一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，屬于肝素鈉制備技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉是廣泛存在于動(dòng)物器官(如:牛、羊的小腸粘膜、肝、胰臟及肺組織等)的一種葡萄胺聚糖，和大多數(shù)粘多糖一樣在體內(nèi)作為蛋白質(zhì)結(jié)合的復(fù)合物存在，這種復(fù)合物的抗凝活性隨著蛋白質(zhì)的去除而增加。肝素納及其衍生物藥品是經(jīng)典的抗凝、抗血栓藥物，在臨床上廣泛用于治療腎臟病患者的滲血，急性心肌梗塞癥，防止血栓形成，腦血管疾病，皮膚病，清除腎病形成的尿毒以及配合治療暴發(fā)性流腦敗血癥，腎炎等，同時(shí)，肝素鈉在降血脂和免疫等方面也有較好的作用，而且隨著對(duì)其逐漸深入了解，其醫(yī)療用途日益擴(kuò)大，市場(chǎng)供不應(yīng)求。
[0003]目前提取肝素鈉的方法主要有三種，第一種高錳酸鉀和過(guò)氧化氫兩步氧化法存在二氧化錳吸食肝素，使肝素活性損失大，回收率低;過(guò)濾困難，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，色澤不好，質(zhì)量差等缺點(diǎn)；第二種過(guò)氧化氫分次加入的二次氧化法工藝，因產(chǎn)品色澤較好，目前被普遍采用，但該工藝主要存在二次氧化氫處理對(duì)肝素結(jié)構(gòu)造成破壞，難以得到較高效價(jià)的精品肝素產(chǎn)品;第三種酶解結(jié)合氧化法工藝其存在雜質(zhì)比較多，純度低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題:針對(duì)目前提取肝素鈉的氧化法和酶解等方法制備的肝素鈉活性損失大，難以得到較高效價(jià)的肝素成品，且回收率低，純度低的問(wèn)題，提供了一種從豬小腸中利用發(fā)酵，曝氣，煮沸，超濾膜濃縮干燥制備得肝素鈉的方法，本發(fā)明制備的肝素鈉其效價(jià)可達(dá)155?170u/mg，回收率達(dá)到97%以上。
[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下所述的技術(shù)方案是:
(1)取新鮮豬小腸，向其內(nèi)部灌入清水，并用腸衣機(jī)擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機(jī)中粉碎成70?80目粘膜顆粒，再按固液質(zhì)量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進(jìn)行攪拌混合，直至均勻，
(2)待混合均勻后，向其加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH至8.5?9.0，并將調(diào)節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為35?38°C，發(fā)酵3?4天；
(3)待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時(shí)對(duì)發(fā)酵罐中的混合濁液進(jìn)行攪拌，攪拌30?45min后，靜置I?2h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對(duì)其沖洗2?3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；
(4)按固液質(zhì)量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進(jìn)行混合，置于水浴鍋中進(jìn)行加熱直至煮沸，待煮沸后，對(duì)其進(jìn)行保溫I?2h，再靜置冷卻至室溫；
(5)待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質(zhì)量10?15%的硫酸銨，攪拌至均勻后，進(jìn)行超濾，控制混合物流速為5?6m/s，壓力為0.5?1.0MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為1000?2000 ； (6)將上述收集的超濾液經(jīng)沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。
[0006]本發(fā)明的應(yīng)用方法:將上述制備的從豬小腸中提取的肝素鈉按照配制，過(guò)濾，灌封，滅菌，包裝等常規(guī)注射劑制備工藝制成供皮下注射的注射劑，來(lái)作為抗凝、抗血栓藥物，其用量為成人每天一次30?40mg，經(jīng)測(cè)試，治療效果好抗凝血因子a的值為165?170IU/mg，抗凝血酶值為0.6?0.7IU/mgo
[0007]本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是:
(1)本發(fā)明制備的肝素鈉其效價(jià)可達(dá)155?170u/mg，回收率達(dá)到97%以上；
(2)本發(fā)明制備的肝素鈉所需原材料成本，制備步驟簡(jiǎn)單。
【具體實(shí)施方式】
[0008]首先取新鮮豬小腸，向其內(nèi)部灌入清水，并用腸衣機(jī)擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機(jī)中粉碎成70?80目粘膜顆粒，再按固液質(zhì)量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進(jìn)行攪拌混合，直至均勻，待混合均勻后，向其加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH至8.5?9.0，并將調(diào)節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為35?38°C，發(fā)酵3?4天;待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時(shí)對(duì)發(fā)酵罐中的混合濁液進(jìn)行攪拌，攪拌30?45min后，靜置I?2h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對(duì)其沖洗2?3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；按固液質(zhì)量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進(jìn)行混合，置于水浴鍋中進(jìn)行加熱直至煮沸，待煮沸后，對(duì)其進(jìn)行保溫I?2h，再靜置冷卻至室溫;待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質(zhì)量10?15 %的硫酸銨，攪拌至均勻后，進(jìn)行超濾，控制混合物流速為5?6m/s，壓力為0.5?1.0MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為1000?2000;最后將上述收集的超濾液經(jīng)沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。
[0009]實(shí)例I
首先取新鮮豬小腸，向其內(nèi)部灌入清水，并用腸衣機(jī)擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機(jī)中粉碎成80目粘膜顆粒，再按固液質(zhì)量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進(jìn)行攪拌混合，直至均勻，待混合均勻后，向其加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH至9.0，并將調(diào)節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為380C，發(fā)酵4天;待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時(shí)對(duì)發(fā)酵罐中的混合濁液進(jìn)行攪拌，攪拌45min后，靜置2h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對(duì)其沖洗3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物;按固液質(zhì)量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進(jìn)行混合，置于水浴鍋中進(jìn)行加熱直至煮沸，待煮沸后，對(duì)其進(jìn)行保溫2h，再靜置冷卻至室溫;待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質(zhì)量15%的硫酸銨，攪拌至均勻后，進(jìn)行超濾，控制混合物流速為6m/s，壓力為0.5?1.0MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為2000;最后將上述收集的超濾液經(jīng)沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。
[0010]將上述制備的從豬小腸中提取的肝素鈉按照配制，過(guò)濾，灌封，滅菌，包裝等常規(guī)注射劑制備工藝制成供皮下注射的注射劑，來(lái)作為抗凝、抗血栓藥物，其用量為成人每天一次40mg，經(jīng)測(cè)試，治療效果好抗凝血因子a的值為170IU/mg，抗凝血酶值為0.7IU/mg。
[0011]實(shí)例2 首先取新鮮豬小腸，向其內(nèi)部灌入清水，并用腸衣機(jī)擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機(jī)中粉碎成70目粘膜顆粒，再按固液質(zhì)量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進(jìn)行攪拌混合，直至均勻，待混合均勻后，向其加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH至8.5，并將調(diào)節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為35°C，發(fā)酵3天;待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時(shí)對(duì)發(fā)酵罐中的混合濁液進(jìn)行攪拌，攪拌30min后，靜置Ih，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對(duì)其沖洗2次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物;按固液質(zhì)量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進(jìn)行混合，置于水浴鍋中進(jìn)行加熱直至煮沸，待煮沸后，對(duì)其進(jìn)行保溫lh，再靜置冷卻至室溫;待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質(zhì)量10%的硫酸銨，攪拌至均勻后，進(jìn)行超濾，控制混合物流速為5m/s，壓力為0.5MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為1000;最后將上述收集的超濾液經(jīng)沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。
[0012]將上述制備的從豬小腸中提取的肝素鈉按照配制，過(guò)濾，灌封，滅菌，包裝等常規(guī)注射劑制備工藝制成供皮下注射的注射劑，來(lái)作為抗凝、抗血栓藥物，其用量為成人每天一次30mg，經(jīng)測(cè)試，治療效果好抗凝血因子a的值為165IU/mg，抗凝血酶值為0.6IU/mg。
[0013]實(shí)例3
首先取新鮮豬小腸，向其內(nèi)部灌入清水，并用腸衣機(jī)擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機(jī)中粉碎成75目粘膜顆粒，再按固液質(zhì)量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進(jìn)行攪拌混合，直至均勻，待混合均勻后，向其加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH至8.7，并將調(diào)節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為37°C，發(fā)酵3天;待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時(shí)對(duì)發(fā)酵罐中的混合濁液進(jìn)行攪拌，攪拌40min后，靜置2h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對(duì)其沖洗2次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物;按固液質(zhì)量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進(jìn)行混合，置于水浴鍋中進(jìn)行加熱直至煮沸，待煮沸后，對(duì)其進(jìn)行保溫2h，再靜置冷卻至室溫;待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質(zhì)量12%的硫酸銨，攪拌至均勻后，進(jìn)行超濾，控制混合物流速為5m/s，壓力為0.7MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為2000;最后將上述收集的超濾液經(jīng)沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。
[0014]將上述制備的從豬小腸中提取的肝素鈉按照配制，過(guò)濾，灌封，滅菌，包裝等常規(guī)注射劑制備工藝制成供皮下注射的注射劑，來(lái)作為抗凝、抗血栓藥物，其用量為成人每天一次35mg，經(jīng)測(cè)試，治療效果好抗凝血因子a的值為167IU/mg，抗凝血酶值為0.65IU/mg。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，其特征在于具體制備步驟為: (1)取新鮮豬小腸，向其內(nèi)部灌入清水，并用腸衣機(jī)擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機(jī)中粉碎成70?80目粘膜顆粒，再按固液質(zhì)量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進(jìn)行攪拌混合，直至均勻， (2)待混合均勻后，向其加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH至8.5?9.0，并將調(diào)節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為35?38°C，發(fā)酵3?4天； (3)待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時(shí)對(duì)發(fā)酵罐中的混合濁液進(jìn)行攪拌，攪拌30?45min后，靜置I?2h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對(duì)其沖洗2?3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物； (4)按固液質(zhì)量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進(jìn)行混合，置于水浴鍋中進(jìn)行加熱直至煮沸，待煮沸后，對(duì)其進(jìn)行保溫I?2h，再靜置冷卻至室溫； (5 )待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質(zhì)量1?15 %的硫酸銨，攪拌至均勻后，進(jìn)行超濾，控制混合物流速為5?6m/s，壓力為0.5?1.0MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為1000?2000 ； (6)將上述收集的超濾液經(jīng)沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從豬小腸中提取肝素鈉的方法，屬于肝素鈉制備技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明首先取新鮮的豬小腸，向其內(nèi)部灌入清水，擠壓出小腸粘膜后，粉碎成顆粒，再將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進(jìn)行攪拌混合，并向其加入氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH后，進(jìn)行發(fā)酵處理，并充入氧氣，攪拌，靜置，收集上浮物，沖洗，烘干，將其與草酰乙酸混合，加熱沸騰，保溫，冷卻至室溫后，向其加入硫酸銨，攪拌，對(duì)其進(jìn)行超濾膜濃縮，收集超濾液，再經(jīng)沉淀，脫水，干燥，粉碎。本發(fā)明制備的肝素鈉其效價(jià)可達(dá)155～170u/mg，回收率達(dá)到97％以上；且所需原材料成本，制備步驟簡(jiǎn)單。<b />
【IPC分類】C08B37/10
【公開(kāi)號(hào)】CN105524191
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610081804
【發(fā)明人】高玉梅, 薛紅娟
【申請(qǐng)人】常州可賽成功塑膠材料有限公司
【公開(kāi)日】2016年4月27日
【申請(qǐng)日】2016年2月3日