專(zhuān)利名稱(chēng):光合細(xì)菌制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種光合細(xì)菌制劑的制備方法。
技術(shù)背景目前，光合細(xì)菌制劑的制備方法種類(lèi)繁多、互不相同。其中，有代表性的一種制備方法為在菌種培養(yǎng)液中接種30％以上的渾球紅假單胞菌(Rhodopseudomonas Sphaeroides)P4株和沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonas Palustris)1號(hào)株的混合菌群，接種后的培養(yǎng)液在溫度為26～32℃、光照強(qiáng)度為3000～5000LX、PH為6～8的厭氧條件下培養(yǎng)48～72小時(shí)，然后將培養(yǎng)出的菌液在敞開(kāi)體系中、自然光照下，根據(jù)菌液中的碳源殘存量適時(shí)添加一次以上的碳源，在溫度為20～35℃、好氧充氣條件下培養(yǎng)72～120小時(shí)后，收集菌液分裝，制成液體微生物混合制劑。眾所周知，菌液中的菌體存在遮光效應(yīng)和貼壁性。因上述制備方法中混合菌群接種于菌種培養(yǎng)液中時(shí)未經(jīng)過(guò)攪拌，且接種后培養(yǎng)液的厭氧培養(yǎng)過(guò)程為一種靜置培養(yǎng)方式，換言之，所述培養(yǎng)液在厭氧培養(yǎng)過(guò)程中始終處于靜止、不流動(dòng)狀態(tài)，故在接種及厭氧培養(yǎng)過(guò)程中，菌體的遮光效應(yīng)和貼壁性相當(dāng)顯著，從而使該方法制備的液體微生物混合制劑，菌體得率低、品質(zhì)不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種菌體得率高、品質(zhì)穩(wěn)定的光合細(xì)菌制劑的制備方法。
本發(fā)明所提供的光合細(xì)菌制劑的制備方法依次包括以下工藝步驟光合細(xì)菌與菌種培養(yǎng)液按容積比為(0.6～1)∶(1～1.4)的比例混合并攪拌，得混合液；混合液在溫度為25～32℃、光照強(qiáng)度為1000～2500LX、PH為7～7.5的厭氧條件下并經(jīng)定時(shí)攪拌，培養(yǎng)73～99小時(shí)將培養(yǎng)出的菌液在光照強(qiáng)度低于50LX、敞開(kāi)體系中，適時(shí)添加碳源，以保證菌液中的碳源含量始終維持在1600ppm以上，在溫度為22～32℃、好氧充氣條件下培養(yǎng)121～143小時(shí)，當(dāng)菌液的活菌濃度達(dá)到2.8×109個(gè)/ml以上時(shí)，制成光合細(xì)菌制劑。
所述光合細(xì)菌至少為CGMCC № 0192混合菌群中任意一屬的菌株，所述混合菌群中含有9株光合細(xì)菌，分別為紅螺菌屬(Rhodospirillium)1株，紅假單胞菌屬(Rhodopseudomonas)2株，紅細(xì)菌屬(Rodobacter)2株，著色菌屬(Chromatium)1株，綠桿菌屬(Chlorobium)1株，紅硫細(xì)菌2株。在公開(kāi)號(hào)為CN1108944A、CN1101498A的兩份中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)說(shuō)明書(shū)中對(duì)上述混合菌群的菌種保藏情況進(jìn)行了披露，上述兩項(xiàng)專(zhuān)利申請(qǐng)的申請(qǐng)人—太原康強(qiáng)生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司已于1993年2月 22日將上述混合菌群在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)進(jìn)行了保藏，保藏編號(hào)為№0192。
所述菌種培養(yǎng)液的組成為乙酸鈉4～4.8kg，乙酸銨0.4～0.48kg，磷酸二氫鉀0.5～1kg，氯化銨1～1.5kg，氯化鎂0.4～0.8kg，氯化鈣0.2～0.4kg，三氯化鐵0.01～0.02kg，氯化鈉0.6～1.2kg，酵母浸膏0.6～0.8kg，生物素2～4kg，維生素B10.02kg，水1000升。
所述光合細(xì)菌與菌種培養(yǎng)液混合時(shí)的攪拌時(shí)間為20～30分鐘。
所述混合液定時(shí)攪拌的方式為每隔20～30分鐘攪拌一次，每次攪拌的時(shí)間為5～7分鐘。
每次在每升菌液中按乙酸鈉與丙酸鈉的重量為10∶2的比例添加碳源。
所述好氧充氣的條件為每升菌液中每分鐘的充氣量為0.04～0.06升。
以上所說(shuō)的敞開(kāi)體系是指敞口的培養(yǎng)容器。
以上所說(shuō)的菌種培養(yǎng)液，其組成成分之一的水采用凈清河水、井水、自來(lái)水中任意一種均可，但凈清河水、井水中諸如懸浮物含量、BOD值、大腸桿菌數(shù)等各項(xiàng)指標(biāo)，均需符合出廠自來(lái)水的標(biāo)準(zhǔn)。
采用以上的方法后，因光合細(xì)菌與菌種培養(yǎng)液混合并攪拌而得混合液，即光合細(xì)菌接種于菌種培養(yǎng)液中時(shí)經(jīng)過(guò)攪拌，故在厭氧培養(yǎng)過(guò)程前，混合液中菌體的遮光效應(yīng)和貼壁性相當(dāng)輕微；又因所述混合液是在厭氧條件下并經(jīng)定時(shí)攪拌進(jìn)行培養(yǎng)，這樣混合液在厭氧培養(yǎng)過(guò)程中經(jīng)常處于流動(dòng)狀態(tài)，故在厭氧培養(yǎng)過(guò)程中，混合液中菌體的遮光效應(yīng)和貼壁性也相當(dāng)輕微。從而使本發(fā)明所述方法制備的光合細(xì)菌制劑，菌體得率高、品質(zhì)穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)實(shí)施例更好地說(shuō)明本發(fā)明，但它們不是對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)施例一光合細(xì)菌采用CGMCC №0192混合菌群。
配制菌種培養(yǎng)液，其組成為乙酸鈉4.8kg，乙酸銨0.48kg，磷酸二氫鉀1kg，氯化銨1.5kg，氯化鎂0.8kg，氯化鈣0.4kg，三氯化鐵0.02kg，氯化鈉1.2kg，酵母浸膏0.8kg，生物素4kg，維生素B10.002kg，凈清河水1000升。
將上述的光合細(xì)菌與菌種培養(yǎng)液按容積比為0.6∶1.4的比例混合并置于潔凈的帶蓋攪拌桶中，攪拌30分鐘得混合液，帶蓋攪拌桶可外購(gòu)(以下實(shí)施例同此)；混合液在溫度為25℃、光照強(qiáng)度為1000LX、PH為7的厭氧條件(即蓋緊所述攪拌桶的桶蓋，以下實(shí)施例同此)下并經(jīng)定時(shí)攪拌，培養(yǎng)73小時(shí)，所述混合液定時(shí)攪拌的方式為每隔20分鐘攪拌一次，每次攪拌的時(shí)間為7分鐘(需要說(shuō)明的是，每次攪拌的時(shí)間-7分鐘是計(jì)算在每次間隔的時(shí)間-20分鐘之內(nèi)的，以下實(shí)施例同此)將培養(yǎng)出的菌液在光照強(qiáng)度為20LX、敞開(kāi)體系(即掀開(kāi)所述攪拌桶的桶蓋，以下實(shí)施例同此)中，每次在每升菌液中按乙酸鈉與丙酸鈉的重量為10∶2的比例添加碳源，以保證菌液中的碳源含量始終維持在1900ppm，在溫度為22℃、好氧充氣(每升菌液中每分鐘的充氣量為0.06升)條件下培養(yǎng)121小時(shí)，當(dāng)菌液的活菌濃度達(dá)到5×109個(gè)/ml時(shí)，制成光合細(xì)菌制劑。
實(shí)施例二光合細(xì)菌采用CGMCC №0192混合菌群中紅螺菌屬(Rhodospirillium)的1株菌株、紅細(xì)菌屬(Rodobacter)的2株菌株。
配制菌種培養(yǎng)液，其組成為乙酸鈉4.4kg，乙酸銨0.44kg，磷酸二氫鉀0.8kg，氯化銨1.3kg，氯化鎂0.6kg，氯化鈣0.3kg，三氯化鐵0.015kg，氯化鈉0.9kg，酵母浸膏0.7kg，生物素3kg，維生素B10.02kg，自來(lái)水1000升。
將上述的光合細(xì)菌與菌種培養(yǎng)液按容積比為0.8∶1.2的比例混合并置于潔凈的帶蓋攪拌桶中，攪拌25分鐘得混合液；混合液在溫度為28℃、光照強(qiáng)度為1750LX、PH為7.3的厭氧條件下并經(jīng)定時(shí)攪拌，培養(yǎng)86小時(shí)15分鐘，所述混合液定時(shí)攪拌的方式為每隔25分鐘攪拌一次，每次攪拌的時(shí)間為6分鐘；將培養(yǎng)出的菌液在光照強(qiáng)度為30LX、敞開(kāi)體系中，每次在每升菌液中按乙酸鈉與丙酸鈉的重量為10∶2的比例添加碳源，以保證菌液中的碳源含量始終維持在1800ppm，在溫度為27℃、好氧克氣(每升菌液中每分鐘的充氣量為0.05升)條件下培養(yǎng)132小時(shí)，當(dāng)菌液的活菌濃度達(dá)到3.5×109個(gè)/ml時(shí)，制成光合細(xì)菌制劑。
實(shí)施例三光合細(xì)菌采用CGMCC №0192混合菌群中紅螺菌屬(Rhodospirillium)的1株菌株。
配制菌種培養(yǎng)液，其組成為乙酸鈉4kg，乙酸銨0.4kg，磷酸二氯鉀0.5kg，氯化銨1kg，氯化鎂0.4kg，氯化鈣0.2kg，三氯化鐵0.01kg，氯化鈉0.6kg，酵母浸膏0.6kg，生物素2kg，維生素B10.02kg，井水1000升。
將上述的光合細(xì)菌與菌種培養(yǎng)液按容積比為1∶1的比例混合并置于潔凈的帶蓋攪拌桶中，攪拌20分鐘得混合液；混合液在溫度為32℃、光照強(qiáng)度為2500LX、PH為7.5的厭氧條件下并經(jīng)定時(shí)攪拌，培養(yǎng)99小時(shí)，所述混合液定時(shí)攪拌的方式為每隔30分鐘攪拌一次，每次攪拌的時(shí)間為5分鐘；將培養(yǎng)出的菌液在光照強(qiáng)度為40LX、敞開(kāi)體系中，每次在每升菌液中按乙酸鈉與丙酸鈉的重量為10∶2的比例添加碳源，以保證菌液中的碳源含量始終維持在1700ppm，在溫度為32℃、好氧充氣(每升菌液中每分鐘的充氣量為0.04升)條件下培養(yǎng)143小時(shí)，當(dāng)菌液的活菌濃度達(dá)到2.9×109個(gè)/ml時(shí)，制成光合細(xì)菌制劑。
權(quán)利要求
1.光合細(xì)菌制劑的制備方法，它依次包括以下工藝步驟(1)光合細(xì)菌與菌種培養(yǎng)液按容積比為(0.6～1)∶(1～1.4)的比例混合并攪拌，得混合液；(2)混合液在溫度為25～32℃、光照強(qiáng)度為1000～2500LX、PH為7～7.5的厭氧條件下并經(jīng)定時(shí)攪拌，培養(yǎng)73～99小時(shí)；(3)將(2)中培養(yǎng)出的菌液在光照強(qiáng)度低于50LX、敞開(kāi)體系中，適時(shí)添加碳源，以保證菌液中的碳源含量始終維持在1600ppm以上，在溫度為22～32℃、好氧充氣條件下培養(yǎng)121～143小時(shí)，當(dāng)菌液的活菌濃度達(dá)到2.8×109個(gè)/ml以上時(shí)，制成光合細(xì)菌制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的光合細(xì)菌制劑的制備方法，其特征在于所述光合細(xì)菌至少為CGMCC № 0192混合菌群中任意一屬的菌株，所述混合菌群中含有9株光合細(xì)菌，分別為紅螺菌屬(Rhodospirillium)1株，紅假單胞菌屬(Rhodopseudomonas)2株，紅細(xì)菌屬(Rodobacter)2株，著色菌屬(Chromatium)1株，綠桿菌屬(Chlorobium)1株，紅硫細(xì)菌2株。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的光合細(xì)菌制劑的制備方法，其特征在于所述菌種培養(yǎng)液的組成為乙酸鈉4～4.8kg，乙酸銨0.4～0.48kg，磷酸二氫鉀0.5～1kg，氯化銨1～1.5kg，氯化鎂0.4～0.8kg，氯化鈣0.2～0.4kg，三氯化鐵0.01～0.02kg，氯化鈉0.6～1.2kg，酵母浸膏0.6～0.8kg，生物素2～4kg，維生素B10.02kg，水1000升。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的光合細(xì)菌制劑的制備方法，其特征在于所述光合細(xì)菌與菌種培養(yǎng)液混合時(shí)的攪拌時(shí)間為20～30分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的光合細(xì)菌制劑的制備方法，其特征在于所述混合液定時(shí)攪拌的方式為每隔20～30分鐘攪拌一次，每次攪拌的時(shí)間為5～7分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的光合細(xì)菌制劑的制備方法，其特征在于每次在每升菌液中按乙酸鈉與丙酸鈉的重量為10∶2的比例添加碳源。
7.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的光合細(xì)菌制劑的制備方法，其特征在于所述好氧充氣的條件為每升菌液中每分鐘的充氣量為0.04～0.06升。
專(zhuān)利摘要
本發(fā)明提供一種光合細(xì)菌制劑的制備方法，即光合細(xì)菌與菌種培養(yǎng)液按容積比為(0.6～1)∶(1～1.4)的比例混合并攪拌，得混合液；混合液在溫度為25～32℃、光照強(qiáng)度為1000～2500LX、PH為7～7.5的厭氧條件下并經(jīng)定時(shí)攪拌，培養(yǎng)73～99小時(shí)；將培養(yǎng)出的菌液在光照強(qiáng)度低于50LX、敞開(kāi)體系中，適時(shí)添加碳源，以保證菌液中的碳源含量始終維持在1600ppm以上，在溫度為22～32℃、好氧充氣條件下培養(yǎng)121～143小時(shí)，使菌液的活菌濃度達(dá)到2.8×10
文檔編號(hào)C12N1/20GKCN1400303SQ02135435
公開(kāi)日2003年3月5日 申請(qǐng)日期2002年8月25日
發(fā)明者常軍 申請(qǐng)人:常軍導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan