與桃果形圓、扁性狀連鎖的snp位點(diǎn)、基于該位點(diǎn)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種與桃果形圓、扁性狀連鎖的SNP位點(diǎn)、基 于該位點(diǎn)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 桃為薔薇科李屬桃亞屬多年生落葉果樹(shù)，其果實(shí)柔軟多汁，風(fēng)味宜人，為大眾喜愛(ài) 的果品。桃果實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，既富含多糖果膠質(zhì)又含多種維生素和礦質(zhì)元素，是老少皆宜的 水果。
[0003] 目前，桃果實(shí)從果形上主要分為兩種：扁平的蟠桃和圓形的普通桃。每一種類(lèi)型都 有相應(yīng)的消費(fèi)群體以及重要的利用價(jià)值，但是對(duì)如今的桃產(chǎn)業(yè)體系來(lái)說(shuō)，品質(zhì)優(yōu)良的品種 仍舊很少。培育高品質(zhì)的蟠桃、普通桃成為當(dāng)下急需解決的問(wèn)題。
[0004] 目前，育種家在桃育種工作中主要采用的是傳統(tǒng)的雜交選育新品種的方法，該方 法育種周期長(zhǎng)，占地面積大，耗時(shí)耗力，而且育種效率低。對(duì)普通桃、蟠桃的選育更是如此， 育種早起根本無(wú)法區(qū)分普通桃與蟠桃性狀。
[0005] 而且，桃樹(shù)育種工作中沒(méi)有一種有效準(zhǔn)確的分子標(biāo)記用于普通桃、蟠桃的選育，育 種家只能等到樹(shù)體達(dá)到具有開(kāi)花結(jié)果能力之后進(jìn)行選擇，因而培育普通桃與蟠桃工作花費(fèi) 的時(shí)間長(zhǎng)、工作量大、效率低。
[0006] 然而，隨著消費(fèi)者需求的不斷提高，如何快速高效地培育風(fēng)味更好、品質(zhì)更優(yōu)的普 通桃與蟠桃品種成為現(xiàn)在育種家面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。目前急需一種準(zhǔn)確高效的分子標(biāo)記，利 用分子標(biāo)記輔助選擇育種技術(shù)，快速提高普通桃與蟠桃的選育效率，加速育種進(jìn)程，加速中 國(guó)桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種與桃果形圓、扁性狀連 鎖的SNP位點(diǎn)、基于該位點(diǎn)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明的目的之一在于提供一種與普通桃、蟠桃果形性狀連鎖的SNP(單核苷酸 多態(tài)性）位點(diǎn)。
[0009] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種基于該SNP位點(diǎn)開(kāi)發(fā)的一種與普通桃、蟠桃兩種 果形性狀顯著相關(guān)的AS-PCR分子標(biāo)記及用于擴(kuò)增該標(biāo)記的引物對(duì)。
[0010] 本發(fā)明的目的之三在于提供以上所述的SNP位點(diǎn)以及基于該位點(diǎn)的AS-PCR分子 標(biāo)記及其在普通桃、蟠桃的選育工作中的應(yīng)用。
[0011] 其技術(shù)方案如下：
[0012] 1、本發(fā)明所提及的SNP位點(diǎn)，位于桃基因組第6號(hào)染色體上，所屬基因的基因名稱(chēng) 為PRUPE_ppa003772mg，該SNP位于該基因的第2453堿基處，該處的堿基為腺嘌呤脫氧核糖 核苷酸（A)或者胸腺嘧啶脫氧核糖核苷酸（T)，該SNP位點(diǎn)與桃果形的圓、扁性狀連鎖。
[0013] 2、本發(fā)明中是利用該SNP位點(diǎn)，成功將其轉(zhuǎn)化為基于PCR的AS-PCR標(biāo)記，擴(kuò)增產(chǎn) 物長(zhǎng)度345bp左右。擴(kuò)增該AS-PCR標(biāo)記的引物對(duì)如表1 :
[0014] 表 1
[0016] 3、利用該SNP轉(zhuǎn)化的AS-PCR分子標(biāo)記，即可通過(guò)簡(jiǎn)單的PCR、瓊脂糖電泳操作，實(shí) 現(xiàn)對(duì)蟠桃與普通桃的準(zhǔn)確區(qū)分，成功地將分子標(biāo)記輔助選擇育種技術(shù)應(yīng)用于現(xiàn)實(shí)的桃育種 工作中。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：通過(guò)以上方法，在蟠桃、普通桃的選育工作 中，可以顯著降低桃樹(shù)育種的工作量，縮短育種時(shí)間，極大地提高育種效率。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0019] 1、在苗期摘取雜交苗的葉片，用于DNA的提取。
[0020] 2、利用該AS-PCR分子標(biāo)記引物對(duì)，對(duì)提取的DNA進(jìn)行PCR。
[0021] PCR反應(yīng)體系如表2。
[0022] 表 2
[0024]
[0025]3、對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠（1% )電泳，并對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行條帶統(tǒng)計(jì)。統(tǒng)計(jì)中 凡是出現(xiàn)345bp條帶的即為蟠桃，沒(méi)有的則為普通桃。
[0026] 4、通過(guò)上述步驟即可簡(jiǎn)單快速的區(qū)分蟠桃與普通桃，成功的將分子標(biāo)記輔助育種 應(yīng)用于桃育種中蟠桃與普通桃的選育。在蟠桃、普通桃的選育工作中，顯著降低育種的工作 量，縮短育種時(shí)間，極大地提高育種效率。
[0027] 以上所述，僅為本發(fā)明最佳實(shí)施方式，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明 披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可顯而易見(jiàn)地得到的技術(shù)方案的簡(jiǎn)單變化或等效替換均落入本發(fā)明的 保護(hù)范圍。
[0028]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種與桃果形圓、扁性狀緊密連鎖的SNP位點(diǎn)，其特征在于，所述的SNP位點(diǎn)位于基 因PPa003772mg的2453bp處，序列編碼方向?yàn)?'--3'方向。2. -種基于SNP位點(diǎn)開(kāi)發(fā)的AS-PCR分子標(biāo)記，其特征在于，所述SNP位點(diǎn)恰好位于所 述的AS-PCR分子標(biāo)記的下游R引物的最后一個(gè)3'端堿基處，同時(shí)錯(cuò)配3'端第二位的堿基， 由胸腺嘧啶脫氧核糖核苷酸T變?yōu)轼B(niǎo)嘌呤脫氧核糖核苷酸G。3. 如基于SNP位點(diǎn)開(kāi)發(fā)的AS-PCR分子標(biāo)記，其特征在于，所述AS-PCR標(biāo)記的引物序 列，其中上游引物如SEQ IE NO :1所示，下游引物如SEQ IE NO :2所示。4. 權(quán)利要求1所述的與桃果形圓、扁性狀緊密連鎖的SNP在桃果形圓、扁性狀中的分標(biāo) 記輔助選擇育種中的應(yīng)用。5. 權(quán)利要求3所述的引物在桃果形圓、扁性狀的選育中的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了與桃果形圓、扁性狀連鎖的SNP位點(diǎn)、基于該位點(diǎn)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用，所述的SNP位點(diǎn)位于基因PPa003772mg的2453bp處，序列編碼方向?yàn)?’—3’方向。所述SNP位點(diǎn)恰好位于所述的AS-PCR分子標(biāo)記的下游R引物的最后一個(gè)3’端堿基處，同時(shí)錯(cuò)配3’端第二位的堿基，由胸腺嘧啶脫氧核糖核苷酸T變?yōu)轼B(niǎo)嘌呤脫氧核糖核苷酸G。通過(guò)以上方法，在蟠桃、普通桃的選育工作中，可以顯著降低桃樹(shù)育種的工作量，縮短育種時(shí)間，極大地提高育種效率。
【IPC分類(lèi)】C12Q1/68, C12N15/11
【公開(kāi)號(hào)】CN104962627
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510356996
【發(fā)明人】王力榮, 郭健, 曹珂, 朱更瑞, 方偉超, 陳昌文, 王新衛(wèi), 李勇
【申請(qǐng)人】中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹(shù)研究所
【公開(kāi)日】2015年10月7日
【申請(qǐng)日】2015年6月22日