脅迫誘導(dǎo)型衍生啟動(dòng)子的制作方法
【專利說明】脅迫誘導(dǎo)型衍生啟動(dòng)子
[0001] 發(fā)明背景
[0002] 本發(fā)明涉及通過非生物脅迫可誘導(dǎo)的衍生植物啟動(dòng)子，以及用所述非生物脅迫誘 導(dǎo)性啟動(dòng)子轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因植物。
[0003] 非生物脅迫包括干旱、鹽度和極端溫度。這些脅迫，特別是干旱，引起農(nóng)作物生產(chǎn) 重大的損失。作物耐受干旱條件的能力將是有益于降低這些損失。
[0004] PCT/IB2008/054628(公開為W02009/060402)中描述了在非生物脅迫條件下可 誘導(dǎo)的植物啟動(dòng)子，將其內(nèi)容通過引用合并入本文中。總的來說，與通過組成型啟動(dòng)子的 高水平轉(zhuǎn)基因表達(dá)相比，脅迫誘導(dǎo)性啟動(dòng)子在轉(zhuǎn)基因植物中具有低的基因表達(dá)水平。另一 方面，發(fā)現(xiàn)從耐干燥的單子葉植物Xerophyta viscosa的基因組分離的脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子 XvPSapl有效地表達(dá)。然而，XvPSapl啟動(dòng)子具有缺陷，因?yàn)樾蛄邢鄬?duì)大。大的啟動(dòng)子大小 是其用于轉(zhuǎn)基因植物研發(fā)中的限制因素，因?yàn)檗D(zhuǎn)基因DNA序列越長(zhǎng)，轉(zhuǎn)化效率和形狀穩(wěn)定 性越低。因此，這將很大程度地限制XvPSapl在生物技術(shù)應(yīng)用中的使用。
[0005] 因此，對(duì)可以用于轉(zhuǎn)化作物并且其具有短于XvPSapl的長(zhǎng)度而且仍然能夠至少起 到與XvPSapl同樣好的作用的非生物脅迫誘導(dǎo)型啟動(dòng)子存在需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)實(shí)施方案，提供了從Xerophyta viscosa分離的衍生植物啟 動(dòng)子核苷酸序列，其作為通過非生物脅迫可誘導(dǎo)的植物啟動(dòng)子。
[0007] 所述核苷酸序列可以源自Xerophyta viscose XvPSapl或可以人工合成。
[0008] 衍生啟動(dòng)子片段核苷酸序列可以包括如下鑒定的一個(gè)或多個(gè)調(diào)控元件：富TC 重復(fù)序列actttctcca，attttctaac ;MYB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn),caactg；或ABA-應(yīng)答原件
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種衍生啟動(dòng)子，包含選自由以下組成的組的核酸序列： (a) 呈現(xiàn)出與SEQ ID NO: 1-3中的任一個(gè)至少80%序列同一性的核酸序列；和 (b) SEQ ID NO: 1-3中的任一個(gè)的核酸序列； 其中所述衍生啟動(dòng)子作為啟動(dòng)子起作用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的衍生啟動(dòng)子，其中所述衍生啟動(dòng)子是誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的衍生啟動(dòng)子，其中所述衍生啟動(dòng)子是通過非生物脅迫可誘導(dǎo) 的。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的衍生啟動(dòng)子，其中所述非生物脅迫選自由滲透脅迫、脫水脅 迫、溫度脅迫、干旱、鹽度或干燥組成的組。
5. -種核苷酸盒，包含權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的衍生啟動(dòng)子，可操作地連接異源 可轉(zhuǎn)錄DNA序列，和，其中表達(dá)盒進(jìn)一步可選含有可操作地連接異源可轉(zhuǎn)錄DNA序列的終止 子序列。
6. -種重組載體，包含權(quán)利要求5所述的核苷酸盒。
7. -種用權(quán)利要求6所述的重組載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。
8. -種包含權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因植物。
9. 一種獲自權(quán)利要求8所述的轉(zhuǎn)基因植物的轉(zhuǎn)基因種子。
10. -種調(diào)控宿主細(xì)胞中異源可轉(zhuǎn)錄DNA序列的轉(zhuǎn)錄的方法，所述方法包括用權(quán)利要 求5所述的核苷酸盒轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞。
11. 一種調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)基因植物中異源可轉(zhuǎn)錄DNA序列的轉(zhuǎn)錄的方法，所述方法包括用權(quán)利 要求5所述的核苷酸盒轉(zhuǎn)化所述植物。
12. -種生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因植物的方法，所述方法包括將權(quán)利要求5所述的核苷酸盒引入宿 主細(xì)胞中，并且從所述細(xì)胞再生轉(zhuǎn)基因植物。
【專利摘要】本發(fā)明涉及非生物脅迫誘導(dǎo)型衍生啟動(dòng)子，所述非生物脅迫誘導(dǎo)型衍生啟動(dòng)子來自含有可操作地連接異源可轉(zhuǎn)錄DNA序列的Xerophyta viscosa、核苷酸盒、重組載體、細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因植物。
【IPC分類】C12N15-82, A01H5-00, C07K14-415
【公開號(hào)】CN104781406
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380047042
【發(fā)明人】林恩·阿倫德則-貝利 布朗溫, 安·湯姆森 詹妮弗, 克什尼·伊耶, 蘇海勒·拉富迪恩 穆罕默德, 雷維爾·伊耶, 洛倫·艾利克 塔馬英
【申請(qǐng)人】開普敦大學(xué)
【公開日】2015年7月15日
【申請(qǐng)日】2013年9月9日
【公告號(hào)】CA2883151A1, WO2014037919A1