本發(fā)明屬于微生物醫(yī)學(xué)，具體地說是一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6?homo?sapiens及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、膽管癌(cholangiocarcinoma，cca)是一種起源于膽道系統(tǒng)且具有高度異質(zhì)性的惡性腫瘤，從肝內(nèi)膽管到主要的肝外膽管均可發(fā)生。根據(jù)解剖部位，膽管癌發(fā)生在二級膽管近端時可分為肝內(nèi)膽管(intrahepatic?cholangiocarcinoma，icca)和二級膽管至肝總管的肝(extrahepatic?cholangiocarcinoma,ecca)(亞分類為肝部膽管癌(pcca)和遠端膽管癌(distal?cholangiocarcinoma，dcca)。膽管癌是最常見的膽道惡性腫瘤，也是僅次于肝細(xì)胞癌的第二大原發(fā)性肝癌，約占所有胃腸道腫瘤的3％。不同類型膽管癌的發(fā)病率差異很大，pcca占所有膽管癌的50-60％，其次是dcca(20-30％)，最罕見的是icca(10-20％)。泰國東北部、東南亞和中國的發(fā)病率最高。膽管癌缺乏特異性臨床表現(xiàn)，遺傳和獲得性耐藥是導(dǎo)致絕大多數(shù)cca患者治療失敗的主要問題。

2、目前，膽管癌發(fā)生發(fā)展及耐藥機制尚未完全闡明，細(xì)胞系模型對于膽管癌基礎(chǔ)研究必不可少。然而，截至目前，全球有膽管癌細(xì)胞系138例，主要為肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞系，中國人群肝外膽管癌細(xì)胞系僅有6例。長期體外培養(yǎng)過程中，多數(shù)膽管癌細(xì)胞系由于人為或環(huán)境因素喪失部分原發(fā)腫瘤組織的特性，導(dǎo)致研究結(jié)果差異較大，且耐藥細(xì)胞多為后天獲得性，天然耐藥細(xì)胞對于耐藥相關(guān)的機制研究更為可靠。

3、因此，膽管癌細(xì)胞系特別是肝外膽管癌原發(fā)耐藥細(xì)胞系的建立對于研究膽管癌發(fā)生發(fā)展及耐藥機制至關(guān)重要。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的第一個目的在于，主要針對目前國內(nèi)缺乏中國人群來源的膽管癌細(xì)胞系，且針對膽管癌耐藥的機制不清，而提供了一種原發(fā)性多藥耐藥的遠端膽管癌細(xì)胞系。

2、本發(fā)明技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明的第一目的是提供一種所述人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6?homo?sapiens分離自遠端膽管中分化腺癌。

4、本發(fā)明的第二目的是提供一種所述原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6?homo?sapiens的子代細(xì)胞系。

5、本發(fā)明提供一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6?homo?sapiens，其于2024年3月20日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為cctcc?no:c202436。

6、本發(fā)明提供一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6?homo?sapiens，用于細(xì)胞系cbc3t-6?homo?sapiens的檢測具體包括以下步驟：s1：通過消化細(xì)胞去除纖維細(xì)胞及其他雜細(xì)胞，最終篩選出腫瘤細(xì)胞；

7、s2：將腫瘤細(xì)胞h&e染色，后進行免疫組織化學(xué)分析；

8、s3：接著將細(xì)胞分別接種到96孔板中，待細(xì)胞貼壁后分別加入不同濃度的膽管癌一線化療藥物，觀測細(xì)胞對各種藥物的耐藥性。

9、進一步的，步驟s1中的腫瘤細(xì)胞為膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6?homo?sapiens。

10、進一步的，步驟s3中的一線化療藥物為順鉑、吉西他濱、5-氟尿嘧啶、紫杉醇和奧沙利鉑。

11、本發(fā)明的第三目的是提供所述的原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6homo?sapiens的應(yīng)用，用于下列技術(shù)方案：

12、a)構(gòu)建人遠端膽管癌動物模型；

13、b)篩選或評估治療遠端膽管癌的藥物；

14、c)研究遠端膽管癌耐藥機制；

15、d)開發(fā)腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)藥物。

16、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

17、1、本發(fā)明通過提供一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6?homosapiens，其保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為cctcc?no:c202436。該細(xì)胞系性狀穩(wěn)定，目前已傳至50代。所述人遠端膽管癌細(xì)胞系來源組織病理診斷為膽管中分化腺癌，膽道標(biāo)志物ck7、ck19陽性，保留了肝外膽管癌生物學(xué)特征。此外，cbc3t-6細(xì)胞系具有倍增時間短(約50h)、小鼠皮下成瘤率高、均一性好等特點,且對膽管癌一線抗癌藥物中的吉西他濱、5-fu、奧沙利鉑以及順鉑有不同程度的耐藥，豐富了肝外膽管癌細(xì)胞庫。

18、2、本發(fā)明通過支原體檢測為陰性，表明該細(xì)胞系未受到支原體污染；cbc3t-6細(xì)胞系惡性程度高，可以用于研究遠端膽管癌的發(fā)生發(fā)展機制。

19、3、本發(fā)明通過原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6?homo?sapiens小鼠皮下成瘤率高，可用于制備膽管癌動物模型。遠端膽管癌動物模型可用于基礎(chǔ)研究及抗癌藥物篩選，為基于中國人群遺傳背景為基礎(chǔ)進行的研究提供了強有力的科研資料。該細(xì)胞系為原發(fā)性多藥耐藥細(xì)胞系，相較于目前現(xiàn)有的獲得性耐藥細(xì)胞系具有較高的科研和生產(chǎn)應(yīng)用價值，針對臨床抗癌藥物耐藥性的研究以及逆轉(zhuǎn)耐藥的研究提供新的試驗材料。

技術(shù)特征：

1.一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6homo?sapiens，其特征在于：所述人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6分離自遠端膽管中分化腺癌。

2.如權(quán)利要求1所述一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6homosapiens，其特征在于：包括原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6的子代細(xì)胞系。

3.如權(quán)利要求1所述一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6homosapiens，其特征在于，用于細(xì)胞系cbc3t-6的檢測具體包括以下步驟：

4.如權(quán)利要求3所述一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6homosapiens，其特征在于：步驟s1中的腫瘤細(xì)胞為膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6homo?sapiens。

5.如權(quán)利要求4所述一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6homosapiens，其特征在于：步驟s3中的一線化療藥物為順鉑、吉西他濱、5-氟尿嘧啶、紫杉醇和奧沙利鉑。

6.一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6homo?sapiens的應(yīng)用，其特征在于：應(yīng)用于權(quán)利要求1-5任意一項所述原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系cbc3t-6homo?sapiens，應(yīng)用于下列技術(shù)方案：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于微生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，提供一種原發(fā)性多藥耐藥的人遠端膽管癌細(xì)胞系CBC3T?6?Homo?sapiens及應(yīng)用，所述人遠端膽管癌細(xì)胞系CBC3T?6?Homo?sapiens分離自遠端膽管中分化腺癌，該細(xì)胞系目前已傳至50代，長期體外培養(yǎng)性狀穩(wěn)定，在保留膽管癌生物學(xué)特征的前提下，具有倍增時間短、小鼠皮下成瘤率高等特點，且對膽管癌一線抗癌藥物中的吉西他濱、5?氟尿嘧啶、奧沙利鉑以及順鉑有不同程度的耐藥。這不僅豐富了肝外膽管癌細(xì)胞庫，為膽管癌基礎(chǔ)研究和臨床藥物研發(fā)提供新的細(xì)胞模型，同時也為基于中國人群遺傳背景開展的研究提供了有力的科研資料。因此，該原發(fā)性多藥耐藥的細(xì)胞系具有較高的科研和臨床應(yīng)用價值。

技術(shù)研發(fā)人員：孟文勃,林延延,王若水,田宸駿,曹潔
受保護的技術(shù)使用者：蘭州大學(xué)第一醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9