CI-H1299人非小細胞肺癌細胞株（訂購于中科院上海細胞資源中心，Cat#TCHu 160)
[0138] NCI-H460人大細胞肺癌細胞株(訂購于中科院上海細胞資源中心，Cat#TCHu 205)
[0139] HCT-116人結(jié)腸癌細胞株(訂購于中科院上海細胞資源中心，Cat#TCHu 99)
[0140] HT-29人結(jié)腸癌細胞株(訂購于中科院上海細胞資源中心，Cat#TCHu 103)
[0141] SK-0V-3人卵巢癌細胞株(訂購于中科院上海細胞資源中心，Cat#TCHu 185)
[0142] 2.試劑和耗材：
[0143] Cell Counting Kit-8(Cat#CK04_13，Dojindo)
[0144] 96孔培養(yǎng)板（Cat#3599，Corning Costar)
[0145] 培養(yǎng)基和胎牛血清(GIBCO)
[0146] 臺式酶標(biāo)儀：SpectraMax M5Microplate Reader(Molecular Devices)
[0147] 受試化合物:實施例各化合物。
[0148] 3.培養(yǎng)基的配制
[0149] 表2
[0151] 4.IC50 實驗（CCK-8 檢測）
[0152] a)收集對數(shù)生長期細胞，計數(shù)，用完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞，調(diào)整細胞濃度至合適 濃度(依照細胞密度優(yōu)化試驗結(jié)果確定），接種96孔板，每孔加 100μΙ細胞懸液。細胞在37°C， 100 %相對濕度，5 % C02培養(yǎng)箱中孵育24小時。
[0153] b)用培養(yǎng)基將待測化合物稀釋至所設(shè)置的相應(yīng)作用濃度，按25μ1/孔加入細胞。根 據(jù)實驗所需濃度溶解于二甲基亞砜，配成化合物DMS0溶液，化合物的作用終濃度為100μΜ、 25μΜ、6.25μΜ、1.5625μΜ、0.390625μΜ、0.097656μΜ、0.024414μΜ、0.006104μΜ、0.001526μΜ;
[0154] c)細胞置于37°C，100 %相對濕度，5 % C02培養(yǎng)箱中孵育72小時。
[0155] d)吸棄培養(yǎng)基，加入含10 % CCK-8的完全培養(yǎng)基置于37°C培養(yǎng)箱中孵育1-4小時。
[0156] e)輕輕震蕩后在SpectraMax M5Microplate Reader上測定450nm波長處的吸光 度，以650nm處吸光度作為參比，計算抑制率。
[0157] 5.數(shù)據(jù)處理
[0158] 按下式計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率:腫瘤細胞生長抑制率％ = [(Aa-As)/ (Ac-Ab)]X100%
[0159] As:樣品的0A (細胞+CCK-8+待測化合物）
[0160] Ac:陰性對照的0A(細胞+CCK-8+DMS0)
[0161] Ab:陽性對照的0A(培養(yǎng)基+CCK-8+DMS0)
[0162] 運用軟件Graphpad Prism 5并米用計算公式log(inhibitor)vs.normalized response進行IC50曲線擬合并計算出IC50值，如下表所示：
[0163] 表3化合物對多種人腫瘤細胞株的1(：50值


[0167] 結(jié)果:本發(fā)明化合物對多種人腫瘤細胞株的生長均具有明顯的抑制作用。
[0168] 藥代動力學(xué)評價
[0169] 以SD大鼠為受試動物，應(yīng)用LC/MS/MS法測定了大鼠灌胃給予化合物1-2、化合物I-10、化合物I -26、化合物I -51后不同時刻血漿中的藥物濃度，研究本發(fā)明的化合物在大鼠體 內(nèi)的藥代動力學(xué)行為，評價其藥代動力學(xué)特征。
[0170] 實驗方案：
[0171 ] 1.劑量選擇
[0172]給藥劑量為5mg/kg。
[0173] 2.受試動物
[0174] 受試大鼠實驗前給予2天的環(huán)境適應(yīng)期。
[0175] 取SD大鼠24只，雌雄各半，體重約為200g。根據(jù)平均體重將雌/雄大鼠組進行隨機 分成4個受試組(每組6只，雌雄各半）。
[0176] 3.血漿樣品處理
[0177] 取大鼠血漿50μ1，加入200μ1蛋白沉淀劑，振蕩3min沉淀蛋白，20000rcf *10min離 心后，轉(zhuǎn)移80μ1上清液至進樣瓶，2μ1進樣分析。
[0178] 4.實驗過程
[0179] 大鼠禁食12h，分別依次灌胃（i . g.)給予5mg/kg化合物I-2、化合物I-10、化合物I-26、化合物1-51。大鼠給藥后，自眼眶靜脈叢采集給藥前(0)及給藥后15min、30min、45min、 卟、211、411、611、811、1211和2411大鼠靜脈血約20(^1至采血管(采血管預(yù)先用0.5%肝素鈉抗凝） 中，以4000rpm離心5min后轉(zhuǎn)移上層血衆(zhòng)，血衆(zhòng)樣品經(jīng)沉淀蛋白預(yù)處理后進行分析，測定血 漿中化合物的經(jīng)時濃度。
[0180] 5.藥代動力學(xué)參數(shù)結(jié)果
[0181]將SD大鼠單次灌胃給藥5mg/kg本發(fā)明的化合物后，體內(nèi)實測藥物經(jīng)時血藥濃度使 用DAS軟件求算其在SD大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)，結(jié)果分別列于表3~7。
[0182]表4化合物I -2在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù)(禁食）
[0184]表5化合物I -10在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù)(禁食）
[0186]表6化合物1-26在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù)(禁食）
[0188]表7化合物1-51在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù)(禁食）
[0190]結(jié)論:本發(fā)明化合物的藥代吸收良好，具有明顯的藥代吸收效果。
【主權(quán)項】
1. 式I結(jié)構(gòu)所示的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或異構(gòu)體： 其中，M基團任意選自氨原子、烷基、環(huán)烷基； Y代表N原子位置取代或者非取代的含一個氮原子的5~8元環(huán)，所述的取代基為-Xi基 團、-C〇2X2、-COx3 或者-CONHXS Xi選自取代或非取代的烷基、環(huán)烷基、芐基、芳基、雜芳基，所述的取代基任選自面素、= 氣甲基、氨基、烷基、硝基、乙醋基、丙締酸基或徑基的一種或幾種； X2選自取代或非取代的烷基、環(huán)烷基、含氮雜環(huán)烷基、芳基;X3選自取代或非取代的燒 基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基，其中X2和X3的取代基分別獨立地任選自烷基、面素、=氣甲基、氯 基、硝基、氨基、乙締基、[l，5-a]喀晚并2-甲基-4,5,6,7-四氨-化挫基、芳基和雜芳基； X4選自取代或非取代的烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基，所述的取代基任選自面素、氯基、= 氣甲基、氨基、硝基、芳基和雜芳基。2. 如權(quán)利要求1任意一項所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或異構(gòu)體，其特征在于 式I 中所述烷基分別獨立地選自Cl-6烷基;環(huán)烷基分別獨立地選自C3-8環(huán)烷基。3. 如權(quán)利要求1所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或異構(gòu)體，其特征在于式I中所述 的芳基分別獨立地選自5~6元單環(huán)芳基，雜芳基分別獨立地選自含氮或硫的5~6元單環(huán)雜 芳基。4. 如權(quán)利要求1所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或異構(gòu)體，其特征在于式I中所述 的芳基分別獨立地選自取代或非取代的苯基。5. 如權(quán)利要求1所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或異構(gòu)體，其特征在于式I中所述 的雜芳基分別獨立地選自取代或非取代的化晚基。6. 如權(quán)利要求1所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或異構(gòu)體，其特征在于式I中所述 的Y代表贓晚基。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或異構(gòu)體，其特征在于化合物 選自：8. -種藥物組合物，該藥物組合物包含治療有效量的游離形式或可藥用鹽形式的權(quán)利 要求1至7中任意一項所定義的化合物作為活性成分;一種或多種藥用載體物質(zhì)和/或稀釋 劑。9. 含有權(quán)利要求1所述的化合物的藥物組合物，在肺癌、結(jié)腸癌和卵巢癌抗腫瘤藥物中 的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種具有優(yōu)異的抗腫瘤活性的吡唑并吡啶類抗腫瘤化合物，該抗腫瘤化合物用式I表示，其中，M基團任意選自氫原子、烷基、環(huán)烷基；Y代表N原子位置取代或者非取代的含一個氮原子的5～8元環(huán)，所述的取代基為-X1基團、-CO2X2、-COX3或者-CONHX4；X1、X2、X3和X4定義與說明書中定義相同；本發(fā)明還提供式I所示抗腫瘤劑制備方法及其在肺癌、結(jié)腸癌和卵巢癌抗腫瘤藥物中的應(yīng)用,本發(fā)明化合物具有較好的抗腫瘤活性。
【IPC分類】A61P35/00, C07D471/04, C07D519/00
【公開號】CN105503865
【申請?zhí)枴緾N201510993200
【發(fā)明人】張孝清, 包金遠, 宋志春, 翟洪
【申請人】南京華威醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2015年12月24日