專利名稱：唾液預(yù)處理試劑盒及唾液預(yù)處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過利用抗原抗體反應(yīng)的免疫層析法，用于鑒定和定量測(cè)定作為人唾液中存在的致齲細(xì)菌之一的變異鏈球菌(Streptococcimutans)的唾液預(yù)處理試劑盒，以及使用該唾液預(yù)處理試劑盒的唾液預(yù)處理方法。
背景技術(shù)：
已知人口腔內(nèi)的變異鏈球菌的存在與齲齒的產(chǎn)生間有密切的關(guān)系，因此，如果可以簡(jiǎn)便地檢查人口腔內(nèi)變異鏈球菌的有無以及量，則可以了解患病風(fēng)險(xiǎn)和目前的患病狀況，為相當(dāng)多的人帶來益處。
以住是實(shí)施在檢查中利用抗原抗體反應(yīng)的檢查技術(shù)。例如，免疫酶技術(shù)，這是使用酶以發(fā)色濃度進(jìn)行鑒定和定量測(cè)定的方法，為處理抗體和試樣需要特殊的洗滌器和復(fù)雜精確的操作，并且為進(jìn)行酶反應(yīng)還需要溫育器。另外，熒光抗體技術(shù)作為一種對(duì)與用熒光染料標(biāo)記的抗體反應(yīng)的抗原特異染色的方法不常使用，原因是需要熒光顯微鏡作為測(cè)定器。
因此，提出了多種簡(jiǎn)便地利用抗原抗體反應(yīng)的技術(shù)。例如，利用層析法的測(cè)定技術(shù)(例如參照美國(guó)專利5,591,645號(hào)、4,855,240號(hào)、4,435,504號(hào)和4,980,298號(hào)，和日本專利申請(qǐng)JP-A-61-145459和JP-A-6-160388號(hào)公報(bào))。該技術(shù)簡(jiǎn)便性優(yōu)異，因?yàn)榭乖挠袩o及量?jī)H通過在含有要鑒定和定量測(cè)定的抗原的試驗(yàn)溶液中混入這樣采集的體液，然后滲入檢查器具中即可測(cè)定。該技術(shù)一般稱為免疫層析技術(shù)，鑒定和定量測(cè)定的原理已有詳細(xì)揭示(例如參照，Se-Hwan Peak，Seung-Hwa Lee，Joung-Hawan Cho和Young-Sang Kim，“Development ofrapid One-Step immunochromatographic assay，Methods”，22卷，53-60頁(2000))。
看起來人口腔內(nèi)的變異鏈球菌的鑒定和定量測(cè)定可以通過應(yīng)用該技術(shù)實(shí)施，但由于存在下列問題該技術(shù)還沒有投入實(shí)際應(yīng)用。即，免疫層析技術(shù)使用的試樣需要通過毛細(xì)管現(xiàn)象通過多孔膜。但是，由于變異鏈球菌這樣的口腔細(xì)菌檢查應(yīng)用的主要試樣是唾液，因此唾液中存在的稱為粘蛋白的高粘性物質(zhì)會(huì)阻塞多孔膜的孔。另外，由于粘蛋白具有將從口腔粘膜剝落的上皮附著細(xì)胞聚集的功能，所以多孔膜的孔被這些物質(zhì)阻塞，從而阻礙了變異鏈球菌的通過。
除粘蛋白外，存在的另外一個(gè)問題是免疫層析技術(shù)把變異鏈球菌的鑒定和定量測(cè)定變得復(fù)雜。即，要測(cè)定的變異鏈球菌是自體直徑約1μm的細(xì)菌，但由于鏈球菌的性質(zhì)，經(jīng)常形成由10-20個(gè)或更多個(gè)細(xì)菌構(gòu)成的鏈，這可能是妨礙在多孔膜中移動(dòng)的因素之一。另外，變異鏈球菌從食物中的蔗糖形成具有粘著性的葡聚糖，并且經(jīng)常嚴(yán)重聚集。變異鏈球菌的鏈形成和聚集造成多孔膜中的阻塞，另外減少了鏈球菌的表面積，對(duì)變異鏈球菌表面存在的抗原數(shù)的定量測(cè)定產(chǎn)生影響，這降低了測(cè)定的準(zhǔn)確性。
在免疫層析技術(shù)中，一般通過使用兩個(gè)抗體進(jìn)行分析對(duì)象的檢測(cè)。第一抗體保持在由試樣滴下那一側(cè)的玻璃纖維等形成的多孔膜中，并且抗體一般用乳膠顆粒、金膠體顆粒等進(jìn)行標(biāo)記(以下有時(shí)稱為標(biāo)記抗體)。試樣中存在要測(cè)定的對(duì)象時(shí)，當(dāng)試樣通過多孔膜時(shí)標(biāo)記抗體識(shí)別要測(cè)定的分析對(duì)象并與其結(jié)合。分析對(duì)象與標(biāo)記抗體的復(fù)合體通過毛細(xì)管現(xiàn)象向以例如帶狀固定有第二抗體(以下有時(shí)稱為捕捉抗體)的另一多孔膜流動(dòng)，并且識(shí)別、捕捉分析對(duì)象與標(biāo)記抗體的復(fù)合體，并作為可見信號(hào)(此時(shí)呈帶狀)被檢測(cè)出來。但是，免疫層析技術(shù)應(yīng)用于作為試樣的唾液時(shí)，標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體被捕捉在保持標(biāo)記抗體的膜中，但不能通過毛細(xì)管現(xiàn)象向固定有捕捉抗體的多孔膜有效流動(dòng)，引起測(cè)定的準(zhǔn)確性下降的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是通過利用抗原抗體反應(yīng)的免疫層析法解決與鑒定和定量測(cè)定作為人唾液中的致齲細(xì)菌之一的變異鏈球菌的常規(guī)技術(shù)相關(guān)的問題，以及提供唾液預(yù)處理試劑盒及唾液預(yù)處理方法，其中可以以簡(jiǎn)便的操作消除由粘蛋白及變異鏈球菌的鏈形成引起的聚集，并且標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體可以有效地從保持標(biāo)記抗體的膜中流出。
本發(fā)明人為解決上述課題進(jìn)行了認(rèn)真的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過用特定的酸和堿溶液進(jìn)行處理可以得到下面的效果，從而完成了本發(fā)明。
(1)唾液中的粘蛋白和葡聚糖溶解，作用于變異鏈球菌的外膜，從而抑制聚集。
(2)而且，通過使用特定的表面活性劑，變異鏈球菌中的蛋白質(zhì)被增溶，從而變異鏈球菌可有效地流過多孔膜。
(3)此外，通過使用特定的金屬鹽，即氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂或硫酸錳，標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體可以有效地從保持標(biāo)記抗體的膜中流出。
一方面，本發(fā)明涉及唾液預(yù)處理試劑盒，含有(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L，和(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑，成分(C)與成分(A)和(B)的至少一個(gè)混合，或與成分(A)和(B)分別提供，并且選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量包含在成分(A)、(B)和(C)的至少一個(gè)中。該方面中優(yōu)選(D)三(羥甲基)氨基甲烷與成分(A)、(B)和(C)的至少一個(gè)混合。
另一方面，本發(fā)明還涉及唾液預(yù)處理試劑盒，含有(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L，(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑，和(D)含有三(羥甲基)氨基甲烷的水溶液，成分(C)與成分(A)、(B)和(D)的至少一個(gè)混合，或與成分(A)、(B)和(D)分別提供，并且選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量包含在成分(A)、(B)、(C)和(D)的至少一個(gè)中。
具體實(shí)施例方式
在本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒中，優(yōu)選作為成分(C)的非離子表面活性劑是選自聚乙二醇單辛基苯基醚、正辛基-β-D-葡糖苷、正庚基-β-D-硫葡糖苷、正辛基-β-D-硫葡糖苷、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇(nonylphenoxypolyethoxyethanol)和聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯的一種、或兩種以上的混合物，以及作為成分(C)的兩性表面活性劑為選自CHAPS(3-((3-膽酰胺丙基)-二甲基銨基)-1-丙烷磺酸鹽)和CHAPSO(3-((3-膽酰胺丙基)-二甲基銨基)-1-羥基丙烷磺酸鹽)的一種、或兩種以上的混合物。
一方面，通過利用本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒的免疫層析法鑒定和定量測(cè)定變異鏈球菌的唾液預(yù)處理方法包括下面的步驟將選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量與選自下述(A)、(B)和(C)的至少一個(gè)混合(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L，和(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑；和通過以任意順序滴下成分(A)、(B)和(C)將它們混合(以下稱為第一方法)。
另一方面，通過免疫層析法鑒定和定量測(cè)定變異鏈球菌的唾液預(yù)處理方法也包括下面的步驟將選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量與選自下述(A)和(B)的至少一個(gè)混合(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L和(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L；將(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑混入(A)和(B)的至少一個(gè)中；和通過以任意順序滴下成分(A)和(B)將它們混合(以下稱為第二方法)。
另一方面，通過免疫層析法鑒定和定量測(cè)定變異鏈球菌的唾液預(yù)處理方法包括下面的步驟將選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量與選自下述(A)、(B)、(C)和(D)的至少一個(gè)混合(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L，(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑，和(D)三(羥甲基)氨基甲烷；和通過以成分(A)與成分(B)在成分(D)的存在下接觸的順序滴下成分(A)、(B)、(C)和(D)，將它們混合(以下稱為第三方法)。
在第一方法中，優(yōu)選將(D)三(羥甲基)氨基甲烷混入成分(A)、(B)和(C)的至少一個(gè)中，并且通過以成分(A)與成分(B)在成分(D)的存在下接觸的順序滴下成分(A)、(B)、和(C)，將它們混合。在第二方法中，優(yōu)選將(D)三(羥甲基)氨基甲烷混入成分(A)和(B)的至少一個(gè)中，并通過以任意順序滴下成分(A)和(B)將它們混合。在第三方法中，優(yōu)選通過以成分(A)與成分(B)在成分(D)的存在下接觸的順序滴下成分(A)、(B)和(D)(其中至少一個(gè)與成分(C)混合)，將它們混合。
作為成分(A)用于本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法中的濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液具有對(duì)唾液中的粘蛋白和存在于變異鏈球菌的外膜上的葡聚糖起作用，抑制變異鏈球菌聚集的功能，從而使作為抗原的變異鏈球菌在多孔膜中的移動(dòng)變得容易。作為堿溶液的氫氧化鈉的使用是必要的，但碳酸鈉、磷酸氫二鈉等不適合，使用氫氧化鈉以外的堿溶液不能進(jìn)行變異鏈球菌的檢查。推測(cè)這是由于氫氧化鈉以外的堿溶液可能損害變異鏈球菌的抗原的結(jié)構(gòu)。水溶液中氫氧化鈉的濃度為0.01-10mol/L是必要的，低于0.01mol/L的濃度不能得到充分的效果，而超過10mol/L時(shí)破壞變異鏈球菌的抗原，從而降低檢測(cè)精度。
作為成分(B)用于本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法中的濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液具有抑制變異鏈球菌的鏈形成的功能，從而使作為抗原的變異鏈球菌在多孔膜中的移動(dòng)變得容易。酒石酸和/或檸檬酸作為酸使用是必要的，但其它酸，如鹽酸、硫酸、硝酸、醋酸、乳酸和馬來酸是不適合的，并且即使其它酸與氫氧化鈉組合使用，也不能得到目標(biāo)檢查精度。推測(cè)這是由于酒石酸和檸檬酸以外的酸可能損害變異鏈球菌的抗原的結(jié)構(gòu)。水溶液中酒石酸和/或檸檬酸的濃度為0.01-3mol/L是必要的，低于0.01mol/L的濃度不能得到充分的效果，而超過3mol/L也不適合，原因是酒石酸和/或檸檬酸的溶解度到達(dá)了產(chǎn)生沉淀的極限。
作為成分(C)用于本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法中非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑具有將變異鏈球菌表面的蛋白質(zhì)增溶的功能，從而使變異鏈球菌有效通過多孔膜變得容易。離子表面活性劑經(jīng)常用在免疫層析法中，用來促進(jìn)試樣溶液或抗原溶液在檢查器內(nèi)平滑移動(dòng)。但是，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明在本發(fā)明的用于鑒定和定量測(cè)定變異鏈球菌的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法中使用的表面活性劑必須為非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑，但是通過十二烷基硫酸鈉和十二烷基苯磺酸鈉等陰離子表面活性劑不能進(jìn)行通過抗體檢測(cè)抗原。
本發(fā)明中使用的這樣的表面性活劑可以是任何非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑而沒有特別的限制，并且一般用作膜蛋白增溶劑的那些都可以使用。變異鏈球菌的檢測(cè)靈敏度隨使用的非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑的種類而變化，從檢測(cè)靈敏度的角度考慮，優(yōu)選使用選自聚乙二醇單辛基苯基醚、正辛基-β-D-葡糖苷、正庚基-β-D-硫葡糖苷和正辛基-β-D-硫葡糖苷的一種、或兩種以上的混合物作為非離子表面活性劑，選自CHAPS(3-((3-膽酰胺丙基)-二甲基銨基)-1-丙烷磺酸鹽)和CHAPSO(3-((3-膽酰胺丙基)-二甲基銨基)-1-羥基丙烷磺酸鹽)的一種、或兩種以上的混合物作為兩性表面活性劑。
在本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法中，非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑(C)以唾液處理后濃度為0.05-90重量％這樣的方式使用是優(yōu)選的。濃度低于0.05重量％時(shí)，由于存在抗原抗體反應(yīng)的檢測(cè)靈敏度降低的傾向因而不優(yōu)選，當(dāng)超過90重量％時(shí)，由于抗原抗體反應(yīng)的檢測(cè)靈敏度容易降低也不優(yōu)選。
在本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法中，非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑(C)可以與(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液和(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液分別提供，此時(shí)其可以是水溶液的形式。也可以以與(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液和(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液之一或兩者的混合物的形式提供，此時(shí)酸和堿分解性必須予以注意。
在本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法中，在(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液、(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液和(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑的至少一個(gè)中，以5-25重量％的量含有選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)，以使標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體從保持標(biāo)記抗體的膜中有效流出。選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)具有通過鹽析使唾液中存在的各種蛋白質(zhì)聚集并抵消標(biāo)記抗體與保持該抗體的膜間的相互作用的功能，從而通過該功能提供促進(jìn)標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體從保持標(biāo)記抗體的膜中有效流出的效果。
選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量包含在(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液、(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液和(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑的至少一個(gè)中是必要的。該量低于5重量％時(shí)，不能得到充分的效果，并且標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體不能有效地從保持標(biāo)記抗體的膜中流出。另一方面，超過25重量％時(shí)，檢測(cè)靈敏度降低。
在本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法中，由于(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液與(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液之間發(fā)生中和反應(yīng)，因此優(yōu)選使用緩沖劑，并且為在中和反應(yīng)中得到有效的緩沖作用，優(yōu)選使用三(羥甲基)氨基甲烷作為緩沖劑。但是此時(shí)，已經(jīng)確認(rèn)通過其它緩沖劑如碳酸氫鈉與碳酸鈉的組合、以及檸檬酸與檸檬酸鈉的組合不能得到充分的緩沖作用。三(羥甲基)氨基甲烷可以與成分(A)、(B)和(C)中的一個(gè)混合，或者可以單獨(dú)提供，此時(shí)優(yōu)選以水溶液的形式。在本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒中，(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液與(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液因引起中和反應(yīng)而必須單獨(dú)提供。
在本發(fā)明的第一方法中，通過免疫層析法對(duì)變異鏈球菌進(jìn)行鑒定和定量測(cè)定時(shí)，選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量與(A)、(B)和(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑的至少一個(gè)混合，然后通過以任意的順序滴下(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液、(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液和(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑而將它們混合。為簡(jiǎn)化本發(fā)明的第二方法的操作，將(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑與(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液及(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液的至少一個(gè)預(yù)先混合，然后通過以任意順序滴下(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液和(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液而將它們混合。
在本發(fā)明的唾液預(yù)處理方法中，由于(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液與(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液之間發(fā)生中和反應(yīng)，因此優(yōu)選使用緩沖劑，并且為在中和反應(yīng)中得到有效的緩沖作用，優(yōu)選使用(D)三(羥甲基)氨基甲烷作為緩沖劑。盡管用成分(A)、(B)和(C)的處理因各成分的功能相互獨(dú)立而可以任意順序進(jìn)行，但在唾液預(yù)處理試劑盒中含有(D)三(羥甲基)氨基甲烷時(shí)，為在成分(A)與成分(B)的中和反應(yīng)中得到緩沖作用，成分(A)與成分(B)相互接觸在(D)三(羥甲基)氨基甲烷存在下進(jìn)行是必要的。
除第一和第二方法外，在本發(fā)明的第三方法中，通過免疫層析法鑒定和定量測(cè)定變異鏈球菌時(shí)，選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量與(A)濃度為0.01-10mol/L的氫氧化鈉水溶液、(B)濃度為0.01-3mol/L的酒石酸和/或檸檬酸的水溶液、(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑和(D)三(羥甲基)氨基甲烷的至少一個(gè)混合，然后通過以成分(A)與成分(B)在成分(D)存在下接觸的順序滴下成分(A)、(B)、(C)和(D)，將它們混合。此時(shí)優(yōu)選通過以成分(A)與成分(B)在成分(D)存在下接觸的順序滴下成分(A)、(B)和(D)(其中至少一個(gè)與成分(C)混合)，將它們混合。
在本發(fā)明的唾液預(yù)處理方法中，處理優(yōu)選以這樣的方式進(jìn)行處理后的唾液的pH在5-9的范圍內(nèi)，因?yàn)榭乖贵w反應(yīng)在該pH范圍內(nèi)進(jìn)行。盡管該范圍隨使用的抗體而變化，但當(dāng)pH在該范圍以外時(shí)，由于抗體與抗原相互離開、并且它們具有非特異的親合力，故存在測(cè)定結(jié)果的可靠性下降的傾向。
可以通過使用常規(guī)的免疫層析技術(shù)的抗原抗體反應(yīng)，對(duì)通過本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒及唾液預(yù)處理方法處理的唾液試樣進(jìn)行變異鏈球菌的鑒定和定量測(cè)定?？贵w可以通過通常使用的方法得到。例如，可以通過由Kohler和Milstein(Kohler G，C.Milstein，Continuous culturesof fused cells secreting antibody of predefined specificity，Nature，256卷，495-497頁(1976))的細(xì)胞融合建立雜交瘤得到，或可以使用那些從用抗原免疫的動(dòng)物血清中簡(jiǎn)單純化的那些。
實(shí)施例以下將參照實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。如果沒有特別指明，操作在室溫下進(jìn)行，pH為在20-25℃下的pH。
(1)試劑和試驗(yàn)裝置的準(zhǔn)備1.抗體的制作通過使用BHI培養(yǎng)基(Brain Heart Infusion培養(yǎng)基，DIFCOLaboratories制)在37℃過夜，分別培養(yǎng)變異鏈球菌(ATCC 25175菌株)和遠(yuǎn)緣鏈球菌(Streptococci sobrinus)(ATCC 33478菌株)。通過離心從培養(yǎng)液收集細(xì)菌細(xì)胞后，用PBS(10mmol磷酸鹽緩沖的鹽水)將其洗滌兩次，用甲醛水溶液終止生長(zhǎng)。直接用細(xì)菌的分解液將小鼠免疫，然后通過使用Kohler和Milstein的細(xì)胞融合建立雜交瘤，得到下面所示的抗體各兩種。
SM1抗體抗變異鏈球菌抗體SM2抗體抗變異鏈球菌抗體SS1抗體抗遠(yuǎn)緣鏈球菌抗體SS2抗體抗遠(yuǎn)緣鏈球菌抗體2.抗體的金膠體標(biāo)記用粒徑40nm的金膠體標(biāo)記SM2抗體及SS2抗體。金膠體使用市售品(British Biocell International制)，并用含有1％牛血清清蛋白(BSA，商品名，Sigma-Aldrich Corp.制)、1％非離子表面活性劑(Tween-20，商品名，Sigma-Aldrich Corp.制)的PBS稀釋到抗體濃度為0.1μg/mL。用金膠體標(biāo)記的抗體溶液分別稱為SM2標(biāo)記抗體和SS2標(biāo)記抗體。
3.抗體固定化的多孔膜條的制作使用用塑料薄膜(SXHF，商品名，Millipore Corp.Japan制)襯里的硝化纖維素膜作為多孔膜。將該膜切成5mm×40mm的長(zhǎng)方形。用含有1％牛血清清蛋白的50mmol磷酸鹽緩沖液將SM1抗體或SS1抗體稀釋成1mg/mL的濃度，并用微量移液管將抗體稀釋溶液在這樣切出的硝化纖維素膜的中央部沿與膜的縱向垂直的方向涂布，涂布量達(dá)到約1μL/cm。固定化的抗體有時(shí)分別稱為SM1捕捉抗體和SS1捕捉抗體。在該膜的一端用夾子固定15mm見方的濾紙作為吸水體，使互相緊密接觸。在與吸水體相對(duì)的膜的另一端用夾子固定5mm×20mm的聚丙烯基質(zhì)(Quick Release Conjugate Pad，商品名，Millipore Corp.Japan制)作為保持標(biāo)記抗體的多孔膜(以下稱為標(biāo)記抗體保持體)，在它上面滴下30μL的SM2標(biāo)記抗體溶液或SS2標(biāo)記抗體溶液。將裝置在37℃干燥2小時(shí)，然后在使用前保存在干燥器中。
(2)變異鏈球菌的定量測(cè)定通過使用前述試劑和裝置的免疫層析法對(duì)唾液中的變異鏈球菌的定量測(cè)定結(jié)果與通過由菌落數(shù)計(jì)算的常規(guī)方法算出的唾液中的變異鏈球菌數(shù)進(jìn)行比較。
1.通過免疫層析法進(jìn)行的試驗(yàn)方法變異鏈球菌與在抗體固定化的多孔膜條上固定化的抗體的反應(yīng)性通過下面的原理檢測(cè)。唾液通過抗體固定化的多孔膜條的標(biāo)記抗體保持體時(shí)，標(biāo)記抗體與唾液中的變異鏈球菌結(jié)合，變?yōu)榧t色。變異鏈球菌與標(biāo)記抗體的復(fù)合體在抗體固定化的多孔膜條中移動(dòng)，然后它被抗體固定化的多孔膜條上的以例如帶狀固定化的抗體(捕捉抗體)捕捉，從而作為帶狀痕跡被確認(rèn)。
2.通過常規(guī)方法從菌落數(shù)計(jì)算變異鏈球菌數(shù)變異鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌和夾雜菌在MSB培養(yǎng)基上形成菌落。為準(zhǔn)確測(cè)定它們的菌落數(shù)，測(cè)定在MSB培養(yǎng)基上形成的菌落數(shù)后，收集一部分菌落并破碎后，并用具有對(duì)變異鏈球菌或遠(yuǎn)緣鏈球菌特異的序列的合成DNA引物進(jìn)行PCR(聚合酶鏈反應(yīng))。用瓊脂凝膠對(duì)由此擴(kuò)增的基因斷片進(jìn)行電泳，以確認(rèn)菌株。
實(shí)施例1使用這樣的抗體固定化的多孔膜條在其中央部將SM1抗體固定化，在另一端的標(biāo)記抗體保持體中含有SM2標(biāo)記抗體。通過下面的方式進(jìn)行檢查。
讓被試驗(yàn)者咀嚼收集唾液用的樹膠5分鐘，將唾液收集在試管中。這樣收集的一部分唾液用PBS稀釋并涂布在MSB培養(yǎng)基上。在37℃進(jìn)行厭氧培養(yǎng)2或3天后，測(cè)定菌落數(shù)。測(cè)定后，收集一部分菌落。將細(xì)菌細(xì)胞破碎后，用具有對(duì)變異鏈球菌或遠(yuǎn)緣鏈球菌特異的序列的合成DNA引物進(jìn)行PCR(聚合酶鏈反應(yīng))，并用瓊脂凝膠對(duì)由此擴(kuò)增的基因斷片進(jìn)行電泳，以判別菌株。從作為判別結(jié)果的、確認(rèn)為變異鏈球菌的菌落數(shù)計(jì)算細(xì)菌細(xì)胞數(shù)(CFU/mL)。
通過在含有1.0mol/L氫氧化鈉(成分(A))的含有1.0mol/L三(羥甲基)氨基甲烷(成分(D))的溶液中添加23.3重量％氯化鈉準(zhǔn)備溶液(AD溶液)。通過在含有0.5mol/L檸檬酸(成分(B))的含有1.0mol/L三(羥甲基)氨基甲烷(成分(D))的溶液中添加5重量％作為非離子表面活性劑(成分(C))的聚乙二醇單辛基苯基醚(Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.制)準(zhǔn)備溶液(BCD溶液)。
在250μL唾液中加入50μL AD溶液，然后攪拌。然后在其中加入100μL BCD溶液，然后攪拌。從這樣處理的唾液中取100μL，滴到標(biāo)記抗體保持體一側(cè)的條上。這樣處理的溶液的pH為7.2。溶液中成分(C)的濃度為1.25重量％。滴下15分鐘后，確認(rèn)了與捕捉抗體的反應(yīng)，并且標(biāo)記抗體保持體中殘留的SM2標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體的量通過目視進(jìn)行了觀察。
對(duì)5個(gè)被試驗(yàn)者a～e進(jìn)行前述試驗(yàn)。這樣得到的結(jié)果如下表1所示。與抗體的反應(yīng)性分四級(jí)評(píng)價(jià)，即，紅色帶可清楚確認(rèn)(++)，紅色帶可確認(rèn)(+)，紅色帶稍微可以確認(rèn)(±)，以及不能確認(rèn)帶(-)。標(biāo)記抗體保持體中殘留的SM2標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體的量(以下簡(jiǎn)稱為殘留抗體量)通過目視進(jìn)行了觀察，并分三級(jí)評(píng)價(jià)，即作為紅色在標(biāo)記抗體保持體中確認(rèn)大量殘留抗體(+)，稍微確認(rèn)殘留抗體(±)，和無殘留抗體確認(rèn)(-)。表中使用的單位CFU/mL是指每1mL唾液的細(xì)菌菌落數(shù)。
表1

實(shí)施例2使用除使用SS1捕捉抗體代替SM1捕捉抗體，SS2標(biāo)記抗體代替SM2標(biāo)記抗體外與實(shí)施例1同樣的抗體固定化的多孔膜條，以下面的方式進(jìn)行試驗(yàn)。
通過在含有1.0mol/L氫氧化鈉(成分(A))的溶液中添加25.0重量％氯化鈉準(zhǔn)備溶液(A溶液)。通過在含有1.0mol/L三(羥甲基)氨基甲烷(成分(D))的溶液中添加0.5mol/L檸檬酸(成分(B))準(zhǔn)備溶液(BD溶液)。準(zhǔn)備含有5重量％聚乙二醇單辛基苯基醚(Wako PureChemical Industries，Ltd.制)作為非離子表面活性劑(成分(C))的水溶液(C溶液)。
在250μL唾液中加入80μL BD溶液，然后攪拌。然后在其中加入50μL C溶液，然后攪拌。最后在其中加入40μL A溶液，然后攪拌。從這樣處理的唾液中取100μL，滴到標(biāo)記抗體保持體一側(cè)的條上。這樣處理的溶液的pH為6.6。溶液中成分(C)的濃度為0.60重量％。滴下15分鐘后，確認(rèn)了與捕捉抗體的反應(yīng)，并且標(biāo)記抗體保持體中殘留的SS2標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體的量通過目視進(jìn)行了觀察。
對(duì)5個(gè)被試驗(yàn)者a～e進(jìn)行前述試驗(yàn)，并進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的評(píng)價(jià)。這樣得到的結(jié)果如下表2所示。
表2

實(shí)施例3使用與實(shí)施例1同樣的使用SM1捕捉抗體和SM2標(biāo)記抗體的抗體固定化的多孔膜條，以下面的方式進(jìn)行試驗(yàn)。
通過在含有5重量％聚乙二醇單辛基苯基醚(Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.制)作為非離子表面活性劑(成分(C))的水溶液中添加1.0mol/L氫氧化鈉(成分(A))準(zhǔn)備溶液(AC溶液)。通過在含有0.5mul/L檸檬酸(成分(B))的含有1.0mol/L三(羥甲基)氨基甲烷(成分(D))的溶液中添加12.0重量％氯化鈉準(zhǔn)備溶液(BD溶液)。
在250μL唾液中加入75μL AC溶液，然后攪拌。然后在其中加入75μL BD溶液，然后攪拌。從這樣處理的唾液中取100μL，滴到標(biāo)記抗體保持體一側(cè)的條上。這樣處理的溶液的pH為7.5。溶液中成分(C)的濃度為0.94重量％。滴下15分鐘后，確認(rèn)了與捕捉抗體的反應(yīng)，并且標(biāo)記抗體保持體中殘留的SM2標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體的量通過目視進(jìn)行了觀察。
對(duì)3個(gè)被試驗(yàn)者a～c進(jìn)行前述試驗(yàn)，并進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的評(píng)價(jià)。這樣得到的結(jié)果如下表3所示。
表3

實(shí)施例4使用與實(shí)施例2同樣的使用SS1捕捉抗體和SS2標(biāo)記抗體的抗體固定化的多孔膜條，以下面的方式進(jìn)行試驗(yàn)。
準(zhǔn)備含有4.0mol/L氫氧化鈉(成分(A))的水溶液(A溶液)。準(zhǔn)備含有1.0mol/L檸檬酸(成分(B))的溶液(B溶液)。準(zhǔn)備含有5重量％聚乙二醇單辛基苯基醚(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.制)作為非離子表面活性劑(成分(C))的水溶液(C溶液)。通過在含有1.0mol/L三(羥甲基)氨基甲烷(成分(D))的溶液中添加12.0重量％氯化鈉準(zhǔn)備溶液(D溶液)。
在250μL唾液中加入40μL C溶液，然后攪拌。然后在其中加入40μL B溶液，然后攪拌。進(jìn)一步在其中加入40μL D溶液，然后攪拌。最后在其中加入40μLA溶液，然后攪拌。從這樣處理的唾液中取100μL，滴到標(biāo)記抗體保持體一側(cè)的條上。這樣處理的溶液的pH為8.0。溶液中成分(C)的濃度為0.49重量％。滴下15分鐘后，確認(rèn)了與捕捉抗體的反應(yīng)，并且標(biāo)記抗體保持體中殘留的SS2標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體的量通過目視進(jìn)行了觀察。
對(duì)3個(gè)被試驗(yàn)者a～c進(jìn)行前述試驗(yàn)，并進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的評(píng)價(jià)。這樣得到的結(jié)果如下表4所示。
表4

實(shí)施例5使用與實(shí)施例1同樣的使用SM1捕捉抗體和SM2標(biāo)記抗體的抗體固定化的多孔膜條，以下面的方式進(jìn)行試驗(yàn)。
通過在含有1.0mol/L氫氧化鈉(成分(A))的含有5重量％聚乙二醇單辛基苯基醚(Wako Pure Chemical Industries，Ltd.制)作為非離子表面活性劑(成分(C))的水溶液中添加12重量％氯化鈉準(zhǔn)備溶液(AC溶液)。準(zhǔn)備含有0.5mol/L檸檬酸(成分(B))的水溶液(B溶液)。通過在含有1.0mol/L三(羥甲基)氨基甲烷(成分(D))的溶液中添加12.0重量％氯化鈉準(zhǔn)備溶液(D溶液)。
在250μL唾液中加入75μL AC溶液，然后攪拌。然后在其中加入75μL B溶液，然后攪拌。最后在其中加入50μL D溶液，然后攪拌。從這樣處理的唾液中取100μL，滴到標(biāo)記抗體保持體一側(cè)的條上。這樣處理的溶液的pH為7.2。溶液中成分(C)的濃度為0.83重量％。滴下15分鐘后，確認(rèn)了與捕捉抗體的反應(yīng)，并且標(biāo)記抗體保持體中殘留的SM2標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體的量通過目視進(jìn)行了觀察。
對(duì)3個(gè)被試驗(yàn)者a～c進(jìn)行前述試驗(yàn)，并進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的評(píng)價(jià)。這樣得到的結(jié)果如下表5所示。
表5

實(shí)施例6使用與實(shí)施例1同樣的使用SM1捕捉抗體和SM2標(biāo)記抗體的抗體固定化的多孔膜條，以下面的方式進(jìn)行試驗(yàn)。
通過在含有3.0mol/L氫氧化鈉(成分(A))的含有1.0mol/L三(羥甲基)氨基甲烷(成分(D))的溶液中添加12.0重量％氯化鈉準(zhǔn)備溶液(AD溶液)。通過在含有1.0mol/L三(羥甲基)氨基甲烷(成分(D))的溶液中添加1.0mol/L酒石酸和0.5mol/L檸檬酸(成分(B))準(zhǔn)備溶液(BD溶液)。通過在含有5重量％聚乙二醇單辛基苯基醚(Wako PureChemical Industries，Ltd.制)作為非離子表面活性劑(成分(C))的水溶液中添加2mol/L氯化鈉準(zhǔn)備溶液(C溶液)。
在250μL唾液中加入40μL BD溶液，然后攪拌。然后在其中加入40μL A溶液，然后攪拌。最后在其中加入40μL C溶液，然后攪拌。從這樣處理的唾液中取100μL，滴到標(biāo)記抗體保持體一側(cè)的條上。這樣處理的溶液的pH為6.9。溶液中成分(C)的濃度為0.54重量％。滴下15分鐘后，確認(rèn)了與捕捉抗體的反應(yīng)，并且標(biāo)記抗體保持體中殘留的SM2標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體的量通過目視進(jìn)行了觀察。
對(duì)3個(gè)被試驗(yàn)者a～c進(jìn)行前述試驗(yàn)，并進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的評(píng)價(jià)。這樣得到的結(jié)果如下表6所示。
表6

實(shí)施例7使用與實(shí)施例1同樣的使用SM1捕捉抗體和SM2標(biāo)記抗體的抗體固定化的多孔膜條，以下面的方式進(jìn)行試驗(yàn)。
通過在含有1.0mol/L氫氧化鈉(成分(A))的水溶液中添加25.0重量％氯化鈉準(zhǔn)備溶液(A溶液)。通過在含有0.5mol/L檸檬酸(成分(B))的水溶液中添加5.0重量％聚乙二醇單辛基苯基醚(Wako PureChemical Industries，Ltd.制)作為非離子表面活性劑(成分(C))準(zhǔn)備溶液(BC溶液)。準(zhǔn)備含有2mol/L三(羥甲烷)氨基甲烷(成分(D))的緩沖液(D溶液)。
在250μL唾液中加入40μL D溶液，然后攪拌。然后在其中加入40μL A溶液，然后攪拌。最后在其中加入70μL BC溶液，然后攪拌。從這樣處理的唾液中取100μL，滴到標(biāo)記抗體保持體一側(cè)的條上。這樣處理的溶液的pH為6.9。溶液中成分(C)的濃度為0.88重量％。滴下15分鐘后，確認(rèn)了與捕捉抗體的反應(yīng)，并且標(biāo)記抗體保持體中殘留的SM2標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體的量通過目視進(jìn)行了觀察。
對(duì)5個(gè)被試驗(yàn)者a～e進(jìn)行前述試驗(yàn)，并進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的評(píng)價(jià)。這樣得到的結(jié)果如下表7所示。
表7

比較例1除使用不含氯化鈉的AD溶液外，對(duì)5個(gè)被試驗(yàn)者a～e進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的試驗(yàn)，并進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的評(píng)價(jià)。這樣得到的結(jié)果如下表8所示。
表8

比較例2除使用不含氯化鈉的D溶液外，對(duì)3個(gè)被試驗(yàn)者a～c進(jìn)行與實(shí)施例4同樣的試驗(yàn)，并進(jìn)行與實(shí)施例1同樣的評(píng)價(jià)。這樣得到的結(jié)果如下表9所示。
表9

從以上的結(jié)果可以確認(rèn)使用本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒的唾液預(yù)處理方法可以消除由唾液中的粘蛋白及變異鏈球菌的鏈形成引起的聚集，并且由于在標(biāo)記抗體保持體中殘留的標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體的量少，所以確認(rèn)了防止標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體殘留在保持標(biāo)記抗體的膜中這種現(xiàn)象的效果。
如上所詳述，通過利用抗原抗體反應(yīng)的免疫層析法鑒定和定量測(cè)定作為人唾液中存在的一種致齲細(xì)菌的變異鏈球菌時(shí)，本發(fā)明的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法通過簡(jiǎn)便的操作可以消除由唾液中的粘蛋白及變異鏈球菌的鏈形成引起的聚集，并且可以使標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體從保持標(biāo)記抗體的多孔膜有效流出，從而可以進(jìn)行高精度的鑒定和定量測(cè)定。因此，它提供對(duì)牙科領(lǐng)域有貢獻(xiàn)的非常大的價(jià)值。
權(quán)利要求
1.一種唾液預(yù)處理試劑盒，含有(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L，和(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑，成分(C)與成分(A)和(B)的至少一個(gè)混合，或可以與成分(A)和(B)分別提供，以及在成分(A)、(B)和(C)的至少一個(gè)中含有選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)，含量為5-25重量％。
2.如權(quán)利要求1所述的唾液預(yù)處理試劑盒，其中(D)三(羥甲基)氨基甲烷與成分(A)、(B)和(C)的至少一個(gè)混合。
3.一種唾液預(yù)處理試劑盒，含有(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L，(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑，和(D)含有三(羥甲基)氨基甲烷的水溶液，成分(C)與成分(A)、(B)和(D)的至少一個(gè)混合，或可以與成分(A)、(B)和(D)分別提供，以及在成分(A)、(B)、(C)和(D)的至少一個(gè)中含有選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)，含量為5-25重量％。
4.如權(quán)利要求1-3的任一項(xiàng)所述的唾液預(yù)處理試劑盒，其中作為成分(C)的非離子表面活性劑為選自聚乙二醇單辛基苯基醚、正辛基-β-D-葡糖苷、正庚基-β-D-硫葡糖苷、正辛基-β-D-硫葡糖苷、壬基苯氧基聚乙氧基乙醇和聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯的一種、或兩種以上的混合物。
5.如權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)所述的唾液預(yù)處理試劑盒，其中作為成分(C)的兩性表面活性劑為選自CHAPS(3-(3-膽酰胺丙基)-二甲基銨基)-1-丙烷磺酸鹽)和CHAPSO(3-(3-膽酰胺丙基)-二甲基銨基)-1-羥基丙烷磺酸鹽)的一種、或兩種以上的混合物。
6.一種唾液預(yù)處理方法，用于通過免疫層析法鑒定和定量測(cè)定變異鏈球菌，包括下列步驟將選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量與選自下述(A)、(B)和(C)的至少一個(gè)混合，(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L，和(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑；和通過以任意順序滴下成分(A)、(B)和(C)將它們混合。
7.如權(quán)利要求6所述的唾液預(yù)處理方法，其中(D)三(羥甲基)氨基甲烷與成分(A)、(B)和(C)的至少一個(gè)混合，并且通過以成分(A)與成分(B)在成分(D)的存在下接觸的順序滴下成分(A)、(B)和(C)，將它們混合。
8.一種唾液預(yù)處理方法，用于通過免疫層析法鑒定和定量測(cè)定變異鏈球菌，包括下列步驟將選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量與選自下述(A)和(B)的至少一個(gè)混合，(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L和(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L；將(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑混入成分(A)和(B)的至少一個(gè)中；和通過以任意順序滴下成分(A)和(B)將它們混合。
9.如權(quán)利要求8所述的唾液預(yù)處理方法，其中(D)三(羥甲基)氨基甲烷與成分(A)和(B)的至少一個(gè)混合，并且通過以任意順序滴下成分(A)和(B)，將它們混合。
10.一種唾液預(yù)處理方法，用于通過免疫層析法鑒定和定量測(cè)定變異鏈球菌，包括下列步驟將選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)以5-25重量％的量與選自下述(A)、(B)、(C)和(D)的至少一個(gè)混合，(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01-10mol/L，(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01-3mol/L，(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑，和(D)三(羥甲基)氨基甲烷；和通過以成分(A)與成分(B)在成分(D)的存在下接觸的順序滴下成分(A)、(B)、(C)和(D)，將它們混合。
11.如權(quán)利要求10所述的唾液預(yù)處理方法，其中通過以成分(A)與成分(B)在成分(D)的存在下接觸的順序滴下至少其中之一已與成分(C)混合的成分(A)、(B)和(D)，將它們混合。
全文摘要
在通過利用抗原抗體反應(yīng)鑒定和定量測(cè)定變異鏈球菌時(shí)的唾液預(yù)處理試劑盒和唾液預(yù)處理方法，它通過簡(jiǎn)便的操作可以消除由唾液中的粘蛋白及變異鏈球菌的鏈形成引起的聚集，并且可以使標(biāo)記抗體與變異鏈球菌的復(fù)合體從保持標(biāo)記抗體的多孔膜有效流出，所述的唾液預(yù)處理試劑盒含有(A)氫氧化鈉水溶液，濃度為0.01－10mol/L，(B)酒石酸和/或檸檬酸的水溶液，濃度為0.01－3mol/L，和(C)非離子表面活性劑和/或兩性表面活性劑，其中成分(C)與成分(A)和(B)的至少一個(gè)混合，或可以分別提供，以及在成分(A)、(B)和(C)的至少一個(gè)中含有選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂、硫酸鎂和硫酸錳的至少一種物質(zhì)，含量為5－25重量％。
文檔編號(hào)G01N33/543GK1492230SQ0315914
公開日2004年4月28日 申請(qǐng)日期2003年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月9日
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