蛹蟲草菌種培養(yǎng)基及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蛹蟲草菌種培養(yǎng)基及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蛹蟲草是以蠶蛹為宿主的真菌，與冬蟲夏草同科同屬，化學成分基本一致，其抗腫 瘤成分蟲草素含量高于冬蟲夏草，且是衛(wèi)生部批準的新資源食品，具有抗腫瘤、抗病毒、抗 菌、抗炎癥、延緩衰老、提高免疫力等多種功效，適用人群廣泛。近年來蛹蟲草的人工栽培 與開發(fā)迅速發(fā)展，然而蛹蟲草的菌種經(jīng)過幾代培養(yǎng)會出現(xiàn)菌絲體生長慢，轉(zhuǎn)色慢，生活力下 降，出草率下降，出草慢等菌種衰退現(xiàn)象。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種蛹蟲草菌種培養(yǎng)基及其制備方法，以該 培養(yǎng)基作為菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)蛹蟲草可有效提高出草率，提高蛹蟲草產(chǎn)量，解決菌種退化等 問題。
[0004] 本發(fā)明提供的蛹蟲草菌種培養(yǎng)基以水為溶劑，由如下濃度的成分構(gòu)成：
[0005] 蛋白胨 ！5~25g/L、 酵母粉 3~5g/L、 葡萄糖 15~30g/L、 磷酸二氫鉀1.2-1.5g/L、 氯化鈉 0.8~1.2g/L、 硫酸鎂 1~L2g/L、 奶粉 4~10g/L。
[0006] 作為優(yōu)選配方，上述蛹蟲草菌種培養(yǎng)基由如下濃度的成分構(gòu)成：
[0007] 蛋白胨 20g/L、 酵母粉 5g/L、 葡萄糖 丨5g/L、 KH2P〇4 1.2g/L,
[0008] N?CI 1.2g/Ls MgSOai.2g/L·, 奶粉 8g/L。
[0009] 本發(fā)明進一步提供上述蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的制備方法，具體包括如下步驟：以純 凈水將蛋白胨、酵母粉、葡萄糖、KH2P04、NaCl、MgS04、奶粉溶解并充分混勻，分裝入培養(yǎng)瓶， 密封，滅菌，冷卻。
[0010] 所述滅菌的具體條件為：121°C、1.IMpa滅菌20~45min。
[0011] 本發(fā)明蛹蟲草菌種培養(yǎng)基配方合理，各成分間協(xié)同作用良好。使用本發(fā)明培養(yǎng)基 作為菌種培養(yǎng)基活化蛹蟲草菌種后再培養(yǎng)蛹蟲草，營養(yǎng)全面均衡，可有效改變菌絲體生長 慢、轉(zhuǎn)色慢、出草慢，活力低，出草率低等現(xiàn)象，獲得的蟲草子實體產(chǎn)量穩(wěn)定，可有效降低或 減緩蛹蟲草菌種的退化現(xiàn)象。
【具體實施方式】
[0012] 以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步具體描述，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好地 理解本發(fā)明并能予以實施，但所舉實施例不作為對本發(fā)明的限定。
[0013] 實施例1 :
[0014] 一、蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的配制：
[0015] 本實施例蛹蟲草菌種培養(yǎng)基以水為溶液，由如下濃度的成分構(gòu)成：
[0016] 蛋白胨 20g/L、 酵母粉 5g/L、 葡萄糖 15g/L、 KH2PO41.2 g/L、 Nad 1.2g/L、 MgS04 1.2 奶粉 8 g/L。
[0017] 制備如下：按以上重量配方稱取各成分，加純凈水1L，充分溶解和混勻后分裝入 三角培養(yǎng)瓶，每瓶裝200ml，121°C、1.IMpa滅菌30~40min，待其自然冷卻后備用。
[0018] 二、蛹蟲草菌種的活化
[0019] 1、在超凈臺中使用上述配制的菌種培養(yǎng)基接種已經(jīng)明顯退化的蟲草菌體（菌種 為Cordycepsmilitaris(L)Link)，接種比例為 1:100〇
[0020]2、在溫度22 °C條件下避光靜置培養(yǎng)24h，然后溫度22°C、170rpm下繼續(xù)培養(yǎng) 60-72h，使菌液濃度達到每毫升3-5個菌球。
[0021] 三、蛹蟲草的培養(yǎng)
[0022] 采用常用方法進行蛹蟲草的無菌培養(yǎng)、收獲以及干燥。具體如下：
[0023] 1、在超凈臺中接種活化的蛹蟲草菌體至固體培養(yǎng)基，每瓶50ml固體培養(yǎng)基接種 lmL活化菌液。固體培養(yǎng)基配方如下：干蠶蛹粉30g/L、大米粉170g/L、磷酸二氫鉀1. 2g/L、 磷酸二氫鈉〇. 8g/L、牛肉膏l(xiāng)g/L。
[0024] 2、在溫度22°C、濕度75~85%條件下避光培養(yǎng)3~5天，使蟲草菌絲迅速長滿培 養(yǎng)基表面，防止其他雜菌在培養(yǎng)基表面生長。
[0025]3、第5~20天光照培養(yǎng)，白天12小時日光燈光照，溫度20~22°C(最好為22°C)、 濕度80~85%，光照強度控制在100~150Lx;晚上12小時閉光，溫度18~20°C(最好 18°C)、濕度75~85%。每天通風2次，早晚各一次，氣溫相對低的時候進行每次20~30 分鐘。白天晚上溫差有利于原基的分化形成。
[0026] 4、第21~35天白天12小時光照（自然光加日光燈），溫度20~22°C(最好為 22°C)、濕度75%~85%，光照強度控制在1000~1200Lx;晚上12小時閉光，溫度18~ 20°C(最好為18°C)、濕度75~85%。此時間為子實體生長時期，強光對子實體的生長 有利，使其呈棒狀生長并不斷成熟、健壯、色澤變?yōu)轷r艷的橙黃色，在此生長階段每天通風2 次，早晚各一次，氣溫相對低的時候進行每次20~30分鐘。
[0027] 5、收獲及再培養(yǎng)，旋開培養(yǎng)瓶蓋，鑷子用75%酒精消毒后，將子實體取出（只取出 培養(yǎng)基上面的部分），將取出的子實體置于干凈的不銹鋼盤中，挑選色澤均勻、粗壯、完整的 子實體，去除殘存的培養(yǎng)基后置于新的不銹鋼盤中稱重備用；培養(yǎng)瓶中剩余部分按第20~ 35天的培養(yǎng)條件及方法繼續(xù)培養(yǎng)，再次收獲。
[0028] 培養(yǎng)中的注意事項：
[0029] A、光照時要用散射光，而不能用直射光，蟲草的生長有向光性，對光照均勻的地方 的瓶子要進行轉(zhuǎn)瓶，使其光照均勻，子實體向上生長。
[0030] B、在培養(yǎng)過程中要嚴格控制溫度和濕度，所以要嚴格控制好溫度。在目前車間沒 控制溫度設(shè)備的情況下，要用地面灑水來控制培養(yǎng)室的溫度，一般一天灑水3次，但也要根 據(jù)當天的氣溫情況來變，溫度高要多灑，培養(yǎng)室溫度超過25°C，要開空調(diào)降溫。
[0031] C、每天培養(yǎng)室要通風換氣一到兩次，時間選擇在早上和傍晚溫度相對低的時候， 每次20~30分鐘。
[0032] D、接種后污染的瓶子要及時的拿出，把里面的培養(yǎng)基倒出重新滅菌后重新接種， 不能讓污染的瓶子放在培養(yǎng)室里培養(yǎng)，而造成整個培養(yǎng)室受雜菌的污染。
[0033] 實施例2 :
[0034] 一、蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的配制：
[0035] 本實施例蛹蟲草菌種培養(yǎng)基以水為溶液，由如下濃度的成分構(gòu)成：
[0036] 蛋白胨 25g/L、 酵母粉 4g/L、 葡萄糖 25g/L、 KH2PO4 1.4g/L、 NaCI 1g/L、 MgSO-? 1g/L、 奶粉 6g/L。
[0037] 制備如下：按以上重量配方稱取各成分，加純凈水1L，充分溶解和混勻后分裝入 三角培養(yǎng)瓶，每瓶裝200ml，121°C、1.IMpa滅菌30~40min，待其自然冷卻后備用。
[0038] 按實施例1相同的方法進行蛹蟲草Cordycepsmilitaris(L)Link菌種的活化和 培養(yǎng)。
[0039] 實施例3 :
[0040] 一、蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的配制：
[0041] 本實施例蛹蟲草菌種培養(yǎng)基以水為溶液，由如下濃度的成分構(gòu)成：
[0042] 蛋白胨 20g/L、 酵母粉 5g/L.、 葡萄糖 30g/L、 ΚΗ2Ρ0-1 丨~％1、 NaCl 0.8g/L、 MgSO.) 丨g/L、 奶粉 10g/L。
[0043] 制備如下：按以上重量配方稱取各成分，加純凈水1L，充分溶解和混勻后分裝入 三角培養(yǎng)瓶，每瓶裝200ml，121°C、1.IMpa滅菌30~40min，待其自然冷卻后備用。
[0044] 按實施例1相同的方法進行蛹蟲草Cordyceps militaris(L)Link菌種的活化和 培養(yǎng)。
[0045] 實施例4:
[0046] 一、蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的配制：
[0047] 本實施例蛹蟲草菌種培養(yǎng)基以水為溶液，由如下濃度的成分構(gòu)成：
[0048] 蛋白胨 22g/L、 酵母粉 4g/L、
[0049] 葡萄糖 25g/L、 KH?P〇4 1.5g/L、 NaCl 1.2g/L、 MgS〇4 1.2 g/L、 奶粉 _〗0g/L。
[0050] 制備如下：按以上重量配方稱取各成分，加純凈水1L，充分溶解和混勻后分裝入 三角培養(yǎng)瓶，每瓶裝200ml，121°C、1.IMpa滅菌30~40min，待其自然冷卻后備用。
[0051] 按實施例1相同的方法進行蛹蟲草Cordycepsmilitaris(L)Link菌種的活化和 培養(yǎng)。
[0052] 實施例5:
[0053] 一、蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的配制：
[0054] 本實施例蛹蟲草菌種培養(yǎng)基以水為溶液，由如下濃度的成分構(gòu)成：
[0055] 蛋白胨 15g/L、 酵母粉 3g/L、 葡萄糖 20g/L、 KH-iPOi 1.2 g-?,ν NaCI 0.8g/L'、 MgSa 1g/L、 奶粉 6g/L。
[0056] 制備如下：按以上重量配方稱取各成分，加純凈水1L，充分溶解和混勻后分裝入 三角培養(yǎng)瓶，每瓶裝200ml，121°C、1.IMpa滅菌30~40min，待其自然冷卻后備用。
[0057] 按實施例1相同的方法進行蛹蟲草Cordycepsmilitaris(L)Link菌種的活化和 培養(yǎng)。
[0058] 將以上實施例獲得的蛹蟲草干品進行稱重計算，結(jié)果如下表1所示。
[0059] 表1 :蛹蟲草干品重量
[0060]
[0061] 由以上實施例可知，使用本發(fā)明菌種培養(yǎng)基活化蛹蟲草Cordycepsmilitaris(L) Link菌種后進行培養(yǎng)，獲得的蛹蟲草子實體干品產(chǎn)量在0. 94~1. 07g之間，而按照正常培 養(yǎng)每瓶子實體干重產(chǎn)率由原來的1~1. 2g下降至0. 8g左右。所以利用本發(fā)明所提供的培 養(yǎng)基作為菌種培養(yǎng)基活化蛹蟲草菌種后培養(yǎng)可以有效緩解蛹蟲草菌種的退化現(xiàn)象。
[0062] 本發(fā)明的上述實施例是對本發(fā)明的說明而不能用于限制本發(fā)明，與本發(fā)明的權(quán)利 要求書相當?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何改變，都應認為是包括在權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種蛹蟲草菌種培養(yǎng)基，其特征在于：所述培養(yǎng)基以水為溶劑，由如下濃度的成分 構(gòu)成： 蛋白胨 15-25 g/L、 酵母粉 3~5g/L、 葡萄糖 15~3 O g/L、 磷酸二氫鉀 L2~1.5g/L、 氯化鈉 0.8~1.2g/L、 硫酸鎂 1~1.2g/L、 奶粉 4~10 g/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛹蟲草菌種培養(yǎng)基，其特征在于：由如下濃度的成分構(gòu)成： 蛋白胨 20g/L、 酵母粉 5g/L、 葡萄糖 15 g/L、 KH^PO4 1.2 g/L.、 NaCl l_2g/L、 MgSO4 1.2 g/L 奶粉 8g/L。3. 權(quán)利要求1所述的蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于步驟如下：以純凈水 將蛋白胨、酵母粉、葡萄糖、KH2P0 4、NaCl、MgSO4、奶粉溶解并充分混勻，分裝入培養(yǎng)瓶，密封， 滅菌，冷卻。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛹蟲草菌種培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于：所述滅菌的條 件為：121°C、I. IMpa 滅菌 20 ~45min。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種蛹蟲草菌種培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基以水為溶劑，由如下濃度的成分構(gòu)成：蛋白胨15～25g/L、酵母粉3～5g/L、葡萄糖15～30g/L、磷酸二氫鉀1.2～1.5g/L、氯化鈉0.8～1.2g/L、硫酸鎂1～1.2g/L、奶粉4～10g/L。使用該培養(yǎng)基作為菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)蛹蟲草可有效提高出草率，提高蛹蟲草產(chǎn)量，解決菌種退化等問題。
【IPC分類】C05G1/00
【公開號】CN105418192
【申請?zhí)枴緾N201510889837
【發(fā)明人】張耀洲, 蓋其靜
【申請人】正源堂（天津）生物科技有限公司
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年12月4日