本發(fā)明屬于epa-ee的制備領(lǐng)域，尤其涉及一種從魚油中制備高純度epa-ee的方法。

背景技術(shù)：

魚油，英文名稱為fatsandglyceridicoils，cas號(hào)為8016-13-5，是魚體內(nèi)的全部油類物質(zhì)的總稱，來源于大型海洋魚類的身體，其主要成分為omega-3脂肪酸，包括dha、epa、ara等，是一種多元不飽和脂肪酸。

epa是eicosapentaenoicacid即二十碳五烯酸的英文縮寫，是人體不可缺少的重要營養(yǎng)素，具有降低膽固醇和甘油三酯的含量，促進(jìn)體內(nèi)飽和脂肪酸代謝的作用，防止脂肪在血管壁的沉積，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展、預(yù)防腦血栓、腦溢血、高血壓等心血管疾病。雖然亞麻酸在人體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為epa，但此反應(yīng)在人體中的速度很慢且轉(zhuǎn)化量很少，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人體對(duì)epa的需要，因此必須從食物中直接補(bǔ)充。

高純度的二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)可以作為原料藥，應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域。美國amarin公司研制的用于治療高甘油三酯血癥和血脂異常癥的藥物，就是采用純度大于96％的二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)，目前已進(jìn)入三期臨床，將成為美國唯一治療高甘油三酯血癥和血脂異常癥的omega-3(ω-3)脂肪酸處方藥。因此，高純度二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)未來必將廣泛的應(yīng)用于原料藥和醫(yī)藥中間體。

目前，已報(bào)道的從魚油制備二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)的方法很多，主要包括以下幾種：尿素包合法、低溫冷凍法、金屬鹽沉淀法、真空蒸餾法、超臨界萃取法、高效液相色譜法、柱層析法等。這些方法都各有優(yōu)缺點(diǎn)，但大部分方法還是停留在簡(jiǎn)單地去除魚油中色素、膽固醇和部分飽和脂肪酸的水平，無法制備得到高純度二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)或者制備得到的產(chǎn)品不達(dá)標(biāo)，無法應(yīng)用。采用制備色譜可以制備得到高純度二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)，但是處理量小且需要特殊設(shè)備，成本高，很難實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。因此研究開發(fā)簡(jiǎn)單可控、容易操作、成本低廉、可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的制備高純度二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)的方法勢(shì)在必行。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了實(shí)現(xiàn)高純度二十碳五烯酸乙酯(epa-ee)的工業(yè)化生產(chǎn)，本發(fā)明提供一種從魚油中制備高純度epa-ee的方法，本方法同時(shí)利用了分子蒸餾、柱層析、銀離子絡(luò)合三種方法來提高產(chǎn)品的純度，除去產(chǎn)品里的有害雜質(zhì)。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是提供一種從魚油中制備高純度epa-ee的方法，包括以下步驟：

1)通過二級(jí)分子蒸餾方法蒸餾乙酯化的粗魚油，得到epa-ee、dha-ee、ara-ee的混合物；

2)將步驟1)分子蒸餾得到的產(chǎn)品通過柱層析純化，制備得到epa-ee粗產(chǎn)品，所述epa-ee粗產(chǎn)品含極少的dha-ee、ara-ee或不含dha-ee、ara-ee；

3)將柱層析純化后的粗epa-ee通過硝酸銀絡(luò)合法純化，利用溫度差異除雜，

得到epa-ee產(chǎn)品。

優(yōu)選地，上述步驟1)具體為：

設(shè)置一級(jí)分子蒸餾蒸發(fā)面溫度為90-120℃，冷凝面溫度為10-35℃，進(jìn)料保溫溫度為35-60℃，掛膜轉(zhuǎn)速為200-250轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度為3-7l/min，壓力為10-20pa，進(jìn)行一級(jí)分子蒸餾，棄去餾分；

設(shè)置二級(jí)分子蒸餾蒸發(fā)面溫度為120-140℃，冷凝面溫度為10-35℃，進(jìn)料保溫溫度為35-60℃，掛膜轉(zhuǎn)速為200-250轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度為3-7l/min，壓力為5-15pa，進(jìn)行二級(jí)分子蒸餾，收集餾分用于步驟2)中。

更進(jìn)一步地，上述步驟1)具體為：

設(shè)置一級(jí)分子蒸餾蒸發(fā)面溫度為120℃，冷凝面溫度為25℃，進(jìn)料保溫溫度為45℃，掛膜轉(zhuǎn)速為230轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度為5l/min，壓力為15pa，進(jìn)行一級(jí)分子蒸餾，棄去餾分；

設(shè)置二級(jí)分子蒸餾蒸發(fā)面溫度為140℃，冷凝面溫度為20℃，進(jìn)料保溫溫度為45℃，為掛膜轉(zhuǎn)速230轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度為5l/min，壓力為5pa，進(jìn)行二級(jí)分子蒸餾，收集餾分用于步驟2)中。

優(yōu)選地，上述步驟2)具體為：

將步驟1)得到的產(chǎn)品加入反相硅膠柱，使用甲醇水或者乙醇水體系作為洗脫劑洗脫。

優(yōu)選地，上述反相硅膠柱為c-18反相硅膠柱；所述反相硅膠柱高徑比為20-30。

上述步驟2)也可以具體為：

將步驟1)得到的產(chǎn)品加入正相硅膠柱，使用石油醚、己烷、乙酸乙酯、丙酮體系作為洗脫劑洗脫。

優(yōu)選地，上述正相硅膠柱的高徑比為20-30。

優(yōu)選地，上述步驟3)具體為：將步驟2)柱層析后的粗epa-ee加入到50-60％硝酸銀水溶液中，其中硝酸銀水溶液的質(zhì)量為粗epa-ee質(zhì)量的3-8倍，用環(huán)己烷低溫萃取，其中環(huán)己烷的質(zhì)量為粗epa-ee質(zhì)量的3-5倍，分取環(huán)己烷相，作為副產(chǎn)物；水相再用3-5倍量的環(huán)己烷高溫萃取兩次，然后迅速降溫，分取并合并兩次環(huán)己烷相；向環(huán)己烷相中加入硅膠，過濾，除掉溶液中的銀離子，濃縮濾液，既得最終產(chǎn)品epa-ee。

優(yōu)選地，上述步驟3)具體為：將步驟2)柱層析后的粗epa-ee加入到50-60％硝酸銀水溶液中，其中硝酸銀水溶液的質(zhì)量為粗epa-ee質(zhì)量的5倍，用環(huán)己烷在0-15℃萃取1-2分鐘，其中環(huán)己烷質(zhì)量為粗epa-ee質(zhì)量的4倍，分取環(huán)己烷相，作為副產(chǎn)物；水相再用4倍量的環(huán)己烷50-70℃萃取兩次，每次10-15分鐘，然后迅速降溫至20-30℃，分取并合并兩次環(huán)己烷相；向環(huán)己烷相中加入原料一半量的硅膠，過濾，除掉溶液中的銀離子，濃縮濾液，既得最終產(chǎn)品epa-ee。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：

本發(fā)明依次通過分子蒸餾、柱層析、銀離子絡(luò)合步驟分離提取乙酯化的粗魚油中的epa-ee，最終得到純度為96％以上的產(chǎn)品，操作簡(jiǎn)單、成本低廉、可實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的制備。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。

實(shí)施例一

1、分子蒸餾

取乙酯化的粗魚油5000g，調(diào)節(jié)分子蒸餾設(shè)備參數(shù)，一級(jí)蒸餾蒸發(fā)面溫度90℃，冷凝面溫度10℃，進(jìn)料保溫溫度35℃，掛膜轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度3l/min，壓力10pa；二級(jí)蒸餾蒸發(fā)面溫度120℃，冷凝面溫度10℃，進(jìn)料保溫溫度35℃，掛膜轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度3l/min，壓力5pa，收集二級(jí)蒸餾產(chǎn)品400g。

2、柱層析純化

取步驟1中得到的產(chǎn)品50g，用65％的甲醇或者乙醇溶解，通過高徑比為25的c-18反相硅膠柱分離純化，收集富含epa-ee部分流出液，回收溶劑，得到epa-ee粗產(chǎn)品23g。

3、硝酸銀絡(luò)合法純化

取步驟2得到的epa-ee粗產(chǎn)品20g，加入到60ml55％硝酸銀水溶液中，避光振蕩5分鐘，加入100ml環(huán)己烷10℃萃取2分鐘，分取環(huán)己烷相，作為副產(chǎn)物，水相再用100ml環(huán)己烷60℃萃取兩次，每次10分鐘，然后迅速降溫至20-30℃，分取兩次環(huán)己烷相，合并，經(jīng)10g硅膠過濾除掉溶液中的銀離子，濾液(環(huán)己烷相)濃縮，既得10.3g97.2％產(chǎn)品。

實(shí)施例二

1、分子蒸餾

取乙酯化的粗魚油5000g，調(diào)節(jié)分子蒸餾設(shè)備參數(shù)，一級(jí)蒸餾蒸發(fā)面溫度120℃，冷凝面溫度25℃，進(jìn)料保溫溫度45℃，掛膜轉(zhuǎn)速230轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度5l/min，壓力15pa；二級(jí)蒸餾蒸發(fā)面溫度140℃，冷凝面溫度20℃，進(jìn)料保溫溫度45℃，掛膜轉(zhuǎn)速230轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度5l/min，壓力10pa，收集二級(jí)蒸餾產(chǎn)品420g。

2、柱層析純化

取步驟1中得到的產(chǎn)品50g，用70％的甲醇或者乙醇溶解，通過高徑比為25的c-18反相硅膠柱分離純化，收集富含epa-ee部分流出液，回收溶劑，得到epa-ee粗產(chǎn)品25g。

3、硝酸銀絡(luò)合法純化

取步驟2得到的epa-ee粗產(chǎn)品20g，加入到100ml55％硝酸銀水溶液中，60ml環(huán)己烷0-15℃萃取1分鐘，分取環(huán)己烷相，作為副產(chǎn)物，水相再用80ml環(huán)己烷60℃萃取兩次，每次10-15分鐘，然后迅速降溫至20-30℃，分取兩次環(huán)己烷相，合并，經(jīng)10g硅膠過濾除掉溶液中的銀離子，濾液(環(huán)己烷相)濃縮，既得10.5g96.8％產(chǎn)品。

實(shí)施例三

1、分子蒸餾

取乙酯化的粗魚油5000g，調(diào)節(jié)分子蒸餾設(shè)備參數(shù)，一級(jí)蒸餾蒸發(fā)面溫度110℃，冷凝面溫度35℃，進(jìn)料保溫溫度60℃，掛膜轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度7l/min，壓力20pa；二級(jí)蒸餾蒸發(fā)面溫度140℃，冷凝面溫度35℃，進(jìn)料保溫溫度60℃，掛膜轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分鐘，進(jìn)料速度7l/min，壓力15pa，收集二級(jí)蒸餾產(chǎn)品398g。

2、柱層析純化

取步驟1中得到的產(chǎn)品50g，用80％的甲醇或者乙醇溶解，通過高徑比為25的c-18反相硅膠柱分離純化，收集富含epa-ee部分流出液，回收溶劑，得到epa-ee粗產(chǎn)品23.5g。

3、硝酸銀絡(luò)合法純化

取步驟2得到的epa-ee粗產(chǎn)品20g，加入到160ml60％硝酸銀水溶液中，80ml環(huán)己烷0-15℃萃取1-2分鐘，分取環(huán)己烷相，作為副產(chǎn)物，水相再用80ml環(huán)己烷60℃萃取兩次，每次10-15分鐘，然后迅速降溫至20-30℃，分取兩次環(huán)己烷相，合并，經(jīng)10g硅膠過濾除掉溶液中的銀離子，濾液(環(huán)己烷相)濃縮，既得10.0g98.7％產(chǎn)品。