本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
：傳統(tǒng)葡萄糖異構(gòu)酶生產(chǎn)考慮到發(fā)酵酶活力偏低，葡萄糖異構(gòu)酶在液體劑型時(shí)穩(wěn)定性差等因素，通常把發(fā)酵結(jié)束時(shí)的發(fā)酵液通過(guò)化工產(chǎn)品進(jìn)行交聯(lián)固定酶活，烘干后得到固定化葡萄糖異構(gòu)酶，其劑型為固體，目前僅有國(guó)外丹麥諾維信、美國(guó)杜邦公司供應(yīng)。固定化葡萄糖異構(gòu)酶使用時(shí)，必須花費(fèi)幾十萬(wàn)上百萬(wàn)一次購(gòu)買(mǎi)大量裝柱后方可使用，且使用要求葡萄糖液必須精制達(dá)標(biāo)方可生產(chǎn)果葡糖漿，且生產(chǎn)也要求連續(xù)，葡萄糖液質(zhì)量不達(dá)標(biāo)、間歇生產(chǎn)或使用維護(hù)不當(dāng)，均會(huì)導(dǎo)致失效甚至報(bào)廢，造成生產(chǎn)巨大損失。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，使用所述生產(chǎn)方法生產(chǎn)得到的葡萄糖異構(gòu)酶，具有活力高、耐溫、酶活穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于果葡糖漿行業(yè)，適合間歇生產(chǎn)F42型果葡糖漿，同時(shí)也可使用該葡萄糖異構(gòu)酶一步法生產(chǎn)F55型果葡糖漿。生產(chǎn)F42型果葡糖漿時(shí)該產(chǎn)品對(duì)葡萄糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求較低；一次購(gòu)酶花費(fèi)少；操作簡(jiǎn)單，隨加隨生產(chǎn)，不需維護(hù)和考慮酶活，完全實(shí)現(xiàn)該酶國(guó)產(chǎn)且生產(chǎn)靈活性高。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：A、活化接種：將鏈霉菌活化后，接入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，得到種母液；B、連續(xù)培養(yǎng)：將種母液依次在180-220轉(zhuǎn)/分，30-35℃下培養(yǎng)24-28小時(shí)，在180-220轉(zhuǎn)/分，30-35℃下培養(yǎng)18-36小時(shí)，在150-180轉(zhuǎn)/分，30-35℃下培養(yǎng)18-36小時(shí)，得到培養(yǎng)液；C、發(fā)酵培養(yǎng)：將培養(yǎng)液在110-150轉(zhuǎn)/分，30-35℃下培養(yǎng)40-55小時(shí)，得到發(fā)酵液；D、處理發(fā)酵液：將發(fā)酵液經(jīng)過(guò)過(guò)濾處理后取濾液，得到含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑。使用所述生產(chǎn)方法生產(chǎn)得到的葡萄糖異構(gòu)酶，具有活力高、耐溫、酶活穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明使用的培養(yǎng)基為：蔗糖7％、蛋白胨3％、牛肉粉1.5％、麩皮1％、玉米漿0.5％、硫酸銨0.5％、硫酸鎂0.05％、氯化鈷0.05％、磷酸氫二鉀0.02％、磷酸二氫鉀0.01％，余量為純凈水。優(yōu)選的，培養(yǎng)基為蔗糖10％、蛋白胨1.5％、牛肉粉2.0％、麩皮0.8％、玉米漿1.0％、硫酸銨0.35％、硫酸鎂0.08％、氯化鈷0.05％、磷酸氫二鉀0.02％、磷酸二氫鉀0.01％，余量為純凈水。為了進(jìn)一步提高得到的液體制劑中的葡萄糖異構(gòu)酶的含量及酶活，優(yōu)選的技術(shù)方案是，所述鏈霉菌為M1033鏈霉菌。所述M1033鏈霉菌是本申請(qǐng)的發(fā)明人經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)確定的，相較普通的鏈霉菌，在發(fā)酵后得到的液體制劑中的葡萄糖異構(gòu)酶的含量及酶活耐溫性都較高。為了進(jìn)一步提高鏈霉菌活化效率，優(yōu)選的技術(shù)方案是，步驟A中，從零下80-零下85℃的凍干管中取出鏈霉菌，在30-35℃下查氏斜面活化48-72小時(shí)后，接入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。為方便對(duì)所述鏈霉菌進(jìn)行多級(jí)培養(yǎng)，優(yōu)選的技術(shù)方案是，步驟A中，所述培養(yǎng)瓶為搖瓶，以方便在搖床上進(jìn)行培養(yǎng)；步驟B中，將種母液依次在180-220轉(zhuǎn)/分，30-35℃下在搖瓶中培養(yǎng)24-28小時(shí)，然后在180-220轉(zhuǎn)/分，30-35℃下在一級(jí)種子罐中培養(yǎng)18-36小時(shí)，在150-180轉(zhuǎn)/分，30-35℃下在二級(jí)種子罐中培養(yǎng)18-36小時(shí)，得到培養(yǎng)液，在連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中，依次從搖瓶到一級(jí)種子罐再到二級(jí)種子罐，根據(jù)不同培養(yǎng)時(shí)期選擇不同的培養(yǎng)容器以便于整個(gè)培養(yǎng)流程的順利進(jìn)行；步驟C中，在發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，便于提供穩(wěn)定的發(fā)酵環(huán)境。為避免雜菌污染，以保證整個(gè)生產(chǎn)工藝的順利進(jìn)行，優(yōu)選的技術(shù)方案是，連續(xù)培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)均在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行。為保證過(guò)濾的效果，優(yōu)選的技術(shù)方案是，步驟D中的過(guò)濾處理為：向發(fā)酵液中添加防腐劑、硅藻土、膨潤(rùn)土和純凈水，在15-30℃下攪拌15-30分鐘后，靜置1-3小時(shí)，再依次進(jìn)行過(guò)濾除渣、微濾除菌和超濾濃縮。防腐劑為苯甲酸鈉、山梨酸鉀、尼泊金甲酯或尼泊金乙酯。根據(jù)防腐劑的不同，相對(duì)于發(fā)酵液的加入的量也不同，如苯甲酸鈉的添加量為2-3g/L，山梨酸鉀的加入量為1-2g/L，尼泊金甲酯或尼泊金乙酯的加入量均為200-500ppm。在過(guò)濾之前加入硅藻土、膨潤(rùn)土和純凈水，主要是起到絮凝的作用，以方便將后續(xù)過(guò)濾操作，并且，本發(fā)明中采用板框過(guò)濾、微濾和卷式膜超濾的組合過(guò)濾方式，除渣、除菌更充分，從而提高了最終產(chǎn)品的純度。進(jìn)一步的，所述硅藻土、膨潤(rùn)土和純凈水相對(duì)發(fā)酵液的重量百分比分別為1-3％、1-5％和50-150％。根據(jù)本申請(qǐng)的發(fā)明人實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在上述配比下，既能夠保證良好的絮凝效果，又能節(jié)省試劑，從而降低了生產(chǎn)工藝的成本。根據(jù)不同過(guò)濾手段的工況和目的，本申請(qǐng)的發(fā)明人進(jìn)一步研究得到：所述板框過(guò)濾、微濾和卷式膜超濾的過(guò)濾壓力分別為0.05-0.25MPa，0.15-0.35MPa和0.30-0.50MPa，在上述壓差參數(shù)下，能夠保證較好的過(guò)濾效果和過(guò)濾速率。為保證最終產(chǎn)品能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定保存，優(yōu)選的技術(shù)方案是，步驟D中，超濾濃縮處理后，還有防腐穩(wěn)定處理：向濃縮液中加入食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷，食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷相對(duì)最終液體制劑的體積百分比分別為15-20％，5-10％，2-5％，0.1-0.2％和0.05-0.1％。本申請(qǐng)的發(fā)明人經(jīng)過(guò)正交反復(fù)試驗(yàn)，得到了上述防腐組合物的成分和配比，能夠使上述含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑穩(wěn)定保存較長(zhǎng)的時(shí)間，便于后續(xù)生產(chǎn)使用。為保證產(chǎn)品質(zhì)量，步驟D中，經(jīng)過(guò)防腐穩(wěn)定處理后，還需經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)步驟，檢驗(yàn)合格后，灌裝入庫(kù)；檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)為：含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑的酶活大于等于5000u/ml。需要說(shuō)明的是，酶活的數(shù)值主要是濃縮比決定的，也就是說(shuō)，在發(fā)酵完成之后，提取精制時(shí)，超濾濃縮比越大，得到的液體產(chǎn)品酶活越高。除了酶活之外，還有以下檢測(cè)指標(biāo)：通過(guò)以上檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)之后，即可保證最終成品具有較好的穩(wěn)定性，能夠長(zhǎng)期保存。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，使用所述液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶生產(chǎn)工藝生產(chǎn)得到的葡萄糖異構(gòu)酶，具有活力高、耐溫、酶活穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用于果葡糖漿行業(yè)，適合間歇生產(chǎn)F42型果葡糖漿，同時(shí)也可使用該葡萄糖異構(gòu)酶一步法生產(chǎn)F55型果葡糖漿。生產(chǎn)F42型果葡糖漿時(shí)該產(chǎn)品對(duì)葡萄糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求較低；一次購(gòu)酶花費(fèi)少；操作簡(jiǎn)單，隨加隨生產(chǎn)，不需維護(hù)和考慮酶活，完全實(shí)現(xiàn)該酶國(guó)產(chǎn)且生產(chǎn)靈活性高。附圖說(shuō)明為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1是利用粗制糖液生產(chǎn)制備F42型果葡糖漿時(shí)不同的液體制劑添加量的果糖含量隨時(shí)間變化示意圖；圖2是利用粗制糖液生產(chǎn)制備F42型果葡糖漿時(shí)不同的溫度下的果糖含量隨時(shí)間變化示意圖；圖3是利用粗制糖液生產(chǎn)制備F42型果葡糖漿時(shí)不同的pH下的果糖含量隨時(shí)間變化示意圖圖4是利用精制糖液生產(chǎn)制備F55型果葡糖漿時(shí)不同的液體制劑添加量的果糖含量隨時(shí)間變化示意圖；圖5是利用精制糖液生產(chǎn)制備F55型果葡糖漿時(shí)不同的溫度下的果糖含量隨時(shí)間變化示意圖；圖6是利用精制糖液生產(chǎn)制備F55型果葡糖漿時(shí)不同的pH下的果糖含量隨時(shí)間變化示意圖。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)的描述。顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所得到的所有其它實(shí)施方式，都屬于本發(fā)明所保護(hù)的范圍。實(shí)施例1高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：A、活化接種：從零下80℃的凍干管中取出M1033鏈霉菌，在35℃下斜面活化48小時(shí)后，接入搖瓶中培養(yǎng)，得到種母液；B、連續(xù)培養(yǎng)：將種母液依次在220轉(zhuǎn)/分，30℃下在搖瓶中培養(yǎng)28小時(shí)，然后在180轉(zhuǎn)/分，35℃下在一級(jí)種子罐中培養(yǎng)18小時(shí)，在180轉(zhuǎn)/分，30℃下在二級(jí)種子罐中培養(yǎng)36小時(shí)，得到培養(yǎng)液；C、發(fā)酵培養(yǎng)：將培養(yǎng)液在110轉(zhuǎn)/分，35℃下在發(fā)酵罐中培養(yǎng)40小時(shí)，得到發(fā)酵液；連續(xù)培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)均在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行；D、處理發(fā)酵液：向發(fā)酵液中添加苯甲酸鈉、硅藻土、膨潤(rùn)土和純凈水，防腐劑的添加量為2g/L，硅藻土、膨潤(rùn)土和純凈水相對(duì)發(fā)酵液的重量百分比分別為3％、1％和150％；在15℃下攪拌30分鐘后，靜置1小時(shí)，再依次進(jìn)行板框過(guò)濾、微濾和卷式膜超濾，所述板框過(guò)濾、微濾和卷式膜超濾的過(guò)濾壓力分別為0.25MPa，0.15MPa和0.50MPa；過(guò)濾處理后，還有防腐穩(wěn)定處理：向發(fā)酵液中加入食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷，食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷相對(duì)最終液體制劑的體積百分比分別為15％，10％，2％，0.2％和0.05％；經(jīng)過(guò)防腐穩(wěn)定處理后，得到含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑，實(shí)施液體制劑經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)步驟，檢驗(yàn)合格后，灌裝入庫(kù)。實(shí)施例2高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：A、活化接種：從零下85℃的凍干管中取出M1033鏈霉菌，在30℃下斜面活化72小時(shí)后，接入搖瓶中培養(yǎng)，得到種母液；B、連續(xù)培養(yǎng)：將種母液依次在180轉(zhuǎn)/分，35℃下在搖瓶中培養(yǎng)24小時(shí)，然后在220轉(zhuǎn)/分，30℃下在一級(jí)種子罐中培養(yǎng)36小時(shí)，在150轉(zhuǎn)/分，35℃下在二級(jí)種子罐中培養(yǎng)18小時(shí)，得到培養(yǎng)液；C、發(fā)酵培養(yǎng)：將培養(yǎng)液在150轉(zhuǎn)/分，30℃下在發(fā)酵罐中培養(yǎng)55小時(shí)，得到發(fā)酵液；連續(xù)培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)均在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行；D、處理發(fā)酵液：向發(fā)酵液中添加山梨酸鉀、硅藻土、膨潤(rùn)土和純凈水，山梨酸鉀的添加量為2g/L，所述硅藻土、膨潤(rùn)土和純凈水相對(duì)發(fā)酵液的重量百分比分別為1％、5％和50％；在30℃下攪拌15分鐘后，靜置2小時(shí)，再依次進(jìn)行板框過(guò)濾、微濾和卷式膜超濾，所述板框過(guò)濾、微濾和卷式膜超濾的過(guò)濾壓力分別為0.05MPa，0.35MPa和0.30MPa；過(guò)濾處理后，還有防腐穩(wěn)定處理：向發(fā)酵液中加入食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷，食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷相對(duì)最終液體制劑的體積百分比分別為20％，5％，5％，0.1％和0.1％；經(jīng)過(guò)防腐穩(wěn)定處理后，得到含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑，實(shí)施液體制劑經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)步驟，檢驗(yàn)合格后，灌裝入庫(kù)。實(shí)施例3高純度液體劑型葡萄糖異構(gòu)酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：A、活化接種：從零下82℃的凍干管中取出M1033鏈霉菌，在32℃下斜面活化60小時(shí)后，接入搖瓶中培養(yǎng)，得到種母液；B、連續(xù)培養(yǎng)：將種母液依次在200轉(zhuǎn)/分，32℃下在搖瓶中培養(yǎng)26小時(shí)，然后在200轉(zhuǎn)/分，32℃下在一級(jí)種子罐中培養(yǎng)27小時(shí)，在165轉(zhuǎn)/分，32℃下在二級(jí)種子罐中培養(yǎng)27小時(shí)，得到培養(yǎng)液；C、發(fā)酵培養(yǎng)：將培養(yǎng)液在130轉(zhuǎn)/分，32℃下在發(fā)酵罐中培養(yǎng)47小時(shí)，得到發(fā)酵液；連續(xù)培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)均在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行；D、處理發(fā)酵液：向發(fā)酵液中添加尼泊金甲酯、硅藻土、膨潤(rùn)土和純凈水，尼泊金甲酯的添加量為500ppm，所述硅藻土、膨潤(rùn)土和純凈水相對(duì)發(fā)酵液的重量百分比分別為2％、3％和100％；在22℃下攪拌22分鐘后，靜置2小時(shí)，再依次進(jìn)行板框過(guò)濾、微濾和卷式膜超濾，所述板框過(guò)濾、微濾和卷式膜超濾的過(guò)濾壓力分別為0.15MPa，0.25MPa和0.4MPa；過(guò)濾處理后，還有防腐穩(wěn)定處理：向發(fā)酵液中加入食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷，食鹽、醋酸鈉、甘油、硫酸鎂和氯化鈷相對(duì)最終液體制劑的體積百分比分別為17％，7％，3.5％，0.15％和0.07％；經(jīng)過(guò)防腐穩(wěn)定處理后，得到含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑，實(shí)施液體制劑經(jīng)過(guò)檢驗(yàn)步驟，檢驗(yàn)合格后，灌裝入庫(kù)。實(shí)驗(yàn)例1本實(shí)驗(yàn)例是對(duì)實(shí)施例1-3得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑的檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果如表1所示：本實(shí)驗(yàn)例的檢測(cè)值，均為使用國(guó)標(biāo)GB/T23533--2009測(cè)定方法或行業(yè)通用測(cè)量方法得到的，其中，酶活力保存率為室溫20-25℃保存三個(gè)月后的酶活力保存率。表1：檢測(cè)結(jié)果表檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施例1值實(shí)施例2值實(shí)施例3值結(jié)論酶活力≥5000u/ml5445555710600均合格酶活力保存率≥85％90.1％92％91.5％均合格pH值5.0-7.57.117.056.95均合格容重1.10-1.25g/ml1.181.201.22均合格重金屬(以Pb計(jì))≤0.0040.0030.0030.003均合格鉛(以Pb計(jì))≤0.0010.000720.000720.0002均合格砷(以As計(jì))≤0.00030.000130.000130.00007均合格菌落總數(shù)≤50000個(gè)/ml300300500均合格大腸菌群≤30個(gè)/ml230均合格大腸桿菌不得檢出未檢出未檢出未檢出均合格霉菌≤100個(gè)/ml000均合格酵母≤100個(gè)/ml000均合格黃曲霉毒素B1≤0.0000005％000均合格從表1能夠看出，實(shí)施例1-3得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑均具有酶活高，穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)，說(shuō)明本發(fā)明提供的生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性好，成品質(zhì)量佳。實(shí)驗(yàn)例2本實(shí)驗(yàn)例，為實(shí)施例1和2得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑生產(chǎn)果葡糖漿的使用報(bào)告：使用報(bào)告11、實(shí)驗(yàn)條件取葡萄糖含量大于92％的糖液170kg，固形物含量34.8％，DE＝98.1；將pH值調(diào)至8.1左右，加入140g七水合硫酸鎂和32g焦亞硫酸鈉，攪拌均勻，加入實(shí)施例1得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑550ml，升溫至65-68℃，作用16小時(shí)后，用高效液相色譜檢測(cè)，糖液中果糖含量達(dá)到43.19％，葡萄糖+果糖含量＝94.87％，最后將糖水pH值調(diào)至4.2滅酶。2、實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)使用實(shí)施例3得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑生產(chǎn)F42果葡糖漿，能使糖液中果糖含量達(dá)到43.19％，葡萄糖+果糖含量＝94.87％，滿足GB/T20882-2007《果葡糖漿》中果糖含量42-44％，葡萄糖+果糖含量≥92％的要求。所述液體制劑使用方便，經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)墓に嚳刂?，能直接把葡萄糖液轉(zhuǎn)化為F42果葡糖漿，滿足生產(chǎn)的需求。使用報(bào)告21、實(shí)驗(yàn)條件取葡萄糖含量大于93％的糖液28立方，固形物含量30％，DE＝101；將pH值調(diào)至8.1左右，加入25kg七水合硫酸鎂和6.1kg焦亞硫酸鈉，攪拌均勻，加入實(shí)施例2得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑8.5L，升溫至65-68℃，作用21小時(shí)后，用高效液相色譜檢測(cè)，糖液中果糖含量達(dá)到45.02％，葡萄糖+果糖含量＝92.72％，最后將糖水pH值調(diào)至4.1滅酶。2、實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)使用實(shí)施例3得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑生產(chǎn)F42果葡糖漿，能使糖液中果糖含量達(dá)到45.02％，葡萄糖+果糖含量＝92.72％。所述液體制劑使用方便，經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)墓に嚳刂疲苤苯影哑咸烟且恨D(zhuǎn)化為F42果葡糖漿，滿足生產(chǎn)的需求。實(shí)驗(yàn)例3本實(shí)驗(yàn)例，是對(duì)實(shí)施例3得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑生產(chǎn)果葡糖漿的能力研究。一、利用粗制糖液生產(chǎn)制備F42型果葡糖漿使用實(shí)施例3得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑(酶活10600u/ml)，底物為粗葡萄糖液，固形物含量為35.0％，MgSO4·7H2O：550-850g/M3(糖液)，Na2S2O5：200-300g/M3(糖液)。1、不同的液體制劑添加量，果糖含量隨時(shí)間變化結(jié)果如圖1所示，從圖1可以看出，隨著液體制劑添加量的增大，果糖含量達(dá)到F42型所需時(shí)間越短，液體制劑添加量2‰時(shí)，達(dá)到F42型需要30個(gè)小時(shí)，而液體制劑添加量3‰，達(dá)到F42型，只需18個(gè)小時(shí)。2、不同的溫度下，果糖含量隨時(shí)間變化結(jié)果如圖2所示，隨著溫度的提高(一定溫度)，在相同時(shí)間內(nèi)，溫度越高，果糖含量越高，說(shuō)明溫度的提高有利于果糖的轉(zhuǎn)化。3、不同的pH下，果糖含量隨時(shí)間變化結(jié)果如圖3所示，隨著pH值的升高(一定pH值)，相同時(shí)間內(nèi)，pH值越高，果糖含量越高。二、利用精制糖液生產(chǎn)制備F55型果葡糖漿使用實(shí)施例3得到的含有葡萄糖異構(gòu)酶的液體制劑(酶活10600u/ml)，底物為精制葡萄糖液，固形物含量為35.0％，水為去離子水，MgSO4·7H2O：550-850g/M3(糖液)，Na2S2O5：200-300g/M3(糖液)。1、不同的液體制劑添加量，果糖含量隨時(shí)間變化結(jié)果如圖4所示，從圖4可以看出，隨著液體制劑添加量的增大，果糖含量達(dá)到F55型所需時(shí)間越短，液體制劑添加量1％時(shí)，達(dá)到F55型需要10個(gè)小時(shí)，液體制劑添加量2％，達(dá)到F55型，只需5個(gè)小時(shí)。2、不同的溫度下，果糖含量隨時(shí)間變化結(jié)果如圖5所示，從圖5可以看出，隨著溫度的提高，在一定時(shí)間內(nèi)(≤18h)，相同時(shí)間時(shí)，溫度越高，果糖含量越高，當(dāng)溫度達(dá)到68℃以上，時(shí)間18小時(shí)，果糖含量相差不大。說(shuō)明在一定時(shí)間內(nèi)，溫度的提高有利于果糖的轉(zhuǎn)化。3、不同的pH下，果糖含量隨時(shí)間變化結(jié)果如圖6所示，從圖6可以看出，在生產(chǎn)F55型果葡糖漿時(shí)，在pH值8.0與pH值8.2時(shí)，兩者果糖含量相差不大。在pH值8.0與pH值7.8相比較，相同時(shí)間內(nèi)，pH值8.0的果糖含量比pH值7.8的要高。pH值7.5時(shí)，在20小時(shí)內(nèi)，果糖含量達(dá)不到F55型。結(jié)果分析1、在用高純度液體葡萄糖異構(gòu)酶生產(chǎn)果葡糖漿時(shí)，酶加量、溫度、pH值越高，越有利于果糖的轉(zhuǎn)化。2、隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，果糖含量增長(zhǎng)較快，呈明顯的上升趨勢(shì)，在20小時(shí)以后，果糖含量增長(zhǎng)快慢，逐漸趨于平緩。使用液體制劑的優(yōu)點(diǎn)1、設(shè)備簡(jiǎn)單，投資小，不需購(gòu)進(jìn)昂貴的設(shè)備，如色譜分離柱，普通制糖設(shè)備就可以生產(chǎn)F55果葡糖漿。2、操作簡(jiǎn)單，直接添加，一步制得型果葡糖漿，減去了生產(chǎn)工序，生產(chǎn)更易操作。3、生產(chǎn)更易調(diào)度。可根據(jù)市場(chǎng)情況，靈活安排生產(chǎn)，不存在固定化異構(gòu)酶不生產(chǎn)易失活、難保護(hù)和昂貴設(shè)備閑置的情況。4、簡(jiǎn)化了生產(chǎn)工序，節(jié)約了人力、水電費(fèi)用和生產(chǎn)成本，增強(qiáng)了企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力。5、有利于果葡糖漿的存儲(chǔ)、運(yùn)輸，減少了因結(jié)晶企業(yè)不必要的損失。以上所述，僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)以所述權(quán)利要求的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3