本發(fā)明屬于植物抗逆鑒定，具體涉及一個大豆耐鹽分子標記dnka281及其引物。

背景技術：

1、土地鹽漬化是限制我國農業(yè)發(fā)展的主要因素之一。培育耐鹽大豆新品種，有效利用鹽漬化土地，是提高大豆種植面積和增加總產量的潛在途徑。目前的常規(guī)耐鹽育種為幼苗生長試驗篩選法以及生理生化指標測定篩選法。

2、常規(guī)的育種手段周期長、見效慢，而開發(fā)分子標記應用于分子輔助育種可以有效克服該缺點。大豆的耐鹽性在不同時期往往受控于不同的基因，目前有少量大豆耐鹽分子標記的開發(fā)，但主要針對于芽期和苗期的基因或基因座。亟需一種對任意時期組織時期均可檢測的方法。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了提供一種在大豆的花莢期鑒定大豆耐鹽抗性的分子標記。

2、本發(fā)明提供一種大豆耐鹽抗性相關的分子標記，所述分子標記的基因為glyma.04g018300，且在2804bp位上的核苷酸位點為c或t。

3、本發(fā)明提供一種擴增上述的分子標記的引物組合，所述引物組合為上游引物如seq?id?no.3或seq?id?no.4所示，下游引物如seq?id?no.5所示。

4、本發(fā)明提供一種檢測大豆耐鹽抗性的試劑盒，所述試劑盒包括上述的引物組合。

5、進一步地限定，所述試劑盒還包括flu-arms?2x?pcr?mix試劑。

6、本發(fā)明提供一種上述的分子標記或上述的引物組合在制備鑒定大豆耐鹽抗性試劑盒中的應用。

7、本發(fā)明提供一種上述的分子標記或上述的引物組合在篩選大豆耐鹽的育種中的應用。

8、本發(fā)明提供一種鑒定大豆耐鹽性的方法，所述的方法的具體步驟如下：

9、步驟1：提取待檢測大豆的dna；

10、步驟2：利用權利要求2所述的引物組合進行pcr反應，檢測待檢測品種的大豆的基因型。

11、進一步地限定，步驟2中的pcr反應條件為pcr反應程序為95℃預變性10min；擴增循環(huán)1：95℃變性15s，61℃-55℃，-0.6℃/cycles，退火60s，共10個循環(huán)；擴增循環(huán)2：95℃變性15s，55℃退火60s，共32個循環(huán)。

12、進一步地限定，步驟3中若鑒定大豆品種為cc基因型則為低耐鹽性的大豆品種，若鑒定的大豆品種為tt基因型，則大豆品種為高耐鹽性的大豆品種。

13、進一步地限定，cc基因型待檢測的snp位點是4號染色體上的1435281位點為c，tt型待檢測的snp位點是4號染色體上的1435281位點為t。

14、cc基因型待檢測的snp位點為glyma.04g018300的cds序列的第1664bp處待檢測的snp位點為c，tt基因型待檢測的snp位點為glyma.04g018300的cds序列的第1664bp處待檢測的snp位點為t。

15、有益效果：本發(fā)明涉及一個大豆耐鹽新標記dnka281(標記的染色體為大豆的7號染色體，且在19078765bp的核苷酸的位點為g或t)及其專用引物，該標記為一個與大豆花莢期耐鹽性相關的kasp標記。通過對大豆自然群體的花莢期耐鹽相關表型進行鑒定，結合重測序獲得的數據，進行全基因組關聯(lián)分析(gwas)，挖掘顯著相關snp位點，并從與該位點連鎖的基因中篩選候選基因。進一步，在自然群體中挑選極端抗感材，基于它們耐鹽相關表型性狀的表型值，結合基因組重測序數據對候選基因進行關聯(lián)分析，挖掘到大豆花莢期耐鹽基因(glyma.04g018300)及基因上的功能性snp位點，針對該位點開發(fā)的kasp標記，即dnka281。該標記可以在大豆材料中進行基因型分型，準確清晰地將含有耐鹽基因型的材料區(qū)分出來，篩選出的材料在花莢期鹽處理后的株高的平均值顯著高于非耐鹽材料。在實際生產中，可利用該標記對有耐鹽潛力的大豆育種材料進行篩選。

技術特征：

1.一種大豆耐鹽抗性相關的分子標記，其特征在于，所述分子標記的基因為glyma.04g018300，且在2804bp位上的核苷酸位點為c或t。

2.擴增權利要求1所述的分子標記的引物組合，其特征在于，所述引物組合為上游引物如seq?id?no.3或seq?id?no.4所示，下游引物如seq?id?no.5所示。

3.一種檢測大豆耐鹽抗性的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求2所述的引物組合。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括flu-arms?2x?pcrmix試劑。

5.權利要求1所述的分子標記或權利要求2所述的引物組合在制備鑒定大豆耐鹽抗性試劑盒中的應用。

6.權利要求1所述的分子標記或權利要求2所述的引物組合在篩選大豆耐鹽的育種中的應用。

7.一種鑒定大豆耐鹽性的方法，其特征在于，所述的方法的具體步驟如下：

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟2中的pcr反應條件為pcr反應程序為95℃預變性10min；擴增循環(huán)1：95℃變性15s，61℃-55℃，-0.6℃/cycles，退火60s，共10個循環(huán)；擴增循環(huán)2：95℃變性15s，55℃退火60s，共32個循環(huán)。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟3中若鑒定大豆品種為cc基因型則為低耐鹽性的大豆品種，若鑒定的大豆品種為tt基因型，則大豆品種為高耐鹽性的大豆品種。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，cc基因型待檢測的snp位點是4號染色體上的1435281位點為c，tt型待檢測的snp位點是4號染色體上的1435281位點為t。

技術總結
本發(fā)明公開一個大豆耐鹽分子標記DNKA281及其引物，屬于植物抗逆鑒定技術領域。本發(fā)明為了提供一種在大豆的花莢期鑒定大豆耐鹽抗性的分子標記。本發(fā)明提供一種大豆耐鹽抗性相關的分子標記，所述分子標記的基因為Glyma.04G018300，且在2804bp位上的核苷酸位點為C或T。該標記可以在大豆材料中進行基因型分型，準確清晰地將含有耐鹽基因型的材料區(qū)分出來，篩選出的材料在花莢期鹽處理后的株高的平均值顯著高于非耐鹽材料。在實際生產中，可利用該標記對有耐鹽潛力的大豆育種材料進行篩選。

技術研發(fā)人員：孫茂霖,韓英鵬,王禹賀,明萌,韓金鳳,劉爽,孟祥坤
受保護的技術使用者：東北農業(yè)大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6