一株具有吸附或降解腸毒素功能的乳酸菌及其應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設及一株具清腸毒素功能的乳酸菌及其應用，可應用于功能性食品及保健 食品，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 毒素是一種可W干預正常生理活動并破壞機體功能的物質(zhì)。由于外在環(huán)境的污 染、飲食的不健康等因素導致體內(nèi)產(chǎn)生毒素。人體內(nèi)在毒素有自由基、宿便、膽固醇、尿酸、 乳酸、水毒和渺血等，并且新陳代謝過程中產(chǎn)生內(nèi)生毒素如糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝素亂所產(chǎn) 生的毒素，腸內(nèi)宿便積聚產(chǎn)生的毒素。
[0003] 人體積存的毒素不僅破壞人體正常的消化吸收，同時毒素也會隨著血液循環(huán)到人 體各器官，從而損壞循環(huán)系統(tǒng)、過濾系統(tǒng)及消化系統(tǒng)。當人體內(nèi)的毒素積累到一定量的時 候，將嚴重威脅到人的身體健康。由于女性身體結(jié)構(gòu)的特殊性，健康就受到了更為嚴峻的挑 戰(zhàn)，會導致W下幾個方面的健康問題：體內(nèi)毒素過多積累，造成人體免疫力下，表現(xiàn)為降畏 寒怕冷、特別容易感冒；體內(nèi)渺血等毒素渺積，氣血不調(diào)表現(xiàn)為身體疼痛，手腳冰涼；毒素 釋放膠原蛋白酶和硬彈性蛋白酶，破壞人體酶系統(tǒng)平衡，導致肌膚失去彈性，導致皺紋、膚 色暗沉、肌膚老化，失去美麗；體內(nèi)致癌毒素圍積引發(fā)癌變，諸如乳腺痛、子宮癌等。排毒是 維護女性健康的必要課程，只有排出體內(nèi)毒素，才會獲得由內(nèi)而外的美麗。
[0004]目前，排毒養(yǎng)顏保健品按特點及主要功效成分可劃分為四類；第一類W大黃等致 瀉藥劑為主要功效成分，有腹痛、腹瀉等副作用，長期服用會導致腸功能素亂，如排毒養(yǎng)顏 膠囊。第二類W決明子、淮山藥和蘆菩等清潤類藥劑為主要功效成分，有一定副作用，長期 服同樣用會產(chǎn)生依賴性，如碧生源常潤茶。第=類W益生元為主要功效成分，不含任何藥物 成分，W純糧提煉的天然元素為功效成分，通便自然，不腹痛、不腹瀉、無依賴，但見效時間 長，如立健=清。第四類W益生菌為主要功效成分，無明顯副作用，如昂立1號R優(yōu)菌多顆 粒（女±型）（嗜酸乳桿菌）。排毒養(yǎng)顏保健品中前S類數(shù)量繁多，但只占據(jù)了很少的市場 份額，具北京、上海、杭州=地調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，排毒養(yǎng)顏該一款產(chǎn)品占據(jù)了排毒養(yǎng)顏類產(chǎn)品 的43%份額，處于主導地位的只有排毒養(yǎng)顏、昂立一號、腦白金等幾款產(chǎn)品。面對排毒養(yǎng)顏 類產(chǎn)品市場的主導產(chǎn)品少的局面，適時抓住商機，推出人體全方位"調(diào)理、養(yǎng)護、促排"新概 念的特色產(chǎn)品，真正解決排除體內(nèi)毒素，降低毒素引發(fā)的體弱多病、免疫低下、膚質(zhì)暗淡等 的發(fā)生，為中年女性朋友增添一抹諷色。
[0005] 本發(fā)明從現(xiàn)有的乳酸菌中初選的10株菌進行清除腸道毒素功能的篩選，篩選到 一株具清除腸道毒素性能的植物乳桿菌，分析其清毒素機理，并對其耐受性進行研究，為將 乳酸菌的清除腸道毒素作用應用于功能性食品或保健品的開發(fā)和生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明旨在篩選出一株具有吸附或降解腸毒素功能的乳酸 菌，分析清除腸毒素機理，并對其耐受性進行研究，為將乳酸菌的清除腸毒素作用應用于功 能性食品或保健品的開發(fā)和生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
[0007] 為了解決W上發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下，一株具有吸附或降解 腸毒素功能的乳酸菌，該菌株命名為植物乳桿菌化CC2-0126,其保藏編號為CCTCC N0:M2015128〇
[000引為了解決W上發(fā)明目的，本發(fā)明還采用了如下技術(shù)方案，一株具有吸附或降解腸 毒素功能的乳酸菌的應用，用于機體的腸毒素清除。
[0009] 作為優(yōu)選；將菌粉與載體混勻，直接飲用或制成功能性食品及保健品食用。
[0010] 為了解決W上發(fā)明目的，本發(fā)明還采用了如下技術(shù)方案，一種菌粉的制備方法：所 述菌粉是通過W下步驟得到的：
[0011] (i)菌種；選用植物乳桿菌MXC2-0126 ;
[0012] (ii)斜面培養(yǎng)；將凍干粉菌種接種于固體斜面培養(yǎng)基上，在30~40°C培養(yǎng)22~ 2化；
[0013] (化）一級種子培養(yǎng)：取培養(yǎng)好的斜面，在無菌條件下接種于種子液體培養(yǎng)基中， 在30~40°C條件下，靜置培養(yǎng)12~16h，制得一級種子液；
[0014] (iv)擴大培養(yǎng)：按2~10%的接種量，將一級種子液接種于種子液體培養(yǎng)基中， 在30~40°C條件下，靜置培養(yǎng)12~2化，制得二級種子液；
[0015] (V)發(fā)酵罐培養(yǎng)；按1~5%的接種量，將二級種子液接于液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在 30~40°C條件下，靜置培養(yǎng)12~2化；
[0016] (Vi)收集發(fā)酵產(chǎn)物；待步驟（V)之發(fā)酵液黏度達12000~15000CP時，收集發(fā) 酵液；
[0017] (Vii)發(fā)酵結(jié)束后，立即將發(fā)酵液離屯、并用清水清洗，如此反復2~3遍后冷凍干 燥，粉碎，即為菌粉成品；或；發(fā)酵結(jié)束后，立即噴霧干燥，即得菌粉成品。
[001引作為優(yōu)選：所述步驟（化）、（iv)中，種子液體培養(yǎng)基配方為；葡萄糖20g/L、蛋 白腺lOg/L、牛肉膏l(xiāng)Og/L、酵母膏5g/L，使用時，調(diào)節(jié)抑至5. 5~6. 5，115°C條件下滅菌 20min。
[0019] 作為優(yōu)選：所述步驟（ii)中，固體斜面培養(yǎng)基為上述種子液體培養(yǎng)基中添加 1.5~2.0 %的瓊脂粉。
[0020] 作為優(yōu)選：所述步驟（V)中，液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為；葡萄糖20g/L、蛋白腺lOg/ L、牛肉膏l(xiāng)Og/L、酵母膏5g/L、己酸鋼5g/L、巧樣酸錠2g/L、磯酸氨二鐘5g/L、硫酸儀0. 5g/ L、硫酸鋪0. 2g/L、吐溫-801血/L，使用時，調(diào)節(jié)抑至5. 5~6. 5。
[0021] 本發(fā)明的有益效果如下：一種清除腸道毒素微生態(tài)制劑，是由W下原料組成 的：菌粉和益生元；所述菌為可用于清除腸道毒素的乳桿菌，該株菌株命名為植物乳桿菌 BLCC2-〇126(LactobacillusplantarumE5LCC2-0126)，已于 2015年 3 月 18 日保藏于中國 典型培養(yǎng)物保藏中屯、，其保藏編號為CCTCCN0:M2015128。使用時，直接食用或沖服飲用即 可。本發(fā)明的植物乳桿菌是從眾多乳酸菌中篩選得到的，其不僅具清除腸道毒素活性，還可 W具有良好的耐酸耐膽鹽特性，可增強機體免疫力。
【附圖說明】
[0022] 圖1為植物乳桿顯微菌形態(tài)圖。
【具體實施方式】
[0023] 下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，該些實施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人 員可W對本發(fā)明作各種改動或修改，該些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定 的范圍。
[0024] 如圖1所示，所述乳酸菌的菌種生物學特性如下；該菌種的細胞大小為（0.6ym~ 0.8ym)X(1. 5ym~4. 5ym)，桿狀，無鞭毛，不產(chǎn)芽抱，單個排列；該菌種能在MRS瓊脂培 養(yǎng)基上生長，菌落呈乳白色，圓形，規(guī)則，中央突起，表面光滑，質(zhì)地均勻，挑取菌體時具一定 黏性；該菌種屬于同型發(fā)酵乳酸菌，能夠發(fā)酵果糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、庶糖；接觸酶試 驗、淀粉水解試驗、己酸氧化試驗、明膠液化試驗、硝酸鹽還原試驗甲基紅反應均為陰性；最 適生長溫度為30~37°C，兼性厭氧，在抑值4. 5~9. 5生長，最適抑值6. 0左右。
[0025] 實施例1具有清除腸毒素功能乳酸菌的篩選
[0026] 1.1乳酸菌的培養(yǎng)及發(fā)酵液的制備
[0027] 乳酸菌在MRS液體培養(yǎng)基中37°C培養(yǎng)2化，6000r/min，4°C離屯、lOmin，收集上清液 即為發(fā)酵液。
[002引 1.2乳酸菌在不同毒素及不同濃度中的耐受能力測定
[0029] 吸取2mL嘲噪、苯酪、對甲酪母液與lOOmLMRS培養(yǎng)基中，配制成毒素濃度分別為 0. 1、0. 1、0. 5mg/mL的培養(yǎng)基，接種乳酸菌2化發(fā)酵液（2% )于12K2化、3化取樣活菌計數(shù)， W不含毒素的培養(yǎng)基發(fā)酵液為對照，計算乳酸菌的存活率。母液制備；苯酪（60度溫裕由結(jié) 晶狀態(tài)成為液體）、對甲酪，分別稱取0. 05g、0. 25g溶于lOmL蒸饋水，121°C滅菌15min，即 為5111徑/111^25111徑/1111^母液；嘲噪0.05徑溶于70%酒精，充分溶解后0.22微米濾膜過濾除菌， 備用，母液濃度5mg/mL。
[0030] 1. 3乳酸菌清除腸道毒素的功效驗證
[0031] 選用老齡小鼠，經(jīng)口灌胃受試樣品，依據(jù)《保健品功能評價程序與檢驗手冊》，在實 驗結(jié)束時測定糞樣LPS、嘲噪、苯酪、對甲酪含量，驗證乳酸菌的清除腸道毒素的作用。