一種北蟲草液體菌種的制備方法
【專利摘要】一種北蟲草液體菌種的制備方法，包括以下步驟：（1）配制培養(yǎng)基：（2）裝瓶滅菌：將配好的培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶，封口膜封口后，放入高壓滅菌鍋中滅菌；（3）接種：滅菌完成后，等培養(yǎng)液溫度冷卻后，接入北蟲草斜面母種；（4）培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)瓶放到培養(yǎng)箱中避光密閉培養(yǎng)，培養(yǎng)6-8天后即可得到北蟲草的液體菌種。本發(fā)明不使用發(fā)酵罐、搖床等設(shè)備，不需要通氣或者攪拌培養(yǎng)，可以減少投資，降低生產(chǎn)成本，非常適合大批量的成產(chǎn)和推廣；制備的北蟲草液體菌種，及時(shí)使用能保證菌絲的良好活性，樣品中菌絲濃度適中，培養(yǎng)液清澈透亮，便于觀察菌絲生長(zhǎng)狀況，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理污染的菌種，減少因?yàn)榫N污染接種造成的不必要損失。
【專利說(shuō)明】一種北蟲草液體菌種的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食用菌的使用生產(chǎn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種北蟲草液體菌種的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]國(guó)內(nèi)外學(xué)者一直在努力探索開(kāi)發(fā)培育新的蟲草菌種，進(jìn)行擴(kuò)大化生產(chǎn)和綜合開(kāi)發(fā)，以替代天然的冬蟲夏草，其中以蛹蟲草的研究最多。蛹蟲草又稱為北蟲草，作為傳統(tǒng)珍貴中藥材，北蟲草具有免疫調(diào)節(jié)作用、能夠治療系統(tǒng)失調(diào)、具有抗氧化抗凋亡活性、同時(shí)有治療哮喘，支氣管和炎癥的功能。隨著人們生活水平的提高，蟲草作為我國(guó)傳統(tǒng)的名貴滋補(bǔ)中藥材，由于的營(yíng)養(yǎng)、藥用價(jià)值很高，市場(chǎng)需求日益擴(kuò)大。在野生蟲草日益稀少的今天，北蟲草的子實(shí)體被中醫(yī)認(rèn)為是最好的入藥部位，且人工培養(yǎng)子實(shí)體已實(shí)現(xiàn)規(guī)模化，因此北蟲草的開(kāi)發(fā)和利用具有廣闊的前景。
[0003]北蟲草的菌種一般采用液體菌種，因?yàn)槠渚哂袦缇鷷r(shí)間短、培養(yǎng)周期短而且活性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)而備受重視。栽培實(shí)踐證明北蟲草栽培采用液體種方式更易獲得成功和高產(chǎn)，明顯優(yōu)于固體種栽培的效果?，F(xiàn)有的液體菌種培養(yǎng)制備需要搖床、發(fā)酵罐等設(shè)備，在搖床上培養(yǎng)的液體種菌絲體濃度高，易形成菌絲團(tuán)或者球，這樣不便于肉眼檢查亮度。
[0004]液體種制備是北蟲草栽培步驟中最關(guān)鍵技術(shù)之一，由于受技術(shù)和設(shè)備條件限制使北蟲草栽培還只是局限 在小范圍，這不利于北蟲草產(chǎn)業(yè)的全面推廣普及。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種北蟲草液體菌種的制備方法，該方法克服現(xiàn)有液體菌種培養(yǎng)過(guò)程中使用發(fā)酵罐、搖床等設(shè)備，投資大，操作不便等不足。
[0006]本發(fā)明的制備方法不使用發(fā)酵罐、搖床等設(shè)備，不用通氣或者攪拌培養(yǎng)，可以成功培養(yǎng)出健壯活力的菌絲，此方法簡(jiǎn)單方便、易于推廣。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下步驟:
(1)、配制培養(yǎng)基:將洗凈新鮮的馬鈴薯去皮，稱取200g切成小塊、小條或薄片，向其中加水1000 mL，煮沸20-30 min，用事先浸濕擰干的4層紗布過(guò)濾去渣，收集液汁，并向其中加入葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀I g以及硫酸鎂0.5 g攪拌均勻，并補(bǔ)足水分定容至1000ml,最后用氫氧化鈉水溶液調(diào)整PH至7.0-7.2得到培養(yǎng)基；
(2)、裝瓶滅菌:按照每瓶裝入的液體量為培養(yǎng)瓶體積的60%，將配好的培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶，封口膜封口后，放入高壓滅菌鍋中滅菌；所述的培養(yǎng)瓶為三角瓶、廣口的塑料瓶或玻璃瓶；
(3)、接種:滅菌完成后，等培養(yǎng)液溫度冷卻到28°C以下后，接入北蟲草斜面母種；
(4)、培養(yǎng):將接種好的培養(yǎng)瓶放到培養(yǎng)箱中避光密閉培養(yǎng)，培養(yǎng)6-8天后即可得到北蟲草的液體菌種；所述培養(yǎng)箱溫度控制在20-25°C，濕度保持在60-70%。
[0008]上述方案可進(jìn)一步優(yōu)選為:所述步驟(2)中封口膜采用邊長(zhǎng)為12cm、厚度為5mm耐高溫?zé)o毒薄膜。
[0009]所述步驟(2)中的高壓滅菌程序?yàn)?21°C下保持30min。
[0010]所述步驟(3)的接種是指在無(wú)菌條件下挑0.5 cmX0.5 cm小方塊4塊北蟲草斜
面母種接入培養(yǎng)基中。
[0011]所述步驟(4)中的避光密閉培養(yǎng)需要將接種的菌種瓶先靜置培養(yǎng)48h，以后每天人工搖晃2-3次，每次2分鐘，防止菌絲結(jié)塊，同時(shí)檢查菌絲生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)污染的菌種及時(shí)剔除。
[0012]與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明提供的方法不使用發(fā)酵罐、搖床等設(shè)備，不需要通氣或者攪拌培養(yǎng)，可以減少投資，降低生產(chǎn)成本，非常適合大批量的成產(chǎn)和推廣。
[0013]2、本發(fā)明提供的方法制備的北蟲草液體菌種，及時(shí)使用能保證菌絲的良好活性，樣品中菌絲濃度適中，培養(yǎng)液清澈透亮，便于觀察菌絲生長(zhǎng)狀況，能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理污染的菌種，減少因?yàn)榫N污染接種造成的不必要損失。
[0014]3、本發(fā)明提供的方法不用電，不消耗能源，對(duì)環(huán)境沒(méi)有任何污染，符合國(guó)家節(jié)能環(huán)保的產(chǎn)業(yè)政策。
【具體實(shí)施方式】
`[0015]實(shí)施例1
1、準(zhǔn)備洗干凈的塑料培養(yǎng)瓶500 mL16只,邊長(zhǎng)為12cm,厚度為5mm的正方形的聚丙烯
酰胺封口膜和適量橡皮筋。
[0016]2、配制方法:洗凈新鮮的馬鈴薯，去皮后稱取400 g，切成小塊(或小條、薄片均可)，加水2000 mL，煮沸20-30 min，至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用事先浸濕擰干的4層紗布過(guò)濾去渣，取其液汁于燒杯中，再加入葡萄糖40 g，磷酸二氫鉀2.0 g，硫酸鎂1.0 g，并攪拌均勻，補(bǔ)足水至2000 mL ;最后用氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH7.0-7.2。
[0017]3、裝瓶滅菌:將配好的培養(yǎng)液按照每瓶250 mL裝入培養(yǎng)瓶后，用準(zhǔn)備好的聚丙烯酰胺封口膜封口后，用橡皮筋扎緊，放入高壓滅菌鍋中按照常規(guī)滅菌，滅菌溫度121°C，時(shí)間30mino
[0018]4、接種:等培養(yǎng)液溫度冷卻到28°C以下后，在無(wú)菌的條件下接入北蟲草斜面母種，挑0.5 cmX 0.5 cm小方塊4塊。
[0019]5、培養(yǎng):將接種好的培養(yǎng)瓶放到培養(yǎng)箱中避光密閉培養(yǎng),先靜置培養(yǎng)48h,以后每天人工搖晃3次，每次2分鐘，防止菌絲結(jié)塊，同時(shí)檢查菌絲生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)污染的菌種及時(shí)剔除，培養(yǎng)箱溫度控制在20-25°C，濕度保持在60-70%。培養(yǎng)6_8天后即可得到北蟲草的液體菌種。
[0020]6、使用:將獲得的液體菌種導(dǎo)入滅菌的處理的瓶中，用移液槍均勻接種到北蟲草大米培養(yǎng)基中，每瓶接種3-5 mL。
[0021]下面將連續(xù)振蕩方法(搖床、發(fā)酵罐)制備的液體菌種與本發(fā)明定時(shí)振蕩制備的液體菌種做比較，結(jié)果如下表:
【權(quán)利要求】
1.一種北蟲草液體菌種的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)、配制培養(yǎng)基:將洗凈新鮮的馬鈴薯去皮，稱取200g切成小塊、小條或薄片，向其中加水1000 mL，煮沸20-30 min，用事先浸濕擰干的4層紗布過(guò)濾去渣，收集液汁，并向其中加入葡萄糖20 g、磷酸二氫鉀I g以及硫酸鎂0.5 g攪拌均勻，并補(bǔ)足水分定容至1000ml,最后用氫氧化鈉水溶液調(diào)整PH至7.0-7.2得到培養(yǎng)基； (2)、裝瓶滅菌:按照每瓶裝入的液體量為培養(yǎng)瓶體積的60%，將配好的培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶，封口膜封口后，放入高壓滅菌鍋中滅菌；所述的培養(yǎng)瓶為三角瓶、廣口的塑料瓶或玻璃瓶； (3)、接種:滅菌完成后，等培養(yǎng)液溫度冷卻到28°C以下后，接入北蟲草斜面母種； (4)、培養(yǎng):將接種好的培養(yǎng)瓶放到培養(yǎng)箱中避光密閉培養(yǎng)，培養(yǎng)6-8天后即可得到北蟲草的液體菌種；所述培養(yǎng)箱溫度控制在20-25°C，濕度保持在60-70%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的北蟲草液體菌種的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)中封口膜采用邊長(zhǎng)為12cm、厚度為5mm耐高溫?zé)o毒薄膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的北蟲草液體菌種的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)中的高壓滅菌程序?yàn)?21°C下保持30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的北蟲草液體菌種的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)的接種是指在無(wú)菌條件下挑0.5 cmX0.5 cm小方塊4塊北蟲草斜面母種接入培養(yǎng)基中。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的北蟲草液體菌種的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中的避光密閉培養(yǎng)需要將接種的菌種瓶先靜置培養(yǎng)48h，以后每天人工搖晃2-3次，每次2分鐘，防止菌絲結(jié)塊，同時(shí)檢查菌`絲生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)污染的菌種及時(shí)剔除。
【文檔編號(hào)】A01G1/04GK103858676SQ201410110255
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年3月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月24日
【發(fā)明者】周元科, 陳永民, 劉群濤, 支月娥, 劉霞, 劉濤 申請(qǐng)人:山東晨陽(yáng)菌業(yè)有限公司