一種丹參的乙酸乙酯提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種丹參的乙酸乙酯提取物及其制備方法和應(yīng)用，所述乙酸乙酯提取物由以下方法制備：丹參，用石油醚浸泡，石油醚滲濾，回收殘渣，揮干殘渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液濃縮至無醇味，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。經(jīng)過體外試驗，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明提供的丹參的乙酸乙酯提取物可抑制H1N1病毒，效果明顯。
【專利說明】一種丹參的乙酸乙酯提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及丹參提取物，具體涉及一種丹參的乙酸乙酯提取物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]流感是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染病，具有流行面廣，傳染性高，發(fā)病率高等特點，嚴(yán)重威脅人類的健康和生命。2009年，墨西哥爆發(fā)的HlNl流感是由禽流感、豬流感和人流感病毒基因混合而成，其特點是突然出現(xiàn)，傳播迅速。[0003]HlNl(又稱豬流感)是一種病毒，是Orthomyxoviridae系列的一種病毒。它的宿主是鳥類和一些哺乳動物。幾乎所有甲型的HlNl病毒已被隔離，野生鳥類出現(xiàn)疾病屬罕見。有些HlNl病毒引起嚴(yán)重的疾病大多發(fā)生于家禽方面，而人類卻很少出現(xiàn)。但經(jīng)過鳥類和哺乳動物的傳播和變異，這可能導(dǎo)致疫情或人類流感大面積傳播。
[0004]HlNl流感病毒的群間傳播主要是以感染者的咳嗽和噴嚏為媒介，在人群密集的環(huán)境中更容易發(fā)生感染，而越來越多證據(jù)顯示，微量病毒可留存在桌面、電話機或其它平面上，再透過手指與眼、鼻、口的接觸來傳播。因此盡量不要身體接觸，包括握手、親吻、共餐等。如果接觸帶有甲型HlNl流感病毒的物品，而后又觸碰自己的鼻子和口腔，也會受到感染。感染者有可能在出現(xiàn)癥狀如感染其他人，感染后一般在一周、或一周多后發(fā)病。小孩的傳染性會久一些。目前，中國已成功研制出甲型HlNl流感疫苗。由于HlNl豬流感病毒不同于HlNl人類流感病毒，現(xiàn)有的流感疫苗并不能預(yù)防HlNl豬流感病毒。但四種治療季節(jié)性流感的藥物可預(yù)防豬流感:金剛燒胺(amantadine),金剛乙胺(rimantadine),奧司他韋(oseltamivir)和扎那米韋(zanamivir)。盡管其均為治療流行性感冒的有效藥物,但近期從豬流感患者體內(nèi)檢測出的病毒特征來看，它已對金剛燒胺(amantadine),金剛乙胺(rimantadine)有了抗藥性。因此在治療和預(yù)防時,采用奧司他韋(oseltamivir)和扎那米韋(zanamivir)將更為有效。
[0005]HlNl流感病毒作為流感的一種，可以用傳統(tǒng)的中醫(yī)理論和方法進行治療，從中醫(yī)角度講，流感是感受外來邪氣，客于肺經(jīng)，閉其清道，肺氣不得下降，其人必定流清涕、發(fā)熱、惡風(fēng)、惡寒、頭疼身痛等情形。法宜宣散，如桂枝湯、麻黃湯、葛根湯之類。如不能及時治療會轉(zhuǎn)為內(nèi)傷，引發(fā)腎陽衰而陰寒內(nèi)生，腎絡(luò)通于肺，心肺之陽不足，不能統(tǒng)攝津液，而流清鼻涕，患者必定沒有外感的足征，多困倦無神，或噴嚏不休，或兩腳冰冷，法宜扶陽，如四逆湯、白通湯、封髓丹、麻黃附子細(xì)辛湯、姜桂湯之類。
[0006]中醫(yī)講求辨證施治，根據(jù)流感不同類型分別治療，有一訣竅:凡見打噴嚏、流清涕、鼻塞，而無其它癥狀，就屬于內(nèi)寒感冒，不論輕重，服四逆湯、麻黃附子細(xì)辛湯必效，病去藥止，不留后遺癥。若服其它感冒藥，必然無效，而且，還會使病邪加深加重，轉(zhuǎn)成肺腎等重病。
[0007]所以，治療流感卻服用治療外感的藥物，一定不會有很好的療效。而且，還會將陰邪斂在體內(nèi)，到一定時間必定會發(fā)作。而現(xiàn)行的中、西醫(yī)的治療方法，都具有再次將陰邪收斂的作用，如此經(jīng)過多次積累，最終造成哮喘、鼻炎、咽炎、氣管炎等呼吸系統(tǒng)疾病。[0008]神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase,NA)是甲、乙型流感病毒中有唾液酸酶活性的表面糖蛋白，在病毒的復(fù)制和致病過程中起重要作用。所以神經(jīng)氨酸酶抑制劑的研究與開發(fā)已成為尋找治療流感病毒藥物的研究熱點。
[0009]丹參,來源于唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖,具有如下作用:
[0010]1、抗菌消炎作用:醇提丹參液對口腔常見致病菌有抑制作用。
[0011]2、保護肝臟的作用:丹參水或甲醇提取物能夠治療和預(yù)防肝硬化膽汁的肝纖維化。
[0012]3、對腦組織的作用:丹參提取物可以用作治療學(xué)或保健食品的治療和預(yù)防認(rèn)知功能障礙
[0013]4、抗消化性潰瘍:丹參水溶液治療消化性潰瘍、難治性潰瘍效果較好。
[0014]5、心血管的作用:丹參中的丹參酮具有非常強的抗血凝作用。丹參素、原兒茶醛也具有抗凝作用；丹酚酸A能顯著改善大鼠心肌缺血，提示丹參可對抗缺氧/復(fù)氧對心肌細(xì)胞的影響和損傷；丹酚酸B達(dá)到防治動脈樣硬化的目的。
[0015]迄今為止，尚未有關(guān)于丹參的乙酸乙酯提取物及其相關(guān)應(yīng)用的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016]本發(fā)明的目的是提供一種丹參的乙酸乙酯提取物。
[0017]本發(fā)明的另一目的是提供丹參的乙酸乙酯提取物的制備方法。
[0018]本發(fā)明的另一目的是提供丹參的乙酸乙酯提取物的應(yīng)用。
[0019]本發(fā)明提供的丹參的乙酸乙酯提取物，由以下方法制備:丹參，用石油醚浸泡，石油醚滲濾，回收殘渣，揮干殘渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液濃縮至無醇味，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。
[0020]所述丹參的乙酸乙酯提取物中:
[0021]所述石油醚為60_90°C的石油醚；
[0022]所述石油醚浸泡后滲濾的方法包括以下步驟:用丹參重量3-5倍量體積的石油醚浸泡12-48h，石油醚滲漉，得到丹參重量3-8倍量體積的滲濾液，即可。
[0023]所述殘渣用乙醇提取的方法包括以下步驟:用60%_90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹參重量3-5倍體積的乙醇，每次提取時間為1-3小時。
[0024]優(yōu)選地,所述丹參的乙酸乙酯提取物由以下方法制備:丹參,用丹參重量3-5倍量體積的石油醚浸泡18-36h，石油醚滲漉，得到丹參重量5-7倍量體積的滲濾液，回收殘渣，揮干殘洛中的石油醚，然后用70%_90%的乙醇回流提取2-3次,每次用丹參重量3-5倍量體積的乙醇，每次提取時間為1-3小時，合并提取液，然后濃縮至無醇味，再用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，蒸干，即得丹參的乙酸乙酯提取物。
[0025]進一步優(yōu)選，所述丹參的乙酸乙酯提取物由以下方法制備:丹參，用丹參重量3倍量體積的石油醚浸泡24h，石油醚滲漉，得到丹參重量5倍量體積的滲濾液，回收殘渣，揮干殘渣中的石油醚，然后用丹參重量3倍量體積的80%的乙醇回流提取2次，每次提取時間為2小時，合并提取液，然后濃縮至無醇味，再用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，蒸干，即得丹參的乙酸乙酯提取物。[0026]解釋說明，關(guān)于重量的多少倍體積，例如，用丹參重量3-5倍量體積的石油醚浸泡，以丹參為100g為例，則所用石油醚的用量為300-500ml。
[0027]本發(fā)明還提供了一種制備上述丹參的乙酸乙酯提取物的方法，該方法包括以下步驟:丹參，用石油醚浸泡，石油醚滲濾，回收殘渣，揮干殘渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液濃縮至無醇味，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層提取液，蒸干得乙酸乙酯提取物。
[0028]本發(fā)明還提供了含上述丹參的乙酸乙酯提取物的制劑，該制劑由丹參提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。
[0029]所述制劑為片劑、膠囊、顆?；蛲鑴?。
[0030]所述藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，選自填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、潤濕劑、溶劑、表面活性劑或矯味劑中的一種或幾種。
[0031]所述填充劑選自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素或葡萄糖等;
[0032]所述粘合劑選自纖維素衍生物、藻酸鹽、淀粉、糊精、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等；
[0033]所述崩解劑選自微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；
[0034]所述潤滑劑選自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸鈣、碳酸氫鈉、微粉硅膠、滑石粉或硬脂酸鎂；
[0035]所述助懸劑選自微粉硅膠、蜂蠟、纖維素、固態(tài)聚乙二醇；
[0036]所述潤濕劑選自甘油、吐`溫-80、乙氧基氫化蓖麻油或卵磷脂；
[0037]所述溶劑選自乙醇、液態(tài)聚乙二醇、異丙醇、吐溫-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油選自大豆油、蓖麻油、花生油、調(diào)和油等；
[0038]所述表面活性劑選自十二烷基苯磺酸鈉、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、月旨肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐溫)等；
[0039]所述矯味劑選自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、檸檬酸或糖精鈉。
[0040]本發(fā)明還提供了丹參的乙酸乙酯提取物的在制備抑制HlNl流感病毒藥物中的應(yīng)用。
[0041]在抑制HlNl流感病毒時，丹參的乙酸乙酯提取物的用量(即每日服用量限定為0.lmg-3g)
[0042]本發(fā)明還提供了丹參的乙酸乙酯提取物的檢測方法，該檢測方法是用超高效液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用分析系統(tǒng)()對丹參提取物進行分析，以獲得乙酸乙酯提取物的指紋圖譜。
[0043]所述色譜分析條件為:色譜柱:Waters ACQUITY UPLCtmBEHC18Column (50mmX 2.lmm.1 d., 1.7 μ m) ;二元梯度洗脫，A相為水溶液；B相為乙腈，流速為0.25mL/min;質(zhì)譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測；自動3級質(zhì)譜。
[0044]優(yōu)選地，所述色譜條件見下表(即表1):
[0045]表1:色譜條件
【權(quán)利要求】
1.一種丹參的乙酸乙酯提取物，其特征在于，該乙酸乙酯提取物由以下方法制備:丹參，用石油醚浸泡，石油醚滲濾，回收殘渣，揮干殘渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液濃縮至無醇味，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述石油醚浸泡后滲濾的方法包括以下步驟:用丹參重量3-5倍量體積的石油醚浸泡12-48h，石油醚滲漉，得到丹參重量3-8倍量體積的滲濾液，即可。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述殘渣用乙醇提取的方法包括以下步驟:用60%-90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹參重量3-5倍體積的乙醇，每次提取時間為1-3小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述丹參的乙酸乙酯提取物由以下方法制備:丹參，用丹參重量3-5倍量體積的石油醚浸泡18-36h，石油醚滲漉，得到丹參重量5-7倍量體積的滲濾液，回收殘渣，揮干殘渣中的石油醚，然后用70%-90%的乙醇回流提取2-3次，每次用丹參重量3-5倍量體積的乙醇，每次提取時間為1-3小時，合并提取液，然后濃縮至無醇味，再用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，蒸干，即得丹參的乙酸乙酯提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的乙酸乙酯提取物，其特征在于，所述丹參的乙酸乙酯提取物由以下方法制備:丹參，用丹參重量3倍量體積的石油醚浸泡24h，石油醚滲漉，得到丹參重量5倍量體積的滲濾液，回收殘渣，揮干殘渣中的石油醚，然后用丹參重量3倍量體積的80%的乙醇回流提取2次，每次提取時間為2小時，合并提取液，然后濃縮至無醇味，再用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，蒸干，即得丹參的乙酸乙酯提取物。
6.一種制備權(quán)利要求1-5任一項所述的乙酸乙酯提取物的方法,其特征在于,該方法包括以下步驟:丹參，用石油醚浸泡，石油醚滲濾，回收殘渣，揮干殘渣中的石油醚，然后用乙醇回流提取，提取液濃縮至`無醇味，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層提取液，蒸干得乙酸乙酯提取物。
7.含權(quán)利要求1-5任一項所述的乙酸乙酯提取物的制劑，其特征在于，該制劑由丹參提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。。
8.權(quán)利要求1-5任一項所述的乙酸乙酯提取物或權(quán)利要求7所述的制劑在制備抑制HlNl流感病毒藥物中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1-5任一項所述的乙酸乙酯提取物或權(quán)利要求7所述的制劑的檢測方法，其特征在于，用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)儀對丹參提取物進行分析，以獲得乙酸乙酯提取物的指紋圖譜。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟: 所述色譜分析條件為:色譜柱:Waters ACQUITY UPLCtmBEHC18 Column (50mmX 2.lmm.1d.，1.7 μ m) ;二元梯度洗脫，A相為水溶液；B相為乙腈，流速為0.25mL/min; 質(zhì)譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測；自動3級質(zhì)譜； 優(yōu)選地，所述色譜條件:
【文檔編號】G01N30/02GK103860644SQ201210533996
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2012年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月11日
【發(fā)明者】陳士林, 黃林芳, 王冬梅, 劉艾林, 楊大堅, 徐宏喜, 卞兆祥, 陳新滋 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所, 香港浸會大學(xué)