一種芽孢菌快速產(chǎn)孢的培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及一種芽孢菌快速產(chǎn)孢培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 益生菌的生存能力和穩(wěn)定性是生產(chǎn)者在技術(shù)和市場(chǎng)方面臨的兩大挑戰(zhàn)。由于芽孢 對(duì)多種不利環(huán)境有極大的抗性而成為近年來益生菌劑中一個(gè)研究熱點(diǎn)。芽孢的抗性與多種 因素有關(guān)，并通過芽孢這種獨(dú)特結(jié)構(gòu)來實(shí)現(xiàn)。
[0003] 芽孢是產(chǎn)芽孢菌在生長(zhǎng)發(fā)育后期在細(xì)胞內(nèi)形成的圓形或橢圓形、厚壁含水量低、 抗逆性強(qiáng)的休眠構(gòu)造。芽孢沒有新陳代謝，能經(jīng)受多種環(huán)境傷害，包括熱、紫外線、多種溶 劑、酸、堿、酚類、醛、酶和烷基化試劑的處理。
[0004] 作為微生態(tài)制劑中的微生物，在制劑過程中要經(jīng)過干燥、制粒、甚至是壓片等處理 過程；口服制劑還需耐胃酸、膽鹽；在貯存期內(nèi)需保持其活性；甚至一些益生菌劑的療效只 歸結(jié)為芽孢或它們?cè)谀c道外的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)。因此，通過干燥、制劑、與其它成分包括抗生素配 伍用藥和經(jīng)過胃環(huán)境后保持活性及在貯藏期內(nèi)有較高的穩(wěn)定性，是益生菌劑有效性的重要 指標(biāo)。但作為活菌制劑，要使其能夠真正在生產(chǎn)中大量應(yīng)用，必須解決產(chǎn)量、活性、穩(wěn)定性、 功能性、成本、生產(chǎn)工藝方法等多方面問題。由于芽孢菌的芽孢對(duì)上述不良物理、化學(xué)刺激 具有極強(qiáng)的抗性及其他益生菌不具備的生物功能，因此如何快速整齊的產(chǎn)生健康穩(wěn)定的芽 孢已成為亟待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種芽孢菌快速產(chǎn)孢培養(yǎng)基。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 芽孢菌快速產(chǎn)孢培養(yǎng)基，每升中包含玉米面、豆餅粉、豆柏粉中的一種或多種5~10g， 葡萄糖、蔗糖、麥芽糖中的一種或多種：T6g，魚粉2~8g，磷酸二氫鉀0.l~0.5g，硫酸亞鐵 0. 1~0. 5g，硫酸鎂l~5g，硫酸錳 0. 1~0. 5g，碳酸鈣 0. 1~0. 5g。
[0007] 進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供用所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)芽孢菌的方法。
[0008] 具體地，包括如下步驟：取復(fù)蘇好的菌液，按培養(yǎng)基體積1~5%的量接種到培養(yǎng) 基中，25~40°C，15(T200rpm培養(yǎng) 12~24h。
[0009] 應(yīng)用本發(fā)明的培養(yǎng)基進(jìn)行芽孢菌的培養(yǎng)，菌體生長(zhǎng)同步性好，狀態(tài)整齊，出孢時(shí)間 集中，可以縮短芽孢菌的產(chǎn)孢周期，在12h至18h就能夠出孢80~90%，且芽孢穩(wěn)定健康， 經(jīng)過85°C水浴lOmin仍能得十億以上的菌活數(shù)。該培養(yǎng)基配料簡(jiǎn)單，取材方便，配制工藝簡(jiǎn) 單易行，可操作性強(qiáng)，有利于芽孢菌的研究應(yīng)用及其后續(xù)菌粉的生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神 和實(shí)質(zhì)的前提下，對(duì)本發(fā)明所作的修飾或者替換，均屬于本發(fā)明的范疇 實(shí)施例1 玉米面5g，豆餅粉5g，葡萄糖3g，魚粉2g，磷酸二氫鉀0.lg，硫酸亞鐵0.lg，硫酸 鎂lg，硫酸猛〇. 2g，碳酸|丐0.lg，水1000mL，混合均勻，121°C，高溫濕熱滅菌20min。
[0011] 實(shí)施例2 玉米面5g，蔗糖2g，魚粉2g，磷酸二氫鉀0. 2g，硫酸亞鐵0. 2g，硫酸鎂3g，硫酸錳 〇.lg，碳酸1丐〇. 3g，水1000mL，混合均勻，121°C，高溫濕熱滅菌20min。
[0012] 實(shí)施例3 豆柏粉l〇g，蔗糖4g，魚粉2g，磷酸二氫鉀0.2g，硫酸亞鐵0.2g，硫酸鎂3g，硫酸錳 〇.lg，碳酸1丐〇. 3g，水1000mL，混合均勻，121°C，高溫濕熱滅菌20min。
[0013] 實(shí)施例4 玉米面5g，豆柏粉5g，蔗糖6g，麥芽糖3g，魚粉8g，磷酸二氫鉀0.3g，硫酸亞鐵 〇. 5g，硫酸鎂5g，硫酸猛0.lg，碳酸|丐0. 5g，水1000mL，混合均勻，121°C，高溫濕熱滅菌 20min〇
[0014] 實(shí)施例5 豆餅粉5g，豆柏粉5g，蔗糖2g，麥芽糖3g，魚粉6g，磷酸二氫鉀0.3g，硫酸亞鐵 〇. 5g，硫酸鎂5g，硫酸猛0.lg，碳酸|丐0. 5g，水1000mL，混合均勻，121°C，高溫濕熱滅菌 20min〇
[0015] 實(shí)施例6 玉米面2g，豆餅粉3g、豆柏粉3g，葡萄糖2g，蔗糖2g，麥芽糖lg，魚粉2g，磷酸二氫鉀 0. 2g，硫酸亞鐵0.lg，硫酸鎂lg，硫酸錳0.lg，碳酸鈣0.lg，水1000mL，混合均勻，121°C， 高溫濕熱滅菌20min。
[0016] 對(duì)比例1不同培養(yǎng)基，芽孢菌產(chǎn)孢時(shí)間及狀態(tài)對(duì)比試驗(yàn) 制備不同種類的芽孢菌培養(yǎng)基，用于對(duì)比試驗(yàn)，各實(shí)驗(yàn)組的具體成分如下： Ml:玉米淀粉 1.5g，葡萄糖 5g，尿素lg，K2HP04 3g，KH2P04 1.5g，MgS04 0 . 5g，酵母 膏 0.2g，F(xiàn)eCl2 0·lg，CaC03 0·lg，大豆柏 10g，3.08% 濃度的MnS04 溶液 0· 1%，水 1000mL， pH7. 0~7. 2。
[0017]M2:豆餅粉 50g，蔗糖 20g，（NH4)2S04 15g，檸檬酸三鈉 2. 5g，K2HP04 0· 3g，MgS04 0· 5g，F(xiàn)eS04 0· 005g，水 1000mL，pH7. 0~7. 2。
[0018]M3:牛肉膏3g，蛋白胨10g，葡萄糖10g，NaCl5g，玉米淀粉3g，3. 08%濃度的MnS04 溶液 〇· 1%，水lOOOmL，ρΗ7· 0~7· 2。
[0019]Μ4:葡萄糖 15g，玉米淀粉 2g，豆餅粉 30g，MnS04lg，ΚΗ2Ρ04 1· 5g，MgS04 0· 5g，酵 母膏 0· 2g，F(xiàn)eCl30.lg，CaC030.lg，水 1000mL，ρΗ7· 0~7· 2。
[0020]M5:玉米淀粉 40g，豆餅粉 3g，CaC03 3g，KH2P04 5g，檸檬酸 0· 25g，MgS04 2. 5g， FeS04 0· 25g，水 1000mL。
[0021] M6 :葡萄糖 20g，玉米淀粉 40g，蛋白胨lg，NaN03 10g，K2HP04 3g，MgS04lg，CaC03 0· 9g，水 1000mL。
[0022] M7 :玉米粉5g，酵母粉L5g，豆餅粉20g，尿素2. 5g，蛋白胨0· 75g，KH2P042. 5g， CaC03 0· 5g，MgS04 0· 35g，水 1000mL。
[0023] M8:玉米淀粉lg，葡萄糖 15g，豆餅粉 30g，酵母膏 0· 2g，KH2P04 1. 5g，K2HP04 3g， MnS04lg，MgS04 0· 5g，CaC03 0·lg，F(xiàn)eCL30.lg，水lOOOmL。
[0024] M9 :玉米面 50g，葡萄糖 8g，豆餅粉 20g，麩皮 20g，NaCl4g，水lOOOmL。
[0025] M10 :玉米面17g，葡萄糖10g，黃豆粉23g，麥芽糖10g，酵母膏5g，水lOOOmL。
[0026] Mil:玉米面 40g，豆餅粉 30g，酵母粉 5g，K2HP04 5g，MgS04 1. 5g，水lOOOmL。
[0027] M12 :玉米面 20g，豆餅粉 30g，麩皮 20g，檸檬酸鈉 5g，KH2P04 0· 3g，K2HP04lg，CaCl2 lg,水 1000mL〇
[0028] M13 :硫酸銨2g、碳酸鈣6g、魚粉4g、豆柏粉3g、葡萄糖7g、玉米粉15g、磷酸氫二鉀 〇· 2g、硫酸鎂(λ2g和硫酸錳(λ2g，水1000mL。
[0029] 實(shí)施例1至實(shí)施例6分別對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基分別為試驗(yàn)例1至試驗(yàn)例6。
[0030] 取復(fù)蘇好的枯草芽孢菌CGMCCNo. 4628菌液，按培養(yǎng)基體積2%的量接種到上述 培養(yǎng)基中，30°C，180rpm培養(yǎng)12~24h。過程中分別在12h，18h，24h顯微鏡觀察并記錄菌體 形態(tài)，并在24h發(fā)酵結(jié)束后取發(fā)酵液85°C水浴10min記錄芽孢活力結(jié)果見表1 : 表1 :芽孢生成時(shí)間及狀態(tài)
從表1的數(shù)據(jù)結(jié)果可以看出，相對(duì)比常用芽孢菌培養(yǎng)基，試驗(yàn)組的培養(yǎng)基在培養(yǎng)12h后，芽孢接近90%以上，縮短了產(chǎn)孢時(shí)間，大大的加快了出孢效率。經(jīng)過85°C水浴，芽孢存活 率有很大提1?，為進(jìn)一步的生廣及應(yīng)用做好準(zhǔn)備。
[0031] 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾 也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種芽孢菌快速產(chǎn)孢的培養(yǎng)基，其特征在于，每升培養(yǎng)基中包含玉米面、豆餅粉、豆 柏粉中的一種或多種5~10g，葡萄糖、蔗糖、麥芽糖中的一種或多種：T6g，魚粉2~8g，磷酸 二氫鉀0. 1~0. 5g，硫酸亞鐵0. 1~0. 5g，硫酸鎂l~5g，硫酸錳0. 1~0. 5g，碳酸鈣0. 1~0. 5g。2. -種使用權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)芽孢菌的方法。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：取復(fù)蘇好的菌液，按 培養(yǎng)基體積1~5%的量接種到培養(yǎng)基中，25~40°C，15(T200rpm培養(yǎng)12~24h。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種芽孢菌快速產(chǎn)孢的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基每升中包含玉米面、豆餅粉、豆粕粉中的一種或多種5~10g，葡萄糖、蔗糖、麥芽糖中的一種或多種3~6g，魚粉2~8g，磷酸二氫鉀0.1~0.5g，硫酸亞鐵0.1~0.5g，硫酸鎂1~5g，硫酸錳0.1~0.5g，碳酸鈣0.1~0.5g。應(yīng)用本發(fā)明的培養(yǎng)基進(jìn)行芽孢菌的培養(yǎng)，菌體生長(zhǎng)同步性好，狀態(tài)整齊，可以縮短芽孢菌的產(chǎn)孢周期，且芽孢穩(wěn)定健康。該培養(yǎng)基配料簡(jiǎn)單，取材方便，配制工藝簡(jiǎn)單易行，可操作性強(qiáng)，有利于芽孢菌的研究應(yīng)用及其后續(xù)菌粉的生產(chǎn)。
【IPC分類】C12R1/07, C12N1/20
【公開號(hào)】CN105462870
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410416569
【發(fā)明人】吳雅琨, 孫曉雯, 唐濤, 何增國(guó)
【申請(qǐng)人】北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司, 湖南大北農(nóng)農(nóng)業(yè)科技有限公司, 北京偉農(nóng)生物科技有限公司
【公開日】2016年4月6日
【申請(qǐng)日】2014年8月22日