Pct/saa聯(lián)合快速檢測(cè)用試紙條及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域,涉及一種人降I丐素原(procalcitonin, PCT)和血清淀粉樣蛋白A (serum amyloid A protein, SAA)聯(lián)合快速檢測(cè)用試紙條及其制備方法,具體地說是一種應(yīng)用雙抗夾心法原理的膠體金免疫層析法，配合免疫層析讀數(shù)儀，同時(shí)實(shí)現(xiàn)對(duì)PCT/SAA 二項(xiàng)目進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]本品采用雙抗夾心法和膠體金免疫層析技術(shù)，同時(shí)快速檢測(cè)人全血、血清或血漿樣本中的降鈣素原(PCT)和血清淀粉樣蛋白A (SAA)，可用于炎癥等感染類疾病的輔助診斷。
[0003]近年來，隨著膠體金免疫層析技術(shù)及生化制備技術(shù)的發(fā)展，用膠體金免疫層析法快速檢測(cè)人全血、血清或血漿中的一種或同時(shí)幾種因子、抗原、蛋白已成為現(xiàn)實(shí)，本發(fā)明所述的PCT/SAA的檢測(cè)就屬于聯(lián)合檢測(cè)的一種。
[0004]人降I丐素原(procalcitonin,PCT)是無激素活性的降I丐素(calcitonin, CT)前肽物質(zhì)，由116個(gè)氨基酸組成、分子質(zhì)量為13kD的糖蛋白。PCT半衰期為25-30h，體內(nèi)外穩(wěn)定性很好。正常情況下，PCT在受到荷爾蒙刺激后僅由甲狀腺的C細(xì)胞分泌，其濃度通常小于0.lng/ml。而在促炎癥刺激下，特別是在受到細(xì)菌感染時(shí)，PCT由大量全身各類細(xì)胞產(chǎn)生。在全身性細(xì)菌、真菌、寄生蟲感染和膿毒癥等異常情況下，PCT異常升高，而降鈣素(CT)則無明顯變化。血PCT水平與感染及損傷的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。在感染刺激下的3-6小時(shí)內(nèi)即可觀察到PCT不斷上升達(dá)高峰,并持續(xù)24小時(shí)。當(dāng)PCT濃度大于0.5ng/ml時(shí)極可能感染細(xì)菌，需要使用抗生素治療。目前PCT成為早期診斷全身性重癥細(xì)菌感染的敏感性指標(biāo)。
[0005]血清淀粉樣蛋白A (serum amyloid A protein, SAA)是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，屬于載脂蛋白家族中的異質(zhì)類蛋白質(zhì)，相對(duì)分子量約12kD。正常人血清SAA濃度平均值為2.33mg/L。在急性時(shí)相反應(yīng)中，經(jīng)IL-l、IL-6和TNF刺激，SAA在肝臟中由被激活的巨噬細(xì)胞和纖維母細(xì)胞合成，可升高到最初濃度的100-1000倍，但半衰期短，只有50分鐘左右。
[0006]SAA的含量濃度是反映感染性疾病早期炎癥的敏感指標(biāo)，有助于診斷非特異炎癥、評(píng)估其炎癥活性程度、監(jiān)控其炎癥活動(dòng)及對(duì)其治療的效果。且SAA—個(gè)特別重要的特性是其降解產(chǎn)物能以淀粉樣蛋白A (AA)原纖維的方式沉積在不同的器官中，引起臟器纖維化，在慢性炎癥性疾病發(fā)生發(fā)展過程中影響臟器的功能，而產(chǎn)生一種嚴(yán)重的淀粉樣變性并發(fā)癥。所以在淀粉樣變性患者中，將SAA水平回復(fù)至正常為宗旨的治療，能改善病情發(fā)展。另外，與PCT不同的是，在病毒感染的初期SAA水平也明顯增高。因此，SAA檢測(cè)在診斷腎移植排斥反應(yīng)伴發(fā)病毒感染的患者(特別是進(jìn)行免疫抑制治療的患者)以及用腎上腺皮質(zhì)激素治療的囊性纖維化患者方面，比PCT更能夠準(zhǔn)確判斷炎癥的活動(dòng)狀態(tài)。
[0007]因此，聯(lián)合快速檢測(cè)PCT和SAA比二者任一單獨(dú)使用時(shí)應(yīng)用范圍更廣，更便捷，在診斷感染時(shí)，診斷結(jié)果更準(zhǔn)確，臨床參考價(jià)值更高。
[0008]膠體金免疫層析法具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)且操作無須專門儀器和場(chǎng)所，對(duì)操作人員沒有很高要求，結(jié)果分析清楚，易于判斷，因此非常適合于在缺少設(shè)備的邊遠(yuǎn)山區(qū)、基層醫(yī)院、診所和床邊開展并能滿足家庭或個(gè)人在診斷、保健、體檢等方面的運(yùn)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的在于為解決【背景技術(shù)】中提到的，方便聯(lián)合檢測(cè)人全血、血清或血漿中降I丐素原(procalcitonin, PCT)和血清淀粉樣蛋白 A (serum amyloid A protein, SAA)含量的方法需求，提供一種PCT/SAA聯(lián)合快速檢測(cè)用試紙條，可以解決現(xiàn)有技術(shù)存在的不能在一條試紙中同時(shí)檢測(cè)PCT/SAA的問題。本發(fā)明提供了一種適合進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，簡(jiǎn)單方便、穩(wěn)定可靠、成本低廉、靈敏度高的快速聯(lián)合定量檢測(cè)PCT/SAA的膠體金免疫層析試紙及其檢測(cè)方法。
[0010]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該試紙條的制備方法。
[0011]本發(fā)明目的之一的實(shí)現(xiàn):一種PCT/SAA聯(lián)合快速檢測(cè)用試紙條，包括檢測(cè)卡外殼、測(cè)試條、樣本墊、金結(jié)合物墊、硝酸纖維素膜及吸水紙，所述金結(jié)合物墊上涂覆有兩種膠體金標(biāo)記抗體，分別為膠體金標(biāo)記的能與待檢抗原PCT特異性結(jié)合的抗體以及與待檢抗原SAA特異性結(jié)合的抗體；所述的硝酸纖維素膜上設(shè)有一道包被有固相化的配對(duì)的抗SAA單克隆抗體的T1檢測(cè)線和另一道包被有固相化配對(duì)的抗PCT單克隆抗體的T 2檢測(cè)線，以及一道與所述檢測(cè)線平行的包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體的控制C線。
[0012]所述的樣本墊材質(zhì)為玻璃纖維膜，經(jīng)過含有Tris、酪蛋白鈉鹽、PVP-10的處理液進(jìn)行處理，37攝氏度烘干后，在密封袋中室溫保存。所述的金結(jié)合物墊材質(zhì)為玻璃纖維膜，經(jīng)過含有Tris、檸檬酸三鈉、吐溫20的處理液進(jìn)行處理，37攝氏度烘干后，在密封袋中室溫保存。所述樣本墊、金結(jié)合物墊、硝酸纖維素膜及吸水紙從左到右依次黏貼在測(cè)試條黏貼底襯上方。
[0013]本發(fā)明目的之二的制備方法是由以下步驟實(shí)現(xiàn)的:
I)樣本墊前處理:將含Tris、酪蛋白鈉鹽、PVP-10的樣本墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，于37攝氏度烘干處理后，在密封袋中室溫保存。
[0014]2)金結(jié)合物墊前處理:將含Tris、檸檬酸三鈉、吐溫20的金結(jié)合物墊處理液均勻涂布在玻璃纖維素膜上，于37攝氏度烘干處理后，在密封袋中室溫保存。
[0015]3)金結(jié)合物墊的制備:分別制備含有膠體金標(biāo)記的抗PCT單克隆抗體交聯(lián)物和膠體金標(biāo)記的抗SAA單克隆抗體交聯(lián)物，將這兩種膠體金標(biāo)記抗體混合后，涂覆于步驟2)處理過的金結(jié)合物墊上。
[0016]4)硝酸纖維素膜上檢測(cè)線和質(zhì)控線的制備:用配對(duì)的抗SAA單克隆抗體和配對(duì)的抗PCT單克隆抗體在所述的硝酸纖維素膜上進(jìn)行線狀點(diǎn)樣分別作為1\檢測(cè)線和T 2檢測(cè)線。用羊抗鼠IgG多克隆抗體在所述的硝酸纖維素上進(jìn)行線狀點(diǎn)樣作為控制C線。所述的1\檢測(cè)線、T2檢測(cè)線和控制C線的間距為0.3-0.5cm。
[0017]5)測(cè)試條的組裝:在測(cè)試條黏貼底襯上方從左到右依次黏貼有步驟I)處理過的樣本墊、步驟3)制備的金結(jié)合物墊、步驟4)制備的硝酸纖維素膜及吸水墊。
[0018]6)檢測(cè)卡的組裝:將步驟5)組裝好的測(cè)試條切割成一定寬度的長(zhǎng)條，再將切割好的測(cè)試條安裝在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼底部卡槽中。
[0019]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明聯(lián)合快速檢測(cè)PCT和SAA比二者任一單獨(dú)使用時(shí)應(yīng)用范圍更廣，更便捷，在診斷感染時(shí)，診斷結(jié)果更準(zhǔn)確，臨床參考價(jià)值更高。可有效用于同時(shí)快速測(cè)定全血、血清或血漿中PCT和SAA的水平，適合進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，簡(jiǎn)單方便、降低醫(yī)療成本、穩(wěn)定可靠、成本低廉、靈敏度高。
【附圖說明】
[0020]圖1是本發(fā)明一種PCT/SAA聯(lián)合快速檢測(cè)用試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖，即檢測(cè)卡。圖中:1.檢測(cè)卡外殼2.測(cè)試條3.檢測(cè)窗口 4.加樣孔。
[0021]圖2是本發(fā)明一種PCT/SAA聯(lián)合快速檢測(cè)用試紙條的剖視結(jié)構(gòu)圖，即測(cè)試條。圖中:5.測(cè)試條黏貼底襯6.樣本墊7.金結(jié)合物墊8.硝酸纖維素膜9.吸水墊10.T1檢測(cè)線11.T2檢測(cè)線12.控制C線。
[0022]圖3是本發(fā)明一種PCT/SAA聯(lián)合快速檢測(cè)用試紙條反應(yīng)的5種結(jié)果情況示意圖。圖中:13.T1檢測(cè)線、T2檢測(cè)線和控制C線同時(shí)顯現(xiàn)酒紅色印跡帶，說明被檢測(cè)樣本中PCT和SAA的含量均高于正常允許值；14.T1檢測(cè)線和控制C線同時(shí)顯現(xiàn)酒紅色印跡帶，T 2檢測(cè)線不顯色，說明被檢測(cè)樣本中PCT含量低于或等于正常允許值，SAA的含量高于正常允許值；15.T2檢測(cè)線和控制C線同時(shí)顯現(xiàn)酒紅色印跡帶，T i檢測(cè)線不顯色，說明被檢測(cè)樣本中SAA含量低于或等于正常允許值，PCT的含量高于正常允許值；16.控制C線顯現(xiàn)酒紅色印跡帶，而！\檢測(cè)線和T 2檢測(cè)線均不顯色，說明被檢測(cè)樣本中PCT/SAA的含量均低于或等于正常允許值；17.試紙條沒有出現(xiàn)酒紅色控制C線，說明試紙條已失效，此時(shí)不管檢測(cè)線顏色的深淺或有無，檢測(cè)結(jié)果都判為無效。
【具體實(shí)施方式】
[0023]本發(fā)明結(jié)合具體實(shí)施例參見附圖進(jìn)一步說明如下:
實(shí)施例1
一種PCT/SAA聯(lián)合快速檢測(cè)用試紙條