4-羥基水楊酰苯胺類化合物在制備酪氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥和食品技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及4-羥基水楊酰苯胺（2-Hydroxy-N-(4-hydroxyphenyl) -benzamide)類化合物在制備酪氨酸酶抑制劑等方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 酪氨酸酶（Tyrosinase)是由二價銅離子與酶蛋白結(jié)合的金屬酶，是生物體合成 黑色素的關(guān)鍵酶，可催化含酚基化合物（如酪氨酸、多巴等）氧化成多巴醌，經(jīng)一系列中間 反應(yīng)后形成黑色素，而黑色素的合成、分布與哺乳動物皮膚、毛發(fā)的色素沉積直接相關(guān)，與 果蔬褐變也有著重要的關(guān)系。
[0003] 因此，通過篩選酪氨酸酶抑制劑，抑制酪氨酸酶的活性來控制黑色素的合成，已成 為防止果蔬褐變，治療色素沉著性皮膚病（包括原發(fā)性和繼發(fā)性色素沉著性皮膚疾病，如 黃褐斑、雀斑、炎癥后色素沉著等），以及美白化妝品研制的重要途徑。
[0004] 雖然目前已經(jīng)開發(fā)了一些物質(zhì)用作酪氨酸酶抑制劑或作為美白成分使用，但其長 期安全性和酪氨酸酶抑制活性尚難以令人滿意。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的安全性高、 抑制活性好的酪氨酸酶抑制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種新的安全性高、抑制活性好的酪氨酸酶抑制劑及其在制 備酪氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的第一方面提供了一種具有式I結(jié)構(gòu)的化合物或其鹽的用途，
[0007] . (I)
[0008] 式中，
[0009] 札和1?2各自獨(dú)立地選自：H、01?3和堿金屬，其中R3為取代或未取代的C 烷基、 取代或未取代的(：3_(：4環(huán)烷基，并且所述的"取代"指一個或多個Η被選自下組的基團(tuán)取代： 鹵素、C「C3烷基、氨基、羥基；
[0010] 所述化合物或其鹽用于：(a)制備酪氨酸酶抑制劑或抑制酪氨酸酶的組合物；(b) 制備抑制黑色素生成的組合物；和/或（c)制備預(yù)防或治療色素沉著性皮膚病的組合物。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述的鹽為藥學(xué)上可接受的鹽。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述的式I化合物為選自下組的4-羥基水楊酰苯胺化合物：
[0013]
ο：
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物包括藥物組合物、化妝品組合物、洗滌用品組合 物、保健品組合物。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的式I化合物還用于制備抑制蔬菜和水果發(fā)生褐變的組合 物。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物為外用藥物組合物。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物含有如本發(fā)明第一方面所述的式I化合物或其 藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物為透皮劑型。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述藥學(xué)上可接受的載體選自下組：透皮促進(jìn)劑、軟膏基質(zhì)、乳 化劑、穩(wěn)定劑、或其組合。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物用于抑制黑色素生成，或用于制備抑制黑色素 生成的藥物。
[0021] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物用于預(yù)防或治療色素沉著性皮膚病、或用于制 備預(yù)防或治療色素沉著性皮膚病的藥物。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述色素沉著性皮膚病為所有原發(fā)性和繼發(fā)性色素沉著性皮膚 疾病。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，所述化妝品含有如本發(fā)明第一方面所述的式I化合物或其藥學(xué) 上可接受的鹽。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，所述化妝品為美白化妝品。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，所述化妝品還含有藥學(xué)上可接受的載體。
[0026] 在另一優(yōu)選例中，所述藥學(xué)上可接受的載體選自下組：軟膏基質(zhì)、乳化劑、表面活 性劑、穩(wěn)定劑、或其組合。
[0027] 在另一優(yōu)選例中，所述的化妝品為皮膚外用化妝品。
[0028] 在另一優(yōu)選例中，所述的皮膚包括以下部位的皮膚：面部、手部、足部。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，所述洗滌用品組合物含有如權(quán)利要求1所述的式I化合物或其 鹽、洗滌用表面活性劑和洗滌用載體。
[0030] 在另一優(yōu)選例中，所述洗滌用品為抑制蔬菜和水果發(fā)生褐變的洗滌用品。
[0031 ] 在另一優(yōu)選例中，所述洗滌用載體選自下組：水、乳化劑、穩(wěn)定劑或其組合。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述保健品組合物含有如本發(fā)明第一方面所述的式I化合物或 其藥學(xué)上可接受的鹽以及食品上可接受的載體。
[0033] 在另一優(yōu)選例中，所述的保健品組合物為抑制黑色素生成的組合物。
[0034] 在另一優(yōu)選例中，所述的保健品組合物為片劑、膠囊、或口服液。
[0035] 本發(fā)明的第二方面提供了一種抑制蔬菜和/或水果發(fā)生褐變的方法，所述方法包 括步驟：
[0036] 將所述蔬菜和/或水果與本發(fā)明式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽進(jìn)行接觸，從 而抑制所述蔬菜和/或水果發(fā)生褐變。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述的接觸在水中進(jìn)行，并且所述式I化合物或其鹽在水中的 濃度為3 μΜ~25 μΜ。
[0038] 本發(fā)明的第三方面提供了一種非治療性的體外抑制酪氨酸酶活性的方法，所述方 法包括步驟：在本發(fā)明式I化合物或其鹽存在的情況下，培養(yǎng)細(xì)胞，從而抑制所述細(xì)胞中黑 色素的生成和/或抑制所述細(xì)胞中的酪氨酸酶活性。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述式I化合物或其鹽在培養(yǎng)體系中的濃度為3 μ Μ~25 μ Μ。
[0040] 在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞選自下組：黑色素細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、人表皮細(xì)胞 (包括來源于包皮、面部、乳房、腹部和大腿等部位的表皮細(xì)胞）及其分離得到的黑色素細(xì) 胞、皮膚等價物（一種由黑色素細(xì)胞和角化細(xì)胞組成的重構(gòu)三維皮膚等價物）。
[0041] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0042] 圖1為4-羥基水楊酰苯胺對Β16細(xì)胞胞內(nèi)酪氨酸酶的活性影響的曲線圖。
[0043] 圖2為4-羥基水楊酰苯胺對Β16細(xì)胞黑色素分泌影響的柱狀圖。
[0044] 圖3為4-羥基水楊酰苯胺對Β16細(xì)胞黑色素量影響的柱狀圖。
【具體實施方式】
[0045] 本發(fā)明人經(jīng)過長期廣泛而深入的研究，通過對大量化合物進(jìn)行篩選和測試，首次 意外地發(fā)現(xiàn)，一種已知的保肝活性成分4-羥基水楊酰苯胺及其類似化合物（式I化合物） 居然能夠顯著抑制Β16細(xì)胞胞內(nèi)酪氨酸酶活性，進(jìn)而抑制Β16細(xì)胞的黑色素生成及分泌。實 驗表明，在很低濃度下（處于安全濃度范圍內(nèi)），本發(fā)明的式I化合物就具有明顯的抑制胞 內(nèi)酪氨酸酶活性和美白效果，體現(xiàn)出極高的長期安全性。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
[0046] 活性成分
[0047] 在本發(fā)明中，活性成分為式I化合物。一種代表性的化合物為4-羥基水楊酰苯胺。
[0048] 4-羥基水楊酰苯胺的結(jié)構(gòu)式為：
[0049]
[0050] 該化合物的分子式為C13HnN03，白色粉末狀，分子量為229. 24, CAS編號為 526-18-1。該化合物的通用名為柳胺酚，目前用于肝膽病用藥，作用機(jī)制與去氫膽酸相似， 能增加肝血流量，改善肝功能，可使膽汁中水分顯著增加。利膽作用較去氫膽酸強(qiáng)，能使 Oddi括約肌松弛。此外尚有降低血膽固醇作用。
[0051] 本發(fā)明的研究表明，4-羥基水楊酰苯胺是安全而非常有效的酪氨酸酶抑制劑，能 夠抑制B16細(xì)胞黑色素的分泌和合成。
[0052] B16細(xì)胞為小鼠黑色素瘤細(xì)胞，能夠模擬人的細(xì)胞，在調(diào)控黑色素生成，防止果蔬 褐變、防治色素沉著性皮膚病以及皮膚美白等研究中，是最為常用的細(xì)胞系之一。
[0053] 4-羥基水楊酰苯胺類化合物，作為酪氨酸酶的抑制劑，可為防止果蔬褐變，治療色 素沉著性皮膚?。S褐斑、雀斑、炎癥后色素沉著等）藥物的開發(fā)，以及美白化妝品研制提 供多種途徑。
[0054] 用途
[0055] 本發(fā)明提供了 4-羥基水楊酰苯胺類化合物在用作酪氨酸酶抑制劑中的用途，可 用于以下方面：(a)制備酪氨酸酶抑制劑或抑制酪氨酸酶的組合物；(b)制備抑制黑色素生 成的組合物；和/或（c)制備預(yù)防或治療色素沉著性皮膚病的組合物。
[0056] 組合物
[0057] 本發(fā)明的4-羥基水楊酰苯胺類化合物可用于（a)制備酪氨酸酶抑制劑或抑制酪 氨酸酶的組合物；(b)制備抑制黑色素生成的組合物；和/或（c)制備預(yù)防或治療色素沉著 性皮膚病的組合物。
[0058] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物包括藥物組合物、保健品組合物、化妝品組合物、 洗滌用品組合物。
[0059] 在另一優(yōu)選例中，所述化合物還用于制備抑制蔬菜和水果發(fā)生褐變的組合物。
[0060] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物含有如本發(fā)明第一方面所述的式I化合物或其 藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
[0061 ] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物為外用藥物組合物。
[0062] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物為透皮劑型。
[0063] 在另一優(yōu)選例中，所述藥學(xué)上可接受的載體選自下組：透皮促進(jìn)劑、軟膏基質(zhì)、乳 化劑、穩(wěn)定劑、或其組合。
[0064] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物用于預(yù)防或治療色素沉著性皮膚病、或用于制 備預(yù)防或治療色素沉著性皮膚病的藥物。
[0065] 在另一優(yōu)選例中，所述色素沉著性皮膚病為所有原發(fā)性和繼發(fā)性色素沉著性皮膚 疾病。
[0066] 在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物用于抑制黑色素生成，或用于制備抑制黑色素 生成的藥物。
[0067] 在另一優(yōu)選例中，所述化妝品組合物含有如本發(fā)明第一方面所述的式I化合物或 其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0068] 在另一優(yōu)選例中，所述化妝品為美白化妝品。
[0069] 在另一優(yōu)選例中，所述化妝品還含有藥學(xué)上可接受的載體。
[0070] 在另一優(yōu)選例中，所述藥學(xué)上可接受的載體選自下組：軟膏基質(zhì)、乳化劑、表面活 性劑、穩(wěn)定劑、或其組合。
[0071 ] 在另一優(yōu)選例中，所述的化妝品為皮膚外用化妝品。
[0072] 在另一優(yōu)選例中，所述洗滌用品組合物含有如本發(fā)明第一方面所述的式I化合物 或其鹽、洗滌用表面活性劑和洗滌用載體。
[0073] 在另一優(yōu)選例中，所述洗滌用品為抑制蔬菜和水果發(fā)生褐變的洗滌用品。
[0074] 在另一優(yōu)選例中，所述洗滌用載體選自下組：水、乳化劑、穩(wěn)定劑或其組合。
[0075] 在另一優(yōu)選例中，所述保健品組合物含有如本發(fā)明第一方面所述的式I化合物或 其藥學(xué)上可接受的鹽以及食品上可接受的載體。
[0076] 在另一優(yōu)選例中，所述保健品組合物為抑制黑色素生成的組合物。
[0077] 在另一優(yōu)選例中，所述保健品組合物為片劑、膠囊、或口服液。
[0078] 方法
[0079] 本發(fā)明提供了一種抑制蔬菜和/或水果發(fā)生褐變的方法，所述方法包括步驟：
[0080] 將所述蔬菜和/或水果與本發(fā)明式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽進(jìn)行接觸，從 而抑制所述蔬菜和/或水果發(fā)生褐變。
[0081] 在另一優(yōu)選例中，所述的接觸在水中進(jìn)行，并且所述式I化合物或其鹽