、鐵的螯合劑、尿酸、白蛋白等。
已知關(guān)于利用這些抗氧化物質(zhì)抑制組織增殖及保存器官的研究還不是很多，但是，最近報(bào)道發(fā)現(xiàn)綠茶多酚具有抗氧化作用、除臭作用、抗菌作用及抗癌作用。近年來(lái)，這種綠茶多酚作為功能性食品原料大量、廉價(jià)生產(chǎn)。
另一方面，細(xì)胞與組織的障礙與在細(xì)胞線粒體中由三磷酸腺苷(ATP)轉(zhuǎn)換成的次黃嘌呤(hypoxanthin)轉(zhuǎn)變成黃嘌呤(xanthine)過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧(O-2)有很大關(guān)系。由這種障礙最嚴(yán)重的結(jié)果是發(fā)生癌變，癌的產(chǎn)生過(guò)程被認(rèn)為是經(jīng)過(guò)癌癥引發(fā)和癌癥增進(jìn)過(guò)程產(chǎn)生的。在癌癥引發(fā)中，各種致癌物質(zhì)對(duì)細(xì)胞DNA引起障礙導(dǎo)致突變，細(xì)胞無(wú)限增殖造成組織癌變。這種突變也受活性氧的影響。除此以外，產(chǎn)生這種活性氧的過(guò)氧化物也是老化及各種疾病的重要原因之一。
在本發(fā)明中，通過(guò)自由控制各種動(dòng)物細(xì)胞的增殖，在了解細(xì)胞增殖機(jī)理的同時(shí)，開發(fā)出保存用于器官移植的各種器官以及保存血液時(shí)，將以往的可保存時(shí)間延長(zhǎng)至少2倍以上的保存液，同時(shí)提高了蛋白質(zhì)的保存穩(wěn)定性。
具體的說(shuō)，能夠控制正常有用細(xì)胞的增殖，不冷凍而長(zhǎng)時(shí)間保存，通過(guò)控制與細(xì)胞增殖分裂有很大關(guān)系的自由基，自由控制細(xì)胞的增殖·分裂。
本發(fā)明提供含有作為有效成分的多酚，用于細(xì)胞學(xué)及組織學(xué)領(lǐng)域的動(dòng)物細(xì)胞或移植用器官的保存劑。另外還提供了使用該保存劑，保存動(dòng)物細(xì)胞或器官的方法。
本發(fā)明的多酚例如綠茶酚的主要成分兒茶素類及鞣酸等。
特別是多酚優(yōu)選兒茶素類，其中包括作為3，3，4，5，7-黃戊醇已知的兒茶素、具有3，4-二羥基苯基骨架的兒茶酚胺、去甲腎上腺素、腎上腺素、多巴胺，特別優(yōu)選以表?xiàng)攦翰杷貫橹饕煞值膬翰杷仡悺?br> 其他優(yōu)選的多酚例如鞣酸。這里，所謂鞣酸是指通過(guò)水解生成沒(méi)食子酸的多酚化合物。一般的，例如藥典中的鞣酸是8個(gè)沒(méi)食子酸基結(jié)合在葡萄糖殘基的周圍，其構(gòu)象在同一平面，另外有2個(gè)沒(méi)食子酸基在垂直方向結(jié)合的物質(zhì)。
但是，化合物的中心部分未必只限于是葡萄糖，也可以是纖維素類化合物，也可以使用鞣酸水解得到的沒(méi)食子酸二縮酸酐(didebrisidegallate)等。
在我們平常喜愛(ài)喝的綠茶、紅茶、及紅酒中含有大量本發(fā)明保存劑的有效成分多酚，例如綠茶多酚可以用水、乙醇或乙酸乙酯等有機(jī)溶劑從綠茶的葉萃取、精制得到，其主要成分是以表?xiàng)攦翰杷?EGCg)為主體的兒茶素類。
本發(fā)明的優(yōu)選方式是將本發(fā)明中使用多酚作為有效成分的保存劑加入到通常用作細(xì)胞培養(yǎng)基的各種培養(yǎng)液及用于保存器官的保存液中。
本發(fā)明中使用的培養(yǎng)液及用于保存器官的保存液可以使用公知的物質(zhì)，例如可以使用Euro-Collins液(Euro-Collins液，Squifflet，J.P.，et al.，Transplant Proc.，13，693，1981)、UW液等。
通常，多酚容易得到純度在60％以上的制品，作為本發(fā)明細(xì)胞及器官保存劑的多酚也可以使用純度為60％以上的制品，但是純度在85％以上的精制品更適合。當(dāng)然，如果純度更高，效果會(huì)更好。因此，作為本發(fā)明保存劑的有效成分，與純度無(wú)關(guān)，包括所有多酚。
本發(fā)明的保存劑用于保存動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，在目前各種細(xì)胞培養(yǎng)中使用的各種培養(yǎng)液及用于保存器官的保存液中優(yōu)選添加多酚0.1-50wt％，更優(yōu)選添加1-30wt％。
例如，本發(fā)明的保存劑用于保存器官時(shí)，向以往臨床上用作移植用器官保存液的Euro-Collins液及UW液中，進(jìn)一步以上述多酚0.1-50wt％的濃度，更優(yōu)選以1-30wt％的濃度添加即可。
另外，用作血液、血細(xì)胞及血小板的保存劑時(shí)，向在保存劑中預(yù)先添加或在后添加市售葡萄糖及磷酸鹽得到的液體、或在保存劑中預(yù)先添加或在后添加聚氧乙烯類非離子表面活性劑的液體中，添加0.1-50wt％本發(fā)明的多酚后使用。
另外，本保存劑用作蛋白質(zhì)溶液的穩(wěn)定劑時(shí)，也可以向添加有市售脂肪酸酯的保存液中進(jìn)一步加入0.1-50wt％的多酚，也可以加入0.1-50wt％的多酚代替這種脂肪酸酯。
而且，保存劑作為預(yù)防、治療、改善器官移植后器官障礙的保存劑使用時(shí)，可以向市售的保存劑中添加0.1-50wt％的多酚后使用。這種保存劑的給藥方法可以是常規(guī)的靜脈、口服、經(jīng)鼻、栓劑或透皮給藥方法。另外，給藥量與患者的年齡和癥狀等相應(yīng)，并沒(méi)有特別的限定。
這些培養(yǎng)液、保存液也可以進(jìn)一步與其他抗氧化劑SOD、維生素E、C及谷胱甘肽等并用。
作為使用本發(fā)明保存劑的條件，適用溫度優(yōu)選0-37℃。本發(fā)明保存劑與市售品比較，適用溫度比較高，沒(méi)有必要冷凍，而且耐用時(shí)間比較長(zhǎng)，適應(yīng)于器官移植·手術(shù)。
本發(fā)明中的細(xì)胞包括由人或動(dòng)物的組織分離得到的干細(xì)胞、皮膚細(xì)胞、粘膜細(xì)胞、肝細(xì)胞、胰島細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、骨細(xì)胞、肌細(xì)胞等動(dòng)物細(xì)胞，或家畜及魚類的精子、卵子或受精卵。
本發(fā)明中的器官包括皮膚、血管、角膜、腎臟、心臟、肝臟、臍帶、腸、神經(jīng)、肺、胎盤或胰臟。
本發(fā)明者在數(shù)年前，對(duì)該多酚特別是其抑制癌細(xì)胞增殖的作用非常感興趣，研究了其各種性質(zhì)，發(fā)現(xiàn)其具有上述抗氧化物質(zhì)沒(méi)有的特異性質(zhì)，也就是說(shuō)在水、有機(jī)溶劑中有極好的溶解性，具有兩親性質(zhì)，對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性優(yōu)良，另外，細(xì)胞毒性極低，而且抗氧化活性是SOD的10倍以上，并能夠自由控制目前還完全不了解的動(dòng)物細(xì)胞增殖。
從20世紀(jì)80年代開始就有很多學(xué)者報(bào)道多酚的各種生理活性作用，例如抗癌作用、抗氧化作用、抗菌·抗病毒作用非常優(yōu)良。雖然有關(guān)于多酚對(duì)細(xì)胞增殖影響的研究已有報(bào)道，但幾乎都是抑制癌細(xì)胞增殖的報(bào)告。
特別是最近Nature雜志上發(fā)表的論文(J.Jankun，S.H.Selman，and R.Swiercz，“Why drinking green tea could preventcancer”，Nature，387，5 June，561，1997 Y，Cao and R.Cao，“Angiogenesis inhibited by drinking tea”，Nature，398，1April，381，1999)引起世界矚目。
由于綠茶多酚具有抗氧化作用、消臭作用、抗菌作用等各種各樣的作用，另外還有抗齲齒性及其他生理活性(“飲食料品用機(jī)能性素材有效利用技術(shù)とリ-ズ”No.10，綠茶多酚、上村光男、甜點(diǎn)綜合技術(shù)中心、三勇社)，所以近年來(lái)人們愛(ài)用作功能性食品。但是，對(duì)多酚保存動(dòng)物細(xì)胞及器官的作用到目前為止還完全沒(méi)有提示。
因而認(rèn)為幾乎以前所有的研究人員只是關(guān)心多酚作為抗氧化物的抗癌作用。因此，眾多的研究者中沒(méi)有任何一個(gè)人發(fā)現(xiàn)象本發(fā)明這樣使用動(dòng)物的各種正常細(xì)胞，能夠自由控制其細(xì)胞增殖，出現(xiàn)“動(dòng)物細(xì)胞在體溫下冬眠”的現(xiàn)象。而且，當(dāng)然也不能發(fā)現(xiàn)冬眠后可以再次開始正常細(xì)胞的增殖·分裂，表現(xiàn)出其各種機(jī)能。
了解到各種動(dòng)物細(xì)胞可以這樣自由控制其增殖，不僅成為細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)研究的一個(gè)新突破口，而且是可以保存細(xì)胞、保存血液成分、及長(zhǎng)時(shí)間保存器官的劃時(shí)代發(fā)明。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)能夠自由控制構(gòu)成胰臟、肝臟及腎臟等生物組織的基本單位——各種細(xì)胞增殖的物質(zhì)，提供一種通過(guò)向以前的器官保存液中添加該物質(zhì)，不僅各種器官而且在血液保存方面也可以應(yīng)用的技術(shù)，這對(duì)再生醫(yī)學(xué)的進(jìn)步作出了很大貢獻(xiàn)。
以下，對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例和比較例進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不只限于這些實(shí)施例。
實(shí)施例1和比較例1；大鼠的成纖維細(xì)胞在Eagle公司的MEM(含卡那霉素60ml/l、Eagle’s MEMcontaining kanamycin)和10％的胎牛血清(fetal bovine serum；FBS、M.A.Bioproduct，Marylard，USA)中培養(yǎng)L-929成纖維細(xì)胞。在細(xì)胞密度為1.76×105cell/ml的條件下進(jìn)行細(xì)胞增殖測(cè)試，作為對(duì)照組(比較例1)只采用血清培養(yǎng)基(serum medium)，并向另一個(gè)培養(yǎng)系統(tǒng)中添加多酚(濃度為5mg/ml)(實(shí)施例1)。結(jié)果是對(duì)照組從2天后開始急劇增殖，5天后增加到2.5×106cell，而添加多酚的系統(tǒng)中，確認(rèn)1周后完全沒(méi)有增殖。但是，這時(shí)如果更換培養(yǎng)液(medium)，只用沒(méi)有添加多酚的血清培養(yǎng)基(比較例1)，就會(huì)重新開始增殖，1周后也增加到4.5×106cell/ml。另外，這種休眠確認(rèn)可以持續(xù)3個(gè)月。
實(shí)施例2和比較例2；豬的肝細(xì)胞收集豬的肝細(xì)胞2.1×105個(gè)細(xì)胞于用I型(type I)膠原包被的培養(yǎng)血中進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)照組(比較例2)每3天更換1次Dullbecco’s改良Eagle培養(yǎng)基(含有胎牛血清100mg/l，青霉素50000unit/l，鏈霉素100mg/l，EGF 0.5mg/ml，胰島素0.25mg/l。Dulbecco’s modifiedEagle’s medium；DMEM，containing bovine serum 100mg/ml，penicilin 50000 unit/l，stereptomycin 100mg/l，EGF0.5mg/ml，insulin 0.25mg/l)，并與添加5mg/ml多酚的系統(tǒng)(實(shí)施例2)比較肝細(xì)胞的增殖能力。對(duì)照組(比較例2)至第4天緩慢增殖，隨后，急劇增殖，1周后也增殖到5.4×106cells。另一方面，在添加多酚的系統(tǒng)(實(shí)施例2)中，與成纖維細(xì)胞相同，1周內(nèi)完全沒(méi)有變化，其后如果改變培養(yǎng)基就會(huì)重新開始增殖。作為肝細(xì)胞功能檢測(cè)D-葡萄糖(D-glucose)和利多卡因清除率(Lidocaine clearance)，結(jié)果確認(rèn)添加多酚使之休眠1周后復(fù)蘇的肝細(xì)胞(實(shí)施例2)與正常肝細(xì)胞具有相同程度的肝功能。
實(shí)施例3和比較例3；大鼠胰臟的胰島收集由Wistar系大鼠(體重380g)胰臟得到的胰島(拉氏島)約2000個(gè)，培養(yǎng)其中的一部分200個(gè)。作為培養(yǎng)液使用向RPMI培養(yǎng)基1640(含有L-谷氨酰胺，未添加葡萄糖，RPMI Medium 1640，Gibco BRL，批號(hào)No.1019650，with L-glutamine，without glucose，LIFETECHNOLOGIES公司制造)中分別添加胎牛血清(批號(hào)#29110643，CASERA INTERNATIONAL INC.CANADA公司制造)10％的葡萄糖(glucose)100mg/ml，及抗生素-抗真菌劑(Antibiotic-Antimycotic批號(hào)No.1013807，LIFE TECHNOLOGIES公司制造)的系統(tǒng)。在本發(fā)明的實(shí)施例3中，向該培養(yǎng)液中添加多酚使?jié)舛冗_(dá)到2％，另外比較對(duì)照組是在不添加多酚的系統(tǒng)中在37℃培養(yǎng)1周。比較例3的沒(méi)有添加多酚的系統(tǒng)中在2天后已經(jīng)有50％的拉氏島被破壞，4天后100％的拉氏島死亡。與此相對(duì)，本發(fā)明的添加多酚的系統(tǒng)中，確認(rèn)即使經(jīng)過(guò)1周后所有拉氏島也沒(méi)有被破壞，100％進(jìn)行冬眠。另一方面，為了檢測(cè)拉氏島冬眠后的機(jī)能，將約2000個(gè)拉氏島采用上述方法，通過(guò)向RPMI培養(yǎng)基1640中添加多酚使拉氏島進(jìn)行冬眠，冬眠1周后，除去多酚，使用胰島素測(cè)定試驗(yàn)(Insulin-EIA TEST GLAZYME，和光純藥工業(yè)株式會(huì)社)，采用一步酶免疫測(cè)定法檢測(cè)胰島素的處理機(jī)能，具有與直接由大鼠胰臟采集后的拉氏島相同的正常機(jī)能。
實(shí)施例4和比較例4；大鼠腎臟的保存麻醉狀態(tài)下摘除大鼠(Wistar，380g)的腎臟，比較保存效果。比較例4是摘除腎時(shí)用UW液洗滌后冷卻保存48小時(shí)。與此相對(duì)，本發(fā)明的實(shí)施例4是用進(jìn)一步向該UW液中添加了多酚(10mg/ml)的保存液進(jìn)行摘除腎時(shí)的洗滌，同樣冷卻保存48小時(shí)。隨后，用分離腎灌流裝置進(jìn)行90分鐘的持續(xù)灌流，比較灌流量與尿量及肌酸清除率。結(jié)果與作為比較對(duì)照組的只使用UW液的保存腎相比，本發(fā)明的添加多酚的系統(tǒng)中，腎障礙顯著減輕。
實(shí)施例5和比較例5；酶的穩(wěn)定化向β-D-半乳糖苷酶溶液中添加多酚10mg/ml(實(shí)施例5)，30℃下培養(yǎng)4周后，測(cè)定420nm的吸光度。不添加多酚的比較例5中，其吸光度為10％，而添加了多酚的系統(tǒng)中，吸光度保持90％以上。
實(shí)施例6和比較例6；血液或血細(xì)胞的保存向人血2ml中加入預(yù)先溶解在生理鹽水中的多酚10mg/ml溶液500μl(實(shí)施例6)。48小時(shí)后用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定顆粒數(shù)，未添加多酚的比較例6中顆粒數(shù)減少30％，而添加多酚的系統(tǒng)中幾乎沒(méi)有減少，與直接采血后的顆粒數(shù)相同。
實(shí)施例7和比較例7；血小板的保存離心分離人血，得到多血小板血漿(PRP)。向該P(yáng)RP100ml中加入預(yù)先溶解在生理鹽水中的多酚10mg/ml溶液10ml，22℃下保存3天(實(shí)施例7)。未添加多酚的PRP(比較例7)中，3天后血小板的形狀膨脹，凝集能力降低，而添加多酚的系統(tǒng)中，未發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象，與初期的PRP形狀及凝集能力相同。
實(shí)施例8和比較例8；靜脈給藥為了進(jìn)行作為預(yù)防、治療、改善器官移植后器官障礙的保存劑的研究，嘗試在大鼠的血液中給予多酚水溶液。通過(guò)每日1次、連續(xù)1周向Wistar系雄性大鼠(體重為350g)的尾靜脈注射添加了多酚(10mg/ml)的生理鹽水2ml給與。這1周內(nèi)當(dāng)然沒(méi)有出現(xiàn)任何異常，之后的3個(gè)月內(nèi)也沒(méi)有出現(xiàn)任何異常，正常生存。
本發(fā)明通過(guò)向現(xiàn)有的細(xì)胞培養(yǎng)液中添加多酚，能夠使動(dòng)物的肝細(xì)胞、甚至胰島細(xì)胞及受精卵不進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間冷凍而被保存。因而能夠應(yīng)用于動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞分裂素類、產(chǎn)生有用物質(zhì)的細(xì)胞學(xué)及組織學(xué)中。另外，通過(guò)向現(xiàn)有的器官保存液中添加多酚，能夠大幅延長(zhǎng)移植用器官，例如肝臟、腎臟、胰臟、角膜及皮膚、神經(jīng)、臍帶等所有器官的保存時(shí)間。另外，即使血液及血細(xì)胞、血小板也可以長(zhǎng)時(shí)間保存，而且通過(guò)向以往的血小板保存液中添加多酚，能夠作為替代血漿的血小板保存液使用。另外，通過(guò)使所有蛋白質(zhì)溶液與多酚在系統(tǒng)內(nèi)共存，能夠使在食品、臨床、臨床診斷或醫(yī)學(xué)設(shè)備等中使用的各種蛋白質(zhì)(酶、抗體、抗原、免疫活性物質(zhì)、生理活性肽等)在溶液狀態(tài)、或干燥狀態(tài)下的保存穩(wěn)定性提高。而且，添加多酚的液體能夠用作器官障礙的預(yù)防、治療、改善劑。
結(jié)論是本發(fā)明通過(guò)自由控制各種動(dòng)物細(xì)胞的增殖，了解細(xì)胞增殖機(jī)理的同時(shí)，在保存各種用于器官移植的器官以及保存血液時(shí)，使以前可以保存的時(shí)間至少延長(zhǎng)2倍以上。具體的說(shuō)，能夠控制正常有用細(xì)胞的增殖，不冷凍而長(zhǎng)時(shí)間保存，控制與細(xì)胞分裂增殖有很大關(guān)系的自由基，從而自由控制細(xì)胞的增殖·分裂。另外，將本發(fā)明的保存劑與市售品進(jìn)行比較，適用溫度比較高而不用冷凍，而且耐用時(shí)間比較長(zhǎng)，適用于器官移植·手術(shù)。
權(quán)利要求
1.含有多酚作為有效成分的動(dòng)物細(xì)胞或器官的保存劑。
2.如權(quán)利要求1所述的保存劑，多酚是以表?xiàng)攦翰杷貫橹饕煞值膬翰杷仡悺?br> 3.如權(quán)利要求1所述的保存劑，細(xì)胞包括由人或動(dòng)物的組織分離得到的干細(xì)胞、皮膚細(xì)胞、粘膜細(xì)胞、肝細(xì)胞、胰島細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、骨細(xì)胞、肌細(xì)胞等動(dòng)物細(xì)胞，或家畜及魚類的精子、卵子或受精卵。
4.如權(quán)利要求1所述的保存劑，器官包括皮膚、血管、角膜、腎臟、心臟、肝臟、臍帶、腸、神經(jīng)、肺、胎盤或胰臟。
5.如權(quán)利要求1所述的保存劑，向蛋白質(zhì)溶液的保存劑中添加多酚，使蛋白質(zhì)穩(wěn)定。
6.如權(quán)利要求1所述的保存劑，向血液、血細(xì)胞或血小板的保存劑中添加多酚，起到保存劑的作用。
7.如權(quán)利要求1所述的保存劑，向器官移植后的器官保存劑中添加多酚，預(yù)防、治療、改善器官移植后的器官障礙。
8.在保存用于移植的動(dòng)物細(xì)胞或器官時(shí)使用含有多酚作為有效成分的權(quán)利要求1至7中任意一項(xiàng)所述保存劑的方法。
全文摘要
為了長(zhǎng)時(shí)間保存動(dòng)物細(xì)胞,采用在非常低的溫度下冷凍保存的方法,但是熔解后的生存率很低僅為10—30%。另外,移植用器官的保存時(shí)間也因器官的種類而不同,為4小時(shí)至40小時(shí),非常短。本發(fā)明就是要解決這些問(wèn)題,也就是說(shuō)可以不冷凍動(dòng)物細(xì)胞而進(jìn)行保存,并將移植用器官的保存時(shí)間至少比以前可以保存的時(shí)間提高數(shù)倍。通過(guò)向現(xiàn)有的細(xì)胞培養(yǎng)液或器官保存液中添加多酚,解決了課題。
文檔編號(hào)A01N1/02GK1276152SQ00108778
公開日2000年12月13日 申請(qǐng)日期2000年6月2日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月2日
發(fā)明者玄丞烋 申請(qǐng)人:Mg制藥株式會(huì)社