N‐乙酰神經(jīng)氨酸的制備方法及裝置的制造方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種N‐乙酰神經(jīng)氨酸的制備方法及裝置，其解決了現(xiàn)有全細(xì)胞催化法合成N‐乙酰神經(jīng)氨酸時(shí)需嚴(yán)格控制無(wú)菌、操作復(fù)雜、耗能大、及時(shí)監(jiān)控等缺點(diǎn)的技術(shù)問(wèn)題，其采用超濾法收集菌體作為生物催化劑，然后在完全開(kāi)放的環(huán)境中采用膜分離及簡(jiǎn)易攪拌裝置即可得到N-乙酰神經(jīng)氨酸產(chǎn)物，本發(fā)明可用于N‐乙酰神經(jīng)氨酸的制備。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備方法及裝置
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種化學(xué)衍生物的制備方法及裝置，具體說(shuō)是一種N -乙酰神經(jīng)氨酸 的制備方法及裝置。
【背景技術(shù)】
[0002] 唾液酸（Sialic acid，SA)是一類(lèi) N -乙酰神經(jīng)氨酸（N - acetyl - D - neuraminic acid，Neu5Ac)的0 -乙酰基衍生物，廣泛存在于微生物及哺乳動(dòng)物體內(nèi)，Neu5Ac及其衍生 物在生理學(xué)、病理學(xué)及免疫識(shí)別過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。因此，以唾液酸為主體結(jié)構(gòu)的一系 列藥物已經(jīng)被用于癌癥、炎癥、流感的治療。
[0003] 目前，制備N(xiāo) -乙酰神經(jīng)氨酸的方法主要有天然原料提取、化學(xué)合成、酶促合成、生 物轉(zhuǎn)化及微生物發(fā)酵等，但是這些方法都存在一定的局限性。唾液酸在天然原料中含量較 低，分離提純過(guò)程相對(duì)復(fù)雜，導(dǎo)致其回收率低，成本高，產(chǎn)物立體選擇性較差，難以進(jìn)行大規(guī) 模工業(yè)化生產(chǎn)；化學(xué)合成法不僅需要高溫、高壓等嚴(yán)苛的反應(yīng)條件、復(fù)雜的生產(chǎn)工藝，還涉 及到復(fù)雜的基團(tuán)保護(hù)和去保護(hù)問(wèn)題，并且反應(yīng)過(guò)程中生成較多的中間產(chǎn)物及異構(gòu)體，使產(chǎn) 物后處理極其繁瑣，也不能滿(mǎn)足工業(yè)化生產(chǎn)的要求；微生物發(fā)酵法還僅限于小規(guī)模試驗(yàn)，且 產(chǎn)物濃度低、生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、伴有副產(chǎn)物。
[0004] 就目前情況而言，生產(chǎn)N -乙酰神經(jīng)氨酸的發(fā)酵過(guò)程主要是在通氣攪拌式反應(yīng)器 中進(jìn)行的，這就要求發(fā)酵需要控制嚴(yán)格的無(wú)菌條件、合適的發(fā)酵控制參數(shù)、適當(dāng)?shù)难a(bǔ)料工藝 等一系列的生產(chǎn)工藝過(guò)程。近幾年，原位分離技術(shù)（ISPR)在有機(jī)酸發(fā)酵過(guò)程中的應(yīng)用引起 了世界范圍內(nèi)的廣泛關(guān)注。
[0005] 授權(quán)公告號(hào)為CN 1108375C的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利中公開(kāi)了一種重組菌體在膜生物 反應(yīng)器的連續(xù)生產(chǎn)方法，這種方法可在膜生物反應(yīng)器系統(tǒng)中實(shí)行高密度培養(yǎng)大腸桿菌宿 主，連續(xù)生產(chǎn)重組噬菌體，進(jìn)而生產(chǎn)外來(lái)稀有的具有高生物活性的蛋白質(zhì)，但該裝置無(wú)法多 批次連續(xù)生產(chǎn)制備蛋白質(zhì)產(chǎn)品。
[0006] 《食品與發(fā)酵工業(yè)》第28卷第7期中公開(kāi)了一篇文章《聚偏氟乙烯中空纖維微孔 膜在發(fā)酵液精制與菌體濃縮中的應(yīng)用》，其設(shè)計(jì)了內(nèi)壓膜裝置雙向流工藝流程，將發(fā)酵液流 向周期進(jìn)行倒向，即發(fā)酵液流向按通常的下進(jìn)上出方式運(yùn)行一定時(shí)間后，通過(guò)閥門(mén)切換，將 發(fā)酵液流向反轉(zhuǎn)為上進(jìn)下出方式，運(yùn)行一定時(shí)間后再次換向，依此循環(huán)進(jìn)行，中空纖維膜組 件始終同時(shí)處于高效的工作與清洗狀態(tài)，從而保持膜的高分離功效，但該工藝僅適用于發(fā) 酵液過(guò)濾與精制，不能進(jìn)行產(chǎn)物的合成。
[0007] 公開(kāi)號(hào)為CN 101182457A的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)中提供了一種纖維床反應(yīng)器與膜 分離技術(shù)聯(lián)用高密度生產(chǎn)有機(jī)酸的裝置（FBMS)，該裝置主要由固定化纖維床反應(yīng)器、并聯(lián) 膜組件及膜組件清洗三個(gè)單元所構(gòu)成。該專(zhuān)利申請(qǐng)通過(guò)兩個(gè)膜組件實(shí)現(xiàn)了對(duì)產(chǎn)物的原位分 離，但該方法仍需要與固定化纖維床反應(yīng)器聯(lián)用才能實(shí)現(xiàn)有機(jī)酸的發(fā)酵。
[0008] 公開(kāi)號(hào)為CN 101508949A的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)中提供了一種膜生物反應(yīng)器連續(xù) 發(fā)酵黃酒工藝，其裝置實(shí)現(xiàn)了黃酒生產(chǎn)的反應(yīng)、分離一體化，但該裝置僅實(shí)現(xiàn)了同批實(shí)驗(yàn)的 連續(xù)生產(chǎn)，不能連續(xù)多批次生產(chǎn)黃酒。
[0009] 授權(quán)公告號(hào)為CN 1172003C的中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利中提供了一種在好氧條件下培養(yǎng)基 因工程菌制造 Neu5Ac的方法，該方法實(shí)質(zhì)上還是對(duì)基因工程菌進(jìn)行發(fā)酵制備N(xiāo)eu5Ac，因 此仍然需要嚴(yán)格的無(wú)菌條件及復(fù)雜的發(fā)酵工藝；授權(quán)公告號(hào)為CN 101603023B的發(fā)明專(zhuān)利 提供了一種發(fā)酵溫控共表達(dá)外源基因重組大腸桿菌制備N(xiāo)eu5Ac的方法，雖然該方法采用 溫度誘導(dǎo)法替代了添加有毒性的IPTG誘導(dǎo)物，但該方法還是仍需要嚴(yán)格控制發(fā)酵過(guò)程的 無(wú)菌條件、溫度、誘導(dǎo)時(shí)間等條件；授權(quán)公告號(hào)為CN 1239695C的發(fā)明專(zhuān)利中提供了一種利 用施式假單胞藻SDM完整細(xì)胞與表達(dá)有N -乙酰神經(jīng)氨酸醛縮酶的重組大腸桿菌E. coli BL21 (DE3)/pET15b -nanA為催化劑，以乳酸鈉和化學(xué)異構(gòu)得到的N -乙酰甘露糖胺為底物， 合成Neu5Ac的生產(chǎn)工藝，但是該方法需要用堿法異構(gòu)化及兩種細(xì)胞的參與，操作工藝十分 復(fù)雜。
[0010] 綜上所述，采用全細(xì)胞催化法制備N(xiāo) -乙酰神經(jīng)氨酸是工業(yè)化合成N -乙酰神經(jīng)氨 酸的發(fā)展方向，但是目前全細(xì)胞催化法合成N -乙酰神經(jīng)氨酸的工藝及設(shè)備還是采用傳統(tǒng) 的發(fā)酵法及傳統(tǒng)的通氣攪拌反應(yīng)器。發(fā)酵法還存在一定的缺陷：（1)在整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中要 求嚴(yán)格的無(wú)菌條件，維持純種培養(yǎng)，避免雜菌的入侵；（2)生產(chǎn)過(guò)程受罐溫、攪拌轉(zhuǎn)速、攪拌 功率、空氣流量、罐壓、液位、補(bǔ)料、加糖、 PH、溶氧、培養(yǎng)基等條件及參數(shù)的影響；（3)發(fā)酵過(guò) 程參數(shù)監(jiān)測(cè)要及時(shí)，并規(guī)范化控制生物過(guò)程，要求嚴(yán)格，操作復(fù)雜。目前，廣泛應(yīng)用的膜生物 反應(yīng)器尚不能適用于全細(xì)胞催化技術(shù)中，其不足之處在于：（1)需要與其他生物反應(yīng)器相 耦聯(lián)，才能實(shí)現(xiàn)產(chǎn)物的制備或分離、精制；（2)發(fā)酵菌體僅能實(shí)現(xiàn)一次產(chǎn)物合成，不能連續(xù) 生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的就了為了解決現(xiàn)有全細(xì)胞催化法合成N-乙酰神經(jīng)氨酸時(shí)需嚴(yán)格控制 無(wú)菌、操作復(fù)雜、耗能大、及時(shí)監(jiān)控等缺點(diǎn)的技術(shù)問(wèn)題，提供一種無(wú)需嚴(yán)格控制無(wú)菌、操作簡(jiǎn) 單、耗能小、無(wú)需及時(shí)監(jiān)控的N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備方法及裝置。
[0012] 本發(fā)明提供一種N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備裝置，其設(shè)有轉(zhuǎn)化液配料罐、反應(yīng)罐、膜 分離裝置和產(chǎn)物收集罐，轉(zhuǎn)化液配料罐和反應(yīng)罐中分別設(shè)有第一攪拌器和第二攪拌器；膜 分離裝置設(shè)有進(jìn)液口、第一出口和第二出口；進(jìn)液口連接有耐壓管，耐壓管分為兩個(gè)支路分 別伸入進(jìn)轉(zhuǎn)化液配料罐和反應(yīng)罐中；第一出口和第二出口也分別通過(guò)耐壓管與反應(yīng)罐和產(chǎn) 物收集罐相通；在靠近進(jìn)液口上游的耐壓管通路上設(shè)有電動(dòng)栗；在電動(dòng)栗的上游、轉(zhuǎn)化液 配料罐和反應(yīng)罐分別通向膜分離裝置的耐壓管支路上分別設(shè)有第一截止閥和第二截止閥； 在第一出口下游的耐壓管上設(shè)有節(jié)流閥；反應(yīng)罐的外部設(shè)有夾套。
[0013] 優(yōu)選地，膜分離裝置還設(shè)有第三出口，第三出口為排泄口。
[0014] 優(yōu)選地，膜分離裝置采用中空纖維膜，其孔徑大小為0. 05~0. 1mm，截留分子量范 圍為 6000Da ~60000Da。
[0015] 本發(fā)明還提供一種使用上述N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備裝置制備N(xiāo) -乙酰神經(jīng)氨酸 方法，其包含以下步驟：
[0016] (1)配置轉(zhuǎn)化液
[0017] 在完全開(kāi)放的環(huán)境中，將轉(zhuǎn)化底物稱(chēng)量后放入轉(zhuǎn)化液配料罐中，添加水至指定量， 開(kāi)啟第一攪拌器，使轉(zhuǎn)化液混合均勻后停止；
[0018] ⑵收集菌體
[0019] 將菌液放入反應(yīng)罐中，啟動(dòng)電動(dòng)栗，并打開(kāi)第二截止閥及節(jié)流閥，采用超濾法經(jīng)膜 分離裝置濃縮菌體并使其回流至反應(yīng)罐中，剩余小分子溶液進(jìn)入產(chǎn)物收集罐中并棄掉；然 后關(guān)閉第二截止閥和節(jié)流閥并打開(kāi)第一截止閥，利用轉(zhuǎn)化液沖洗中空纖維膜將菌體完全收 集到反應(yīng)罐中；
[0020] (3)轉(zhuǎn)化反應(yīng)
[0021] 停止電動(dòng)栗并關(guān)閉截止閥，控制夾套的溫度并打開(kāi)第二攪拌器，開(kāi)始進(jìn)行轉(zhuǎn)化反 應(yīng)；反應(yīng)一段時(shí)間后，啟動(dòng)電動(dòng)栗并打開(kāi)第二截止閥及節(jié)流閥，收集產(chǎn)物溶液至產(chǎn)物收集罐 中，菌體濃縮后回到反應(yīng)罐中；
[0022] (4)循環(huán)轉(zhuǎn)化
[0023] 關(guān)閉第二截止閥和節(jié)流閥的同時(shí)打開(kāi)第一截止閥，繼續(xù)進(jìn)行下一個(gè)循環(huán)的轉(zhuǎn)化反 應(yīng)。
[0024] 優(yōu)選地，步驟（3)中控制夾套的溫度為33~37°C，轉(zhuǎn)化反應(yīng)時(shí)間為8~12h。
[0025] 與傳統(tǒng)的發(fā)酵法及改進(jìn)的全細(xì)胞催化法相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0026] (1)整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中不要求無(wú)菌操作，轉(zhuǎn)化底物不要求進(jìn)行高溫滅菌，避免了對(duì)轉(zhuǎn) 化培養(yǎng)基成分的破壞；
[0027] (2)整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程中只需要通過(guò)夾套控制罐溫，無(wú)需控制轉(zhuǎn)化過(guò)程中的攪拌轉(zhuǎn)速、 攪拌功率、空氣流量、罐壓、液位等參數(shù)，能耗較低；
[0028] (3)通過(guò)調(diào)節(jié)節(jié)流閥及截止閥即可實(shí)現(xiàn)整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程的連續(xù)性，操作過(guò)程簡(jiǎn)單易 行；
[0029] (4)可實(shí)現(xiàn)菌體的循環(huán)利用，可進(jìn)行連續(xù)、多次（7~8次）的生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)，成本 低，效率高；
[0030] (5)通過(guò)調(diào)節(jié)節(jié)流閥即可達(dá)到菌液分離的目的，而無(wú)需其他繁瑣步驟，菌體的分離 與收集極其簡(jiǎn)便。
【附圖說(shuō)明】
[0031] 圖1是本發(fā)明N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0032] 圖中符號(hào)說(shuō)明
[0033] 1.轉(zhuǎn)化液配料罐；2.反應(yīng)罐；3.夾套；4.產(chǎn)物收集罐；5.第一攪拌器；6.第二攪 拌器；7.第一截止閥；8.第二截止閥；9.電動(dòng)栗；10.節(jié)流閥；11.膜分離裝置；12.進(jìn)液口； 13.第一出口；14.第二出口；15.第三出口。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 如圖1所示，本發(fā)明N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備裝置設(shè)有轉(zhuǎn)化液配料罐1、反應(yīng)罐2、 膜分離裝置11和產(chǎn)物收集罐4,轉(zhuǎn)化液配料罐1和反應(yīng)罐2中分別設(shè)有第一攪拌器5和第 二攪拌器6。
[0035] 膜分離裝置11設(shè)有進(jìn)液口 12、第一出口 13、第二出口 14和第三出口 15。進(jìn)液口 12連接有耐壓管，耐壓管的另一端分為兩個(gè)支路分別伸入進(jìn)轉(zhuǎn)化液配料罐1和反應(yīng)罐2中； 第一出口 13也連接有耐壓管，耐壓管的另一端伸入進(jìn)反應(yīng)罐2中；第二出口 14同樣也連接 有耐壓管，耐壓管的另一端進(jìn)入進(jìn)產(chǎn)物收集罐4中；第三出口 15為排泄口。
[0036] 在靠近進(jìn)液口 12上游的耐壓管通路上設(shè)有電動(dòng)栗9 ;在電動(dòng)栗9的上游、轉(zhuǎn)化液 配料罐1中的轉(zhuǎn)化液和反應(yīng)罐2中的反應(yīng)液分別進(jìn)入膜分離裝置11的耐壓管支路上分別 設(shè)有第一截止閥7和第二截止閥8 ;在第一出口 13下游的耐壓管道上設(shè)有節(jié)流閥10 ;反應(yīng) 罐2的外部設(shè)有夾套3。
[0037] 下面對(duì)本發(fā)明利用上述裝置制備N(xiāo) -乙酰神經(jīng)氨酸的方法進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0038] 實(shí)施例1
[0039] (1)配置轉(zhuǎn)化液
[0040] 在完全開(kāi)放的環(huán)境中，將各種轉(zhuǎn)化底物稱(chēng)量后放入轉(zhuǎn)化液配料罐1中，添加水至 指定量，開(kāi)啟第一攪拌器5,使轉(zhuǎn)化液混合均勻后停止。
[0041] (2)收集菌體
[0042] 將自誘導(dǎo)菌液放入反應(yīng)罐2中，啟動(dòng)電動(dòng)栗9,并打開(kāi)第二截止閥8 (此時(shí)第一截止 閥7為關(guān)閉狀態(tài)）及節(jié)流閥10,采用超濾法經(jīng)膜分離裝置11濃縮菌體并使其回流至反應(yīng)罐 2中，剩余小分子溶液進(jìn)入產(chǎn)物收集罐4中并棄掉；然后關(guān)閉第二截止閥8和節(jié)流閥10并 打開(kāi)第一截止閥7,利用轉(zhuǎn)化液沖洗中空纖維膜將菌體完全收集到反應(yīng)罐中。
[0043] (3)轉(zhuǎn)化反應(yīng)
[0044] 停止電動(dòng)栗9并關(guān)閉截止閥7,控制夾套3的溫度為37°C并打開(kāi)第二攪拌器6,開(kāi) 始進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)；反應(yīng)8h后，啟動(dòng)電動(dòng)栗9并打開(kāi)第二截止閥8及節(jié)流閥10,收集產(chǎn)物溶 液至產(chǎn)物收集罐4中，菌體濃縮后回到反應(yīng)罐2中。
[0045] (5)循環(huán)轉(zhuǎn)化
[0046] 關(guān)閉第二截止閥8和節(jié)流閥10的同時(shí)打開(kāi)第一截止閥7,繼續(xù)進(jìn)行下一個(gè)循環(huán)的 轉(zhuǎn)化反應(yīng)。
[0047] 經(jīng)7次連續(xù)轉(zhuǎn)化，唾液酸的產(chǎn)量如下：
[0049] 實(shí)施例2
[0050] 步驟（3)中控制夾套3的溫度為33°C，轉(zhuǎn)化反應(yīng)時(shí)間為10h，其余步驟與條件均與 實(shí)施例1相同。
[0051 ] 經(jīng)9次連續(xù)轉(zhuǎn)化，唾液酸的產(chǎn)量如下：
[0052]
[0053] 實(shí)施例3
[0054] 步驟（3)中控制夾套3的溫度為35°C，轉(zhuǎn)化反應(yīng)時(shí)間為12h，其余步驟與條件均與 實(shí)施例1相同。
[0055] 經(jīng)9次連續(xù)轉(zhuǎn)化，唾液酸的產(chǎn)量如下：
[0057] 上述三個(gè)實(shí)施例中膜分離裝置11所采用的中空纖維膜的孔徑大小為0.05~ 0. 1mm，截留分子量范圍為6000Da~60000Da ;電動(dòng)栗9可使用齒輪栗、離心栗、軸流栗、螺 桿栗等多種輸水栗來(lái)抽吸、輸送轉(zhuǎn)化液。
[0058] 根據(jù)上述說(shuō)明書(shū)的揭示和教導(dǎo)，上述實(shí)例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式。因此，本發(fā) 明并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、組合、修 飾，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備裝置，其特征是設(shè)有轉(zhuǎn)化液配料罐、反應(yīng)罐、膜分離裝 置和產(chǎn)物收集罐，所述轉(zhuǎn)化液配料罐和所述反應(yīng)罐中分別設(shè)有第一攪拌器和第二攪拌器； 所述膜分離裝置設(shè)有進(jìn)液口、第一出口和第二出口；所述進(jìn)液口連接有耐壓管，所述耐 壓管分為兩個(gè)支路分別伸入進(jìn)所述轉(zhuǎn)化液配料罐和所述反應(yīng)罐中；所述第一出口和第二出 口也分別通過(guò)耐壓管與所述反應(yīng)罐和所述產(chǎn)物收集罐相通； 在靠近所述進(jìn)液口上游的耐壓管通路上設(shè)有電動(dòng)栗；在所述電動(dòng)栗的上游、所述轉(zhuǎn)化 液配料罐和所述反應(yīng)罐分別通向所述膜分離裝置的耐壓管支路上分別設(shè)有第一截止閥和 第二截止閥；在所述第一出口下游的耐壓管上設(shè)有節(jié)流閥；所述反應(yīng)罐的外部設(shè)有夾套。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備裝置，其特征在于所述膜分離裝置 還設(shè)有第三出口，所述第三出口為排泄口。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備裝置，其特征在于所述膜分離裝置 采用中空纖維膜，其孔徑大小為0. 05~0. 1mm，截留分子量范圍為6000Da~60000Da。4. 一種用如權(quán)利要求1所述的N -乙酰神經(jīng)氨酸的制備裝置制備N(xiāo) -乙酰神經(jīng)氨酸方 法，其特征在于包含以下步驟： (1) 配置轉(zhuǎn)化液 在完全開(kāi)放的環(huán)境中，將轉(zhuǎn)化底物稱(chēng)量后放入轉(zhuǎn)化液配料罐中，添加水至指定量，開(kāi)啟 第一攪拌器，使轉(zhuǎn)化液混合均勻后停止； (2) 收集菌體 將菌液放入反應(yīng)罐中，啟動(dòng)電動(dòng)栗，并打開(kāi)第二截止閥及節(jié)流閥，采用超濾法經(jīng)膜分離 裝置濃縮菌體并使其回流至反應(yīng)罐中，剩余小分子溶液進(jìn)入產(chǎn)物收集罐中并棄掉；然后關(guān) 閉第二截止閥和節(jié)流閥并打開(kāi)第一截止閥，利用轉(zhuǎn)化液沖洗中空纖維膜將菌體完全收集到 反應(yīng)罐中； (3) 轉(zhuǎn)化反應(yīng) 停止電動(dòng)栗并關(guān)閉截止閥，控制夾套的溫度并打開(kāi)第二攪拌器，開(kāi)始進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)；反 應(yīng)一段時(shí)間后，啟動(dòng)電動(dòng)栗并打開(kāi)第二截止閥及節(jié)流閥，收集產(chǎn)物溶液至產(chǎn)物收集罐中，菌 體濃縮后回到反應(yīng)罐中； (4) 循環(huán)轉(zhuǎn)化 關(guān)閉第二截止閥和節(jié)流閥的同時(shí)打開(kāi)第一截止閥，繼續(xù)進(jìn)行下一個(gè)循環(huán)的轉(zhuǎn)化反應(yīng)。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備N(xiāo)-乙酰神經(jīng)氨酸方法，其特征在于所述步驟（3)中控 制夾套的溫度為33~37°C，轉(zhuǎn)化反應(yīng)時(shí)間為8~12h。
【文檔編號(hào)】C12M1/02GK105861288SQ201510035463
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2015年1月23日
【發(fā)明人】晏禮明, 陶勇, 張叢叢, 陳笑, 溫雅, 陳彩霞
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院微生物研究所