一種從鰻魚骨中提取的鰻魚小分子肽及其提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及到用魚骨提取肽的技術(shù)，具體涉及一種從鰻魚骨中提取小分子肽的方法。
【背景技術(shù)】
[0003]從動(dòng)物例如牦牛骨骼中提取的膠原蛋白在吸收率方面有一定的局限性，并且隨著對(duì)瘋牛病帶來的風(fēng)險(xiǎn)，使得這種較為傳統(tǒng)的方式不被人們所認(rèn)可，而人們?cè)絹碓秸J(rèn)可從魚類中提取相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
[0004]目前的提取主要是從魚鱗、魚皮中提取膠原蛋白，例如從羅非魚魚鱗中提取，從深海魚皮例如鱈魚魚皮中提取，但是這些提取物產(chǎn)品分子量分布廣不易吸收，大分子導(dǎo)致的吸收率低等突出問題的存在，極大的阻止了現(xiàn)代人所追求的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，安全，吸收好等新保健理念的實(shí)現(xiàn)。
[0005]另一方面，傳統(tǒng)的膠原蛋白或蛋白肽提取液體積較大，產(chǎn)品的生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，酶解液除雜不徹底，影響膠原蛋白品質(zhì)，所得成品往往具有苦腥味，口感差，如果過濾級(jí)別不夠的話，產(chǎn)品水溶性就會(huì)較差，直接影響消化吸收，對(duì)魚類提取物的含鹽量高的問題解決效果不理想，影響產(chǎn)品口感。
[0006]雖然隨著技術(shù)進(jìn)步，人們運(yùn)用膜分離技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，在一定程度上提高了產(chǎn)品質(zhì)量，但是還沒有從根本上得到小分子活性肽。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明為有效解決上述問題，提供一種全新的制備方法，以鰻魚骨為原料，通過創(chuàng)新手段得到易于吸收，口感好，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，安全的鰻魚小分子活性肽，且該方法提取效率高，工藝簡(jiǎn)單使用。
[0008]本發(fā)明采用改良的生物酶解修飾復(fù)配法，制備鰻魚小分子活性肽，具體技術(shù)方案是，一種從鰻魚骨中提取鰻魚小分子活性肽的方法，包括如下步驟:(I)鰻魚骨處理:將新鮮的鰻魚骨清洗干凈，破碎，在蒸煮罐中，采用溫度為120-150°C的溫度，0.13-0.15Mpa的壓力蒸煮6-10h，骨渣排出，得到骨湯，速凍后，形成冷凍骨湯油凍塊，貯存于_18°C的冷凍庫(kù)內(nèi)備用；(2)低溫粉碎處理:采用粉碎機(jī)在低溫對(duì)所述的冷凍骨湯油凍塊進(jìn)行低溫粉碎，粉碎溫度控制在0-4°C之間，將所述的冷凍骨湯油凍塊粉碎為顆粒直徑在0.02-0.1毫米的冷凍骨湯油凍塊顆粒；(3)細(xì)胞溶出處理:采用常壓下4°C無氧水對(duì)粉碎的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行浸滲水處理，水飽和時(shí)間為6-8小時(shí)，所述無氧水以完全淹沒原料為準(zhǔn);然后快速深度冷凍與融凍處理，其中深冷凍處理時(shí)間為l_2h，冷凍溫度為零下22-25°C，緊接著融凍，即以常壓下4°C水浴對(duì)處于深冷凍的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行快速融冰，融冰處理時(shí)間為3-5h;重復(fù)所述的快速深度冷凍與融凍處理過程2-3次，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)被破壞，有效物質(zhì)溶出，形成鰻魚寡肽骨湯；(4)生物酶解處理:將所述鰻魚寡肽骨湯導(dǎo)入水解罐中，加入復(fù)合酶，所述的復(fù)合酶制備方法如下，先將草芽孢桿菌、雙歧螺桿菌、鼠李糖乳桿菌、光合菌、地衣芽孢桿菌置于三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度為28-33°C，在200-250rpm/min下培養(yǎng)25_35h，使菌體或者孢子濃度達(dá)到I X 114個(gè)/升(CFU/L)，制得發(fā)酵劑，然后向發(fā)酵劑中加入營(yíng)養(yǎng)素，控制營(yíng)養(yǎng)素的重量是所述發(fā)酵劑重量的1/5-1/8，所述的營(yíng)養(yǎng)素為麥芽汁，即得到所述的復(fù)合酶，按照鰻魚寡肽骨湯與復(fù)合酶1000-1200:1的重量比加入所述的復(fù)合酶進(jìn)行生物酶解處理，在所述生物酶解過程中保持水解罐中PH為6.8-7.0，所述酶解溫度為60°C，所述酶解時(shí)間為13-21°C，得到初級(jí)鰻魚小分子活性肽；(5)后處理:將所述的初級(jí)鰻魚小分子活性肽滅酶，快速升溫至180-185°C并保持20-25s，然后50-60°C/s降溫至60°C使酶失活;然后采用高速離心機(jī)將酶解液以60000-80000r/min的速度離心3-5min，將上層液和中層液合并輸入稀釋罐體內(nèi)，即酶解分離液，下層液被分離出去，然后采用熱隔膜低溫濃縮技術(shù)進(jìn)行濃縮，濃縮溫度為45-50°C，真空度為0.4-2.0MPa，將濃縮液輸送到200-220°C的離心噴霧干燥塔內(nèi)干燥成粉沫，即得到所述的鰻魚小分子活性肽。
[0009]優(yōu)選，步驟(I)中采用溫度為130°C的溫度，0.14Mpa的壓力蒸煮7h，骨渣排出，得到骨湯，速凍后，形成冷凍骨湯油凍塊，貯存于_18°C的冷凍庫(kù)內(nèi)備用；步驟2)中，粉碎溫度控制在2°C，將所述的冷凍骨湯油凍塊粉碎為顆粒直徑在0.05毫米的冷凍骨湯油凍塊顆粒。
[0010]優(yōu)選，步驟(3)中細(xì)胞溶出處理:采用常壓下4°C無氧水對(duì)粉碎的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行浸滲水處理，水飽和時(shí)間為7小時(shí)，所述無氧水以完全淹沒原料為準(zhǔn);然后快速深度冷凍與融凍處理，其中深冷凍處理時(shí)間為2h，冷凍溫度為零下25°C，緊接著融凍，即以常壓下4°C水浴對(duì)處于深冷凍的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行快速融冰，融冰處理時(shí)間為3h;重復(fù)所述的快速深度冷凍與融凍處理過程3次，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)被破壞，有效物質(zhì)溶出，形成鰻魚寡肽骨湯。
[0011]優(yōu)選，步驟(4)中在三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度為30°C，在200rpm/min下培養(yǎng)28h，使菌體或者孢子濃度達(dá)到I X 114個(gè)/升(CFU/L)，按照鰻魚寡肽骨湯與復(fù)合酶1000:1的重量比加入所述的復(fù)合酶進(jìn)行生物酶解處理，在所述生物酶解過程中保持水解罐中PH為7.0，所述酶解溫度為60°C，所述酶解時(shí)間為21°C，得到初級(jí)鰻魚小分子活性肽。
[0012]優(yōu)選，步驟(5)中后處理:將所述的初級(jí)鰻魚小分子活性肽滅酶，快速升溫至180°C并保持25s，然后60°C/s降溫至60°C使酶失活；然后采用高速離心機(jī)將酶解液以60000-70000r/min的速度離心4-5min，將上層液和中層液合并輸入稀釋罐體內(nèi)，即酶解分離液，下層液被分離出去，然后采用熱隔膜低溫濃縮技術(shù)進(jìn)行濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為
2.0MPa，將濃縮液輸送到200°C的離心噴霧干燥塔內(nèi)干燥成粉沫，即得到所述的鰻魚小分子活性肽。更優(yōu)選高速離心機(jī)將酶解液以60000r/min的速度離心4min。
[0013]本發(fā)明還提供上述方法制備的所述的鰻魚小分子活性肽，所述的鰻魚小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比不少于88.2%，具體所述的暢魚小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比為88.61 %，480-1000道爾頓的占比為9.43%，大于1000道爾頓的占比為
1.96%，色澤為淡黃色。
[0014]本發(fā)明還提供上述述的鰻魚小分子肽的應(yīng)用;所述的鰻魚小分子肽適用于診斷用肽、肽疫苗、抗菌活性肽、細(xì)胞因子模擬肽、抗病毒肽或抗腫瘤肽，以及肽保健品。
[0015]本發(fā)明的積極效果:
[0016]首先本發(fā)明制備的鰻魚小分子活性多肽成分純，優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中制備的多肽，本發(fā)明制備的暢魚小分子活性多肽含量接近100%，所述的暢魚小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比不少于88.2%，具體所述的鰻魚小分子肽的分子量為0-480道爾頓的占比為88.61%，480-1000道爾頓的占比為9.43%，大于1000道爾頓的占比為1.96%，色澤為淡黃色。
[0017]其次采用生物蛋白酶解技術(shù)將鰻魚骨頭原料降解成膠原螺旋肽;采用超微膜和低溫濃縮技術(shù)分離鰻魚小分子活性肽，產(chǎn)品具有穩(wěn)定性、抗氧化性、易保存，易被人體吸收，得到的鰻魚小分子活性肽粉沫既可以沖水可，又可以做出膠囊，使人們?cè)谌粘Ｉ钸^程得到保健功效，既有藥用價(jià)值，又有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。采用生物技術(shù)，綜合使用了細(xì)胞溶出處理，生物酶解處理以及分離純化、濃縮成肽生物保健品，為鰻魚骨提供了新的途徑。本發(fā)明制備的鰻魚小分子肽，可以應(yīng)用于肽類藥物和肽類保健品，應(yīng)用范圍比較廣泛，例如用于診斷用肽、肽疫苗、抗菌活性肽、細(xì)胞因子模擬肽、抗病毒肽和/或抗腫瘤肽等。本發(fā)明制備的鰻魚小分子肽滿足了日益增長(zhǎng)的藥品和保健品的使用需要，可以安全大規(guī)模制備使用。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0019]實(shí)施例1
[0020]一種從鰻魚骨中提取鰻魚小分子活性肽的方法，包括如下步驟:(I)鰻魚骨處理:將新鮮的鰻魚骨清洗干凈，破碎，在蒸煮罐中，采用溫度為120°C的溫度，0.13Mpa的壓力蒸煮10h，骨渣排出，得到骨湯，速凍后，形成冷凍骨湯油凍塊，貯存于-18°C的冷凍庫(kù)內(nèi)備用；
(2)低溫粉碎處理:采用粉碎機(jī)在低溫對(duì)所述的冷凍骨湯油凍塊進(jìn)行低溫粉碎，粉碎溫度控制在4°C，將所述的冷凍骨湯油凍塊粉碎為顆粒直徑在0.02毫米的冷凍骨湯油凍塊顆粒；
(3)細(xì)胞溶出處理:采用常壓下4°C無氧水對(duì)粉碎的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行浸滲水處理，水飽和時(shí)間為8小時(shí)，所述無氧水以完全淹沒原料為準(zhǔn);然后快速深度冷凍與融凍處理，其中深冷凍處理時(shí)間為2h，冷凍溫度為零下22°C，緊接著融凍，即以常壓下4°C水浴對(duì)處于深冷凍的冷凍骨湯油凍塊顆粒進(jìn)行快速融冰，融冰處理時(shí)間為3h;重復(fù)所述的快速深度冷凍與融凍處理過程2次，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)被破壞，有效物質(zhì)溶出，形成鰻魚寡肽骨湯；(4)生物酶解處理:將所述鰻魚寡肽骨湯導(dǎo)入水解罐中，加入復(fù)合酶，所述的復(fù)合酶制備方法如下，先將草芽孢桿菌、雙歧螺桿菌、鼠李糖乳桿菌、光合菌、地衣芽孢桿菌置于三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度為33°C，在200rpm/min下培養(yǎng)35h，使菌體或者孢子濃度達(dá)到1\1014個(gè)/升(0?1]/L)，制得發(fā)酵劑，然后向發(fā)酵劑中加入營(yíng)養(yǎng)素，控制營(yíng)養(yǎng)素的重量是所述發(fā)酵劑重量的1/5，所述的營(yíng)養(yǎng)素為麥芽汁，即得到所述的復(fù)合酶，按照鰻魚寡肽骨湯與復(fù)合酶1000:1的重量比加入所述的復(fù)合酶進(jìn)行生物酶解處理，在所述生物酶解過程中保持水解罐中PH為7.0，所述酶解溫度為60°C，所述酶解時(shí)間為21 °C，得到初級(jí)鰻魚小分子活性肽；(5)后處理:將所述的初級(jí)鰻魚小分子活性肽滅酶，快速升溫至185°C并保持25s，然后56°C/s降溫至60°C使酶失活;然后采用高速離心機(jī)將酶解液以60000r/min的速度離心3min，將上層液和中層液合并輸入稀釋罐體內(nèi)，即酶解分離液，下層液被分離出去，然后采用熱隔膜低溫濃縮技術(shù)進(jìn)行濃縮，濃縮溫度為45°C，真空度為2.0MPa，將濃縮液輸送到200°C的離心噴霧干燥塔內(nèi)干燥成粉沫，即得到所述的鰻魚小分子活性肽。
[0021]實(shí)施例2
[0022]一種從鰻魚骨中提取鰻魚小分子活性肽的方法，包括如下步驟:(I)鰻魚骨處理:將新鮮的鰻魚骨清洗干凈，破碎，在蒸煮罐中，采用溫度為120°C的溫度，0.13Mpa的壓力蒸煮10h，骨渣排出，得到骨湯，速凍后，形成冷凍骨湯油凍塊，貯存于-18°C的冷凍庫(kù)內(nèi)備用；
(2)低溫粉碎處理:采用粉