斑節(jié)對(duì)蝦mat1基因及其編碼的蛋白的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開(kāi)了斑節(jié)對(duì)蝦MATl基因及其編碼的氨基序列，分析了其在不同組織中 及不同發(fā)育時(shí)相卵巢中的表達(dá)分布情況；屬于生物基因技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)胞周期調(diào)控是一個(gè)精確調(diào)控的過(guò)程。在細(xì)胞分裂過(guò)程中真核生物的細(xì)胞周期可 以概括為兩個(gè)大的階段：細(xì)胞分裂間期（即Gl時(shí)期、S時(shí)期和G2時(shí)期）和細(xì)胞分裂期（即 M時(shí)期），在細(xì)胞分裂時(shí)期，需要許多周期蛋白參與調(diào)控以保證其精確性，CAK(周期蛋白依 賴(lài)性激酶的激酶）作為CDK激活重要參與因子，在細(xì)胞周期調(diào)控過(guò)程中扮演重要角色。
[0003] MATl做為CAK的重要組成部分，對(duì)CAK的活性起著"分子開(kāi)關(guān)"的作用，在調(diào)節(jié)信 號(hào)分子轉(zhuǎn)導(dǎo)、控制細(xì)胞周期的進(jìn)程、影響細(xì)胞的增殖和凋亡等方面起著關(guān)鍵作用。MATl是 CAK的靶向亞單位，通過(guò)調(diào)節(jié)CAK的活性，影響⑶K1、⑶K2、⑶K4、RNA Pol II和細(xì)胞周期蛋 白等底物的磷酸化，進(jìn)而影響抑癌基因 p53、pRb的磷酸化及總轉(zhuǎn)錄因子TFIIH和RNA聚合 酶II介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)卵巢發(fā)育的調(diào)控。
[0004] 氨基酸序列是組成蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)、研宄蛋白質(zhì)功能的基礎(chǔ)，對(duì)于研宄該蛋白在 生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的作用具有重要意義。
[0005] 長(zhǎng)期以來(lái)，斑節(jié)對(duì)蝦親蝦的人工繁育問(wèn)題一直都是限制斑節(jié)對(duì)蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的 技術(shù)瓶頸。在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，親蝦的性腺成熟參差不齊，難以集中育苗的問(wèn)題是對(duì)蝦養(yǎng)殖 過(guò)程中一個(gè)非常重要的限制因素。眼柄切除手術(shù)作為促進(jìn)親蝦性腺同步成熟的常用方法， 對(duì)親蝦本身存在非常大破壞性，導(dǎo)致了親蝦較高的死亡率和產(chǎn)卵質(zhì)量低等問(wèn)題，不利于可 持續(xù)養(yǎng)殖，加大了養(yǎng)殖成本。因此出于尋求一種新的對(duì)蝦繁育方法的需求，對(duì)對(duì)蝦卵巢發(fā)育 機(jī)理及其分子調(diào)控機(jī)理進(jìn)行研宄勢(shì)在必行。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的是以實(shí)驗(yàn)室高通量測(cè)序獲得的EST序列為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)的PCR擴(kuò)增引物，并 通過(guò)RACE技術(shù)克隆到斑節(jié)對(duì)蝦MATl基因的全表達(dá)序列，該序列用于分析斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)發(fā) 育的機(jī)制，從而可以從卵巢的發(fā)育機(jī)制中尋找替代剪除單側(cè)眼柄的方式來(lái)促進(jìn)卵巢成熟的 方法，提高親蝦的產(chǎn)卵率及其卵的質(zhì)量，降低其死亡率。
[0007] 本發(fā)明提供的斑節(jié)對(duì)蝦MAT 1基因，該基因序列如SEQ ID NO: 1所示。
[0008] 該基因的制備方法依次包括下述步驟：
[0009] 1、總RNA的提取
[0010] 取健康斑節(jié)對(duì)蝦，解剖，取肌肉、卵巢、肝胰腺、腦、心臟、腸、精巢、胃等組織，并分 別將組織于ImL Trizol (Invitrogen，日本）中勾衆(zhòng)，按Trizol試劑盒使用手冊(cè)提取斑節(jié)對(duì) 蝦總RNA并用DEPC水懸浮，電泳觀察所提取RNA的完整性，并置于-80 °C保存。
[0011] 2、cDNA第一鏈的合成
[0012] 取上述斑節(jié)對(duì)蝦總RNA 2 μ L與反轉(zhuǎn)錄引物（5>GGCCACGCGACTAGTAC(T) 16〈3) 1 μ L(10pmol/L)混合在反轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV，Promega，USA)的作用下合成cDNA-鏈，反應(yīng)條件： 42〇C 60min,70〇C 15min〇
[0013] 3、引物設(shè)計(jì)依據(jù)，引物合成的方法
[0014] 根據(jù)已有的MATl的EST序列設(shè)計(jì)引物：
[0015]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 斑節(jié)對(duì)蝦MAT1基因，其特征在于，所述的基因序列如SEQ ID N0:1所示。
2. 權(quán)利要求1所述的MAT1基因編碼的蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2 所示。
3. 權(quán)利要求1或者2所述的斑節(jié)對(duì)蝦MAT1在斑節(jié)對(duì)蝦不同組織和卵巢不同發(fā)育時(shí)期 的分布與表達(dá)。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種斑節(jié)對(duì)蝦MAT1基因及其編碼的蛋白，旨在提供一種用于分析斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)發(fā)育的機(jī)制，以便從卵巢的發(fā)育機(jī)制中尋找替代剪除單側(cè)眼柄的方式來(lái)促進(jìn)卵巢成熟的方法，提高親蝦的產(chǎn)卵率及其卵的質(zhì)量，降低其死亡率的基因及其蛋白，其技術(shù)要點(diǎn)是：該斑節(jié)對(duì)蝦MAT1基因序列，如SEQ ID NO:1所示；其蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；屬于生物基因技術(shù)領(lǐng)域。
【IPC分類(lèi)】C07K14-46, C12Q1-68, C12N15-12
【公開(kāi)號(hào)】CN104611342
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510082851
【發(fā)明人】邱麗華, 傅明駿, 趙超, 王艷, 江世貴, 周發(fā)林
【申請(qǐng)人】中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所
【公開(kāi)日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2015年2月13日