-BSA偶聯(lián)物、三聚氰胺-BSA偶聯(lián)物，以及確定抗原、抗體的組合情況。
[0027]2.膠體金的制備
[0028]將0.01%氯金酸溶液加熱煮沸，之后迅速加入2%的檸檬酸三鈉ImL ；
[0029]溶液的顏色由淺藍(lán)色變?yōu)樯钏{(lán)，繼續(xù)加熱出現(xiàn)櫻桃紅色，繼續(xù)加熱1min ;出現(xiàn)透明的櫻桃紅色，停止加熱，繼續(xù)攪拌至室溫。這樣就制備了 30nm的膠體金溶液。用電鏡鏡檢制備膠體金溶液的質(zhì)量，確保制備的金顆粒大小一致、均勻，顆粒直徑在30nm左右。
[0030]3.制備金標(biāo)結(jié)合墊
[0031]取I mL膠體金溶液，向其中加入適量0.2M碳酸鉀溶液，震蕩混勻，測(cè)定pH將pH值調(diào)節(jié)為7.5左右；加入lmg/mL的黃曲霉毒素單克隆抗體5uL然后混勾，于振蕩器上振蕩30 min ;再加入10 uL的20%BSA，混勾，振蕩10 min ;于離心機(jī)中10000 rpm，離心10 min，輕輕吸除上清；用ImL洗滌液重懸膠體金沉淀，用移液器輕輕吸打幾次；于離心機(jī)中10000rpm，離心10 min，輕輕吸除上清；再洗滌一次，離心，去除上清；
[0032]用同樣的方法將三聚氰胺單克隆抗體標(biāo)記在膠體金顆粒表面，然后將兩種膠體金免疫復(fù)合物按1:1的比例混合，再用復(fù)溶液稀釋，使稀釋后的膠體金免疫復(fù)合物在530nm處OD (吸光度)值為1.0-1.5 ;在無紡布上點(diǎn)樣，均勻涂布，形成膠金墊，真空凍干3小時(shí)。
[0033]4.包被
[0034]分別將0.7mg/mL和1.0mg/mL的黃曲霉毒素Ml-BSA偶聯(lián)物和三聚氰胺-BSA偶聯(lián)物劃在硝酸纖維素膜的檢測(cè)線(T線)上，將1.5mg/mL羊抗鼠多克隆抗體劃在質(zhì)控線(C線)上。然后將硝酸纖維素膜置于烘箱中37°C干燥3小時(shí)。
[0035]5.試紙條組裝
[0036]將制備好的金標(biāo)結(jié)合墊和包被好的硝酸纖維素膜按圖1組裝，將以上粘貼好的試紙條板，用切條機(jī)進(jìn)行切條，條寬設(shè)為4_，然后將切好的試紙條裝入塑料卡殼中，將組裝好的檢測(cè)卡，裝入鋁箔袋同時(shí)放入干燥劑密封保存。
[0037]6.試紙條的使用及結(jié)果判讀
[0038]檢測(cè)前，先將樣本和檢測(cè)卡置于室溫下平衡I小時(shí)。
[0039]然后把檢測(cè)卡平放，將樣品滴入到檢測(cè)卡的加樣孔中，加入3-4滴樣本，由于毛細(xì)效應(yīng)，液體向上層析，與固定在T線、C線上的抗原和二抗結(jié)合而被截留，顯色。5min后，根據(jù)Tl、T2、C線的顯色情況判定陰陽性結(jié)果(附圖3)。C線與Tl線、T2線均出現(xiàn)紅色指示線，結(jié)果為陰性，表明樣本中黃曲霉毒素Ml的含量小于0.5ug/L，三聚氰胺的含量小于Img/Lo C線與Tl線出現(xiàn)紅色指示線，T2線不顯色，結(jié)果為三聚氰胺為陽性，表明樣本中的黃曲霉毒素Ml的含量小于0.5ug/L，三聚氰胺含量大于lmg/L。C線與T2線出現(xiàn)紅色指示線，Tl線不顯色，結(jié)果為黃曲霉毒素Ml為陽性，表明樣本中的黃曲霉毒素Ml含量大于0.5ug/L，三聚氰胺的含量小于lmg/L。C線出現(xiàn)紅色指示線，Tl、T2線不顯色，結(jié)果為黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺均為陽性，表明樣本中黃曲霉毒素Ml含量大于0.5ug/L，三聚氰胺含量大于lmg/L ο C線不出線，表明檢測(cè)卡失效。
[0040]實(shí)施例可直接檢測(cè)樣品中的黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺，使用方法不需要特殊專業(yè)培訓(xùn)，操作方便、快速，5min即可獲得結(jié)果，可達(dá)到快速、簡(jiǎn)便、及時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的目的。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的快速檢測(cè)卡，其特征在于檢測(cè)卡由塑料卡殼和置于其中的膠體金試紙條組成，試紙條是由樣品墊、金標(biāo)結(jié)合墊、NC膜和吸水濾紙依次順序相接黏貼在底板上組成，塑料卡殼正面設(shè)有加樣孔和觀察窗，金標(biāo)結(jié)合墊上均勻涂布了標(biāo)記黃曲霉毒素Ml單克隆抗體和三聚氰胺單克隆抗體的膠體金顆粒，而硝酸纖維素膜上，包被了偶聯(lián)BSA的Ml抗原和偶聯(lián)BSA的三聚氰胺抗原，固定于兩條檢測(cè)線即T線上，羊抗鼠二抗固定于質(zhì)控線即C線上。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的快速檢測(cè)卡其特征在于，底板為聚乙烯材料，NC膜為硝酸纖維素膜，樣品墊和金標(biāo)結(jié)合墊為無紡布，吸水紙為濾紙。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的快速檢測(cè)卡其特征在于，膠體金的粒徑在30nm左右，膠體金顆粒上標(biāo)記的黃曲霉毒素Ml單克隆抗體的濃度為5ug/ml，三聚氰胺單克隆抗體的濃度為5ug/ml，膠體金免疫復(fù)合物均勾涂布在無紡布上，形成金標(biāo)結(jié)合墊，真空冷凍干燥3h。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的快速檢測(cè)卡其特征在于，硝酸纖維素膜上包被偶聯(lián)BSA的Ml抗原濃度為0.7mg/ml，偶聯(lián)BSA的三聚氰胺抗原濃度為1.0mg/ml，羊抗鼠二抗的濃度為1.5mg/ml。
【專利摘要】本實(shí)用新型涉及一種能同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素M1和三聚氰胺的快速檢測(cè)卡，本實(shí)用新型利用膠體金免疫層析技術(shù)，黃曲霉毒素M1單克隆抗體和三聚氰胺單克隆抗體分別標(biāo)記在膠體金顆粒表面，將標(biāo)記的膠體金免疫復(fù)合物按1:1比例混合，均勻涂布在金標(biāo)結(jié)合墊上，實(shí)現(xiàn)一次性同時(shí)檢測(cè)兩種物質(zhì)的目的。黃曲霉毒素M1和三聚氰胺快速檢測(cè)卡，由外部的塑料卡殼和置于內(nèi)部的膠體金試紙條組成。膠體金試紙條由樣品墊，金標(biāo)結(jié)合墊，NC膜，底板，吸水紙組成，上塑料卡殼上設(shè)有加樣孔和觀察窗，下塑料卡殼上設(shè)有用來固定膠體金試紙條的定位槽。本實(shí)用新型檢測(cè)卡具有檢測(cè)速度快，操作簡(jiǎn)潔，成本低，重復(fù)性好，適用性強(qiáng)的特點(diǎn)。能同時(shí)測(cè)定樣本中的黃曲霉毒素M1和三聚氰胺，大大提高了檢測(cè)效率，并且降低了檢測(cè)成本。
【IPC分類】G01N33/577
【公開號(hào)】CN204719054
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201520310903
【發(fā)明人】司英杰, 殷娟娟, 李梅, 劉琳, 向榮, 王昊, 張賢剛, 張賢強(qiáng), 朱正宇, 李亞峰
【申請(qǐng)人】德康潤(rùn)生物科技（天津）有限公司
【公開日】2015年10月21日
【申請(qǐng)日】2015年5月14日