一種膜分離與沉淀結合法提取豬小腸粘膜中的肝素鈉方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術領域，屬于從豬小腸粘膜中提取肝素鈉的方法
【背景技術】
[0002] 肝素鈉是一種生化藥品，它從豬小腸粘膜中提取，在手術中起著不可替代的作用， 挽救了無數生命，是醫(yī)界不能斷檔藥品。
[0003] 自上個世紀四十年代以來，肝素鈉被用于臨床，應用范圍不斷擴大。特別自上個世 紀九十年開始，在臨床中肝素鈉被廣泛用于：防治血栓栓塞性疾病，輔助治療尿毒癥，心血 管病，血液病等大量疾病。進入七十年代以后，肝素鈉生產工藝，在我國得到不斷改進提高， 使我國成為最大的肝素鈉產銷國家，目前國際市場上70%以上肝素鈉產品出產于中國。
[0004] 目前，肝素鈉生產廠家主要采用鹽解一一離子交換一一乙醇沉淀法從豬小腸粘膜 中提取肝素鈉粗品，該方法成本高，收率和效價低。所以，本公司開發(fā)了膜分離與沉淀結合 法豬小腸粘膜中提取肝素鈉粗品，以降低成本，提高效益。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種全新的膜分離與沉淀結合法提取豬小腸粘膜中的肝素鈉，能夠 有效地降低成本，并提高肝素鈉粗品的收率和效價。
[0006] 為此，本發(fā)明通過以下技術方案予以實現：
[0007] 1?吸附
[0008] 稱取一定質量的豬小腸黏膜，置于反應罐中，按其質量的10倍加純化水稀釋，用 30%的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至9. 0?9. 5,加熱至沸騰，保持10?15分鐘，同時撈去液 體上的雜物。緩慢降溫至35°C?45°C，用在出水口處系有一 100目尼龍布袋的耐高溫的塑 料軟管將液體虹吸至反應池中，調節(jié)氯化鈉波美度為3. 2?3. 5, PH值為8. 0,按反應池中 液體量加人6%已處理好的D204肝素鈉專用樹脂，保溫攪拌吸附8?10小時。
[0009] 2.洗滌與洗脫
[0010] 吸附完畢后，靜置30分鐘，過濾，收集樹脂，并用純化水將樹脂漂洗干凈，瀝干，加 入I. 2mol/L氯化鈉溶液洗滌2小時，瀝干后，加入4mol/L氯化鈉溶液1倍量，攪拌洗脫5 小時，瀝干后再洗脫2次，每次加入4mol/L氯化鈉溶液的量減半，洗脫時間分別為2小時和 1小時。合并全部洗脫液。
[0011] 3.分離
[0012] 將洗脫液在不斷攪拌的情況下用截留MrfOOO?4000的聚丙烯腈膜進行分離，濾 速保持在30?40ml/min，并使膜上部分占總體積的15%左右時，停止抽濾。
[0013] 4?除蛋白質
[0014] 取膜上截留部分，按DC -W: TQ= 1.0:50. 0?1.0:80. 0的比例加入DC-W，充分攪 拌20分鐘，室溫下靜置5小時，濾除沉淀。
[0015] 5.沉淀
[0016] 按比例在濾液中加入I. 5倍95%的乙醇，充分攪拌后，靜置12小時以上，虹吸上層 乙醇，沉淀分別用95%的乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉粗品。
[0017] 本發(fā)明的有益效果是：在乙醇沉淀之前，先用聚丙烯腈膜進行分離。有效地降低了 乙醇的使用量，并且提高了效價與收率。
【附圖說明】
[0018] 圖1是反應罐。
[0019] 圖2是抽濾裝置。
[0020] 圖3是抽濾裝置的結構圖。
[0021] 圖4是工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0022] 下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0023] 1?吸附
[0024] 稱取50. 0千克的豬小腸黏膜，置于反應罐中，加純化水500. 0千克，用30%的氫 氧化鈉溶液調節(jié)PH值至9. 3,加熱至沸騰，保持14分鐘，同時撈去液體上的雜物。緩慢降 溫至37°C，用在出水口處系有一 100目尼龍布袋的耐高溫的塑料軟管將液體虹吸至反應池 中，調節(jié)氯化鈉波美度為3. 3, PH值為8. 0,按反應池中液體量加人6%已處理好的D204肝 素鈉專用樹脂，保溫攪拌吸附9小時22分鐘。
[0025] 2.洗滌與洗脫
[0026] 吸附完畢后，靜置30分鐘，過濾，收集樹脂，并用純化水將樹脂漂洗干凈，瀝干，加 入I. 2mol/L氯化鈉溶液洗滌2小時，瀝干后，加入4mol/L氯化鈉溶液1倍量，攪拌洗脫5 小時，瀝干后再洗脫2次，每次加入4mol/L氯化鈉溶液的量減半，洗脫時間分別為2小時和 1小時。合并全部洗脫液。
[0027] 3?分離
[0028] 將洗脫液在不斷攪拌的情況下用截留Mr3500的聚丙烯腈膜進行分離，濾速保持 在30?40ml/min，并使膜上部分占總體積的15%左右時，停止抽濾。
[0029] 4?除蛋白質
[0030] 取膜上截留部分，按DC - W: TQ = 1. 0:70. 0的比例加入DC-W，充分攪拌20分鐘， 室溫下靜置5小時，濾除沉淀。
[0031] 5?沉淀
[0032] 按比例在濾液中加入1. 5倍95%的乙醇，充分攪拌后，靜置12小時以上，虹吸上層 乙醇，沉淀分別用95%的乙醇、丙酮脫水2次，真空干燥，得肝素鈉粗品。
[0033] 6?對照
[0034] 稱取50. 0千克同一批次的豬小腸粘膜，采用傳統工藝提取其中的肝素鈉。通過對 照發(fā)現：傳統工藝明顯地成本高，效益低。
[0035] 表1兩種工藝產出效果對照表
[0036]
【主權項】
1. 一種膜分離與沉淀結合法提取豬小腸粘膜中的肝素鈉方法； 其特征在于：采用膜分離法與沉淀法相結合的方法將豬小腸粘膜中的肝素鈉提取出 來。
2. 根據權利要求1所述的的方法； 其特征在于：提取肝素鈉采用如下步驟：吸附，洗滌與洗脫，分離，除蛋白質，沉淀。
3. 根據權利要求1所述的的方法； 其特征在于：在乙醇沉淀之前，先用聚丙烯腈膜進行分離。
4. 根據權利要求1所述的的方法； 其特征在于：在吸附過程中，用30%的氫氧化鈉溶液調節(jié)豬小腸粘膜與純化水的混合 物的pH值至9.0?9. 5。
5. 根據權利要求1所述的的方法； 其特征在于：在分離過程中，用截留MrfOOO?4000的聚丙烯腈膜進行分離洗脫液，并 且濾速保持在30?40ml/min。
6. 根據權利要求1所述的的方法； 其特征在于：在除蛋白質過程中，按DC - W:TQ= 1.0:50. 0?1.0:80. 0的比例在分 離出的膜上截留部分中加入DC-W，并且充分攪拌。
【專利摘要】一種膜分離與沉淀結合法提取豬小腸粘膜中的肝素鈉方法，它采用膜分離與沉淀結合法，經過吸附、洗滌與洗脫、分離、除蛋白質、沉淀五個步驟從豬小腸黏膜中提取出肝素鈉。結果膜分離與沉淀結合法與鹽解——離子交——乙醇沉淀法相比較，乙醇用量減少87%左右，收率提高27％左右，效價提高47u/mg左右。
【IPC分類】C08B37-10
【公開號】CN104558247
【申請?zhí)枴緾N201410816821
【發(fā)明人】劉乃山, 姜德志, 遲培升
【申請人】青島九龍生物醫(yī)藥有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月24日