專利名稱：一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及色譜分離技術領域，具體是涉及一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)。
背景技術：
制備液相色譜是獲取純樣品的一種高效分離技術，其誕生于20世紀30年代，最初應用于色素的分離，至今得到了長足發(fā)展，如今已被廣泛運用于醫(yī)藥工業(yè)，蛋白分離純化等領域，如次生類代謝產(chǎn)物、天然產(chǎn)物、大分子化合物及某些重要的藥用生物活性蛋白、生物治療品與診斷試劑的分離純化。但是，制備液相色譜與分析高效液相色譜比較分離效率不高，不能滿足高純度、高產(chǎn)量的需求。于是，人們致力尋找一種高分離效率的制備色譜模式，降低生產(chǎn)成本，得到高純的樣品。進樣量與分離效率是液相制備色譜的兩個重要指標，而進樣量增加，會降低分離效率。關亞風等實用新型了一種內(nèi)徑逐漸縮小的錐形柱。此內(nèi)徑逐漸縮小的錐形柱，選擇合適的錐角，使色譜譜帶流型接近篩子狀流型，其上樣量大同時能有效提高柱效。但是該色譜柱提高的柱效有限，對一些復雜物質(zhì)分離效果不盡人意。有人通過改進柱設計提出拋物線式色譜柱及色譜球，以進一步提高分離效率。將兩個獨立色譜系統(tǒng)串聯(lián)起來的二維液相色譜(2D-LC)，在一維系統(tǒng)中不能完全分離的組分，有可能在二維系統(tǒng)中得到較好的分離，因此整個二維系統(tǒng)的分離能力，系統(tǒng)分辨率、峰容量較一維色譜系統(tǒng)得到了大大提高。在制備色譜中，有人首先使用離線二維模式，將樣品用低壓制備液相色譜粗分，將收集的洗脫液濃縮后，再以中、高壓液相色譜分離。這種方法操作復雜費時費力，且浪費大量溶劑，生產(chǎn)成本高。有人有人將低、中、高壓制備液相色譜系統(tǒng)結(jié)合構(gòu)建在線二維制備液相色譜系統(tǒng)，用于規(guī)?；苽渖a(chǎn)。但是在線二維液相色譜系統(tǒng)，需要兩個制備液相色譜系統(tǒng)，對于復雜樣品中單個目標物分離純化，初期投資過高。

實用新型內(nèi)容本實用新型主要目的是提供一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，該準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)能夠?qū)崿F(xiàn)高純度、高產(chǎn)量的分離需求，且操作簡便，經(jīng)濟成本低。為實現(xiàn)上述目的，本實用新型采用的技術方案是一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，包括三通閥、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)及檢測器，所述分離系統(tǒng)包括第一維色譜柱及第二維色譜柱，所述第一維色譜柱的進樣端連接所述輸液系統(tǒng)，所述第一維色譜柱的出樣端連接三通閥的一個接口 ；所述第二維色譜柱的進樣端連接三通閥的一個接口，所述第二維色譜柱的出樣端連接至所述檢測器；所述三通閥的另一接口通過管道連接至所述檢測器。優(yōu)選的，所述第一維色譜柱及第二維色譜柱均采用的是色譜塔，以方便物質(zhì)在分離過程中分布。優(yōu)選的，所述第一維色譜柱及第二維色譜柱內(nèi)填充有固定相，所述固定相為聚合物材料、硅膠、原位聚合整體材料中的一種。本實用新型中第二維色譜柱內(nèi)的固定相的粒度不大于第一維色譜柱內(nèi)的固定相的粒度。[0007]進一步的，所述第二維色譜柱內(nèi)徑小于所述第一維色譜柱的內(nèi)徑。進一步的，所述第二維色譜柱長度長于所述第一維色譜柱的長度。進一步的，所述檢測器為紫外分析檢測器， 能高效檢測分析目標物。進一步的,所述輸液系統(tǒng)包括兩個輸液泵。進一步的，所述固定相為反相填料、正相填料、離子交換樹脂填料、體積排阻填料、整體填料、手性填料以及親和填料中的一種。利用本實用新型的一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)分離檢測物質(zhì)時的使用方法，包括如下步驟步驟1、首先利用三通閥將第一維色譜柱的出樣端與檢測器相連，將樣品在第一維色譜柱中進行分離，由檢測器進行實時檢測；步驟2、當檢測到目標物從第一維色譜柱中洗脫下來時，切換三通閥，使得第一維色譜柱與第二維色譜柱相連通，目標物通過中心切割的方式直接進入第二維色譜柱，進行洗脫；步驟3、待目標物完全進入第二維色譜柱后，切換三通閥，將第一維色譜柱與檢測器相連，將后于目標物洗脫的物質(zhì)洗脫，并進行檢測；步驟4、再次切換三通閥，使第一維色譜柱與第二維色譜柱相連通，對第二維色譜柱中的物質(zhì)進行進一步分離純化，再通過檢測器進行檢測確定后收集。本實用新型的有益效果是本實用新型保證大進樣量的同時大大提高系統(tǒng)分離能力；且通過三通閥的轉(zhuǎn)換，能完成兩個分離系統(tǒng)的工作，大大降低硬件和生產(chǎn)成本；應用范圍廣，適合于復雜樣品中微量組分的分離純化。

圖1是本實用新型準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)一較佳實施例的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本實用新型實施例中山茶花樣品的HPLC分析色譜圖；圖3為本實用新型實施例中樣品分離后目標物的HPLC分析色譜圖。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖對本實用新型的較佳實施例進行詳細闡述，以使本實用新型的優(yōu)點和特征能更易于被本領域技術人員理解，從而對本實用新型的保護范圍做出更為清楚明確的界定。實施例請參閱圖1，本實用新型一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，包括三通閥5、輸液系統(tǒng)3、分離系統(tǒng)及檢測器4，分離系統(tǒng)包括第一維色譜柱I及第二維色譜柱2，第一維色譜柱I的進樣端連接輸液系統(tǒng)3，第一維色譜柱I的出樣端連接三通閥5的一個接口 ；第二維色譜柱2的進樣端連接三通閥5的一個接口，第二維色譜柱2的出樣端連接至檢測器4 ;三通閥5的另一接口通過管道連接至檢測器4。本實施例中，第一維色譜柱I及第二維色譜柱2均采用的是色譜塔，以方便物質(zhì)在分離過程中分布。第一維色譜柱I及第二維色譜柱2內(nèi)填充有反相填料固定相，且第二維色譜柱2內(nèi)的反相填料固定相的粒度不大于第一維色譜柱I內(nèi)的反相填料固定相的粒度。固定相還可以根據(jù)實際情況采用聚合物材料、硅膠、原位聚合整體材料等。本實施例中，第一維色譜柱I為內(nèi)徑40mm，長150mm的色譜塔，上部裝填粒徑為50 μ m的C18填料，底部為粒徑25 μ m的C18填料。第二維色譜柱2為內(nèi)徑25mm，長300mm的色譜塔，裝填粒徑25 μ m的C18填料。本實施例中，檢測器4為紫外分析檢測器，能高效檢測分析目標物。本實施例中，輸液系統(tǒng)3由兩個輸液泵組成。本實用新型中第一維色譜柱I及第二維色譜柱2所用的固定相可以為反相填料、正相填料、離子交換樹脂填料、體積排阻填料、整體填料、手性填料以及親和填料中的一種。下面結(jié)合實際操作來進一步說明本實用新型準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)的性能及其使用方法。請參考圖1、圖2及圖3，利用本實用新型準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)來進行如下分離檢測樣品山茶花提取液，目標物為其中一低含量雜質(zhì)，原樣HPLC分析色譜圖如圖2所示。色譜條件檢測波長為230nm。樣品的HPLC分析、利用第一維色譜柱I與第二維色譜柱2分離時均使用O.1 %三氟醋酸水溶液、乙腈為流動相，梯度洗脫。HPLC分析系統(tǒng)色譜柱為 SinoChrom ODS-BP (4. 6 X 150mm5um)。操作步驟如下首先利用三通閥5將第一維色譜柱I的出樣端與檢測器4相連通，將樣品在第一維色譜柱I中進行分離，由檢測器4進行實時檢測；當檢測到目標物從第一維色譜柱I中洗脫下來時，切換三通閥5，使得第一維色譜柱I與第二維色譜柱2相連通，目標物通過中心切割的方式直接進入第二維色譜柱2，進行洗脫；待目標物完全進入第二維色譜柱2后，切換三通閥5，將第一維色譜柱I與檢測器4相連，將后于目標物洗脫的物質(zhì)洗脫，并進行檢測；再次切換三通閥5，使第一維色譜柱I與第二維色譜柱2相連通，對第二維色譜柱2中的物質(zhì)進行進一步分離純化，再通過檢測器4進行檢測確定后收集。收集的目標物用HPLC進行分析，譜圖如圖3所示，圖3中A峰為目標物。與現(xiàn)有技術相比，本實用新型的積極效果是
(I)本實用新型通過三通閥將第一維色譜系統(tǒng)和第二維色譜柱有機結(jié)合，復雜樣品在第一維系統(tǒng)中經(jīng)過粗分后通過中心切割的方式，將目標物轉(zhuǎn)入第二維色譜柱中，去掉絕大部分雜質(zhì)，然后進行進一步分離純化，保證大進樣量的同時大大提高系統(tǒng)分離能力；(2)本實用新型僅需在一維分離系統(tǒng)后使用三通閥連接第二維色譜柱，即可將目標物經(jīng)第一維分離后通過中心切割的方式進入第二維分離系統(tǒng)，進一步分離純化，完成兩個分離系統(tǒng)的工作，能大大降低硬件和生產(chǎn)成本；(3)本實用新型中第一維色譜柱可以填充兩種填料，下部為與第二維相同色譜填料，上部為粒徑更粗的填料。因此，當?shù)诙S色譜柱填料發(fā)生塌陷時，第一維色譜柱中下部的填料會進入第二維色譜柱，實現(xiàn)色譜柱的修補，具有準動態(tài)壓縮柱的功能，大大提高色譜柱使用壽命；同時對溶解性差的樣品，可以在第一維色譜柱上部通過拌樣方式進樣，應用范圍廣。(4)本實用新型操作簡單，易于實現(xiàn)自動化。進樣之后僅需切換三次三通閥，即可完成在線二維分離；(5)本實用新型的應用范圍廣，可以用于天然產(chǎn)物的分離純化、生物樣品的分離純化、藥物的分離及手性樣品的分離，特別適合于復雜樣品中微量組分的分離純化。以上所述僅為本實用新型的實施例，并非因此限制本實用新型的專利范圍，凡是利用本實用新型說明書及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關的技術領域，均同理包括在本實用新型的專利保護范圍內(nèi)。
權利要求1.一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，包括三通閥、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)及檢測器，其特征在于，所述分離系統(tǒng)包括第一維色譜柱及第二維色譜柱，所述第一維色譜柱的進樣端連接所述輸液系統(tǒng)，所述第一維色譜柱的出樣端連接三通閥的一個接口 ；所述第二維色譜柱的進樣端連接三通閥的一個接口，所述第二維色譜柱的出樣端連接至所述檢測器；所述三通閥的另一接口通過管道連接至所述檢測器。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在于，所述第一維色譜柱及第二維色譜柱均采用的是色譜塔。
3.根據(jù)根據(jù)權利要求1所述的一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在于，所述第一維色譜柱及第二維色譜柱內(nèi)填充有固定相，所述固定相為聚合物材料、硅膠、原位聚合整體材料中的一種。
4.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在于，所述第二維色譜柱內(nèi)徑小于所述第一維色譜柱的內(nèi)徑。
5.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在于，所述第二維色譜柱長度長于所述第一維色譜柱的長度。
6.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在于，所述檢測器為紫外分析檢測器。
7.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在于，所述輸液系統(tǒng)包括兩個輸液泵。
8.根據(jù)權利要求1或2或3所述的一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，其特征在于，所述固定相為反相填料、正相填料、離子交換樹脂填料、體積排阻填料、整體填料、手性填料以及親和填料中的一種。
專利摘要本實用新型公開了一種準動態(tài)二維制備液相色譜系統(tǒng)，包括三通閥、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)及檢測器，所述分離系統(tǒng)包括第一維色譜柱及第二維色譜柱，所述第一維色譜柱的進樣端連接所述輸液系統(tǒng)，所述第一維色譜柱的出樣端連接三通閥的一個接口；所述第二維色譜柱的進樣端連接三通閥的一個接口，所述第二維色譜柱的出樣端連接至所述檢測器；所述三通閥的另一接口通過管道連接至所述檢測器。通過上述方式，本實用新型能夠保證大進樣量的同時大大提高系統(tǒng)分離能力，且通過三通閥的轉(zhuǎn)換，能完成兩個分離系統(tǒng)的工作，大大降低硬件和生產(chǎn)成本；應用范圍廣，適合于復雜樣品中微量組分的分離純化。
文檔編號G01N30/46GK202870047SQ201220517278
公開日2013年4月10日 申請日期2012年10月10日 優(yōu)先權日2012年10月10日
發(fā)明者張維冰, 邵平, 戈兆松, 劉翻, 張權青 申請人:蘇州匯通色譜分離純化有限公司