本發(fā)明涉及選擇性抑制ret蛋白活性的化合物，還涉及這些化合物的制備方法和及其藥物組合物的用途.

背景技術(shù)：

1、ret是一個原癌基因，位于10號染色體.ret基因所編碼的ret蛋白是一種存在于細(xì)胞膜上的受體酪氨酸激酶(rtk)，屬于鈣黏蛋白超家族成員，對許多生理功能如早期胚胎發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、腎臟形態(tài)發(fā)生、精子發(fā)生和造血功能是必不可少的(nat.rev.cancer2014，14(3)：173-86.).

2、ret基因的異常，包括激活性點突變和基因融合，會導(dǎo)致ret異常二聚化或促進(jìn)配體非依賴的激活，是多種實體瘤的致癌驅(qū)動因素.ret基因的點突變，如v804m、m918t、c620r/s，c634r/w/y等，會促使ret異常二聚化或與atp結(jié)合能力增強(qiáng)等，常見于多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤和50％甲狀腺髓樣癌患者中.ret基因的染色體重排會出現(xiàn)ret基因的激酶結(jié)構(gòu)域與kif5b、ccdc6、ncoa4等不同的基因發(fā)生融合，導(dǎo)致ret的高表達(dá)或配體非依賴的二聚化激活，成為腫瘤惡性增殖的驅(qū)動因素(transl?lung?cancer?res.2015；4(2)：156-164).ret基因融合存在于5％-40％的甲狀腺乳頭狀癌和1-2％非小細(xì)胞肺癌患者；以及多種實體瘤，包括前列腺癌和乳腺癌等.ret融合陽性的nsclc患者往往更年輕(≤60歲)，很少或沒有吸煙史，疾病分期更晚，并且有較高腦轉(zhuǎn)移風(fēng)險(nat?rev?clin?oncol，2018.15(3)：p.151-167).

3、nsclc是一種常見的惡性腫瘤，發(fā)病率都很高.據(jù)統(tǒng)計每年攜帶ret融合陽性的nsclc新病例數(shù)約為10,000，這與慢性粒細(xì)胞白血病的發(fā)生率大致相同.2012年，ret融合陽性首次被確定為nsclc的驅(qū)動因素(nat?med，2012，18(3)：p.375-7.)，當(dāng)時只有幾種具有ret抑制活性的多激酶的抑制劑(mki)可用，包括：cabozantinib、vandetanib、lenvatinib、sorafenib、alectinib等，初步數(shù)據(jù)表明，mki對ret融合陽性nsclc的臨床獲益有限，客觀緩解率(orr)為16-53％(取決于具體的mki和患者人群)，中位無進(jìn)展生存期(pfs)僅為3.4-7.3個月(oncologist，2023，28(5)：p.402-413.)，且伴隨著因?qū)ζ渌っ?如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2(vegfr2))具有明顯抑制作用而產(chǎn)生的毒性副作用，脫靶毒性導(dǎo)致23-73％的患者劑量降低，8-24％的患者停藥(nat?rev?clin?oncol.2018，15(3)：151-167).此外，盡管抗pd1/pd-l1導(dǎo)向的免疫檢查點抑制劑(ici)被廣泛用于治療nsclc患者，但對于ret融合陽性的nsclc患者，包括pd-l1表達(dá)陽性的患者，使用ici的效果不佳(orr僅為0％-20％，中位pfs為2.2-3.4個月)(j?hematol?oncol,2020，13(1)：p.37).因此，開發(fā)高選擇性的ret抑制劑吸引了眾多制藥公司的研究興趣，特異性的ret抑制劑的開發(fā)已經(jīng)成為提高ret驅(qū)動的癌癥的治療效果的新興治療手段。

4、最近，根據(jù)libretto-001(nct03157128)和arrow研究(nct03037385)成果，兩種選擇性的ret抑制劑selpercatinib和pralsetinib在晚期ret改變的實體瘤中具有快速和持久的臨床療效，并且治療相關(guān)不良事件較少.這兩種藥物已被fda批準(zhǔn)用于治療ret融合陽性的nsclc成人患者和ret突變或ret融合陽性的甲狀腺癌成人和兒童患者，并成為該類患者的一線療法(journal?of?clinical?oncology，2023，41(2)：p.385-394).pralsetinib目前在中國被批準(zhǔn)用于鉑類化療后的局部晚期或轉(zhuǎn)移性ret融合陽性nsclc(https：//www.cstonepharma.com/en/html/news/2566.html).

5、盡管高選擇性ret酪氨酸激酶抑制劑(ret-tkis)具有令人鼓舞的療效，但nsclc靶向治療的經(jīng)驗表明，在使用ret-tkis治療ret融合陽性nsclc過程中，耐藥性仍是一個不可避免的重要問題，最終的獲得性耐藥將會限制高選擇性ret抑制劑的獲益持續(xù)時間.2020年，首次報道了ret融合陽性nsclc患者在使用selpercatinib治療后出現(xiàn)ret?g810溶劑前沿突變，且g810r/s/c同時存在于患者的多種組織，導(dǎo)致耐藥且患者疾病進(jìn)展(j?thoraconcol.2020?april；15(4)：541-549).隨后，2021年，ret融合陽性nsclc患者在使用pralsetinib后也被報道出現(xiàn)ret?l730屋頂突變，導(dǎo)致pralsetinib耐藥(precisiononcology(2021)5：48).目前，已報道的ret獲得性耐藥突變位點包括溶劑前沿突變(retg810)、屋頂突變(ret?l730)、守門員突變(ret?v804)，鉸鏈突變(rety806)及retv804m/g810s雙突變等，這些突變均能干擾抑制劑與ret激酶結(jié)構(gòu)域的結(jié)合，對selpercatinib和pralsetinib表現(xiàn)出交叉耐藥的特性(ann?oncol.2021?february；32(2)：261-268.)；通過回顧性分析，存在13％的患者出現(xiàn)了ret突變的獲得性耐藥，發(fā)生比例高，這些患者的緩解持續(xù)時間(dor)和無進(jìn)展生存期(pfs)時間更短.可預(yù)期的是，隨著越來越多適應(yīng)患者接受ret選擇性抑制劑的治療，耐藥患者的數(shù)量增多也會成為一大問題，未來，開發(fā)針對ret耐藥突變的新一代ret抑制劑，以有效克服這些患者的耐藥問題，存在巨大的臨床需求.

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種ret選擇性抑制劑，其為通式(i)所表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、多晶型物或異構(gòu)體。本發(fā)明同時提供了一系列由通式(i)所表示的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、多晶型物或異構(gòu)體、包含這些化合物的藥物組合物，以及用此類化合物治療疾病的方法.

2、在一個方面，本發(fā)明提供了式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、多晶型物或異構(gòu)體：

3、

4、其中，

5、l為-nh-(co)-cr3r4-(co)-nh-、-nh-(co)-nh-、-cr3r4-(co)-nh-、或者-(co)-nh-，

6、r1選自5-6元雜芳基、3-12元雜環(huán)基、-o-c1-6烷基和-s-c1-6烷基，所述雜芳基和雜環(huán)基可各自任選地被鹵素、c1-6烷基、-cn、-oh、-nr6r7、-o-c1-6烷基、或者-s-c1-6烷基取代，所述烷基可任選地被鹵素、-cn、-oh、-nr6r7、-o-c1-6烷基、或者-s-c1-6烷基取代，

7、r2選自-cn、-c≡c-(c1-6烷基)、5-6元雜芳基和3-12元雜環(huán)基，所述雜芳基和雜環(huán)基可各自任選地被鹵素、c1-6烷基、-cn、-oh、-nr6r7、-o-c1-6烷基、或者-s-c1-6烷基取代，

8、x、x1、x2、x3和x4各自獨立地選自n和cr8，

9、r8各自獨立地選自h、鹵素、-cn、-oh、-nr6r7、c1-6烷基、-o-c1-6烷基和-s-c1-6烷基，

10、a為苯基、5-6元雜芳基、3-8元雜環(huán)基、或者3-8元環(huán)烷基，所述苯基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基可任選地被r5取代，

11、r5選自鹵素、-cn、-oh、-nr6r7、c1-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、-(ch2)0-1-(3-8元環(huán)烷基)、-(ch2)0-1-(3-8元雜環(huán)基)、-(ch2)0-1-(6-10元芳基)、-(ch2)0-1-(5-12元雜芳基)、-o-c1-6烷基、或者-s-c1-6烷基取代，所述烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基可任選地被鹵素、-cn、-oh、-nr6r7、c1-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、-o-c1-6烷基、或者-s-c1-6烷基取代，

12、r3和r4各自獨立地選自h和c1-6烷基，或者r3和r4連到一起形成3-6元碳環(huán)，

13、r6和r7各自獨立地選自h和c1-6烷基，

14、r9為h、-nh2、或者-nh-c1-6烷基.

15、在一些實施方式中，l為-cr3r4-(co)-nh-，r3和r4如以上所定義.

16、在一些實施方式中，r2選自5-6元雜芳基和3-12元雜環(huán)基，所述雜芳基和雜環(huán)基可各自任選地被鹵素、c1-6烷基、-cn、-oh、-nr6r7、-o-c1-6烷基、或者-s-c1-6烷基取代，r6和r7如以上所定義.

17、在一些實施方式中，r9為h或者-nh2，優(yōu)選為-nh2.

18、在本發(fā)明的一些實施方案中，本發(fā)明提供了以下化合物：

19、

20、

21、或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、多晶型物或異構(gòu)體.

22、本發(fā)明另一方面還涉及藥物組合物，其包含本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、多晶型物或異構(gòu)體，以及藥學(xué)上可接受的載體；

23、在另一方面，本發(fā)明提供了治療跟ret相關(guān)的疾病的方法，所述方法包含給對象施用有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、多晶型物或異構(gòu)體、或者上述組合物；在一些實施方式中，所述跟ret相關(guān)的疾病為肺癌、乳頭狀甲狀腺癌、甲狀腺髓樣癌、分化的甲狀腺癌、復(fù)發(fā)性甲狀腺癌、難治性分化型甲狀腺癌、2a或2b型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤(分別為men2a或men2b)、嗜鉻細(xì)胞瘤、甲狀旁腺增生、乳腺癌、結(jié)直腸癌、乳頭狀腎細(xì)胞癌、胃腸粘膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤和宮頸癌，優(yōu)選為ret融合體肺癌或甲狀腺髓樣癌，更優(yōu)選為小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、細(xì)支氣管肺癌或肺腺癌；

24、在本發(fā)明的一些實施方式中，本發(fā)明涉及的所述對象為包括人類的哺乳動物；

25、在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、多晶型物或異構(gòu)體、或者上述組合物在制備用來治療跟ret相關(guān)的疾病的藥物中的用途；在一些實施方式中，所述跟ret相關(guān)的疾病為肺癌、乳頭狀甲狀腺癌、甲狀腺髓樣癌、分化的甲狀腺癌、復(fù)發(fā)性甲狀腺癌、難治性分化型甲狀腺癌、2a或2b型多發(fā)性內(nèi)分泌瘤(分別為men2a或men2b)、嗜鉻細(xì)胞瘤、甲狀旁腺增生、乳腺癌、結(jié)直腸癌、乳頭狀腎細(xì)胞癌、胃腸粘膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤、或者宮頸癌，優(yōu)選為ret融合體肺癌或者甲狀腺髓樣癌，更優(yōu)選為小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、或者細(xì)支氣管肺癌或肺腺癌。

26、發(fā)明詳述

27、在下文的發(fā)明詳述中陳述了利用本發(fā)明原理的示例性實施方式.通過參考以下
技術(shù)實現(xiàn)要素：
可更好地理解本發(fā)明的特征和優(yōu)點.

28、應(yīng)理解本發(fā)明各個方面的保護(hù)范圍由權(quán)利要求書決定，并且這些權(quán)利要求范圍內(nèi)的方法和結(jié)構(gòu)以及其等價的方法和結(jié)構(gòu)均在本權(quán)利要求書涵蓋的范圍之內(nèi).

29、除非另有定義，否則本文所有科技術(shù)語具有的涵義與權(quán)利要求主題所屬領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的涵義相同.除非另有說明，本文全文引用的所有專利、專利申請、公開材料通過引用方式整體并入本文.

30、應(yīng)理解，上述簡述和下文的詳述都是示例性的、解釋性的，而不是對任何本發(fā)明主題的限制.除非另有具體說明，否則使用單數(shù)形式時也包括復(fù)數(shù).除非另有說明，否則所用“或”、“或者”表示“和/或”.此外，所用術(shù)語“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性.

31、某些化學(xué)術(shù)語

32、術(shù)語“任選”、“任選的”或“任選地”是指隨后描述的事件或情況可能發(fā)生也可能不發(fā)生，該描述包括發(fā)生所述事件或情況和不發(fā)生所述事件或情況。例如，“任選取代的烷基”表示“未取代的烷基”或“取代的烷基”。并且，任選取代的基團(tuán)可以是未取代的(例如：-ch2ch3)、完全取代的(例如：-cf2cf3)、單取代的(例如：-ch2ch2f)或者介于單取代和完全取代之間的任意層級(例如：-ch2chf2、-cf2ch3、-cfhchf2等)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可理解，對于包含一個或多個取代基的任何基團(tuán)，不會引入任何在空間上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式.

33、除非另有說明，否則采用本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的常規(guī)方法，如質(zhì)譜、核磁、高效液相色譜、紅外和紫外/可見光譜法和藥理學(xué)方法。除非提出具體定義，否則本文在分析化學(xué)、有機(jī)合成化學(xué)以及藥物和醫(yī)藥化學(xué)的有關(guān)術(shù)語以及實驗步驟和技術(shù)是本領(lǐng)域已知的.可在化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、制劑和遞送、以及對患者的治療中使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù).例如，可利用廠商對試劑盒的使用說明，或者按照本領(lǐng)域公知的方式或本發(fā)明的說明來實施反應(yīng)和進(jìn)行純化.通常可根據(jù)本說明書中引用和討論的多個概要性和較具體的文獻(xiàn)中的描述，按照本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法實施上述技術(shù)和方法.在本說明書中，可由本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇基團(tuán)及其取代基以提供穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)部分和化合物.

34、當(dāng)通過從左向右書寫的常規(guī)化學(xué)式描述取代基時，該取代基也同樣包括從右向左書寫結(jié)構(gòu)式時所得到的在化學(xué)上等同的取代基.舉例而言，-ch2o-等同于-och2-.

35、本文所用術(shù)語“基團(tuán)”、“化學(xué)基團(tuán)”是指分子的一個特定的部分或官能團(tuán).化學(xué)基團(tuán)經(jīng)常被認(rèn)作為嵌入或附加到一個分子中的化學(xué)實體.

36、一些在此命名的化學(xué)基團(tuán)可以用簡略記號表示碳原子的總個數(shù).例如，c1-c6烷基描述了一個烷基基團(tuán)，如下定義的那樣，具有總共1到6個碳原子。簡略記號所示碳原子總個數(shù)不包括可能的取代基上的碳原子.

37、術(shù)語“鹵素”、“鹵代”或“鹵化物”是指溴、氯、氟或碘.

38、本文使用的術(shù)語“芳香”、“芳香環(huán)”、“芳香的”、“芳香性的”、“芳香環(huán)的”是指平面的一個環(huán)或多個環(huán)的環(huán)部分，其具有含4n+2個電子的離域化電子共扼體系，其中n為整數(shù).芳環(huán)可由5、6、7、8、9或9個以上的原子形成.芳族化合物可被任選地取代，并可為單環(huán)或稠合環(huán)的多環(huán).術(shù)語芳族化合物包括所有碳環(huán)(如苯環(huán))和含一個或多個雜原子的環(huán)(如吡啶).

39、本文單獨或作為其它成分的一部分使用的術(shù)語“雜原子”或“雜”是指除碳和氫之外的原子.雜原子獨立地選自氧、氮、硫、磷、硅、硒和錫，但不限于這些原子.在出現(xiàn)兩個或更多雜原子的實施方案中，所述兩個或更多雜原子可彼此相同，或者所述兩個或更多雜原子中的一些或全部彼此不同.

40、本文單獨或組合使用的術(shù)語“稠”或“稠環(huán)”是指兩個或更多個環(huán)共享一個或更多個鍵的環(huán)狀結(jié)構(gòu).

41、本文單獨或組合使用的術(shù)語“螺”或“螺環(huán)”是指兩個或更多個環(huán)共享一個或更多個原子的環(huán)狀結(jié)構(gòu).

42、本文單獨或作為其它組分的一部分(比如：單烷基氨基)使用的術(shù)語“烷基”是指任選取代的直鏈或任選取代的支鏈的一價飽和烴，其具有1-12個碳原子，優(yōu)選1-8個碳原子，更優(yōu)選1-6個碳原子，通過單鍵與分子的其它部分相連，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、2-甲基己基、3甲基己基、正辛基，正壬基、正癸基等.

43、本文單獨或組合使用的術(shù)語“烯基”是指任選取代的直鏈或任選取代的支鏈的一價烴基，其具有一個或多個c＝c雙鍵并具有2-約10個碳原子，更優(yōu)選2-約6個碳原子.這些基團(tuán)中的雙鍵可以為順式或反式構(gòu)象，并應(yīng)被理解為包含所述兩種異構(gòu)體.實例包括但不限于乙烯基(ch＝ch2)、1-丙烯基(ch2ch＝ch2)、異丙烯基(c(ch3)＝ch2)、丁烯基和1,3-丁二烯基等.本文定義的烯基出現(xiàn)數(shù)字范圍時，例如“c2-c6烯基”或“c2-6烯基”是指可由2個碳原子、3個碳原子、4個碳原子、5個碳原子或6個碳原子構(gòu)成的烯基，本文的烯基也涵蓋未指定數(shù)字范圍的情況.

44、本文單獨或組合使用的術(shù)語“炔基”是指任選取代的直鏈或支鏈的一價烴基，其具有一個或多個c≡c三鍵并具有2-約10個碳原子，更優(yōu)選2-約6個碳原子.實例包括但不限于乙炔基、2-丙炔基、2-丁炔基和1，3-丁二炔基等。本文定義的炔基出現(xiàn)數(shù)字范圍時，例如“c2-c6炔基”或“c2-6炔基”是指可由2個碳原子、3個碳原子、4個碳原子、5個碳原子或6個碳原子構(gòu)成的炔基基團(tuán)，本文的炔基也涵蓋未指定數(shù)字范圍的情況.

45、術(shù)語“芳基”是指具有完全共軛的π電子體系的全碳單環(huán)或稠合環(huán)，其具有6-14個碳原子，優(yōu)選具有6-12個碳原子，最優(yōu)選具有6個碳原子.芳基可以是非取代的或被一個或多個取代基所取代，所述取代基的實例包括但不限于烷基、烷基氧基、芳基、芳烷基、氨基、鹵素、羥基、磺?；?、亞磺?；⒘柞；碗s脂環(huán)基.非取代的芳基的非限制性實例包括但不限于苯基、萘基和蒽基.

46、術(shù)語“雜芳基”是指5-12個環(huán)原子的單環(huán)或稠合環(huán)，具有5、6、7、8、9、10、11或12個環(huán)原子，其中含有1、2、3或4個選自n、o、s的環(huán)原子，其余環(huán)原子為c，且具有完全共軛的π-電子體系。雜芳基可以是非取代的或取代的，所述的取代基包括但不限于烷基、烷基氧基、芳基、芳烷基、氨基、鹵素、羥基、氰基、硝基、羰基和雜脂環(huán)基.非取代的雜芳基的非限制性實例包括但不限于吡咯基，呋喃基、噻吩基、咪唑基、惡唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基，吡嗪基、喹啉基、異喹啉基、四唑基、三嗪基.

47、本文單獨或作為其它成分的一部分使用的術(shù)語“環(huán)烷基”是指穩(wěn)定的單價非芳香單環(huán)或多環(huán)碳?xì)浠鶊F(tuán)，只包含碳原子和氫原子，可能包括稠環(huán)、螺環(huán)或橋環(huán)系統(tǒng)，包含3-15個成環(huán)碳原子，優(yōu)選包含3-10個成環(huán)碳原子，更優(yōu)選包含3-8個成環(huán)碳原子，可飽和也可不飽和，通過單鍵與分子的其它部分相連.“環(huán)烷基”的非限制性實例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基等.

48、術(shù)語“碳環(huán)”是指由碳共價閉環(huán)的結(jié)構(gòu)，其可以為飽和或者部分不飽和.可由3、4、5、6、7、8、9或9個以上的原子形成碳環(huán)。術(shù)語碳環(huán)與雜環(huán)之間的區(qū)別在于雜環(huán)的環(huán)骨架包含至少一個與碳不同的原子。本文的“碳環(huán)”可以是單環(huán)，也可以是多環(huán)，多環(huán)碳環(huán)包括螺環(huán)、稠環(huán)和橋環(huán).碳環(huán)可被任意取代.本文中的“碳環(huán)”，優(yōu)選包含約5至約20個或5至10個或5-8個或5-6個骨架成環(huán)原子.

49、本文單獨或作為其它成分的一部分使用的術(shù)語“雜環(huán)基”、“雜環(huán)烷基”、“雜環(huán)”是指穩(wěn)定的3-18元單價非芳香環(huán)，包括2-12個碳原子，1-6個選自氮、氧和硫的雜原子.除非另作說明，雜環(huán)基基團(tuán)可以是單環(huán)、雙環(huán)、三環(huán)或四環(huán)系統(tǒng)，其可能包含稠環(huán)、螺環(huán)或橋環(huán)系統(tǒng)，雜環(huán)基上的氮、碳或硫可選擇性的被氧化，氮原子可選擇性的被季銨化，雜環(huán)基可以部分或完全飽和.雜環(huán)基可以通過環(huán)上的碳原子或雜原子與分子的其余部分通過一個單鍵連接.包含稠環(huán)的雜環(huán)基中可以包含一個或多個芳環(huán)或雜芳環(huán)，只要與分子的其余部分連接的是非芳香環(huán)上的原子.為了本技術(shù)，雜環(huán)基優(yōu)選的是一個穩(wěn)定的4-11元單價非芳香單環(huán)或二環(huán)，其包含1-3個選自氮、氧和硫的雜原子，更優(yōu)選的是一個穩(wěn)定的4-8元單價非芳香單環(huán)，其包含1-3個選自氮、氧和硫的雜原子.雜環(huán)基的的非限制性實例包括氮雜環(huán)庚烷基、氮雜環(huán)丁基、十氫異喹啉基、二氫呋喃基、二氫吲哚基、二氧戊烷基、1，1-二氧-硫代嗎啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、異噻唑烷基、異惡唑烷基、嗎啉基、八氫吲哚基、八氫異吲哚基、惡嗪基、哌嗪基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡喃基、吡唑烷基、吡咯烷基、喹嗪基、奎寧環(huán)基、四氫呋喃基、四氫吡喃基等.

50、本發(fā)明使用的術(shù)語“多晶型物”或“多晶型(現(xiàn)象)”是指本發(fā)明的化合物具有多種晶格形態(tài).本發(fā)明的一些化合物可能有一個以上的晶體形式，本發(fā)明涵蓋所有的多晶型態(tài)或其混合物.

51、本發(fā)明化合物的中間體化合物及其多晶形物也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

52、除非另有指定，本發(fā)明化合物所含有的烯烴雙鍵包括e和z異構(gòu)體.

53、應(yīng)理解，本發(fā)明化合物可能含有不對稱中心.這些不對稱中心可以獨立的為r或s構(gòu)型.一些本發(fā)明化合物也可顯示出順-反異構(gòu)現(xiàn)象，這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的.應(yīng)理解，本發(fā)明化合物包括它們的單獨的幾何異構(gòu)體和立體異構(gòu)體以及它們的混合物，包括外消旋混合物.通過實施或修改已知方法，例如層析技術(shù)和重結(jié)晶技術(shù)可以從它們的混合物中分離這些異構(gòu)體，或者可以由它們的中間體的合適的異構(gòu)體分別制備它們.

54、本文所用術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”既包括加酸鹽，也包括加堿鹽。

55、“藥學(xué)上可接受的加酸鹽”是指那些保留了化合物的游離堿的生物效力和特性、在生物學(xué)上或其它方面并非不合需要、跟無機(jī)酸，例如但是不限于，氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或有機(jī)酸，例如但不限于，乙酸、2，2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、抗壞血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、癸酸、己酸、碳酸、肉桂酸、檸檬酸等形成的鹽.“藥學(xué)上可接受的加堿鹽”是指那些保留了化合物的游離酸的生物效力和特性、在生物學(xué)上或其它方面并非不合需要的鹽。這些鹽通過游離酸跟無機(jī)堿或有機(jī)堿反應(yīng)制備.通過跟無機(jī)堿反應(yīng)生成的鹽包括，但不限于，鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽、鋁鹽等.優(yōu)選的無機(jī)鹽為銨鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、和錳鹽.

56、形成鹽的有機(jī)堿包括，但不限于，伯胺、仲胺、叔胺、環(huán)胺等，例如氨、異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、乙醇胺、二環(huán)己胺、乙二胺、嘌呤、哌嗪、哌啶、膽堿和咖啡因等.特別優(yōu)選的有機(jī)堿為異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環(huán)己胺、膽堿和咖啡因.

57、結(jié)晶經(jīng)常產(chǎn)生本發(fā)明化合物的溶劑化物。本文所用術(shù)語“溶劑化物”是指由一個或多個本發(fā)明化合物分子和一個或多個溶劑分子組合而成的合體.

58、溶劑可以是水，這種情況下，溶劑化物是水合物.另外還可以是有機(jī)溶劑.因此，本發(fā)明化合物可作為水合物存在，包括一水合物、二水合物、半水合物、三水合物、四水合物等，以及相應(yīng)的溶劑化形態(tài)。本發(fā)明化合物可以是真溶劑化物，但在其它一些情況下，本發(fā)明化合物也可能只是偶然保留了水或水跟一些其它溶劑的混合物.本發(fā)明化合物可在一種溶劑中反應(yīng)或在一種溶劑中沉淀或結(jié)晶.本發(fā)明化合物的溶劑化物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi).

59、本文所用術(shù)語“藥物組合物”是指混合有本發(fā)明化合物和通常在本領(lǐng)域被接受的用來將具有生物活性的化合物傳送給哺乳動物(比如人類)的介質(zhì)的制劑.這種介質(zhì)包含所有藥學(xué)上可接受的載體。

60、本文所用的跟制劑、組合物或成分相關(guān)的術(shù)語“可接受的”是指對治療主體的總體健康沒有持續(xù)的有害影響.

61、本文所用術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指不影響本發(fā)明化合物的生物活性或性質(zhì)的物質(zhì)(如載體或稀釋劑)，并且相對無毒，即該物質(zhì)可施用于個體而不造成不良的生物反應(yīng)或以不良方式與組合物中包含的任意組分相互作用.

62、“藥學(xué)上可接受的載體”包括但不限于已經(jīng)被相關(guān)政府行政部門批準(zhǔn)的可以被用于人類和馴養(yǎng)動物的佐劑、載體、賦形劑、助劑、脫臭劑、稀釋劑、保鮮劑、染料/著色劑、風(fēng)味增強(qiáng)劑、表面活性劑和潤濕劑、分散劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑、或乳化劑.

63、本文所用術(shù)語“主體”、“患者”、“對象”或“個體”是指患有疾病、紊亂或病癥等的個體，包括哺乳動物和非哺乳動物。哺乳動物的實例包括但不限于哺乳動物綱的任何成員：人，非人的靈長類動物(例如黑猩猩和其它猿類和猴)；家畜，例如牛、馬、綿羊、山羊、豬；家養(yǎng)動物，例如兔、狗和貓；實驗室動物，包括嚙齒類動物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等.非人哺乳動物的實例包括但不限于鳥類和魚類等.在本文提供的一個有關(guān)方法和組合物的實施方案中，所述哺乳動物為人.

64、本文所用術(shù)語“治療”是指對哺乳動物特別是人類的相關(guān)疾病或病癥的治療，包括

65、(i)預(yù)防哺乳動物，特別是之前已經(jīng)暴漏在某個疾病或病癥下但尚未被診斷患有該疾病或病癥的哺乳動物，產(chǎn)生相應(yīng)的疾病或病癥；

66、(ii)抑制疾病或病癥，即，控制其發(fā)展；

67、(iii)緩解疾病或病癥，即，使疾病或病癥消退；

68、(iv)緩解疾病或病癥引起的癥狀.

69、本文所用術(shù)語“疾病”和“病癥”可以互相替代，也可以是不同意思，因為某些特定疾病或病癥還沒有已知的致病因子(所以發(fā)病原因尚不清楚)，所以還不能被認(rèn)作疾病而只能被看做不想要的狀況或綜合癥，所述綜合癥或多或少有一些具體癥狀已經(jīng)被臨床研究人員證實。

70、本文所使用術(shù)語“有效量”、“治療有效量”或“藥學(xué)有效量”是指服用后足以在某種程度上緩解所治療的疾病或病癥的一個或多個癥狀的至少一種藥劑或化合物的量.其結(jié)果可以為跡象、癥狀或病因的消減和/或緩解，或生物系統(tǒng)的任何其它所需變化.例如，用于治療的“有效量”是在臨床上提供顯著的病癥緩解效果所需的包含本文公開化合物的組合物的量.可使用諸如劑量遞增試驗的技術(shù)測定適合于任意個體病例中的有效量.

71、本文所用術(shù)語“服用”、“施用”、“給藥”等是指能夠?qū)⒒衔锘蚪M合物遞送到進(jìn)行生物作用的所需位點的方法.這些方法包括但不限于口服途徑、經(jīng)十二指腸途徑、胃腸外注射(包括靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、動脈內(nèi)注射或輸注)、局部給藥和經(jīng)直腸給藥.在優(yōu)選的實施方案中，本文討論的化合物和組合物通過口服施用.

72、本發(fā)明化合物的制備

73、以下反應(yīng)路線式顯示了制備本發(fā)明化合物的方法.

74、應(yīng)了解，以下描述中，只有在形成穩(wěn)定化合物的情況下才允許取代基團(tuán)和/或所述分子式的變量進(jìn)行組合.

75、本領(lǐng)域的技術(shù)人員也應(yīng)了解，在以下所述流程中，中間體化合物的官能團(tuán)可能需要被合適的保護(hù)基團(tuán)保護(hù).這些官能團(tuán)包括羥基、氨基、巰基和羧基.合適的羥基保護(hù)基團(tuán)包括三烷基硅基或二芳基烷基硅基(例如叔丁基甲基硅基、叔丁基二苯基硅基或三甲基硅基)、四氫吡喃基、芐基等.合適的氨基、脒基和胍保護(hù)基團(tuán)包括叔丁氧羰基、芐氧羰基等。巰基的合適保護(hù)基團(tuán)包括-c(o)-r″(r″表示烷基、芳基或芳基烷基)、對甲氧基芐基、三苯甲基等.合適的羧基保護(hù)基團(tuán)包括烷基、芳基或芳基烷基酯。保護(hù)基團(tuán)可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)方法加上或去掉.

76、實施例

77、下述非限制性實施例僅僅是說明性的，不以任何方式限制本發(fā)明.

78、除非另有說明，溫度是攝氏溫度.試劑購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司，阿法埃莎(alfa?aesar)，或北京百靈威科技有限公司等商業(yè)供應(yīng)商，并且這些試劑可直接使用無需進(jìn)一步純化，除非另有說明.

79、除非另有說明，下列反應(yīng)在室溫、無水溶劑中、氮氣或氬氣的正壓下或使用干燥管進(jìn)行；反應(yīng)瓶上裝有橡膠隔膜，以便通過注射器加入底物和試劑；玻璃器皿烘干和/或加熱干燥.

80、除非另有說明，柱色譜純化使用青島海洋化工廠的200-300目硅膠；制備薄層色譜使用煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)的薄層色譜硅膠預(yù)制板(hsgf254)；ms的測定用thermolcq?fleet型(esi)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；旋光測定使用sgw-3自動旋光儀，上海申光儀器儀表有限公司.

81、核磁數(shù)據(jù)(1h?nmr)使用varian設(shè)備于400mhz運行。核磁數(shù)據(jù)使用的溶劑有cdcl3、cd3od、d2o、dmso-d6等，以四甲基硅烷(0.00ppm)為基準(zhǔn)或以殘留溶劑為基準(zhǔn)(cdcl3：7.26ppm；cd3od：3.31ppm；d2o：4.79ppm；d6-dmso：2.50ppm).當(dāng)標(biāo)明峰形多樣性時，以下簡寫表示不同峰形：s(單峰)、d(雙重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br(寬峰)、dd(雙雙重峰)、dt(雙三重峰).如果給出了耦合常數(shù)，則以hertz(hz)為單位.

82、縮略語：

83、 <![cdata[pd₂(dba)₃]]> 三(二亞芐基丙酮)二鈀 (±)binap (±)-2，2′-雙(二苯基膦基)-1，1′-聯(lián)二萘 <![cdata[pd(dppf)cl₂]]> 1，1′-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀 hatu 2-(7-氮雜苯并三氮唑)-n,n，n′，n′-四甲基脲六氟磷酸酯 koac 乙酸鉀 <![cdata[pd(pph₃)₄]]> 四(三苯基膦)鈀 <![cdata[cs₂co₃]]> 碳酸銫

84、實施例1：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(4-氰基-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并11，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

85、

86、步驟1：6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-腈

87、氮氣保護(hù)下，將4-溴-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶(2.77g)、氰化鋅(2.35g)和四(三苯基膦)鈀(1.1g)加入到dmf(100ml)中，加熱至120℃并攪拌過夜.冷卻至室溫，過濾，濾液減壓濃縮，用柱層析純化殘余物(洗脫液：石油醚：乙酸乙酯＝1：1(v：v))，得到6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-腈(1.4g)。

88、步驟2：3-溴-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-腈

89、室溫下，將6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-腈(223mg)溶于dmf(5ml)，緩慢加入n-溴代丁二酰亞胺(180mg)，攪拌2小時，反應(yīng)液倒入冰水中并不斷攪拌，有固體析出，過濾，濾餅用甲基叔丁基醚洗滌，真空干燥，得到目標(biāo)產(chǎn)品(195mg).

90、步驟3：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(4-氰基-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

91、氮氣保護(hù)下，將3-溴-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-腈(30mg)、n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(4，4，5,5-四甲基-1，3，2-二惡硼烷-2-基)苯基)乙酰胺(39mg)、四三苯基膦鈀(11mg)和碳酸鉀(28mg)依次加入二氧六環(huán)和水(20ml，體積比5：1)中，加熱至80℃并攪拌過夜.冷卻至室溫，反應(yīng)液倒入水(50ml)中，然后乙酸乙酯萃取，萃取液用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用薄層色譜法(展開劑：二氯甲烷：甲醇＝20：1(v：v))純化得到目標(biāo)化合物(29mg).

92、ms?m/z[lc-ms]：480.60[m+1]。1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.22(s，1h)，9.40(d，j＝1.2hz，1h)，8.35(s，2h)，8.27(s，1h)，8.10(s，1h)，7.51(d，j＝8.4hz，2h)，7.38(d，j＝8.0hz，2h)，6.58(s，1h)，3.87(s，3h)，3.71(s，2h)，1.26(s，9h).

93、實施例2：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(4-氰基-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)-2,2-二氟乙酰胺

94、

95、步驟1：2-(4-溴苯基)-n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2,2-二氟乙酰胺

96、室溫下，將2-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙酸(250mg)、5-(叔丁基)異惡唑-3-胺(140mg)和hatu(400mg)溶于dmf(10ml)，加入diea(260mg)，攪拌12小時，反應(yīng)液倒入冰水中并不斷攪拌，有固體析出，過濾并真空干燥，得到目標(biāo)產(chǎn)品.(285mg)

97、步驟2：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2,2-二氟-2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二惡硼烷-2-基)苯基)乙酰胺

98、氮氣保護(hù)下，將2-(4-溴苯基)-n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2，2-二氟乙酰胺(186mg)、聯(lián)硼酸頻那醇酯(254mg)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(37mg)和醋酸鉀(100mg)加入到干燥的二氧六環(huán)(20ml)中，加熱至90℃攪拌過夜.冷卻至室溫，過濾，濾餅用二氯甲烷洗滌，將濾液減壓濃縮得到粗品，其直接用于下一步反應(yīng).

99、步驟3：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(4-氰基-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-2，2-二氟乙酰胺

100、氮氣保護(hù)下，將3-溴-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-腈(30mg)、n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2,2-二氟-2-(4-(4，4，5,5-四甲基-1，3，2-二惡硼烷-2-基)苯基)乙酰胺(42mg)、四三苯基膦鈀(11mg)和碳酸鉀(28mg)依次加入二氧六環(huán)和水(20ml，體積比5：1)中，加熱至80℃并攪拌過夜.冷卻至室溫，反應(yīng)液倒入水(50ml)中，然后乙酸乙酯萃取，萃取液用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，殘留物用薄層色譜法(展開劑：二氯甲烷：甲醇＝20：1(v：v))純化得到目標(biāo)化合物(25mg)。

101、ms?m/z[lc-ms]：516.20[m+1]。

102、實施例3：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(5-(4-氰基-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)吡啶-2-基)乙酰胺

103、

104、參考實施例2中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(20mg).

105、ms?m/z[lc-ms]：481.23[m+1].1h?nmr(400mhz，cdcl3)δ9.03(s，1h)，8.75(s，1h)，8.74(d，j＝1.2hz，1h)，8.46(s，2h)，8.04(s，1h)，7.81(s，1h)，7.70(s，1h)，7.25(d，j＝1.2hz，1h)，7.06(d，j＝8.0hz，2h)，6.88(d，j＝8.0hz，2h)，6.73(s，1h)，3.99(s，3h)，3.73(s，2h)，1.34(s，9h).

106、實施例4：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(嘧啶-5-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

107、

108、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(19mg).

109、ms?m/z[lc-ms]：533.24[m+1].1h?nmr(400mhz，cdcl3)δ10.53(s，1h)，8.82(d，j＝1.2hz，1h)，8.78(d,j＝2.0hz,1h)，8.13(s，1h)，7.88(dd,j＝8.0hz，2.0hz,1h)，7.77-7.80(m，2h)，7.69(s，1h)，7.40(d，j＝8.0hz，1h)，6.67(s，1h)，4.01(s，3h)，3.97(s，2h)，1.33(s，9h).

110、實施例5：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(嘧啶-5-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

111、

112、步驟1：2-甲基-4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)丁-3-炔-2-醇

113、氮氣保護(hù)下，將4-溴-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶(27mg)、2-甲基丁-3-炔-2-醇(16mg)、雙(三苯基膦)二氯化鈀(ii)(7mg)、碘化亞銅(4mg)和三乙胺(100mg)依次加入二氧六環(huán)(10ml)中，加熱至100℃并攪拌過夜.冷卻至室溫，過濾，濾餅用二氯甲烷洗滌，濾液減壓濃縮，薄層色譜(展開劑：二氯甲烷：甲醇＝20：1(v：v))純化殘留物，得到目標(biāo)化合物(21mg).

114、步驟2、3參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(9mg).ms?m/z[lc-ms]：537.26[mm+1]。

115、實施例6：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-嗎啉并吡唑[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

116、

117、步驟1：4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-4-基)嗎啉

118、氮氣保護(hù)下，將4-溴-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶(27mg)、嗎啉(17mg)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(9mg)、(±)-2，2′-雙(二苯基膦基)-1，1′-聯(lián)二萘(13mg)和碳酸銫(660mg)依次加入甲苯(5ml)中，加熱至110℃并攪拌過夜.冷卻至室溫，過濾，濾餅用二氯甲烷洗滌，濾液減壓濃縮，柱層析純化殘留物(洗脫液：石油醚：乙酸乙酯＝1：1(v：v))，得到目標(biāo)化合物(21mg).

119、步驟2、3參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(19mg).msm/z[lc-ms]：540.26[m+1].

120、實施例7：2-(4-(4,6-雙(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)乙酰胺

121、

122、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(30mg).

123、ms?m/z[lc-ms]：535.27[m+1].

124、實施例8：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(4-氰基-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)2-氟苯基)乙酰胺

125、

126、參考實施例2中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(22mg).

127、ms?m/z[lc-ms]：498.21[m+1].1h?nmr(400mhz,cdcl3)δ8.80(d，j＝1.2hz，1h)，8.12(s，1h)，7.94(s，1h)，7.77-7.78(m，2h)，7.68(s，1h)，7.42-7.45(m，1h)，7.34-7.36(m，1h)，7.27-7.31(m，1h)，6.69(s，1h)，4.01(s，3h)，3.83(s，2h)，1.33(s，9h).

128、實施例9：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基]苯基)乙酰胺

129、

130、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(17mg)。

131、ms?m/z[lc-ms]：532.25[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.08(s，1h)，9.11(d，j＝1.2hz，1h)，8.43(d，j＝2.0hz，1h)，8.34(s，1h)，8.26(dd，j＝8.8hz，1.6hz，1h)，8.10(s，1h)，8.08(s，1h)，7.53(d，j＝1.2hz，1h)，7.37-7.40(m，1h)，6.93-6.98(m，3h)，6.79(d，j＝8.4hz,2h)，6.58(s，1h)，3.67(s，3h)，3.53(s，2h)，1.27(s，9h).

132、實施例10：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-苯基吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

133、

134、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(27mg).

135、ms?m/z[lc-ms]：531.26[m+1].

136、實施例11：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1二甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡啶-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

137、

138、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(21mg).

139、ms?m/z[lc-ms]：532.27[m+1].

140、實施例12：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

141、

142、步驟1：6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼烷-2-基)吡唑[1，5-a]吡啶

143、氮氣保護(hù)下，將4-溴-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶(277mg)、聯(lián)硼酸頻那醇酯(510mg)、[1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(75mg)和醋酸鉀(200mg)加入到干燥的二氧六環(huán)(20ml)中，加熱至90℃攪拌過夜。冷卻至室溫，過濾，濾餅用二氯甲烷洗滌，將濾液減壓濃縮，得到粗品，其直接用于下一步反應(yīng)。

144、步驟2、3、4參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(18mg).msm/z[lc-ms]：533.25[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.09(s，1h)，9.19(d，j＝1.2hz，1h)，8.54(d，j＝1.2hz，1h)，8.34(s，1h)，8.32(d，j＝2.4hz，1h)，8.23-8.24(m，1h)，8.13(s，1h)，8.08(s，1h)，7.72(d，j＝1.6hz，1h)，6.97(d，j＝8.0hz，2h)，6.76(d，j＝8.0hz，2h)，6.57(s，1h)，3.86(s，3h)，3.54(s，2h)，1.26(s，9h).

145、實施例13：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(4-(-4-氰基苯基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

146、

147、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(20mg)。

148、ms?m/z[lc-ms]：556.26[m+1].

149、實施例14：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(4-(三氟甲基)苯基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

150、

151、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(30mg).

152、ms?m/z[lc-ms]：599.27[m+1].

153、實施例15：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(噻吩-3-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

154、

155、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(15mg).

156、ms?m/z[lc-ms]：537.22[m+1].

157、實施例16：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(4-(6-氰基吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基]苯基)乙酰胺

158、

159、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(14mg)。

160、ms?m/z[lc-ms]：557.25[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.09(s，1h)，9.19(d,j＝1.2hz，1h)，8.54(d，j＝1.2hz，1h)，8.34(s，1h)，8.32(d，j＝2.4hz，1h)，8.23-8.24(m，1h)，8.13(s，1h)，8.08(s，1h)，7.72(d，j＝1.6hz，1h)，6.97(d，j＝8.0hz,2h)，6.76(d，j＝8.0hz，2h)，6.57(s，1h)，3.86(s，3h)，3.54(s，2h)，1.26(s，9h)。

161、實施例17：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基]苯基)乙酰胺

162、

163、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(30mg)。

164、ms?m/z[lc-ms]：600.24[m+1]。

165、實施例18：2-(4-(4-(6-氨基吡啶-3-基)-6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基]苯基)-n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)乙酰胺

166、

167、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(12mg)。

168、ms?m/z[lc-ms]：547.25[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.11(s，1h)，9.00(d,j＝1.2hz，1h)，8.31(s，1h)，8.06(s，1h)，8.05(s，1h)，7.78(d，j＝2.4hz，1h)，7.39(s，1h)，7.09-7.16(m，1h)，7.04(d，j＝8.0hz，2h)，6.90(d，j＝8.0hz，2h)，6.55(s，1h)，5.95-6.40(m，3h)，3.86(s，3h)，3.58(s，2h)，1.25(s，9h).

169、實施例19：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

170、

171、參考實施例12中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(12mg).

172、ms?m/z[lc-ms]：533.25[m+1].

173、實施例20：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基]苯基)乙酰胺

174、

175、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(15mg)。

176、ms?m/z[lc-ms]：616.33[m+1].

177、實施例21：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(2-羥基-2-甲基丙氧基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-al吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

178、

179、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(16mg).

180、ms?m/z[lc-ms]：541.26[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.09(s，1h)，8.59(d，j＝2.0hz，1h)，8.45(s，1h)，8.30(d，j＝2.4hz，1h)，8.22-8.24(m，1h)，8.03(s，1h)，7.28(d，j＝1.6hz,1h)，6.95(d，j＝8.0hz，2h)，6.72(d,j＝8.0hz，2h)，6.57(s，1h)，4.69(s，1h)，3.86(s，2h)，3.53(s，2h)，1.26(s，9h)，1.22(s，6h).

181、實施例22：5-(叔丁基)-n-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-基)芐基)異惡唑-3-甲酰胺

182、

183、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(18mg).

184、ms?m/z[lc-ms]：533.24[m+1].

185、實施例23：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(4-(((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺

186、

187、參考實施例2中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(12mg)。

188、ms?m/z[lc-ms]：666.30[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ10.50(s，1h)，9.93-10.09(brs，1h)，9.18(s，1h)，8.53(s，1h)，8.34(s，1h)，8.28(s，1h)，8.25(s，1h)，8.13(s，1h)，8.08(s，1h)，8.04(s，1h)，7.84(d，j＝8.8hz，1h)，7.72(s，1h)，7.64(d，j＝8.8hz，1h)，7.00(d，j＝7.6hz，2h)，6.77(d，j＝7.6hz，2h)，3.86(s，3h)，3.60(s，2h)，3.55(s，2h)，2.67-3.05(m，9h)，2.32-2.44(m，2h).

189、實施例24：n-(4-(1，1，1，3,3-六氟-2-羥丙基-2-基)苯基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4.(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯)乙酰胺

190、

191、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(18mg).

192、ms?m/z[lc-ms]：652.20[m+1]。1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ10.32(s，1h)，9.18(d,j＝1.2hz，1h)，8.59(s，1h)，8.54(d，j＝1.2hz，1h)，8.34(s，1h)，7.25(d，j＝2.4hz，1h)，8.21-8.22(m，1h)，8.13(s，1h)，8.08(s，1h)，7.71-7.74(m，3h)，7.60(d，j＝8.4hz，2h)，7.00(d，j＝8.0hz，2h)，6.76(d，j＝8.0hz，2h)，3.86(s，3h)，3.54(s，2h).

193、實施例25：n-(6-甲氧基吡啶-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基]苯基)乙酰胺

194、

195、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(10mg)。

196、ms?m/z[lc-ms]：517.23[m+1].

197、實施例26：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(5-甲基異惡唑-3-基)乙酰胺

198、

199、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(9mg)。

200、ms?m/z[lc-ms]：491.20[m+1]。

201、實施例27：n-(4-氰基-3-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

202、

203、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(19mg)。

204、ms?m/z[lc-ms]：579.19[m+1].

205、實施例28：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基

206、

207、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(19mg).

208、ms?m/z[lc-ms]：555.20[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ10.71(s，1h)，9.19(d，j＝1.2hz，1h)，8.95(s，1h)，8.65(s，1h)，8.52(s，1h)，8.49(s，1h)，8.34(s，1h)，8.27-8.31(m，2h)，8.14(s，1h)，8.08(s，1h)，7.72(s，1h)，7.01(d，j＝8.0hz，2h)，6.78(d，j＝8.0hz，2h)，3.86(s，3h)，3.61(s，2h)。

209、實施例29：n-環(huán)丙基-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

210、

211、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(29mg)。

212、ms?m/z[lc-ms]：450.22[m+1].

213、實施例30：n-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

214、

215、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(24mg)。

216、ms?m/z[lc-ms]：588.16[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ10.54(s，1h)，9.18(s，1h)，8.53(s，1h)，8.34(s，1h)，8.28(s，1h)，8.25(s，1h)，8.18(s，1h)，8.14(s，1h)，8.08(s，1h)，7.86(d，j＝8.4hz，1h)，7.72(s，1h)，7.66(d，j＝8.4hz，1h)，6.99(d，j＝8.0hz，2h)，6.77(d，j＝8.0hz，2h)，3.86(s，3h)，3.56(s，2h).

217、實施例31：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)乙酰胺

218、

219、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(24mg).

220、ms?m/z[lc-ms]：555.20[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ10.86(s，1h)，9.19(d，j＝1.6hz，1h)，8.61(d,j＝5.6hz，1h)，8.53(d，j＝1.2hz，1h)，8.34(s，1h)，8.29(d，j＝2.4hz，1h)，8.25-8.26(m，1h)，8.14(s，1h)，8.11(d，j＝2.0hz，1h)，8.08(s，1h)，7.78(dd，j＝5.6hz，2.0hz，1h)，7.72(d，j＝1.6hz，1h)，6.99(d，j＝8.0hz，2h)，6.78(d，j＝8.0hz，2h)，3.86(s，3h)，3.62(s，2h).

221、實施例32：n-(3-(叔丁基)異惡唑-5-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

222、

223、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(20mg).

224、ms?m/z[lc-ms]：533.26[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.70(s，1h)，9.18(d，j＝1.6hz，1h)，9.19(d，j＝1.6hz，1h)，8.54(d，j＝1.6hz，1h)，8.34(s，1h)，8.29(d，j＝2.8hz，1h)，8.21-8.22(m，1h)，8.13(s，1h)，7.72(d，j＝1.6hz，1h)，6.96(d，j＝8.0hz,2h)，6.76(d，j＝8.0hz，2h)，6.21(s，1h)，3.86(s，3h)，3.57(s，2h)，1.23(s，9h).

225、實施例33：n-(5-(叔丁基)噻唑-2-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

226、

227、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(22mg).

228、ms?m/z[lc-ms]：549.23[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ12.08(s，1h)，9.18(d，j＝1.2hz，1h)，8.55(d，j＝1.2hz，1h)，8.34(s，1h)，8.27(d，j＝2.4hz，1h)，8.18-8.19(m，1h)，8.13(s，1h)，8.08(s，1h)，7.72(d，j＝1.2hz，1h)，7.16(s，1h)，6.97(d，j＝8.0hz，2h)，6.76(d，j＝8.0hz，2h)，3.86(s，3h)，3.61(s，2h)，1.30(s，9h)。

229、實施例34：n-(3，3-二氟環(huán)丁基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

230、

231、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(14mg).

232、ms?m/z[lc-ms]：549.23[m+1].

233、實施例35：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(5-(三氟甲基)異惡唑-3-基)乙酰胺

234、

235、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(26mg).

236、ms?m/z[lc-ms]：545.17[m+1]。

237、實施例36：n-(5-環(huán)丙基-1h-吡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡嗪-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

238、

239、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(16mg).

240、ms?m/z[lc-ms]：516.23[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ12.03(s，1h)，10.36(s，1h)，9.18(d，j＝1.2hz，1h)，8.56(d,j＝1.6hz，1h)，8.34(s，1h)，8.29(d，j＝2.8hz，1h)，8.17-8.18(m，1h)，8.12(s，1h)，8.08(s，1h)，7.71(d，j＝1.2hz，1h)，6.96(d，j＝8.0hz，2h)，6.73(d，j＝8.0hz，2h)，6.14(s，1h)，3.86(s，3h)，3.45(s，2h)，1.79-1.86(m，1h)，0.85-0.89(m，2h)，0.60-0.64(m，2h).

241、實施例37：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(3-苯基異惡唑-5-基)乙酰胺

242、

243、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(16mg).

244、ms?m/z?[lc-ms]：553.21[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.89(s，1h)，9.19(d，j＝1.2hz，1h)，8.55(s，1h)，8.34(s，1h)，8.33(d，＝2.4hz，1h)，8.23-8.24(m，1h)，8.14(s，1h)，8.08(s，1h)，7.82-7.85(m，2h)，7.72(d，j＝1.2hz，1h)，7.45-7.50(m，3h)，7.00(d，j＝8.0hz，2h)，6.78(d，j＝8.0hz，2h)，6.73(s，1h)，3.86(s，3h)，3.63(s，2h)。

245、實施例38：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)乙酰胺

246、

247、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(16mg).

248、ms?m/z[lc-ms]：598.30[m+1].

249、實施例39：n-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

250、

251、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(17mg).

252、ms?m/z[lc-ms]：613.31[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ10.60(s，1h)，9.18(d，j＝1.2hz，1h)，8.54(d，j＝1.2hz，1h)，8.34(s，1h)，8.26(d，j＝2.4hz，1h)，8.17-8.21(m，2h)，8.13(s，1h)，8.08(s，1h)，8.02(d,j＝8.4hz，1h)，7.71(d，j＝1.2hz，1h)，7.66(dd,j＝8.8hz，2.0hz，1h)，7.00(d，j＝8.0hz，2h)，6.75(d，j＝8.0hz，2h)，3.86(s，3h)，3.58(s，2h)，3.41(s，2h)，2.08-2.54(m，10h)，0.94(t，j＝7.2hz，3h).

253、實施例40：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(吡啶-4-基)乙酰胺

254、

255、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(7mg).

256、ms?m/z[lc-ms]：487.20[m+1]。

257、實施例41：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(5-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)異惡唑-3-基)乙酰胺

258、

259、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(15mg).

260、ms?m/z[lc-ms]：587.22[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.27(s，1h)，9.18(s，1h)，8.53(s，1h)，8.34(s，1h)，8.30(d，j＝2.4hz，1h)，8.21-8.24(m，1h)，8.13(s，1h)，8.08(s，1h)，7.72(s，1h)，6.97(d，j＝8.0hz，2h)，6.95(s，1h)，6.76(d，j＝8.0hz，2h)，3.86(s，3h)，3.57(s，2h)，1.53(s，6h).

261、實施例42：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(3-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)異惡唑-5-基)乙酰胺

262、

263、參考實施例23中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(10mg).

264、ms?m/z[lc-ms]：587.22[m+1].1h?nmr(400mhz，dmso-d6)δ11.92(s，1h)，9.18(s，1h)，8.53(d，j＝1.2hz，1h)，8.33(s，1h)，8.28(d，j＝2.4hz，1h)，8.21-8.22(m，1h)，8.13(s，1h)，8.07(s，1h)，7.71(d，j＝1.6hz，1h)，6.97(d,j＝8.0hz,2h)，6.76(d，j＝8.0hz，2h)，6.34(s，1h)，3.86(s，3h)，3.59(s，2h)，1.48(s，6h).

265、實施例43：2-(4-(6-甲氧基-4-(吡嗪-2-基)吡唑[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(3-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)異惡唑-5-基)乙酰胺

266、

267、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(19mg)。

268、ms?m/z[lc-ms]：537.19[m+1].

269、實施例44：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(4-(6-(1-(二氟甲基)-1h-吡唑-4--基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

270、

271、參考實施例1中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(12mg).

272、ms?m/z[lc-ms]：569.23[m+1].

273、實施例45：n-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

274、

275、參考實施例2中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(9mg)。

276、ms?m/z[lc-ms]：680.31[m+1].

277、實施例46：n-(5-(叔丁基)異惡唑-3-基)-2-(2-氟-4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)苯基)乙酰胺

278、

279、參考實施例2中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(12mg).

280、ms?m/z[lc-ms]：473.21[m+1].

281、實施例47：1-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪-2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-3-(4-(((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)脲

282、

283、使用實施例12中的中間體和相應(yīng)的硼酸酯得到目標(biāo)化合物(11mg).

284、ms?m/z[lc-ms]：667.30[m+1]。

285、實施例48：1-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-3-(4-(((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)脲

286、

287、參考實施例2中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(22mg)。

288、ms?m/z[lc-ms]：589.27[m+1].

289、實施例49：2-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)-n-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺

290、

291、參考實施例2中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(5mg)。

292、ms?m/z[lc-ms]：602.29[m+1].

293、實施例50：1-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)脲

294、

295、參考實施例2中的合成方法使用相應(yīng)的原料得到目標(biāo)化合物(13mg)。

296、ms?m/z[lc-ms]：603.28[m+1].

297、實施例51：1-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)-3-(三氟甲基)苯基)-3-(2-氟-4-(6-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-4-(吡嗪2-基)吡唑并[1，5-a]吡啶-3-基)苯基)脲

298、

299、使用實施例12中的中間體和相應(yīng)的硼酸酯得到目標(biāo)化合物(11mg).

300、ms?m/z[lc-ms]：699.31[m+1]。

301、生物活性實驗

302、ret化合物生物活性試驗方法

303、1.化合物對retwt的體外酶學(xué)活性測定

304、本專利中化合物對retwt的酶學(xué)活性抑制ic50值測定采用均相時間分辨熒光(htrf)的方法進(jìn)行.將化合物從0.2mm開始用100％dmso進(jìn)行5倍的梯度稀釋(共7個濃度)，每個濃度取2μl的化合物加入到48μl的反應(yīng)緩沖液(50mm?hepes?ph7.5，0.1mm?na3vo4，5mmmgcl2，1mm?dtt，0.001％tween?20和100μg/ml?bsa)中進(jìn)行稀釋混勻.取2.5μl加入到384孔板(optiplate-384，購買于perkinelmer)中，然后加入5μl的gst-retwt(658-1114aa，終濃度為0.5nm)，離心混勻，再加入2.5μl的atp(終濃度25μm)和tk?peptide?substrate混合液(終濃度1μm，購買于cisbio)啟動反應(yīng)，總反應(yīng)體積為10μl.將384孔板放于孵育箱中23℃反應(yīng)2小時，然后加入5μl的tk?antibody(購買于cisbio)，5μl的streptavidin-xl665(購買于cisbio)停止反應(yīng).在孵育箱中再次孵育1小時后，在envision(購買于perkinelmer)上讀取熒光值(320nm激發(fā)，檢測665nm與620nm的發(fā)射光，二者比值為酶的活性信號).每個化合物分別在7個濃度下測定retwt的酶學(xué)活性信號，數(shù)據(jù)使用graphpad?prism軟件計算得到該化合物的ic50值.

305、2.化合物對retv804m的體外酶學(xué)活性測定

306、本專利中化合物對retv804m的酶學(xué)活性抑制ic50值測定采用均相時間分辨熒光(htrf)的方法進(jìn)行.將化合物從0.2mm開始用100％dmso進(jìn)行5倍的梯度稀釋(共7個濃度)，每個濃度取2μl的化合物加入到48μl的反應(yīng)緩沖液(50mm?hepes?ph7.5，0.1mm?na3vo4，5mmmgcl2，1mm?dtt，0.001％tween?20，20nm?seb(購買于cisbio)和100μg/ml?bsa)中進(jìn)行稀釋混勻.取2.5μl加入到384孔板(opriplate-384，購買于perkinelmer)中，然后加入5μl的gst-retv804m(658-1114aa,終濃度為0.02nm)，離心混勻，再加入2.5μl的atp(終濃度1.5μm)和tk?peptide?substrate混合液(終濃度1μm，購買于cisbio)啟動反應(yīng)，總反應(yīng)體積為10μl.將384孔板放于孵育箱中23℃反應(yīng)1小時，然后加入5μl的tk?antibody(購買于cisbio)，5μl的streptavidin-xl665(購買于cisbio)停止反應(yīng).在孵育箱中再次孵育1小時后，在envision(購買于perkinelmer)上讀取熒光值(320nm激發(fā)，檢測665nm與620nm的發(fā)射光，二者比值為酶的活性信號).每個化合物分別在7個濃度下測定retv804m的酶學(xué)活性信號，數(shù)據(jù)使用graphpad?prism軟件計算得到該化合物的ic50值。

307、3.化合物對retg810r的體外酶學(xué)活性測定

308、將ret(658-1114aa)基因克隆并連至pfastbac質(zhì)粒，用引物ret?g810rf：ggagtacgccaaataccggtccctgcggggctt和ret?g810r?r：aagccccgcagggaccggtatttggcgtactcc，進(jìn)行定點突變引入ret蛋白810位g突變?yōu)閞，在昆蟲細(xì)胞sf9內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，收集細(xì)胞加入lysisbuffer(50mm?tris-hcl，ph?7.5，150mm?nacl，0.1mm?edta，0.5％triton?x-100，20％glycerol，1mm?dtt，1*protease?inhibitor)重懸，超聲裂解，裂解液過gstrap?hp(gehealthcare)親和柱，用wash?buffer(50mm?tris-hcl，ph?7.5，150mm?nacl，0.1mm?edta,20％glycerol，1mm?dti)洗除雜蛋白，然后用elution?buffer(50mm?tris-hcl，ph?7.5，150mm?nacl，0.1mm?edta，20％glycerol，20mm?glutathione，1mm?dtt)洗脫gst-retg810r蛋白并濃縮，分裝后液氮速凍并保存于-80℃.

309、4.化合物對vegfr2的體外酶學(xué)活性測定

310、本專利中化合物對vegfr2的酶學(xué)活性抑制ic50值測定采用均相時間分辨熒光技術(shù)(htrf)的方法進(jìn)行.將化合物從1mm開始用100％dmso進(jìn)行5倍的梯度稀釋(共7個濃度)，每個濃度取2μl的化合物加入到48μl的反應(yīng)緩沖液(50mm?hepes?ph?7.5，0.1mm?na3vo4，5mmmgcl2，1mm?mncl2，1mm?dtt，0.001％tween?20和100μg/ml?bsa)中進(jìn)行稀釋混勻.取2.5μl加入到384孔板(optiplate-384，購買于perkinelmer)中，然后加入5μl的gst-vegfr2(終濃度為0.1nm)，離心混勻，再加入2.5μl的atp(終濃度2.5μm)和tkpeptide?substrate混合液(終濃度1μm，購買于cisbio)啟動反應(yīng)，總反應(yīng)體積為10μl.將384孔板放于孵育箱中23℃反應(yīng)1.5小時，然后加入5μl的tk?antibody(購買于cisbio)，5μl的streptavidin-xl665(購買于cisbio)停止反應(yīng).在孵育箱中再次孵育1小時后，在envision(購買于perkinelmer)上讀取熒光值(320nm激發(fā)，檢測665nm與620nm的發(fā)射光，二者比值為酶的活性信號).每個化合物化合物分別在7個濃度下測定vegfr2的酶學(xué)活性信號，數(shù)據(jù)使用graphpad?prism軟件計算得到該化合物的ic50值.

311、5.化合物在tt細(xì)胞增殖活性測定

312、人甲狀腺癌細(xì)胞系tt細(xì)胞使用ham's?f-12k培養(yǎng)基加15％的胎牛血清(fbs，購買于biological?industries，bi)和1％青霉素/鏈霉素雙抗(p/s，購買于life?techonology)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37℃，5％co2.進(jìn)行化合物檢測的前一天，將tt細(xì)胞以5000個細(xì)胞/195μl/孔的濃度鋪于96孔板(#3917，購買于corning)中.24小時后將化合物從10mm開始用100％dmso進(jìn)行3倍的梯度稀釋(共10個濃度)，然后每個濃度取2μl的化合物加入到48μl的ham's?f-12k培養(yǎng)基中進(jìn)行稀釋.稀釋后的化合物每個濃度取5μl加入鋪好的細(xì)胞懸液中，將化合物與細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)箱中共孵育120h(5天)，吸盡培養(yǎng)基后加入25μl的cell-titerglo(g7570，購買于promega)試劑再次孵育5-10分鐘.之后在envision上讀取熒光值，數(shù)據(jù)使用graphpad?prism軟件計算得到該化合物對細(xì)胞增殖的抑制的ic50值.

313、6.化合物在kif5b-ret/hek293tv804m細(xì)胞增殖活性測定

314、利用慢病毒侵染構(gòu)建的ret融合形式細(xì)胞系kif5b-ret/hek293t細(xì)胞使用dmem培養(yǎng)基加10％的胎牛血清(fbs，購買于biological?industries，bi)和1％青霉素/鏈霉素雙抗(p/s，購買于life?techonology)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37℃，5％co2.進(jìn)行化合物檢測的前一天，將kif5b-ret/hek293t細(xì)胞以2000個細(xì)胞/195μl/孔的濃度鋪于96孔板(#3917，購買于corning)中.24小時后將化合物從10mm開始用100％dmso進(jìn)行3倍的梯度稀釋(共10個濃度)，然后每個濃度取2μl的化合物加入到48μl的dmem培養(yǎng)基中進(jìn)行稀釋.稀釋后的化合物每個濃度取5μl加入鋪好的細(xì)胞懸液中，將化合物與細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)箱中共孵72h(3天)，吸盡培養(yǎng)基后加入25μl的cell-titer?glo(g7570，購買于promega)試劑再次孵育5-10分鐘.之后在envision上讀取熒光值，數(shù)據(jù)使用graphpad?prism軟件計算得到該化合物對細(xì)胞增殖的抑制的ic50值.

315、7.化合物在baf3-kif5b-retg810r細(xì)胞增殖活性測定

316、將kif5b-ret(k15；r12)融合基因構(gòu)建至質(zhì)粒pcdhl，用定點突變方法引入ret蛋白810位g突變?yōu)閞，與pspax2和pmd2g(4：2：1)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)293t細(xì)胞，包裝慢病毒顆粒并收集轉(zhuǎn)染后48h的慢病毒懸液，侵染baf3細(xì)胞48h后加入終濃度為1μg/ml的嘌呤霉素(購買于索萊寶)篩選，一周后將il-3非依賴的baf3細(xì)胞進(jìn)行單克隆篩選，構(gòu)建baf3-kif5b-retg810r細(xì)胞系.

317、baf3-kif5b-retg810r細(xì)胞使用rpmi-1640培養(yǎng)基加10％的胎牛血清(fbs，購買于biological?industries，bi)和1％青霉素/鏈霉素雙抗(p/s，購買于life?teehonology)進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37℃，5％co2。進(jìn)行化合物檢測的前一天，將baf3-kif5b-retg810r細(xì)胞以1000個細(xì)胞/195μl/孔的濃度鋪于96孔板(#3917，購買于corning)中.24小時后將化合物從10mm開始用100％dmso進(jìn)行3倍的梯度稀釋(共10個濃度)，然后每個濃度取2μl的化合物加入到48μl的dmem培養(yǎng)基中進(jìn)行稀釋.稀釋后的化合物每個濃度取5μl加入鋪好的細(xì)胞懸液中，將化合物與細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)箱中共孵72h(3天)，加入40μl的cell-titer?glo(g7570，購買于promega)試劑再次孵育5-10分鐘。在envision上讀取熒光值，數(shù)據(jù)使用graphpadprism軟件計算得到該化合物對細(xì)胞增殖的抑制的ic50值.

318、蛋白活性和細(xì)胞學(xué)數(shù)據(jù)

319、

320、“-”表示未測試

321、8.化合物的藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)：

322、雄性sd大鼠來源于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，將大鼠分組，每組3只，分別口服灌胃待測樣品的混懸液(5me/kg，混懸劑為mc?0.5％).動物在實驗前禁食過夜，禁食時間從給藥前10小時至給藥后4小時.分別于給藥后0.25、0.5、1、2、4、6、8、和24小時采血.使用小動物麻醉機(jī)經(jīng)異氟烷麻醉后通過眼底靜脈叢采取0.3ml全血，放于肝素抗凝管中，樣品于4℃、4000rpm離心5min，血漿轉(zhuǎn)移至離心管中，并放于-80℃保存直到分析.血漿中樣品使用蛋白質(zhì)沉淀法萃取，萃取液通過lc/ms分析.

323、

324、工業(yè)實用性

325、本發(fā)明提供一種ret選擇性抑制劑及其制備和用途.本發(fā)明同時提供了一系列由通式(i)所表示的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、多晶型物或異構(gòu)體、包含這些化合物的藥物組合物，以及用此類化合物治療疾病的方法.本發(fā)明提供的ret選擇性抑制劑的活性高、耐藥性強(qiáng)、臨床副作用小，可有效克服腫瘤治療耐藥性問題，具有較好的經(jīng)濟(jì)價值和應(yīng)用前景。