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用低劑量mptp建立雄性獼猴慢性帕金森病模型的方法

文檔序號(hào):349805閱讀:485來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:用低劑量mptp建立雄性獼猴慢性帕金森病模型的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種建立帕金森病靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型的方法。
背景技術(shù)
帕金森病(PD)是僅次于阿爾茨海默病的第二大中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。該病 一般在50歲至65歲開始發(fā)病,發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而逐漸增加,60歲發(fā)病率約為1%。,70歲 發(fā)病率達(dá)3%。至5%。。帕金森病早期主要表現(xiàn)包括靜止性震顫、肌強(qiáng)直、行動(dòng)緩慢、動(dòng)作啟動(dòng) 困難以及姿勢(shì)異常等。靜止性震顫即患者的手或臂不受控制地發(fā)抖,在休息時(shí)出現(xiàn)或情緒 緊張時(shí)加重;其他早期癥狀包括開始活動(dòng)時(shí)感到困難,其后雙臂和雙腿經(jīng)常震顫,上肢不能 作精細(xì)運(yùn)動(dòng),乃致日常生活不能自理,如穿衣、洗漱感覺(jué)困難。帕金森病還常伴有抑郁、焦 慮、肢體酸痛不適、多汗、流涎等。因此,帕金森病給家庭社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。
當(dāng)基底節(jié)中多巴胺(dopamine,DA)含量減少70%時(shí),才開始出現(xiàn)臨床癥狀。因此, 去醫(yī)院就診的帕金森病患者腦內(nèi)已出現(xiàn)不可逆的損傷。要在疾病早期進(jìn)行診斷,建立一個(gè) 合適的動(dòng)物模型顯得猶為重要。幾十年來(lái),研究者建立了多種多樣的帕金森病動(dòng)物模型。從 最早的利血平模型、甲基苯丙胺模型到6-羥多巴模型和1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氫 吡啶模型(MPTP模型)。最近發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)的給予農(nóng)藥殺蟲劑魚藤酮能在大鼠模型上產(chǎn)生明確 的PD癥狀。 利血平和甲基苯丙胺都是通過(guò)耗竭腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)使動(dòng)物出現(xiàn)骨骼肌僵硬、 震顫、舔毛等與帕金森癥相似的癥狀。這兩種模型都屬于急性損傷模型,不能完全復(fù)制原發(fā) 性帕金森病的病理變化。并且實(shí)驗(yàn)對(duì)象為嚙齒類動(dòng)物,不能為人類帕金森病提供很好的信息。 6-0HDA與DA有很強(qiáng)的化學(xué)相似性,因此能在兒茶酚胺能神經(jīng)元內(nèi)特異性聚集,對(duì) 大鼠、小鼠、貓和靈長(zhǎng)類動(dòng)物均有神經(jīng)毒性。6-0HDA(8 12iig)注射于紋狀體或內(nèi)側(cè)前腦 束,可以造成大鼠的運(yùn)動(dòng)平衡障礙,如軀體彎曲、運(yùn)動(dòng)不能、肌強(qiáng)直等。隨著病程延長(zhǎng),動(dòng)物 會(huì)出現(xiàn)吞咽和呼吸困難。6-0HDA單側(cè)損毀制備的PD動(dòng)物模型在病理、生化方面的表現(xiàn)同 人類PD有不少相似之處,如黑質(zhì)DA能神經(jīng)元變性、死亡、缺失,膠質(zhì)細(xì)胞增生,黑質(zhì)和紋狀 體TH活性及DA含量降低。另一優(yōu)點(diǎn)是在系統(tǒng)注射DA受體激動(dòng)劑L-D0PA或促DA釋放藥 物后,可導(dǎo)致不對(duì)稱的、能夠定量化的異常運(yùn)動(dòng)行為。因此,藥物誘發(fā)的旋轉(zhuǎn)行為的量化是 評(píng)價(jià)抗PD藥物療效穩(wěn)定可靠的指標(biāo)。缺點(diǎn)是該模型仍屬急性損傷模型,不能模擬PD慢性 進(jìn)行性病程特點(diǎn),不能用于長(zhǎng)期神經(jīng)保護(hù)研究中。病理方面也與人類PD有一定差異,如無(wú) 細(xì)胞內(nèi)包涵體Lewy小體。而且6-0HDA不能透過(guò)血腦屏障,只能通過(guò)腦內(nèi)直接給藥才能造 成黑質(zhì)神經(jīng)元的損傷。這樣,為在靈長(zhǎng)類上的應(yīng)用增加了一定的難度。
魚藤酮是一種從植物中提取的天然有機(jī)殺蟲劑,具有高親脂性,容易透過(guò)血腦屏 障,對(duì)腦組織線粒體復(fù)合酶I具有很強(qiáng)的抑制作用。制備模型的神經(jīng)毒素來(lái)源于自然環(huán)境, 其慢性暴露的制作方式能較好地模擬PD發(fā)病過(guò)程,在病理、生化、發(fā)病機(jī)制、行為改變等方
3面均能較好地模擬人類PD的相關(guān)特征。由于產(chǎn)生類似Lewy小體的a -sy皿clein陽(yáng)性包 涵體,它成為研究Lewy小體形成的分子機(jī)制的有效工具。該模型對(duì)研究環(huán)境因素與PD病 因及發(fā)病機(jī)制之間的關(guān)系具有獨(dú)特的價(jià)值。其慢性、進(jìn)行性病程特征還特別適合PD的神經(jīng) 保護(hù)治療研究。缺點(diǎn)是魚藤酮因?yàn)槠溆H脂性,可以進(jìn)入所有細(xì)胞中,并不選擇性的累積在DA 能神經(jīng)元中。同時(shí),制備過(guò)程費(fèi)時(shí)、費(fèi)力,不同動(dòng)物個(gè)體的制備效果不一 (有些動(dòng)物無(wú)明顯 毒性效應(yīng))。 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6_四氫吡啶(MPTP)是一種高親脂性物質(zhì),給藥后能夠迅 速透過(guò)血腦屏障并被星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)單胺氧化酶B(MAO-B)轉(zhuǎn)化為1-甲基4-苯基吡啶離 子(MPP+)。而后,特異性的在DA能神經(jīng)元內(nèi)濃集。MPTP的毒性效應(yīng)存在種屬差異,人和靈 長(zhǎng)類動(dòng)物最為敏感,貓和小鼠次之,而大鼠、豚鼠對(duì)其有明顯的抵抗力。這種種屬敏感性差 異的原因不明,可能與MPTP進(jìn)入體內(nèi)后的分布、代謝及動(dòng)物體內(nèi)MA0-B的活性、抗氧化反應(yīng) 能力的差異等有關(guān)。目前,利用MPTP制備的帕金森病模型有①雙側(cè)損毀模型成年恒河 猴(獼猴、松鼠猴亦可),麻醉后,腹腔注射MPTP 2-4mg/Kg,每日一次,共4次,或者按體重 0. 35-0. 5mg/Kg下肢靜脈注射MPTP,第1日3次,第2、3日每日2次。在2_4次注射后出現(xiàn) 短暫海洛因樣急性反應(yīng),表現(xiàn)為仰臥、瞌睡、間歇性閉眼、動(dòng)作減少、重復(fù)點(diǎn)頭、四肢伸展、頭 向后仰并向一側(cè)旋轉(zhuǎn)。 一周后出現(xiàn)類似于人類的PD癥狀,如眨眼少、兩眼凝視、動(dòng)作減少、 動(dòng)作遲緩、肢體發(fā)僵、震顫、屈曲姿勢(shì)、發(fā)音、吞咽困難等。②單側(cè)損毀模型恒河猴,按體重 0. 5-0. 7mg/Kg —側(cè)頸動(dòng)脈注射MPTP,一周后出現(xiàn)損毀對(duì)側(cè)肢體活動(dòng)減少,以及自發(fā)性向損 毀側(cè)轉(zhuǎn)身。腹腔注射苯丙胺誘發(fā)向損毀側(cè)快速旋轉(zhuǎn),注射阿樸嗎啡后向損毀對(duì)側(cè)快速旋轉(zhuǎn)。 提高劑量至0. 8mg/Kg則可制成偏側(cè)為主的雙側(cè)PD模型。③MPTP對(duì)小鼠有DA能神經(jīng)毒性, 但所需劑量要比損害猴DA能神經(jīng)元的劑量高得多。 一般選10-12周齡,體重25-30g成年 C57/BL褐鼠,按體重30-4mg/Kg腹腔注射MPTP, 一天一次,連續(xù)7次。于第6_7次注射后出 現(xiàn)暫時(shí)性(2-3h)軀干震顫、豎毛、尾巴過(guò)伸、動(dòng)作減少及爬桿試驗(yàn)障礙。④成年家貓,按體 重5mg/Kg腹腔注射MPTP,連續(xù)5天。于第2次注射后可見(jiàn)短暫海洛因樣毒性反應(yīng),如瞳孔 散大、流淚、流涎、凝視、活動(dòng)異常等。在首次注射后次日起逐漸表現(xiàn)出表情呆滯、兩眼凝視、 瞬目減少、低頭弓背、發(fā)音低弱、活動(dòng)減少、動(dòng)作笨拙、進(jìn)食困難等PD癥狀。此模型行為反應(yīng) 持續(xù)約1-2周,較小鼠PD模型行為反應(yīng)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)且穩(wěn)定。MPTP的動(dòng)物模型不僅有PD癥 狀,也有DA能神經(jīng)元選擇性損傷的病理改變,因而被廣泛用于PD發(fā)病機(jī)制、診斷及治療方 面的研究工作中。但是,目前利用MPTP建立的靈長(zhǎng)類帕金森病模型,主要以急性模型為主, 并不能模型人類帕金森病的慢性進(jìn)程。
技術(shù)方案 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足,提供一種帕金森病靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型 的建立方法,即用低劑量MPTP建立雄性獼猴慢性帕金森病模型的方法,所建立的模型能模 擬人類帕金森病慢性進(jìn)程。 MPTP誘導(dǎo)的帕金森病已為社會(huì)所公認(rèn)。利用MPTP制備的靈長(zhǎng)類PD模型,在癥狀、 體征、病理、生化改變方面均與人類PD相似,而且較穩(wěn)定,對(duì)抗PD藥物的反應(yīng)(包括副作 用)也同人類相似。利用MPTP誘導(dǎo)出的靈長(zhǎng)類PD癥狀可以用PD患者的量表進(jìn)行定量研 究。這是目前所建立的最能反映人類PD特征的動(dòng)物模型。靈長(zhǎng)類動(dòng)物在進(jìn)化、組織結(jié)構(gòu)、 免疫、生理和代謝等方面與人類高度近似,尤其是在神經(jīng)系統(tǒng)方面,靈長(zhǎng)類動(dòng)物是許多人類
4特有疾病唯一或最合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。目前的帕金森病動(dòng)物模型可分為急性和慢性模 型。從最終結(jié)果上來(lái)看,兩種模型均能模擬出人類帕金森病發(fā)展到后期的生理、生化改變。 但是,人類的帕金森病是在各種因素作用下逐漸表現(xiàn)出病征的,病程能持續(xù)十幾年甚至幾 十年。因此,要模擬人類帕金森病,慢性模型具有更大的優(yōu)勢(shì)。通過(guò)低劑量長(zhǎng)期給藥MPTP 建立的慢性模型可以幫助闡明發(fā)病的機(jī)理、發(fā)現(xiàn)疾病在病情改變中的各種特征表現(xiàn)、可以 在模型建立過(guò)程中對(duì)各種可能的治療方法進(jìn)行檢測(cè)。 為了建立可靠的慢性靈長(zhǎng)類帕金森病模型,我們通過(guò)低劑量長(zhǎng)期肌肉給藥MPTP 來(lái)建立雄性獼猴慢性帕金森病模型。該模型主要通過(guò)行為觀察、MRI觀察腦內(nèi)結(jié)構(gòu)變化、 SPECT觀察腦內(nèi)功能變化來(lái)確定模型的有效性。
本發(fā)明方法按以下步驟進(jìn)行 1、給雄性獼猴肌肉注射MPTP三個(gè)月或三個(gè)月以上的時(shí)間,每隔2 3天注射1次, 每次0. 2 0. 4mg/kg,在注射MPTP的期間,對(duì)獼猴每隔1 2天做一次行為觀察,注射持續(xù) 到獼猴出現(xiàn)震顫癥狀為止; 2、該獼猴在注射MPTP以前進(jìn)行MRI掃描,得到正常期的圖譜,對(duì)步驟1注射MPTP 過(guò)程中的獼猴每20 40天進(jìn)行一次MRI檢測(cè),其結(jié)果和正常期的圖譜進(jìn)行對(duì)比,以觀察腦 內(nèi)黑質(zhì)區(qū)的改變進(jìn)程; 3、該獼猴在注射MPTP以前進(jìn)行SPECT掃描,得到正常期的圖譜,對(duì)步驟1注射 MPTP過(guò)程中的獼猴每20 40天進(jìn)行一次SPECT檢測(cè),其結(jié)果和正常期的圖譜進(jìn)行對(duì)比,以 觀察紋狀體成像上的改變進(jìn)程; 4、注射過(guò)MPTP的獼猴,如果行為觀察猴出現(xiàn)震顫,并且在MRI成像上觀察到腦內(nèi) 黑質(zhì)區(qū)有神經(jīng)元缺損,同時(shí)在SPECT成像上顯示紋狀體有神經(jīng)元缺損,則表明該獼猴就是 成功建立的模型。 本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)化的方法是,行為觀察時(shí)根據(jù)國(guó)際通用的Kurlan帕金森氏病量 表(見(jiàn)下表1)做行為評(píng)分,以評(píng)價(jià)獼猴帕金森病的嚴(yán)重程度,從而滿足模型的使用者的不 同要求;進(jìn)行SPECT掃描時(shí)用锝的同位素("Tc)標(biāo)記腦內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體。行為觀察最好用錄象 法。 表l _ 帕金森相關(guān)癥狀
1.震顫
0-無(wú) 1-輕微的、低幅度的震顫,間斷性的出現(xiàn) 2_中等程度_中等幅度的震顫,在大多數(shù)時(shí)間都出現(xiàn) 3-嚴(yán)重的-大幅度的震顫,幾乎是持續(xù)性且干擾了正常的功能 2.身體姿態(tài) 0-正常,直立的 l-彎腰、屈背 2-面部貼近地面(腳面) 3.步態(tài)
0-正常;流暢的使用四肢
1-行走減慢 2_顯著的行走受損;雖然可以移動(dòng)但是速度很慢并且吃力 3_移動(dòng)的能力嚴(yán)重降低(受損) 4-不能行走 4.運(yùn)動(dòng)徐緩(概括性的) O-正常的速度以及靈巧的運(yùn)動(dòng) 1-所有的運(yùn)動(dòng)都表現(xiàn)出輕微的運(yùn)動(dòng)減慢 2-中等程度的運(yùn)動(dòng)減慢 3-嚴(yán)重的運(yùn)動(dòng)減慢;在發(fā)起維持運(yùn)動(dòng)中非常緩慢的、吃力的、困難 [OO" ] 4-基本上沒(méi)有運(yùn)動(dòng)(運(yùn)動(dòng)不能)
5.平衡
3-正常 4-在站起或運(yùn)動(dòng)的過(guò)程中經(jīng)常失去平衡,靠抓住籠子來(lái)支撐 5-嚴(yán)重失去平衡 6.整體運(yùn)動(dòng)技能(上肢,左/右)) 0-正常;可以在運(yùn)動(dòng)和活動(dòng)中大范圍的使用上肢 1-可觀察到的上肢使用的減少,但是仍然可以經(jīng)常的使用 2-上肢使用減少,幾乎不用 3-無(wú)法或拒絕使用上肢(包括行走) 7.防御性反應(yīng)(對(duì)實(shí)驗(yàn)人員防御性的和/或者進(jìn)攻性的反應(yīng))
0-正常;適度的反應(yīng) 1-可觀察到的損傷;緩慢的、不正常的或者短暫的反應(yīng)
2-對(duì)挑釁很少做出反應(yīng)或者沒(méi)有反應(yīng) _ 帕金森病患者的腦內(nèi)由于神經(jīng)元的死亡,導(dǎo)致鐵沉積,此現(xiàn)象表現(xiàn)在MRI上為黑 色沉積。用锝的同位素("Tc)標(biāo)記腦內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體,通過(guò)檢測(cè)腦內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體的含量來(lái)判斷 DA神經(jīng)元的缺失程度。若腦內(nèi)DA神經(jīng)元死亡,DA轉(zhuǎn)運(yùn)體變會(huì)及時(shí)的減少,與"Tc的結(jié)合率 下降,在SPECT成像上顯示紋狀體顏色變淺。 本發(fā)明方法第一次將行為指標(biāo)、MRI、SPECT三種方法結(jié)合,用于帕金森病動(dòng)物模型 的建立。 本發(fā)明積極效果本方法成功建立了慢性靈長(zhǎng)類帕金森病模型,所建立的動(dòng)物模 型能模擬人類帕金森病慢性進(jìn)程。模型不僅有PD癥狀,也有DA能神經(jīng)元選擇性損傷的病 理改變,可廣泛用于PD發(fā)病機(jī)制、診斷及治療方面的研究工作中。 本研究還發(fā)現(xiàn)帕金森猴腦內(nèi)黑質(zhì)鐵沉積明顯,表明黑質(zhì)損傷。根據(jù)鐵沉積的面積 等,可以計(jì)算出黑質(zhì)損傷程度。這點(diǎn)可為研究人類帕金森病提供有效的診斷手段。
本研究利用SPECT發(fā)現(xiàn)帕金森猴腦內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體減少,表明黑質(zhì)神經(jīng)元含量減少。 根據(jù)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體減少的量,可以定量的計(jì)算出黑質(zhì)神經(jīng)元的缺失數(shù)。這點(diǎn)也可以為人類帕金 森病的診斷分級(jí)提供有用的信息。
本方法最大的優(yōu)點(diǎn)是,模型猴出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)癥狀需要數(shù)個(gè)月的時(shí)間,在這幾個(gè)月內(nèi),研 究者可以進(jìn)行各種研究。例如,摸索帕金森病的發(fā)病原因、影響因素等;摸索運(yùn)動(dòng)癥狀出現(xiàn) 前,是否有其他方面的改變。這可以為人類帕金森病的早期預(yù)防提供非常有用的信息。


圖1表明實(shí)施例1中模型猴的癥狀隨時(shí)間的增加而加重
圖2為實(shí)施例1中模型猴與正常猴的MRI掃描結(jié)果對(duì)比。
圖3為實(shí)施例1中模型猴與正常猴的SPECT掃描結(jié)果對(duì)比。
圖4表明實(shí)施例2中模型猴的癥狀隨時(shí)間的增加而加重
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 :獼猴為雄性,7歲。MPTP購(gòu)買自美國(guó)Sigma公司。 1、每隔2天給該獼猴肌肉注射MPTP 1次,每次0. 2mg/kg。給藥3個(gè)月出現(xiàn)明顯的
帕金森病癥狀,如四肢震顫、運(yùn)動(dòng)緩慢、運(yùn)動(dòng)量減少、運(yùn)動(dòng)發(fā)起困難等。 2、在注射MPTP的期間,對(duì)獼猴每隔一天通過(guò)錄象做一次行為觀察,采集獼猴全天
的行為數(shù)據(jù)。錄象裝置安裝在猴房?jī)?nèi),排除人的干擾。根據(jù)表l做行為評(píng)分,結(jié)果見(jiàn)圖1。 3、對(duì)注射MPTP 3個(gè)月的獼猴用MRI檢測(cè)腦內(nèi)的結(jié)構(gòu)變化,觀察腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)的改
變,結(jié)果見(jiàn)圖2。圖2中左邊為正常猴的MRI掃描結(jié)果,右邊為帕金森猴的掃描結(jié)果。A為
黑質(zhì)區(qū),可以看出在黑質(zhì)區(qū)有明顯的鐵沉積,呈黑色棒狀。 4、對(duì)注射MPTP 3個(gè)月的獼猴用SPECT檢測(cè)腦內(nèi)變化,用锝的同位素("Tc)標(biāo)記腦 內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體,觀察在SPECT成像上顯示的顏色。結(jié)果見(jiàn)圖3,左邊為正常猴SPECT掃描結(jié) 果,右邊為帕金森猴的掃描結(jié)果。右邊猴紋狀體的顏色比正常猴明顯變淺,說(shuō)明帕金森猴的 紋狀體已經(jīng)出現(xiàn)明顯的損傷。SPECT的數(shù)據(jù)見(jiàn)下表
左側(cè)紋狀體 (放射性計(jì) 數(shù))右側(cè)紋狀體 (放射性計(jì) 數(shù))小腦紋狀體 (放射性計(jì) 數(shù))比值 左/小右/ 小
正常Total :4805 Max :55 Avg :44. 51Total :4847 Max :51 Avg :43. 28Total :3800 Max :40 Avg :35. 511. 251. 22
PDTotal :6521 Max :106 Avg :97. 3Total :6516 Max :106 Avg :98. 7Total :6536 Max :111 Avg :102. 10. 950. 97 說(shuō)明根據(jù)上表中"比值"這一欄可知,PD猴比正常時(shí)腦內(nèi)放射程度降低顯著,說(shuō) 明PD猴腦內(nèi)DA缺損顯著。 步驟1注射MPTP3個(gè)月的獼猴,按表1行為評(píng)分的總分值為15,錄象觀察行為上出 現(xiàn)了震顫,并且在MRI成像上觀察到腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)有黑色沉積,同時(shí)在SPECT成像上顯示紋狀體顏色變淺,因此該獼猴就是成功建立的模型。 實(shí)施例2 :獼猴為雄性,8歲。MPTP購(gòu)買自美國(guó)Sigma公司。 1、開始每隔2天給該獼猴肌肉注射MPTP 1次,每次0. 2mg/kg。 3個(gè)月后出現(xiàn)很輕 微的癥狀。增加劑量至每次0.4mg/kg,第六個(gè)月出現(xiàn)明顯的帕金森病癥狀。
2、在注射MPTP的期間,對(duì)獼猴每隔一天通過(guò)錄象做一次行為觀察,采集獼猴全天 的行為數(shù)據(jù)。錄象裝置安裝在猴房?jī)?nèi),排除人的干擾。根據(jù)表1做行為評(píng)分,結(jié)果見(jiàn)圖4。
3、對(duì)注射MPTP 6個(gè)月的獼猴用MRI檢測(cè)腦內(nèi)的結(jié)構(gòu)變化,觀察腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)的改 變,結(jié)果是在黑質(zhì)區(qū)有明顯的黑色沉積。 4、對(duì)注射MPTP 6個(gè)月的獼猴用SPECT檢測(cè)腦內(nèi)變化,用锝的同位素("Tc)標(biāo)記腦 內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體,觀察在SPECT成像上顯示的顏色。結(jié)果是紋狀體的顏色比正常猴明顯變淺, 說(shuō)明帕金森猴的紋狀體已經(jīng)出現(xiàn)明顯的損傷。 步驟1注射MPTP 6個(gè)月的獼猴,表1行為評(píng)分的總分值為ll,錄象觀察行為上出 現(xiàn)了震顫,并且在MRI成像上觀察到腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)有黑色沉積,同時(shí)在SPECT成像上顯示紋狀 體顏色變淺,因此該獼猴就是成功建立的模型。 實(shí)施例3 :獼猴為雄性,7歲。MPTP購(gòu)買自美國(guó)Sigma公司。 1、每隔 2天給該獼猴肌肉注射MPTP 1次,每次0. 25mg/kg。第3個(gè)月出現(xiàn)明顯 的帕金森病癥狀。 2、在注射MPTP的期間,對(duì)獼猴每隔一天通過(guò)錄象做一次行為觀察,采集獼猴全天 的行為數(shù)據(jù)。 3、對(duì)注射MPTP 3個(gè)月的獼猴用MRI檢測(cè)腦內(nèi)的結(jié)構(gòu)變化,觀察腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)的改 變,結(jié)果是在黑質(zhì)區(qū)有明顯的黑色沉積。 4、對(duì)注射MPTP 3個(gè)月的獼猴用SPECT檢測(cè)腦內(nèi)變化,用锝的同位素("Tc)標(biāo)記腦 內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體,觀察在SPECT成像上顯示的顏色。結(jié)果是紋狀體的顏色比正常猴明顯變淺, 說(shuō)明帕金森猴的紋狀體已經(jīng)出現(xiàn)明顯的損傷。 步驟1注射MPTP 3個(gè)月的獼猴,表1行為評(píng)分的總分值為12,錄象觀察行為上出 現(xiàn)了震顫,并且在MRI成像上觀察到腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)有黑色沉積,同時(shí)在SPECT成像上顯示紋狀 體顏色變淺,因此該獼猴就是成功建立的模型。 實(shí)施例4 :獼猴為雄性,9歲。MPTP購(gòu)買自美國(guó)Si gma公司。 1、每隔2天給該獼猴肌肉注射MPTP 1次,每次0. 25mg/kg。第4個(gè)月出現(xiàn)明顯的 帕金森病癥狀。 2、在注射MPTP的期間,對(duì)獼猴每隔一天通過(guò)錄象做一次行為觀察,采集獼猴全天 的行為數(shù)據(jù)。 3、對(duì)注射MPTP 4個(gè)月的獼猴用MRI檢測(cè)腦內(nèi)的結(jié)構(gòu)變化,觀察腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)的改 變,結(jié)果是在黑質(zhì)區(qū)有明顯的黑色沉積。 4、對(duì)注射MPTP 4個(gè)月的獼猴用SPECT檢測(cè)腦內(nèi)變化,用锝的同位素("Tc)標(biāo)記腦 內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體,觀察在SPECT成像上顯示的顏色。結(jié)果是紋狀體的顏色比正常猴明顯變淺, 說(shuō)明帕金森猴的紋狀體已經(jīng)出現(xiàn)明顯的損傷。 步驟1注射MPTP 4個(gè)月的獼猴,表1行為評(píng)分的總分值為12,錄象觀察行為上出 現(xiàn)了震顫,并且在MRI成像上觀察到腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)有黑色沉積,同時(shí)在SPECT成像上顯示紋狀體顏色變淺,因此該獼猴就是成功建立的模型。 實(shí)施例5 :獼猴為雄性,9歲。MPTP購(gòu)買自美國(guó)Sigma公司。 1、每隔2天給該獼猴肌肉注射MPTP 1次,每次0. 25mg/kg。第4個(gè)月出現(xiàn)明顯的 帕金森病癥狀。 2、在注射MPTP的期間,對(duì)獼猴每隔一天通過(guò)錄象做一次行為觀察,采集獼猴全天 的行為數(shù)據(jù)。 3、對(duì)注射MPTP 4個(gè)月的獼猴用MRI檢測(cè)腦內(nèi)的結(jié)構(gòu)變化,觀察腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)的改 變,結(jié)果是在黑質(zhì)區(qū)有明顯的黑色沉積。 4、對(duì)注射MPTP 4個(gè)月的獼猴用SPECT檢測(cè)腦內(nèi)變化,用锝的同位素("Tc)標(biāo)記腦 內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體,觀察在SPECT成像上顯示的顏色。結(jié)果是紋狀體的顏色比正常猴明顯變淺, 說(shuō)明帕金森猴的紋狀體已經(jīng)出現(xiàn)明顯的損傷。 步驟1注射MPTP 4個(gè)月的獼猴,表1行為評(píng)分的總分值為IO,錄象觀察行為上出 現(xiàn)了震顫,并且在MRI成像上觀察到腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)有黑色沉積,同時(shí)在SPECT成像上顯示紋狀 體顏色變淺,因此該獼猴就是成功建立的模型。 實(shí)施例6 :獼猴為雄性,7歲。MPTP購(gòu)買自美國(guó)Sigma公司。 1、每隔2天給該獼猴肌肉注射MPTP 1次,每次0. 25mg/kg。第4個(gè)月出現(xiàn)明顯的 帕金森病癥狀。 2、在注射MPTP的期間,對(duì)獼猴每隔一天通過(guò)錄象做一次行為觀察,采集獼猴全天 的行為數(shù)據(jù)。 3、對(duì)注射MPTP 4個(gè)月的獼猴用MRI檢測(cè)腦內(nèi)的結(jié)構(gòu)變化,觀察腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)的改 變,結(jié)果是在黑質(zhì)區(qū)有明顯的黑色沉積。 4、對(duì)注射MPTP 4個(gè)月的獼猴用SPECT檢測(cè)腦內(nèi)變化,用锝的同位素("Tc)標(biāo)記腦 內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體,觀察在SPECT成像上顯示的顏色。結(jié)果是紋狀體的顏色比正常猴明顯變淺, 說(shuō)明帕金森猴的紋狀體已經(jīng)出現(xiàn)明顯的損傷。 步驟1注射MPTP 4個(gè)月的獼猴,表1行為評(píng)分的總分值為9,錄象觀察行為上出現(xiàn) 了震顫,并且在MRI成像上觀察到腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)有黑色沉積,同時(shí)在SPECT成像上顯示紋狀體 顏色變淺,因此該獼猴就是成功建立的模型。
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權(quán)利要求
用低劑量MPTP建立雄性獼猴慢性帕金森病模型的方法,其特征是按以下步驟進(jìn)行(1)、給雄性獼猴肌肉注射MPTP三個(gè)月或三個(gè)月以上的時(shí)間,每隔2~3天注射1次,每次0.2~0.4mg/kg,在注射MPTP的期間,對(duì)獼猴每隔1~2天做一次行為觀察,注射持續(xù)到獼猴出現(xiàn)震顫癥狀為止;(2)、該獼猴在注射MPTP以前進(jìn)行MRI掃描,得到正常期的圖譜,對(duì)步驟1注射MPTP過(guò)程中的獼猴每20~40天進(jìn)行一次MRI檢測(cè),其結(jié)果和正常期的圖譜進(jìn)行對(duì)比,以觀察腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)的改變進(jìn)程;(3)、該獼猴在注射MPTP以前進(jìn)行SPECT掃描,得到正常期的圖譜,對(duì)步驟1注射MPTP過(guò)程中的獼猴每20~40天進(jìn)行一次SPECT檢測(cè),其結(jié)果和正常期的圖譜進(jìn)行對(duì)比,以觀察紋狀體成像上的改變進(jìn)程;(4)、注射過(guò)MPTP的獼猴,如果行為觀察猴出現(xiàn)震顫,并且在MRI成像上觀察到腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)有神經(jīng)元缺損,同時(shí)在SPECT成像上顯示紋狀體有神經(jīng)元缺損,則表明該獼猴就是成功建立的模型。
2. 如權(quán)利要求l所說(shuō)的方法,其特征是行為觀察時(shí)根據(jù)Kurlan帕金森氏病量表做行為 評(píng)分,以評(píng)價(jià)獼猴帕金森病的嚴(yán)重程度,從而滿足模型的使用者的不同要求。
3. 如權(quán)利要求1所說(shuō)的方法,其特征是進(jìn)行SPECT掃描時(shí)用锝的同位素("Tc)標(biāo)記腦 內(nèi)DA轉(zhuǎn)運(yùn)體。
4. 如權(quán)利要求1所說(shuō)的方法,其特征是行為觀察用錄象法。
全文摘要
用低劑量MPTP建立雄性獼猴慢性帕金森病模型的方法,屬生命科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。給雄性獼猴低劑量肌肉注射MPTP三個(gè)月或三個(gè)月以上的時(shí)間,并進(jìn)行行為觀察、MRI檢測(cè)和SPECT檢測(cè)。如果猴出現(xiàn)震顫,且在MRI成像上觀察到腦內(nèi)黑質(zhì)區(qū)有神經(jīng)元缺損,在SPECT成像上顯示紋狀體有神經(jīng)元缺損,則表明該獼猴就是成功建立的模型。行為觀察時(shí)可根據(jù)Kurlan帕金森氏病量表做行為評(píng)分,以評(píng)價(jià)獼猴帕金森病的嚴(yán)重程度,從而滿足模型的使用者的不同要求。本方法成功建立了慢性靈長(zhǎng)類帕金森病模型,能模擬人類帕金森病慢性進(jìn)程。模型不僅有PD癥狀,也有DA能神經(jīng)元選擇性損傷的病理改變,可廣泛用于PD發(fā)病機(jī)制、診斷及治療方面的研究工作中。
文檔編號(hào)A01K67/027GK101779609SQ201010101959
公開日2010年7月21日 申請(qǐng)日期2010年1月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月28日
發(fā)明者晏婷, 李燕皎, 牛海晨, 胡新天, 馬原野 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所;昆明亞靈生物科技有限公司
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