同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素m1和三聚氰胺的快速檢測(cè)卡的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于快速檢測(cè)試劑領(lǐng)域，具體為一種同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的快速檢測(cè)卡。
【背景技術(shù)】
[0002]黃曲霉毒素主要是由黃曲霉(aspergillus flavus)、寄生曲霉(a.parasiticus)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，是霉菌毒素中毒性最大、對(duì)人類健康危害極為突出的一類毒素。1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研宄機(jī)構(gòu)劃定為I類致癌物，黃曲霉毒素(Aflatoxins)主要包括BI，B2，Gl, G2，Ml, M2等十幾種類型。其中黃曲霉毒素Ml是哺乳類動(dòng)物攝入被黃曲霉毒素BI污染的飼料或食品后，在體內(nèi)通過羥基化作用轉(zhuǎn)化成的。黃曲霉毒素Ml危害主要表現(xiàn)在致癌性和致突變性，對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。在畜牧業(yè)中，如果奶牛食用了被黃曲霉污染的飼料，大部分黃曲霉毒素會(huì)在奶牛體內(nèi)代謝為黃曲霉毒素M1，并繼續(xù)存在于牛乳汁中，被人食用產(chǎn)生危害，尤其是對(duì)嬰兒的危害更大。我國(guó)(GB 2761-2011)規(guī)定乳及乳制品中黃曲霉毒素Ml限量標(biāo)準(zhǔn)為0.5ug/Kg。
[0003]三聚氰胺(Melamine)，俗稱密胺、蛋白精，它是白色單斜晶體，幾乎無(wú)味，微溶于水(3.lg/L常溫)，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、熱乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚類、對(duì)身體有害，不可用于食品加工或食品添加物。自三鹿奶粉事件后，我國(guó)加強(qiáng)了對(duì)乳及乳制品中三聚氰胺的監(jiān)測(cè)，制定了三聚氰胺在食品中的限量標(biāo)準(zhǔn)，嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值為lmg/Kg，液態(tài)奶(包括原料乳)、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值為2.5mg/Kg。
[0004]黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的檢測(cè)方案主要有高效液相色譜法，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用，液相色譜-質(zhì)普聯(lián)用，熒光測(cè)定，酶聯(lián)免疫試劑盒等，這些方法對(duì)儀器設(shè)備、操作技能等的要求很高，并且檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，價(jià)格昂貴，操作復(fù)雜，不能滿足食品企業(yè)對(duì)于檢測(cè)快速、高效、簡(jiǎn)便的要求。并且我國(guó)奶牛養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；潭认鄬?duì)不高，奶企需從散戶或者小規(guī)模養(yǎng)殖企業(yè)收奶，此時(shí)，有一款能夠適合于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的產(chǎn)品十分必要。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)中有單獨(dú)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的檢測(cè)卡，但須分別檢測(cè)，造成檢測(cè)重復(fù)、耗時(shí)、浪費(fèi)原料，本實(shí)用新型可同時(shí)測(cè)定樣本中的黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺，簡(jiǎn)便、快速、節(jié)約成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本實(shí)用新型的目的在于開發(fā)一種能夠同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的產(chǎn)品，以便能夠同時(shí)檢測(cè)液態(tài)奶及奶制品中的黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺。
[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用以下技術(shù)方案:
[0008]黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺快速檢測(cè)卡，由上下兩塊塑料卡殼和置于內(nèi)部的膠體金試紙條組成。膠體金試紙條由樣品墊(1)，金標(biāo)結(jié)合墊(2)，NC膜(3)，底板(4)，吸水紙
(5)組成，所述金標(biāo)結(jié)合墊、NC膜、吸水紙以水平方向順序相接固定在底板下方，金標(biāo)結(jié)合墊、NC膜、吸水紙相鄰部分各有l(wèi)_2mm的重疊區(qū)域，上述金標(biāo)結(jié)合墊上粘有樣品墊。上塑料卡殼上設(shè)有加樣孔(9)和觀察窗(10)，并且下塑料殼上設(shè)有用來(lái)固定膠體金試紙條的定位槽。
[0009]所述NC膜上從樣品墊方向到吸水紙方向，依次設(shè)有檢測(cè)線I (7)、檢測(cè)線2 (6)和質(zhì)控線(8)。所述檢測(cè)線I (7)包被的是牛血清白蛋白偶聯(lián)的黃曲霉毒素Ml結(jié)合物，檢測(cè)線2 (6)包被的是牛血清白蛋白偶聯(lián)的三聚氰胺結(jié)合物，質(zhì)控線(8)包被的是羊抗鼠二抗。
[0010]所述的金標(biāo)結(jié)合墊上標(biāo)記有黃曲霉毒素Ml的單克隆抗體和三聚氰胺的單克隆抗體。
[0011]所述的底板為聚氯乙烯材料，所述的NC膜為硝酸纖維素膜，所述金標(biāo)結(jié)合墊和樣品墊為無(wú)紡布，吸水紙為濾紙。
[0012]本實(shí)用新型的有益效果為:
[0013]1.多項(xiàng)檢測(cè)。本實(shí)用新型檢測(cè)卡可以同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺的含量。
[0014]2.靈敏度高。本實(shí)用新型檢測(cè)卡黃曲霉毒素Ml檢測(cè)限最低可達(dá)0.5ug/Kg，三聚氰胺的最低檢測(cè)限可達(dá)lmg/Kg，能夠滿足國(guó)標(biāo)對(duì)乳制品中這兩類物質(zhì)的限量要求，適合各奶企和養(yǎng)殖戶的應(yīng)用。
[0015]3.操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速。本實(shí)用新型檢測(cè)卡檢測(cè)液態(tài)奶中的黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺時(shí)無(wú)需稀釋直接點(diǎn)樣，在3-5分鐘內(nèi)完成2個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)，大大提高了檢測(cè)效率，檢測(cè)奶粉只需將奶粉用純水溶解后檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便，無(wú)需特殊培訓(xùn)，普通工人均可操作。
[0016]4.降低成本、節(jié)約資源。本檢測(cè)卡一張卡可同時(shí)檢測(cè)黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺，節(jié)約了研制、生產(chǎn)和用戶的成本。
[0017]【附圖說(shuō)明】:
[0018]圖1為本實(shí)用新型檢測(cè)卡中膠體金試紙條的側(cè)面結(jié)構(gòu)示意圖。其中I為樣品墊，2為金標(biāo)結(jié)合墊，3為NC膜，4為底板，5為吸水紙，6為檢測(cè)線2，7為檢測(cè)線1，8為質(zhì)控線。
[0019]圖2為本實(shí)用新型檢測(cè)卡俯視圖，9為加樣孔，10為觀察窗。
[0020]圖3為本實(shí)用新型檢測(cè)結(jié)果判定示意圖。
[0021]【具體實(shí)施方式】:
[0022]下面結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明:本實(shí)施例以本實(shí)用新型技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過程，但具體的實(shí)施例僅用于解釋本實(shí)用新型，而不用于限制本實(shí)用新型。
[0023]本實(shí)例先用2%的檸檬酸三鈉溶液制備30nm的膠體金溶液，將黃曲霉毒素Ml和三聚氰胺單克隆抗體分別標(biāo)記在膠體金上，之后將標(biāo)記好的兩種膠體金免疫復(fù)合物按1:1比例混合均勻，再噴金標(biāo)墊。黃曲霉毒素Ml-BSA偶聯(lián)物、三聚氰胺-BSA偶聯(lián)物，羊抗鼠多克隆抗體分別包被至檢測(cè)線I (7)、2 (6)、質(zhì)控線(8)，然后組裝膠體金試紙條，室溫干燥保存?zhèn)溆肙
[0024]實(shí)施例:
[0025]1.篩選原料
[0026]篩選靈敏度合適的黃曲霉毒素Ml單克隆抗體、三聚氰胺單克隆抗體、黃曲霉毒素Ml