Myoz1基因及其表達(dá)產(chǎn)物在帕金森病診治中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及人MYOZ1基因在帕金森病診斷、治療中的 用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 帕金森病是一種常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，多見(jiàn)于老年人，平均發(fā)病年齡為60歲 左右。我國(guó)65歲以上人群帕金森的患病率大約是1. 7%。大部分的帕金森患者為散發(fā)病 例，男性稍多于女性。該病最主要的病理改變是中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡，由此 引起紋狀體多巴胺含量顯著減少而致病。帕金森病是一種慢性進(jìn)展性疾病，具有高度異質(zhì) 性，目前尚不能治愈。嚴(yán)重者可全身僵硬，生活不能自理，甚至長(zhǎng)期臥床，最終多死于肺炎等 并發(fā)癥。
[0003] 帕金森病的診斷主要依靠病史、臨床癥狀及體征。由于缺乏疾病特異性生物標(biāo)志 物和有效的實(shí)驗(yàn)室輔助檢測(cè)方法，所以帕金森病在臨床前期無(wú)法檢測(cè)。當(dāng)該病發(fā)展到臨床 期時(shí)，患者中腦多巴胺神經(jīng)元蛻變已達(dá)70%。因此早診早治是目前改善帕金森病患者長(zhǎng)期 生存的最佳途徑。帕金森病的輔助檢測(cè)方法如99mTc-TRODAT-l等作為示蹤劑行多巴胺轉(zhuǎn) 運(yùn)體功能顯像可支持診斷，但是檢查費(fèi)用較貴，難以在臨床大規(guī)模地推廣。因此尋找一種特 異和敏感的診斷方法愈發(fā)重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種可用于帕金森病診斷的分 子標(biāo)志物MYOZ1基因。相比傳統(tǒng)的帕金森病的診斷方法，使用基因標(biāo)志物來(lái)診斷帕金森病 具有及時(shí)性、特異性和靈敏性，從而使患者在早期就能知曉疾病風(fēng)險(xiǎn)，針對(duì)風(fēng)險(xiǎn)高低，采取 相應(yīng)的預(yù)防和治療措施。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0006] 本發(fā)明提供了一種人MYOZ1基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備診斷帕金森病的產(chǎn)品中的 應(yīng)用。
[0007] 進(jìn)一步，上面所提到的診斷產(chǎn)品包括：通過(guò)RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測(cè)、原位 雜交或芯片檢測(cè)MYOZ1基因及其表達(dá)產(chǎn)物的表達(dá)水平以診斷帕金森病的產(chǎn)品。
[0008] 進(jìn)一步，所述用RT-PCR診斷帕金森病的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增MYOZ1基因的 引物；所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷帕金森病的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增MYOZ1基因的引物； 所述用免疫檢測(cè)診斷帕金森病的產(chǎn)品包括：與MYOZ1蛋白特異性結(jié)合的抗體；所述用原位 雜交診斷帕金森病的產(chǎn)品包括：與MYOZ1基因的核酸序列雜交的探針；所述用芯片診斷帕 金森病的產(chǎn)品包括：蛋白質(zhì)芯片和基因芯片；其中，蛋白質(zhì)芯片包括與MYOZ1蛋白特異性結(jié) 合的抗體，基因芯片包括與MYOZ1基因的核酸序列雜交的探針。
[0009] 優(yōu)選地，所述產(chǎn)品包括芯片、試劑盒。
[0010] 本發(fā)明還提供了人MYOZ1基因在高通量測(cè)序平臺(tái)中的應(yīng)用。隨著高通量測(cè)序技 術(shù)的發(fā)展，構(gòu)建人的基因表達(dá)譜將成為十分便捷的工作。通過(guò)對(duì)比疾病患者和正常人群的 基因表達(dá)譜，容易分析出哪個(gè)基因的異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測(cè)序中獲知人MY0Z1 基因的表達(dá)異常與帕金森病相關(guān)也屬于人MY0Z1基因的用途，同樣在本發(fā)明的保護(hù)范圍之 內(nèi)。
[0011] 本發(fā)明還提供了一種診斷帕金森病的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括但不限于芯片、試劑盒。
[0012] 其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白質(zhì)芯片；所述基因芯片包括固相載體以及固定 在固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包括用于檢測(cè)MYOZ1基因轉(zhuǎn)錄水平的針 對(duì)MYOZ1基因的寡核苷酸探針；所述蛋白質(zhì)芯片包括固相載體以及固定在固相載體上的 MYOZ1蛋白的特異性抗體。所述基因芯片可用于檢測(cè)包括人MYOZ1基因在內(nèi)的多個(gè)基因（例 如與帕金森病相關(guān)的多個(gè)基因）的表達(dá)水平。所述蛋白質(zhì)芯片可用于檢測(cè)包括人MYOZ1蛋 白在內(nèi)的多個(gè)蛋白質(zhì)（例如與帕金森病相關(guān)的多個(gè)蛋白質(zhì)）的表達(dá)水平。通過(guò)將多個(gè)帕金 森病的標(biāo)志物同時(shí)檢測(cè)，可大大提高帕金森診斷的準(zhǔn)確率。
[0013] 其中，所述試劑盒包括基因檢測(cè)試劑盒和蛋白免疫檢測(cè)試劑盒；所述基因檢測(cè)試 劑盒包括用于檢測(cè)MYOZ1基因轉(zhuǎn)錄水平的試劑；所述蛋白免疫檢測(cè)試劑盒包括MYOZ1蛋白 的特異性抗體。
[0014] 進(jìn)一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交或芯片方 法檢測(cè)MYOZ1基因表達(dá)水平的試劑。優(yōu)選地，所述試劑包括針對(duì)MYOZ1基因的引物和/或 探針。根據(jù)MYOZ1核苷酸序列信息容易設(shè)計(jì)出可以用于檢測(cè)MYOZ1基因表達(dá)水平的引物和 探針。
[0015] 進(jìn)一步，與MYOZ1基因的核酸序列雜交的探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、 PNA或其它衍生物。所述探針的長(zhǎng)度沒(méi)有限制，只要能完成特異性雜交、與目的核苷酸序列 特異性結(jié)合，任何長(zhǎng)度都可以。所述探針的長(zhǎng)度可短至25、20、15、13或10個(gè)堿基長(zhǎng)度。同 樣，所述探針的長(zhǎng)度可長(zhǎng)至60、80、100、150、300個(gè)堿基對(duì)或更長(zhǎng)，甚至整個(gè)基因。由于不同 的探針長(zhǎng)度對(duì)雜交效率、信號(hào)特異性有不同的影響，所述探針的長(zhǎng)度通常至少是14個(gè)堿基 對(duì)，最長(zhǎng)一般不超過(guò)30個(gè)堿基對(duì)，與目的核苷酸序列互補(bǔ)的長(zhǎng)度以15-25個(gè)堿基對(duì)最佳。所 述探針自身互補(bǔ)序列最好少于4個(gè)堿基對(duì)，以免影響雜交效率。
[0016] 進(jìn)一步，所述MYOZ1蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述MYOZ1 蛋白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾（例如，嵌合抗體、scFv、 Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能夠保留與MYOZ1蛋白的結(jié)合能力即可。用于蛋白質(zhì) 水平的抗體的制備是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本發(fā)明可以使用任何方法來(lái)制備所述抗 體。
[0017] 本發(fā)明還提供了人MYOZ1基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備治療帕金森病的藥物中的應(yīng) 用。
[0018] 進(jìn)一步，所述藥物的主要活性成分包括抑制MYOZ1基因表達(dá)的物質(zhì)、影響MYOZ1基 因表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)、和/或抑制MYOZ1基因表達(dá)產(chǎn)物活性的物質(zhì)。
[0019] 進(jìn)一步，本發(fā)明所述的治療帕金森病的藥物包括：通過(guò)干擾RNA抑制MYOZ1基因表 達(dá)的雙鏈核糖核酸，或基于MYOZ1抗原蛋白的腫瘤疫苗、或用于抑制MYOZ1蛋白活性的蛋白 質(zhì)。
[0020] 本發(fā)明還提供了一種用于治療帕金森病的藥物組合物，所述藥物組合物包含 MY0Z1基因和/或其表達(dá)產(chǎn)物抑制劑。所述抑制劑包括抑制MY0Z1基因表達(dá)的物質(zhì)、抑制MY0Z1基因表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定性的物質(zhì)、和/或抑制MY0Z1基因表達(dá)產(chǎn)物活性的物質(zhì)。
[0021] 進(jìn)一步，本發(fā)明所述抑制劑包括：通過(guò)干擾RNA抑制MY0Z1基因表達(dá)的雙鏈核糖核 酸，或基于MY0Z1抗原蛋白的腫瘤疫苗、或用于抑制MY0Z1蛋白活性的蛋白質(zhì)。
[0022] 在本發(fā)明中，所述RNA干擾（RNAinterference，RNAi)是指內(nèi)源性或外源性雙鏈 RNA(double-strandedRNA，dsRNA)介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)mRNA發(fā)生特異性降解，從而導(dǎo)致革E1基因 的表達(dá)沉默，產(chǎn)生相應(yīng)的功能表型缺失的現(xiàn)象。RNAi技術(shù)是一種典型的負(fù)調(diào)控機(jī)制，使用該 技術(shù)可以特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達(dá)，該技術(shù)已被廣泛用于探索基因功能、基因治 療及新藥開(kāi)發(fā)領(lǐng)域。以細(xì)胞為基礎(chǔ)的RNAi篩選在功能基因?qū)W研宄方面具有許多優(yōu)勢(shì)，主要 表現(xiàn)在大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型都能使用RNAi方法，并且相對(duì)較容易下調(diào)或沉默目的基因的表達(dá)。
[0023] 為了確保MY0Z1基因能夠被高效剔除或沉默，根據(jù)MY0Z1基因的mRNA序列設(shè)計(jì) 了siRNA特異性片段。siRNA的設(shè)計(jì)根據(jù)已發(fā)表的通用設(shè)計(jì)原則（Elbashiret.al2001， Schwarzet.al2003,Khvorovaet.al2003,Reynoldset.al2004,Hsiehet.al2004, Ui-Teiet.al2004)，通過(guò)在線工具完成設(shè)計(jì)，該在線工具為：siRNASelectionProgram ofWhiteheadInstitute(BingbingYuanet.al2004,http://jura.wi.mit.edu/bi°C/siRNAext/)和BL°CK-iTTMRNAiDesigneroflNVITROGEN(winnerofthe 2004Frost&Sul1ivanExcell