一種聯(lián)合檢測唾液酸和羥脯氨酸的試劑及其檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種聯(lián)合檢測唾液酸和羥脯氨酸的試劑及其檢測方法，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)
技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 唾液酸，又稱N-乙酰神經(jīng)氨酸，是一種天然神經(jīng)氨酸衍生物，其母體結(jié)構(gòu)是由九 個(gè)碳原子組成的內(nèi)環(huán)氨基酸，是一族化合物的總稱。唾液酸廣泛分布于動(dòng)物體內(nèi)，人體血清 中唾液酸，包括游離唾液酸和結(jié)合唾液酸，其中前者含量較低，與脂蛋白和糖蛋白結(jié)合的結(jié) 合唾液酸為血清中唾液酸的主要存在形式。羥脯氨酸，是一種亞氨基酸，為脯氨酸羥化后的 產(chǎn)物，通常在第4位上帶有羥基，但有時(shí)也在第3位上。由于有兩個(gè)不對稱的碳原子，所以 有4種立體異構(gòu)體。在自然界中天然存在的為L-羥脯氨酸，不存在D-羥脯酸。L-羥脯氨 酸是膠原蛋白所特有的氨基酸，其它蛋白含量甚微，人體血清中的羥脯氨酸主要為膠原蛋 白降解時(shí)釋放出的游離羥脯氨酸。
[0003] 正常代謝時(shí)，人體血清中唾液酸、羥脯氨酸含量穩(wěn)定。當(dāng)組織細(xì)胞發(fā)生惡變時(shí)，細(xì) 胞表面糖蛋白在結(jié)構(gòu)和功能上均發(fā)生明顯改變，結(jié)合在糖蛋白上的唾液酸隨異常表達(dá)的糖 蛋白脫落入血，是血液中唾液酸含量升高的原因之一。而血清羥脯氨酸升高是因?yàn)樵谀[瘤 發(fā)生、發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞發(fā)生浸潤、轉(zhuǎn)移，破壞膠原組織、彈性蛋白甚至于骨組織，導(dǎo)致 羥脯氨酸釋放增加所致。目前多項(xiàng)研宄發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者血清中唾液酸、羥脯氨酸含量增加， 因此在臨床檢驗(yàn)中常把唾液酸、羥脯氨酸作為檢測指標(biāo)，用于惡性腫瘤的診斷當(dāng)中。
[0004] 目前唾液酸的檢測方法主要有酶法、化學(xué)比色法和高效液相色譜法。但酶法測定 敏感性較低，而化學(xué)比色法特異性差，高效液相色譜方法雖具有靈敏度高、特異性好的優(yōu) 點(diǎn)，但是儀器昂貴且不適合臨床批量檢測。羥脯氨酸的檢測方法主要有化學(xué)比色法、高效液 相色譜法、氨基酸自動(dòng)分析儀法。氯胺T比色法是羥脯氨酸傳統(tǒng)的測定方法，但該方法特異 性差、靈敏度低，目前已應(yīng)用不多。高效液相色譜法、氨基酸自動(dòng)分析儀法檢測羥脯氨酸則 同桿存在儀器昂貴，檢測不方便等問題，限制了臨床批量應(yīng)用。
[0005] 由此可見，雖然目前唾液酸、羥脯氨酸各自的檢測方法較多，但均存在各種問題， 無法常規(guī)應(yīng)用于臨床，更是缺乏兩者聯(lián)合檢測的方法，因而探尋一種快速、準(zhǔn)確、成本低廉、 方便適用的唾液酸、羥脯氨酸聯(lián)合檢測的方法，對于提高腫瘤診斷的敏感性、特異性具有重 要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所要解決的問題是提供一種快速、準(zhǔn)確、成本低廉、方 便適用的聯(lián)合檢測唾液酸和羥脯氨酸的試劑，及其檢測方法。
[0007] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0008] 一種聯(lián)合檢測唾液酸和羥脯氨酸的試劑，由顯色劑和參比品液組成，其中，顯色劑 是由鄰苯二甲酸二乙酯、乙酸乙酯、2,4-二硝基苯肼、過氧化氫、鹽酸、苯甲酸和水組成的， 其中，各組分的濃度如下：
[0009]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種聯(lián)合檢測唾液酸和羥脯氨酸的試劑，其特征在于：由顯色劑和參比品液組成， 其中，顯色劑是由鄰苯二甲酸二乙酯、乙酸乙酯、2,4-二硝基苯肼、過氧化氫、鹽酸、苯甲酸 和水組成的，各組分的濃度如下： 鄰苯二甲酸二乙酯 0.35mol/L 乙酸乙酯 0. 46 mol/L 2, 4-二硝基苯肼 0. 07 mol/L 過氧化氫 0. 006 mol/L 鹽酸（氯化氫） 0.62 mol/L 苯甲酸 0.2% (質(zhì)量百分?jǐn)?shù)） 參比品液是由唾液酸、羥脯氨酸、對羥基苯甲酸甲酯和水組成的，各組分的濃度如下： 唾液酸 〇. 3g/L 羥脯氨酸 0. 25g/L 對羥基苯甲酸甲酯0.2% (質(zhì)量百分?jǐn)?shù)）。
2. 利用權(quán)利要求1所述的聯(lián)合檢測唾液酸和羥脯氨酸的試劑檢測唾液酸、羥脯氨酸的 方法，其特征在于：取樣品，加入顯色劑，充分混勻，置沸水?。軌虮３殖掷m(xù)沸騰）中準(zhǔn)確 反應(yīng)15分鐘，迅速取出置于室溫水（< 25°C )中冷卻5分鐘，終止反應(yīng)；以3000轉(zhuǎn)/分離 心10分鐘，取上清液，測量在波長450nm、光徑0. 5cm處的吸光度值，以蒸餾水調(diào)零；同時(shí)， 對參比品液進(jìn)行同樣的操作，參比品液理論值為lOOU/ml ;根據(jù)以下公式計(jì)算檢測值：
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種聯(lián)合檢測唾液酸和羥脯氨酸的試劑，由顯色劑和參比品液組成，其中，顯色劑是由鄰苯二甲酸二乙酯、乙酸乙酯、2，4-二硝基苯肼、過氧化氫、鹽酸、苯甲酸和水組成的，各組分的濃度如下：鄰苯二甲酸二乙酯0.35mol/L；乙酸乙酯0.46mol/L；2，4-二硝基苯肼0.07mol/L；過氧化氫0.006mol/L；鹽酸0.62mol/L；苯甲酸0.2％；參比品液是由唾液酸、L-羥脯氨酸、對羥基苯甲酸甲酯和水組成的。本發(fā)明通過一次反應(yīng)使多種腫瘤標(biāo)志物(唾液酸、羥脯氨酸)反應(yīng)顯色，由于顯色迭加，因而提高了檢測的靈敏度，順應(yīng)了腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測的潮流，并且操作簡便，無須貴重儀器。
【IPC分類】G01N21-78
【公開號】CN104730070
【申請?zhí)枴緾N201510120981
【發(fā)明人】邢海霞, 曲曉燕
【申請人】邢海霞
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年3月19日