專利名稱:蟲草菌種814(Paeilomyces SP·814)選育及其發(fā)酵工藝的制作方法
本發(fā)明屬于蟲草菌新菌種資源的開發(fā)利用，可做醫(yī)藥原料及滋補(bǔ)食品和飲料的原料。
本發(fā)明的目的在于用人工發(fā)酵進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)，以解決天然蟲草資源之不足，部分或大部分滿足市場(chǎng)的需要。
本蟲草菌菌種814是本所于1981年從野外采集到的古尼蟲草〔cordycePs gunnii(BerK)BerK〕，經(jīng)子囊孢子萌發(fā)而得，經(jīng)該菌無性階段鑒定，屬于擬青霉屬中的一種(Paeilomyces sP.)本菌進(jìn)行了察氏(CzaPeK)培養(yǎng)基培養(yǎng)、斜面固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)，菌種的形態(tài)特征因不同的培養(yǎng)條件而有所不同，本菌種814生長(zhǎng)適宜條件是(1)培養(yǎng)物質(zhì)葡萄糖3-5%，蛋白胨0.8-1%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%;(2)培養(yǎng)溫度26-27℃，(3)培養(yǎng)PH值7.5。本菌種的菌絲化學(xué)成分(1)甘露醇含量5.7%，(2)脂肪酸得率約1%(其中亞油酸50.95%，油酸24.3%，軟脂酸10.1%);(3)蛋白質(zhì)、糖類的含量總糖9.44%，還原糖4.75%，多糖4.69%，蛋白質(zhì)39.04%;氨基酸共18種，總含量23.47%，游離氨基酸共26種。
本菌種814菌絲體毒性測(cè)定結(jié)果(1)急性毒性試驗(yàn)LD50＞30900毫克/公斤，按毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，受試物屬無毒級(jí);(2)亞急性毒性試驗(yàn)大白鼠給藥前后，各組的紅血球、白血球、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶以及血漿非蛋白的氮均無明顯差異，心、肝、腎、脾等組織切片檢查亦未有異常;(3)蓄積毒性試驗(yàn)用蓄積系數(shù)法試驗(yàn)結(jié)果，蓄積系數(shù)K＞5.3，說明無明顯蓄積作用;(4)Ames試驗(yàn)用TA98、TA100標(biāo)準(zhǔn)菌株，用滲入法試驗(yàn)，本試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)有致突變作用，結(jié)果為陰性;(5)微核試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞有致突變作用，結(jié)果為陰性;(6)小鼠睪丸生殖細(xì)胞染色體畸變分析，未發(fā)現(xiàn)有致突變效應(yīng)，結(jié)果為陰性;(7)砷、鉛、銅及黃曲霉素含量測(cè)定，四項(xiàng)均符合衛(wèi)生要求。
本發(fā)明的人工發(fā)酵產(chǎn)品，與天然野生蟲草產(chǎn)品比較起來，具有成本低、可以工廠化生產(chǎn)、能有效地解決天然蟲草來源不足的優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)施例1本菌種814在察氏(CzaPeK)培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)的形態(tài)特征是菌落初期白色，后由于產(chǎn)生分生孢子，略呈粉白色，最后為灰白或銀灰色，園形。24℃培養(yǎng)7天直徑8-12(-14)毫米，培養(yǎng)14天直徑16-20(-24)毫米，反面中部近棕色，具環(huán)紋，邊緣白色，色澤稍擴(kuò)散;菌絲壁薄，光滑。分生孢子梗透明，光滑，從菌絲長(zhǎng)出，分枝或不分枝;小梗瓶狀，單生、對(duì)生或輪生，基部膨大，寬2-3微米，最窄處約0.7微米，長(zhǎng)7.5-17.5(-25)微米，分生孢子單孢，寬橢園形，徑2.7-4.2×2.2-2.7微米，串生，長(zhǎng)達(dá)150微米以上，具小疣。
實(shí)施例2本菌種814在斜面固體培養(yǎng)時(shí)的形態(tài)特征是菌落初白色，后產(chǎn)生大量分生孢子漸轉(zhuǎn)呈粉白色，老后變灰色，具放射狀溝紋，中央凸起，緊貼培養(yǎng)基部分灰棕色，有時(shí)出現(xiàn)綠色，在埋伏型菌絲體上常出現(xiàn)一種變形菌絲和大孢子，大孢子生于長(zhǎng)園形或卵形小梗上，單生至多個(gè)簇生，亦有側(cè)生于菌絲體上的，分生孢子在27℃條件下培養(yǎng)7天的種齡，經(jīng)過9小時(shí)培養(yǎng)開始萌發(fā)，至11小時(shí)后大量萌發(fā)，先后長(zhǎng)出1至數(shù)個(gè)芽管，隨后芽管伸長(zhǎng)分枝形成菌絲體。
實(shí)施例3本菌種814在液體培養(yǎng)時(shí)的形態(tài)特征是(1)在液體靜止培養(yǎng)下，菌絲在液體表面初期形成白色菌落，最后連結(jié)成一層菌塊，其顏色特征近似斜面固體培養(yǎng)的菌落。(2)在搖瓶及發(fā)酵罐中培養(yǎng)下，菌絲生長(zhǎng)一定階段便形成菌球，菌球由小至大，直徑可達(dá)2400微米或更大，菌球中間緊密至周圍漸疏松，由于菌絲不斷增長(zhǎng)而周圍交織成束狀菌絲體，菌球的顏色由初期白色轉(zhuǎn)棕色最后呈棕黑色，菌絲在生長(zhǎng)過程中老菌絲還可能變形膨大，呈蓮藕狀。
實(shí)施例4本菌種814發(fā)酵工藝條件是(1)培養(yǎng)基配方葡萄糖3%，蛋白胨0.8%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，消泡油0.3%(花生油)，配方調(diào)配好后置于121℃下滅菌30分鐘，待冷卻至27℃時(shí)接種;(2)每毫升含分生孢子數(shù)2.68×106，每10立升接100毫升種(大的發(fā)酵罐生產(chǎn)需逐級(jí)按10%接種培養(yǎng));(3)培養(yǎng)條件溫度26-27℃;罐壓0.4-0.6公斤/厘米2，通氣量1∶0.4-1∶1.2v/v/分，攪拌轉(zhuǎn)速約200轉(zhuǎn)/分(發(fā)酵初期轉(zhuǎn)速可慢些);(4)放罐標(biāo)準(zhǔn)ⅰ/無雜菌污染;ⅱ/菌絲濕重在20%以上〔濕重測(cè)定采用離心分離后稱重(3800轉(zhuǎn)/分，分離30分鐘);ⅲ/PH值回升，穩(wěn)定在6.0左右;ⅳ/殘?zhí)?%以下;ⅴ/菌絲水煮液，品嘗味鮮甜;ⅵ/菌絲質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(a)總蛋白20%以上(干菌絲計(jì));(b)多糖4%左右(干菌絲計(jì));(c)灰分不低于8。
權(quán)利要求
1.蟲草菌種814(PaeilomycessP.814)的特征是從古尼蟲草(CordycePsgunnii)上分離而得。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的蟲草菌種814，其特征是在搖瓶及發(fā)酵罐中培養(yǎng)時(shí)，菌絲長(zhǎng)至一定階段便形成菌球，直徑可達(dá)2400微米以上，顏色由白轉(zhuǎn)棕色最后呈棕黑色，菌絲不斷增長(zhǎng)而周圍交織成束狀菌絲體，老菌絲還可能變形膨大，呈蓮藕狀。
3.蟲草菌種814人工菌絲發(fā)酵工藝的特征是，(a)培養(yǎng)基配方葡萄糖0.3%，蛋白胨0.8%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，消泡油0.3%，(b)接種方法在121℃下滅菌30分鐘，每毫升含分生孢子數(shù)2.68×106，每10立升接種10毫升;(c)培養(yǎng)條件溫度26-27℃，罐壓0.4-0.6公斤/厘米2，通氣量1∶0.4-1∶1.2vv/分，攪拌轉(zhuǎn)速約200轉(zhuǎn)/分。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的發(fā)酵工藝，其特征是放罐標(biāo)準(zhǔn)為無雜菌，PH穩(wěn)定在6.0左右，殘?zhí)?%以下，菌絲水煮液味鮮甜，菌絲質(zhì)量為(a)總蛋白20%以下，(b)多糖4%左右，(c)灰分不低于8。
5.根據(jù)權(quán)利要求
3和4所述的發(fā)酵工藝和放罐標(biāo)準(zhǔn)，其特征是菌絲發(fā)酵產(chǎn)品無毒，可作醫(yī)藥原料和食品及飲料的滋補(bǔ)品原料。
專利摘要
蟲草菌814無毒，可做滋補(bǔ)品原料。菌絲含甘露醇5.7％，脂肪酸得率約1％，粗蛋白39.04％，總糖9.44％，還原糖4.75％，多糖4.69％，氨基酸共18種，總含量23.47％，游離氨基酸共26種。培養(yǎng)基配方葡萄糖3％，蛋白胨0.8％，KH
文檔編號(hào)C12N1/14GK85102231SQ85102231
公開日1986年7月2日 申請(qǐng)日期1985年4月29日
發(fā)明者黃茂先, 何國襄, 葉結(jié)冰 申請(qǐng)人:廣東省微生物研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan