本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，具體是一種喹乙醇快速檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

乙醇（Olaquindox，2-[N-(2-羥基-乙基)-氨基甲酰]-3-甲基-喹惡啉-1,4-二氧化物）因其具有良好的廣譜抗菌效果并且有促進(jìn)畜禽對(duì)飼料的消化利用，提高生長(zhǎng)速度；是一種低毒、高效、用量少的抗菌促生長(zhǎng)劑，被廣泛用于多種獸藥及飼料添加劑中。

目前國(guó)內(nèi)外食品中喹乙醇的檢測(cè)大都采用液相色譜及液相色譜質(zhì)譜聯(lián)聯(lián)用的方法進(jìn)行定性和定量檢測(cè)，但上述幾種檢測(cè)方法所使用的設(shè)備價(jià)格昂貴且在喹乙醇含量較低時(shí)很難檢出，需要復(fù)雜樣品前處理技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種喹乙醇快速檢測(cè)方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種喹乙醇快速檢測(cè)方法，包括如下步驟：在抗原預(yù)包被條的每個(gè)微孔內(nèi)分別加入50μL 系列濃度的喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)液或是處理好的樣品液以及50μL銪標(biāo)記單克隆抗體，混勻，37℃孵育1h，用洗滌液洗滌微孔3～5次 ； B. 每個(gè)微孔加入200μL增強(qiáng)液，37℃避光振蕩孵育10min ；用時(shí)間分辨儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度值cps；制備分子印跡聚合物：在甲醇溶液中，將喹乙醇、功能單體3-氨基丙基三乙氧基硅烷、交聯(lián)劑四乙氧基硅烷以1:3:8的摩爾比例混合均勻，然后加入活化硅球作為支持載體，0.1mol醋酸作為催化劑進(jìn)行聚合反應(yīng)；用1:3（v/v）冰乙酸-甲醇溶液連續(xù)洗脫8h以除去喹乙醇，再用100%甲醇洗至中性，干燥后得分子印跡聚合物MIP；建立流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系向一根6mm×5cm的玻璃管內(nèi)填充步驟1制備的100mg分子印跡聚合物，兩端塞少許玻璃棉制成MIP柱；將MIP柱放在化學(xué)發(fā)光儀的檢測(cè)光窗上，建立流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系；將3.0×104mol高錳酸鉀溶液、1.5mol硫酸溶液和5.0×104mol硫代硫酸鈉溶液分別通過三條流路同時(shí)流動(dòng)注射流過MIP柱，除去MIP柱上的雜質(zhì)直至基線平穩(wěn)；流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用檢測(cè)：a把喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液流動(dòng)注射入分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系4min，當(dāng)喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液流經(jīng)MIP柱時(shí)，溶液中的喹乙醇被MIP柱選擇性吸附；b把蒸餾水注入體系2min，清洗并除去MIP柱上除喹乙醇以外的雜質(zhì)；c將3.0×104mol高錳酸鉀溶液、1.5mol硫酸溶液和5.0×104mol硫代硫酸鈉分別通過三條流路同時(shí)流動(dòng)注射入體系與MIP柱上吸附的喹乙醇反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，記錄光信號(hào)響應(yīng)值；d把蒸餾水注入體系2min，清洗并除去MIP柱上喹乙醇反應(yīng)后殘留的雜質(zhì)；以步驟3）中喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)濃度產(chǎn)生的光信號(hào)響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線將含喹乙醇的分析物粉碎，按重量體積比（g/mL）1:5加入乙腈溶液超聲提取三次，合并提取液，定容；3000r離心30min，得樣品提取液；將得到的樣品提取液代替喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)化學(xué)發(fā)光信號(hào)響應(yīng)值由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出分析物中喹乙醇含量。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：用包被緩沖液即0.05M pH為9.6的碳酸鈉緩沖液將包被原OLA-HS-OVA稀釋至1.0μg·mL，每微孔100μL加入到聚苯乙烯微孔板中，37℃包被2h。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：還包括用琥珀酸酐 (HS) 將喹乙醇偶聯(lián)到載體蛋白BSA上，合成免疫原OLA-HS-BSA，免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾細(xì)胞和SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能穩(wěn)定分泌抗喹乙醇單克隆抗體的陽性細(xì)胞株并擴(kuò)大培養(yǎng)，注射細(xì)胞進(jìn)入小鼠體內(nèi)誘生腹水，純化獲得抗喹乙醇的單克隆抗體。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明喹乙醇快速檢測(cè)方法避免了傳統(tǒng)檢測(cè)中復(fù)雜的樣品前處理過程，使檢測(cè)過程簡(jiǎn)單、快速且具有高的靈敏度，對(duì)保證我國(guó)食品中喹乙醇的有效檢測(cè)和監(jiān)控監(jiān)管，盡快提升我國(guó)的食品安全性和食品安全的控制能力將發(fā)揮重要作用，具有十分重要意義。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。

本發(fā)明實(shí)施例中，一種喹乙醇快速檢測(cè)方法，包括如下步驟：在抗原預(yù)包被條的每個(gè)微孔內(nèi)分別加入50μL 系列濃度的喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)液或是處理好的樣品液以及50μL銪標(biāo)記單克隆抗體，混勻，37℃孵育1h，用洗滌液洗滌微孔3～5次 ； B. 每個(gè)微孔加入200μL增強(qiáng)液，37℃避光振蕩孵育10min ；用時(shí)間分辨儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度值cps；制備分子印跡聚合物：在甲醇溶液中，將喹乙醇、功能單體3-氨基丙基三乙氧基硅烷、交聯(lián)劑四乙氧基硅烷以1:3:8的摩爾比例混合均勻，然后加入活化硅球作為支持載體，0.1mol醋酸作為催化劑進(jìn)行聚合反應(yīng)；用1:3（v/v）冰乙酸-甲醇溶液連續(xù)洗脫8h以除去喹乙醇，再用100%甲醇洗至中性，干燥后得分子印跡聚合物MIP；建立流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系向一根6mm×5cm的玻璃管內(nèi)填充步驟1制備的100mg分子印跡聚合物，兩端塞少許玻璃棉制成MIP柱；將MIP柱放在化學(xué)發(fā)光儀的檢測(cè)光窗上，建立流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系；將3.0×104mol高錳酸鉀溶液、1.5mol硫酸溶液和5.0×104mol硫代硫酸鈉溶液分別通過三條流路同時(shí)流動(dòng)注射流過MIP柱，除去MIP柱上的雜質(zhì)直至基線平穩(wěn)；流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用檢測(cè)：a把喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液流動(dòng)注射入分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系4min，當(dāng)喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液流經(jīng)MIP柱時(shí)，溶液中的喹乙醇被MIP柱選擇性吸附；b把蒸餾水注入體系2min，清洗并除去MIP柱上除喹乙醇以外的雜質(zhì)；c將3.0×104mol高錳酸鉀溶液、1.5mol硫酸溶液和5.0×104mol硫代硫酸鈉分別通過三條流路同時(shí)流動(dòng)注射入體系與MIP柱上吸附的喹乙醇反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，記錄光信號(hào)響應(yīng)值；d把蒸餾水注入體系2min，清洗并除去MIP柱上喹乙醇反應(yīng)后殘留的雜質(zhì)；以步驟3）中喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)濃度產(chǎn)生的光信號(hào)響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線將含喹乙醇的分析物粉碎，按重量體積比（g/mL）1:5加入乙腈溶液超聲提取三次，合并提取液，定容；3000r離心30min，得樣品提取液；將得到的樣品提取液代替喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)化學(xué)發(fā)光信號(hào)響應(yīng)值由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出分析物中喹乙醇含量。用包被緩沖液即0.05M pH為9.6的碳酸鈉緩沖液將包被原OLA-HS-OVA稀釋至1.0μg·mL，每微孔100μL加入到聚苯乙烯微孔板中，37℃包被2h。還包括用琥珀酸酐 (HS) 將喹乙醇偶聯(lián)到載體蛋白BSA上，合成免疫原OLA-HS-BSA，免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾細(xì)胞和SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能穩(wěn)定分泌抗喹乙醇單克隆抗體的陽性細(xì)胞株并擴(kuò)大培養(yǎng)，注射細(xì)胞進(jìn)入小鼠體內(nèi)誘生腹水，純化獲得抗喹乙醇的單克隆抗體。

實(shí)施例1：

本發(fā)明喹乙醇快速檢測(cè)方法，包括如下步驟：在抗原預(yù)包被條的每個(gè)微孔內(nèi)分別加入50μL 系列濃度的喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)液或是處理好的樣品液以及50μL銪標(biāo)記單克隆抗體，混勻，37℃孵育1h，用洗滌液洗滌微孔3次；B. 每個(gè)微孔加入200μL增強(qiáng)液，37℃避光振蕩孵育10min ；用時(shí)間分辨儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度值cps；制備分子印跡聚合物：在甲醇溶液中，將喹乙醇、功能單體3-氨基丙基三乙氧基硅烷、交聯(lián)劑四乙氧基硅烷以1:3:8的摩爾比例混合均勻，然后加入活化硅球作為支持載體，0.1mol醋酸作為催化劑進(jìn)行聚合反應(yīng)；用1:3（v/v）冰乙酸-甲醇溶液連續(xù)洗脫8h以除去喹乙醇，再用100%甲醇洗至中性，干燥后得分子印跡聚合物MIP；建立流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系向一根6mm×5cm的玻璃管內(nèi)填充步驟1制備的100mg分子印跡聚合物，兩端塞少許玻璃棉制成MIP柱；將MIP柱放在化學(xué)發(fā)光儀的檢測(cè)光窗上，建立流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系；將3.0×104mol高錳酸鉀溶液、1.5mol硫酸溶液和5.0×104mol硫代硫酸鈉溶液分別通過三條流路同時(shí)流動(dòng)注射流過MIP柱，除去MIP柱上的雜質(zhì)直至基線平穩(wěn)；流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用檢測(cè)：a把喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液流動(dòng)注射入分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系4min，當(dāng)喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液流經(jīng)MIP柱時(shí)，溶液中的喹乙醇被MIP柱選擇性吸附；b把蒸餾水注入體系2min，清洗并除去MIP柱上除喹乙醇以外的雜質(zhì)；c將3.0×104mol高錳酸鉀溶液、1.5mol硫酸溶液和5.0×104mol硫代硫酸鈉分別通過三條流路同時(shí)流動(dòng)注射入體系與MIP柱上吸附的喹乙醇反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，記錄光信號(hào)響應(yīng)值；d把蒸餾水注入體系2min，清洗并除去MIP柱上喹乙醇反應(yīng)后殘留的雜質(zhì)；以步驟3）中喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)濃度產(chǎn)生的光信號(hào)響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線將含喹乙醇的分析物粉碎，按重量體積比（g/mL）1:5加入乙腈溶液超聲提取三次，合并提取液，定容；3000r離心30min，得樣品提取液；將得到的樣品提取液代替喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)化學(xué)發(fā)光信號(hào)響應(yīng)值由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出分析物中喹乙醇含量。用包被緩沖液即0.05M pH為9.6的碳酸鈉緩沖液將包被原OLA-HS-OVA稀釋至1.0μg·mL，每微孔100μL加入到聚苯乙烯微孔板中，37℃包被2h。還包括用琥珀酸酐 (HS) 將喹乙醇偶聯(lián)到載體蛋白BSA上，合成免疫原OLA-HS-BSA，免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾細(xì)胞和SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能穩(wěn)定分泌抗喹乙醇單克隆抗體的陽性細(xì)胞株并擴(kuò)大培養(yǎng)，注射細(xì)胞進(jìn)入小鼠體內(nèi)誘生腹水，純化獲得抗喹乙醇的單克隆抗體。

實(shí)施例2：

本發(fā)明喹乙醇快速檢測(cè)方法，包括如下步驟：在抗原預(yù)包被條的每個(gè)微孔內(nèi)分別加入50μL 系列濃度的喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)液或是處理好的樣品液以及50μL銪標(biāo)記單克隆抗體，混勻，37℃孵育1h，用洗滌液洗滌微孔5次；B.每個(gè)微孔加入200μL增強(qiáng)液，37℃避光振蕩孵育10min ；用時(shí)間分辨儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度值cps；制備分子印跡聚合物：在甲醇溶液中，將喹乙醇、功能單體3-氨基丙基三乙氧基硅烷、交聯(lián)劑四乙氧基硅烷以1:3:8的摩爾比例混合均勻，然后加入活化硅球作為支持載體，0.1mol醋酸作為催化劑進(jìn)行聚合反應(yīng)；用1:3（v/v）冰乙酸-甲醇溶液連續(xù)洗脫8h以除去喹乙醇，再用100%甲醇洗至中性，干燥后得分子印跡聚合物MIP；建立流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系向一根6mm×5cm的玻璃管內(nèi)填充步驟1制備的100mg分子印跡聚合物，兩端塞少許玻璃棉制成MIP柱；將MIP柱放在化學(xué)發(fā)光儀的檢測(cè)光窗上，建立流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系；將3.0×104mol高錳酸鉀溶液、1.5mol硫酸溶液和5.0×104mol硫代硫酸鈉溶液分別通過三條流路同時(shí)流動(dòng)注射流過MIP柱，除去MIP柱上的雜質(zhì)直至基線平穩(wěn)；流動(dòng)注射分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用檢測(cè)：a把喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液流動(dòng)注射入分子印跡-化學(xué)發(fā)光在線聯(lián)用體系4min，當(dāng)喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液流經(jīng)MIP柱時(shí)，溶液中的喹乙醇被MIP柱選擇性吸附；b把蒸餾水注入體系2min，清洗并除去MIP柱上除喹乙醇以外的雜質(zhì)；c將3.0×104mol高錳酸鉀溶液、1.5mol硫酸溶液和5.0×104mol硫代硫酸鈉分別通過三條流路同時(shí)流動(dòng)注射入體系與MIP柱上吸附的喹乙醇反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，記錄光信號(hào)響應(yīng)值；d把蒸餾水注入體系2min，清洗并除去MIP柱上喹乙醇反應(yīng)后殘留的雜質(zhì)；以步驟3）中喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)濃度產(chǎn)生的光信號(hào)響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線將含喹乙醇的分析物粉碎，按重量體積比（g/mL）1:5加入乙腈溶液超聲提取三次，合并提取液，定容；3000r離心30min，得樣品提取液；將得到的樣品提取液代替喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)化學(xué)發(fā)光信號(hào)響應(yīng)值由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出分析物中喹乙醇含量。用包被緩沖液即0.05M pH為9.6的碳酸鈉緩沖液將包被原OLA-HS-OVA稀釋至1.0μg·mL，每微孔100μL加入到聚苯乙烯微孔板中，37℃包被2h。還包括用琥珀酸酐 (HS) 將喹乙醇偶聯(lián)到載體蛋白BSA上，合成免疫原OLA-HS-BSA，免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾細(xì)胞和SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能穩(wěn)定分泌抗喹乙醇單克隆抗體的陽性細(xì)胞株并擴(kuò)大培養(yǎng)，注射細(xì)胞進(jìn)入小鼠體內(nèi)誘生腹水，純化獲得抗喹乙醇的單克隆抗體。

對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。