酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法，屬于食品添加劑及其檢測方法領(lǐng)域。所述的酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法,包括以下步驟：用Chelex-100除去CPP產(chǎn)品中的鈣，再用去離子水配制成一定濃度CPP溶液，室溫下攪拌10分鐘后加入PH=8.0的5mL磷酸二氫鉀和磷酸氫鉀緩沖溶液并攪拌均勻，然后加入氯化鈣溶液混合均勻，將此溶液在25℃下靜置40分鐘待沉淀充分產(chǎn)生，然后在2900rpm離心20分鐘除去溶液中的沉淀，則上清液中含有與CPP絡(luò)合的鈣離子。用原子吸收光譜儀檢測上清液中的鈣含量，并換算出該濃度下的CPP所能結(jié)合的鈣離子數(shù)量。本發(fā)明所述的測定方法具有簡單快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好、結(jié)果準確可靠等特點。因此，本發(fā)明所述的測定方法可用于酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品應(yīng)用中持鈣能力的快速常規(guī)分析測定。
【專利說明】酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法，屬于食品添加劑及其檢測方法領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]酪蛋白磷酸肽(簡稱CPP)是牛奶酪蛋白經(jīng)酶解、分離、純化而制得的活性肽產(chǎn)品。研究發(fā)現(xiàn)CPP能與鈣離子結(jié)合生成穩(wěn)定的可溶性絡(luò)合物，從而阻止或延緩鈣離子在中性或弱堿性環(huán)境中形成沉淀。CPP結(jié)合鈣能力的高低與其分子中氨基酸的組成、排序或磷酸基的分布等因素密切相關(guān)。其中CPP產(chǎn)品的氮/磷摩爾比(N/P)能較客觀地反映CPP產(chǎn)品的純度、磷酸基密度、結(jié)合鈣能力等理化性質(zhì)。一般來說，N/P值較低的CPP產(chǎn)品其純度較高，結(jié)合鈣的能力(即持鈣能力)亦較高。但是，由于生產(chǎn)中各廠家所采用的原料，酶或酶系及生產(chǎn)條件均不相同，故商品CPP的純度、N/P值等指標也不盡相同，這直接影響了 CPP產(chǎn)品的持鈣能力。
[0003]對于CPP產(chǎn)品的持鈣能力的測定，對CPP應(yīng)用以及含CPP產(chǎn)品產(chǎn)生具有重要的意義。例如，要研制一種含CPP的鈣片，每片重0.5g，含元素鈣80mg。假設(shè)要求加入的CPP產(chǎn)品能夠全部結(jié)合片劑中的鈣，根據(jù)理論上需要加入107mg高持鈣能力的CPP產(chǎn)品或413mg低持鈣能力的CPP產(chǎn)品，若使用含鈣量最高的碳酸鈣為鈣源，則提供SOmg元素鈣需要碳酸鈣200mg。在不添加任何輔料的情況下，碳酸鈣和低持鈣能力的CPP產(chǎn)品的量已達0.613g，超出了片重規(guī)格要求，因此在這種情況下選擇產(chǎn)品(在生產(chǎn)中是難以滿足配方設(shè)計要求的。而選用高持鈣能力的CPP產(chǎn)品的產(chǎn)品則問題可迎刃而解，因為只需加入107mg產(chǎn)品’即可滿足原功效成分配方的設(shè)計，且尚有0.193g空間用來添加和調(diào)整其它原輔料。
[0004]因此，建立一種簡便、快速、準確測定酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的方法很有必要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在提供一種簡便、快速、準確的酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法。
[0006]本發(fā)明所述的酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法，包括以下步驟:
用Chelex-1OO除去CPP產(chǎn)品中的鈣，再用去離子水配制成一定濃度CPP溶液，室溫下攪拌10分鐘后加入PH=8.0的5mL磷酸二氫鉀和磷酸氫鉀緩沖溶液并攪拌均勻，然后加入氯化鈣溶液混合均勻，將此溶液在25°C下靜置40分鐘待沉淀充分產(chǎn)生，然后在2900rpm離心20分鐘除去溶液中的沉淀，則上清液中含有與CPP絡(luò)合的鈣離子。用原子吸收光譜儀檢測上清液中的鈣含量，并換算出該濃度下的CPP所能結(jié)合的鈣離子數(shù)量。
[0007]優(yōu)選的，本發(fā)明所述的CPP溶液的濃度為100mg/mL，用量為3.75mL。
[0008]更優(yōu)選的，本發(fā)明所述的氯化鈣溶液的濃度為100mg/mL，加入量為1.25mL。
[0009]本發(fā)明所述的測定方法是根據(jù)CPP在中性或弱堿性溶液中能與鈣離子結(jié)合形成穩(wěn)定的水溶性絡(luò)合物，阻止或延緩溶液中的鈣離子與磷酸根離子結(jié)合生成磷酸鈣沉淀這一特性，CPP持鈣能力的大小可以通過定量測定CPP結(jié)合特定溶液中鈣離子的量來進行評價。
[0010]本發(fā)明所述的測定方法具有簡單快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好、結(jié)果準確可靠等特點。因此，本發(fā)明所述的測定方法可用于酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品應(yīng)用中持鈣能力的快速常規(guī)分析測定。

【具體實施方式】
[0011]實施例一:
取市售高純度CPP產(chǎn)品，用Chelex-ΙΟΟ除去CPP產(chǎn)品中的鈣，再用去離子水配制成濃度為100mg/mL的CPP溶液，取3.75mL在室溫下攪拌10分鐘后加入PH=8.0的5mL磷酸二氫鉀和磷酸氫鉀緩沖溶液并攪拌均勻，然后加入1.25mL濃度為100mg/mL的氯化鈣溶液混合均勻，將此溶液在25°C下靜置40分鐘待沉淀充分產(chǎn)生，然后在2900rpm離心20分鐘除去溶液中的沉淀，則上清液中含有與CPP絡(luò)合的鈣離子。用原子吸收光譜儀檢測上清液中的鈣含量，并換算出該濃度下的CPP所能結(jié)合的鈣離子數(shù)量。經(jīng)測定，該CCP產(chǎn)品的持鈣能力為 74.7mg/100mg。
[0012]實施例二:
取市售低純度CPP產(chǎn)品，用Chelex-ΙΟΟ除去CPP產(chǎn)品中的鈣，再用去離子水配制成濃度為100mg/mL的CPP溶液，取3.75mL在室溫下攪拌10分鐘后加入PH=8.0的5mL磷酸二氫鉀和磷酸氫鉀緩沖溶液并攪拌均勻，然后加入1.25mL濃度為100mg/mL的氯化鈣溶液混合均勻，將此溶液在25°C下靜置40分鐘待沉淀充分產(chǎn)生，然后在2900rpm離心20分鐘除去溶液中的沉淀，則上清液中含有與CPP絡(luò)合的鈣離子。用原子吸收光譜儀檢測上清液中的鈣含量，并換算出該濃度下的CPP所能結(jié)合的鈣離子數(shù)量。經(jīng)測定，該CCP產(chǎn)品的持鈣能力為 19.4mg/100mgo
【權(quán)利要求】
1.酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法，包括以下步驟: 用Chelex-1OO除去CPP產(chǎn)品中的鈣，再用去離子水配制成一定濃度CPP溶液，室溫下攪拌10分鐘后加入PH=8.0的5mL磷酸二氫鉀和磷酸氫鉀緩沖溶液并攪拌均勻，然后加入氯化鈣溶液混合均勻，將此溶液在25°C下靜置40分鐘待沉淀充分產(chǎn)生，然后在2900rpm離心20分鐘除去溶液中的沉淀，則上清液中含有與CPP絡(luò)合的鈣離子；用原子吸收光譜儀檢測上清液中的鈣含量，并換算出該濃度下的CPP所能結(jié)合的鈣離子數(shù)量。
2.如權(quán)利要求1所述的酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法，其特征在于所述的CPP溶液的濃度為100mg/mL，用量為3.75mL。
3.如權(quán)利要求1或2所述的酪蛋白磷酸肽產(chǎn)品持鈣能力的測定方法，其特征在于所述的氯化鈣溶液的濃度為100mg/mL，加入量為1.25mL。
【文檔編號】G01N21/31GK104297184SQ201410573848
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月24日
【發(fā)明者】李勇, 劉文斌 申請人:西安瑩樸生物科技股份有限公司