本發(fā)明屬于化學(xué)分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種聚合物整體柱、基于所述整體柱的固相萃取過濾器及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

樣品前處理是分析化學(xué)方法中不可或缺的步驟，對提高樣品分析的精密度和準(zhǔn)確度至關(guān)重要。近年來，隨著有機(jī)化合物的種類不斷增多，基質(zhì)日益復(fù)雜多樣，樣品前處理技術(shù)面臨著新的挑戰(zhàn)。固相萃取技術(shù)是最為有效的樣品前處理技術(shù)之一，它兼具提取和濃縮功能，并且具有有機(jī)溶劑消耗量少，萃取效率高等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、食品科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域的樣品前處理中。傳統(tǒng)固相萃取吸附劑大多為烷基功能化的硅膠填充柱，例如c8柱和c18柱。然而，c8/c18固相萃取柱存在如下局限性：(1)該類萃取柱為疏水性，僅適用于吸附強(qiáng)非極性、非極性以及中性化合物，對極性和強(qiáng)極性化合物萃取效果不佳；(2)在使用之前必須用甲醇等有機(jī)溶劑進(jìn)行活化，使得該類柱體表面的烷基鏈呈伸展?fàn)顟B(tài)，從而能夠更好地與目標(biāo)化合物接觸，但是活化步驟往往復(fù)雜耗時(shí)；(3)硅膠基質(zhì)不能適用于堿性環(huán)境，限制了該類固相萃取柱的適用范圍。

聚合物整體柱是一類由有機(jī)單體原位聚合而成的多孔連續(xù)床層，其內(nèi)部結(jié)構(gòu)中貫穿有大通孔。與填充柱相比，聚合物整體柱的通透性好，傳質(zhì)速率快，在快速分離和萃取中具有不可比擬的優(yōu)勢。與硅膠基質(zhì)的色譜材料相比，聚合物單體選擇范圍廣。根據(jù)單體的極性大小，研究者們可設(shè)計(jì)反相、離子交換、正相等模式整體柱。另外，聚合物整體柱耐極端ph環(huán)境能力強(qiáng)。正是由于上述諸多優(yōu)點(diǎn)，固相萃取整體柱引起了人們高度重視。發(fā)展至今，多種裝置已被應(yīng)用于制備固相萃取整體柱，例如毛細(xì)管、微量移液槍頭、peek(聚醚醚酮)管、不銹鋼色譜柱管等。然而，固相萃取整體柱仍然存在種類單一、重復(fù)性較差、吸附容量小、操作復(fù)雜耗時(shí)等局限性，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足實(shí)際樣品的分析需求。因此，發(fā)展高效、快速、高通量的新型固相萃取聚合物整體柱具有十分重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種聚合物，由包括下列的組分通過聚合反應(yīng)制備：

1)下式(i)所示的單體：

其中，r¹、r²彼此獨(dú)立地選自h或無取代或任選被r^a取代的下列基團(tuán)：烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、烯基、炔基、芳基、雜芳基；

y¹代表-r⁵-r⁶-r⁷-；

r⁵選自化學(xué)鍵、-c(＝o)-、-c(＝s)-；

r⁶選自化學(xué)鍵、o、s、-nr^b-；

r⁷選自化學(xué)鍵或無取代或任選被r^a取代的下列基團(tuán)：烷基、烯基；

條件是r⁵、r⁶和r⁷不同時(shí)為化學(xué)鍵；

r³、r⁴彼此獨(dú)立地選自無取代或任選被r^a取代的烷基；

y²代表-r⁸-r⁹-r¹⁰-；

r⁸選自化學(xué)鍵、-c(＝o)-、-c(＝s)-；

r⁹選自化學(xué)鍵、o、s、-nr^b-；

r¹⁰選自化學(xué)鍵或無取代或任選被r^a取代的下列基團(tuán)：烷基、烯基；

條件是r⁸、r⁹和r¹⁰不同時(shí)為化學(xué)鍵；

a^-代表載有負(fù)電荷的基團(tuán)，例如選自-so3^-、-coo^-、-h2po4^-；

每個ra獨(dú)立地選自h、烷基、烷氧基、烯基、炔基、環(huán)烷基、f、cl、br、i、oh、sh、cn、＝o、nhrb、-c(o)rb、c(o)orb、oc(o)rb、-conrbrb'；

每個rb、rb’獨(dú)立地選自h、烷基、環(huán)烷基；

2)交聯(lián)劑；

3)致孔劑；

4)引發(fā)劑。

作為示例性的實(shí)例，所述式(i)所示的單體可以選自例如下式所示的甲基丙烯酰乙基磺基甜菜堿：

根據(jù)本發(fā)明，所述交聯(lián)劑可以選自二乙烯基苯、季戊四醇三丙烯酸酯、季戊四醇四丙烯酸酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羥甲基丙烷三丙烯酸酯、n,n-二亞甲基丙烯酰胺、n,n-1,4-二亞苯基丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺。優(yōu)選地，所述交聯(lián)劑為甲叉雙丙烯酰胺。

所述致孔劑可以選自醇類溶劑、醚類溶劑、砜類溶劑、芳烴類溶劑、鹵代烴類溶劑、腈類溶劑、酯類溶劑等中的一種、兩種或更多種。

例如，醇類溶劑可以選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、戊醇、癸醇、正十二醇、環(huán)戊醇、環(huán)己醇、苯甲醇、苯乙醇；

醚類溶劑可以選自乙醚、甲基乙基醚、二丙醚、二丁醚、1,4-二氧六環(huán)、呋喃、甲基呋喃；

砜類溶劑可以選自二甲基亞砜、二甲基砜、環(huán)丁砜、2,4-二甲基環(huán)丁砜；

芳烴類溶劑可以選自甲苯、氯苯；

鹵代烴類溶劑可以選自二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳；

腈類溶劑可以選自乙腈；

酯類溶劑可以選自乙酸己酯、乙酸甲酯。

作為示例性的實(shí)例，所述致孔劑可以選自甲醇、二甲亞砜、正十二醇中的一種、兩種或三種的混合物。作為示例性的實(shí)例，可以使用醇類溶劑和砜類溶劑的混合物作為致孔劑，其中醇類溶劑與砜類溶劑的體積比可以是10:1～1:1，例如5:1～1.5:1、3:1～1.5:1，如1.8:1。所述醇類溶劑可以選自上述醇類溶劑的混合物，例如甲醇和其他醇類溶劑(如正十二醇)的混合物。優(yōu)選地，甲醇與所述其他醇類溶劑的體積比可以是3:1～1:1，例如2:1～1.1:1，如1.25:1。作為示例性的實(shí)例，可以使用甲醇、二甲亞砜和正十二醇的三元混合溶劑為致孔劑，其中甲醇、二甲亞砜和正十二醇的體積比可以是1.25:1.25:1。

所述引發(fā)劑可以選自偶氮二異丁腈、偶氮二異庚腈或其混合物。優(yōu)選地，所述引發(fā)劑為偶氮二異丁腈。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的聚合物表面具有選自下列的一種或多種官能團(tuán)：極性基團(tuán)、離子交換基團(tuán)、非極性作用位點(diǎn)。

根據(jù)本發(fā)明的聚合物，優(yōu)選地，所述極性基團(tuán)包括但不限于選自羰基、氨基、亞氨基、酰胺基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基氧基、雜環(huán)基、芳基、芳基氧基、雜芳基、雜芳基氧基、硝基、羥基、鹵素中的一種或多種；

根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地，所述離子交換基團(tuán)為季銨基、磺酸基；

根據(jù)本發(fā)明，所述非極性作用位點(diǎn)可以為烷基基團(tuán)，例如可以為甲基、乙基、丙基中的一種或多種。

本發(fā)明還提供一種整體柱，包含柱體和在柱體內(nèi)的所述聚合物。

根據(jù)本發(fā)明，所述聚合物由包括上述1)、2)、3)和4)的組分在整體柱的柱體內(nèi)通過原位聚合反應(yīng)得到。

根據(jù)本發(fā)明，所述整體柱的柱體可以選自例如毛細(xì)管、過濾器、加樣器(如微量移液器)。

本發(fā)明的整體柱可以任選地與其他分離或分析儀器，如液相色譜(lc)、高效液相色譜(hplc)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(lc-ms)等儀器中的一種或多種結(jié)合使用。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，還提供一種基于所述整體柱的毛細(xì)管、過濾器或加樣器(如微量移液器)。

作為實(shí)例，所述基于整體柱的過濾器包括過濾器和在過濾器內(nèi)通過原位聚合反應(yīng)得到的所述聚合物。

根據(jù)本發(fā)明，所述過濾器優(yōu)選為固相萃取過濾器。

本發(fā)明對于過濾器的規(guī)格和尺寸沒有特別限定，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要進(jìn)行選擇。例如，所述過濾器可以為針式過濾器，內(nèi)徑可以為1～50mm，如10～15mm。

根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地，所述整體柱或基于整體柱的過濾器，例如固相萃取過濾器可根據(jù)需要，選擇萃取分離雜質(zhì)或萃取分離待測目標(biāo)物，從而適應(yīng)不同樣品的測試需求。

本發(fā)明還提供所述整體柱的制備方法，包括使上述組分1)、2)、3)和4)進(jìn)行聚合反應(yīng)。

根據(jù)本發(fā)明的制備方法，優(yōu)選地，使上述組分在整體柱的柱體內(nèi)進(jìn)行原位聚合反應(yīng)。

根據(jù)本發(fā)明的制備方法，可以通過如下步驟進(jìn)行：

1)將上述單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑混合制備聚合液；

2)將所述聚合液引入整體柱的柱體，進(jìn)行聚合反應(yīng)；

3)聚合反應(yīng)完成后，沖洗所得的整體柱，去除殘余組分。

根據(jù)本發(fā)明的制備方法，步驟1)中，所述混合可以通過攪拌或超聲混合。

步驟2)中，所述聚合優(yōu)選為原位聚合。優(yōu)選地，可以使用注射器將所述聚合液引入過濾器。優(yōu)選地，所述聚合反應(yīng)在密閉條件下進(jìn)行。

根據(jù)本發(fā)明，聚合反應(yīng)的反應(yīng)溫度可以為50℃以上，優(yōu)選70℃以上，例如可以在80℃下反應(yīng)；反應(yīng)時(shí)間可以為1h以上，例如2～24h，如12h。

根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選地，通過將過濾器密封從而實(shí)現(xiàn)密閉條件。對于密封使用的材料沒有限制，如可以選自生料帶、封口膜、透明膠中的一種或多種。

步驟3)中，可以使用醇類溶劑，例如甲醇、乙醇或其混合物沖洗所得的整體柱。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述制備方法可通過如下步驟進(jìn)行：

將上述單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑組分混合均勻，利用注射器將上述聚合液引入至針式過濾器中，然后密封針式過濾器兩端。待聚合反應(yīng)完成后，將針式過濾器連接于注射器上，采用甲醇沖洗整體柱，去除致孔劑、未反應(yīng)的單體、引發(fā)劑或交聯(lián)劑。

本發(fā)明還提供一種固相萃取裝置，包括所述整體柱。

作為實(shí)例，本發(fā)明提供一種固相萃取裝置，包括所述基于整體柱的過濾器。根據(jù)本發(fā)明，所述固相萃取裝置還可以包括注射器。優(yōu)選地，所述注射器與過濾器可以根據(jù)需要連接。

本發(fā)明還提供一種固相萃取方法，包括使用所述整體柱、基于整體柱的毛細(xì)管、過濾器或加樣器(如微量移液器)、或所述固相萃取裝置處理樣品。

所述固相萃取方法可包括如下步驟：

1)將樣品溶液流經(jīng)整體柱，使整體柱吸附目標(biāo)組分；

2)使脫附溶劑流經(jīng)過整體柱，使整體柱吸附的目標(biāo)組分脫附，得到洗脫液。

根據(jù)本發(fā)明的固相萃取方法，在步驟1)中的整體柱吸附目標(biāo)組分之后，還可以使用除雜溶劑洗脫雜質(zhì)。

根據(jù)本發(fā)明，對于所述除雜溶劑沒有任何限制，只要其可使雜質(zhì)脫附且對目標(biāo)組分呈惰性即可。對于所述脫附溶劑沒有任何限制，只要其可使目標(biāo)組分脫附即可。

優(yōu)選地，所述溶劑除雜溶劑和脫附溶劑不相同，例如可彼此獨(dú)立地選自水(如去離子水)或有機(jī)溶劑。所述有機(jī)溶劑可以選自醇類溶劑、醚類溶劑、砜類溶劑、芳烴類溶劑、鹵代烴類溶劑、腈類溶劑、酯類溶劑中的一種或多種。

例如，醇類溶劑可以選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、戊醇、癸醇、正十二醇、環(huán)戊醇、環(huán)己醇、苯甲醇、苯乙醇；

醚類溶劑可以選自乙醚、甲基乙基醚、二丙醚、二丁醚、1,4-二氧六環(huán)、呋喃、甲基呋喃；

砜類溶劑可以選自二甲基亞砜、二甲基砜、環(huán)丁砜、2,4-二甲基環(huán)丁砜；

芳烴類溶劑可以選自甲苯、氯苯；

鹵代烴類溶劑可以選自二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳；

腈類溶劑可以選自乙腈；

酯類溶劑可以選自乙酸己酯、乙酸甲酯。

任選地，步驟2)得到的洗脫液可以進(jìn)一步進(jìn)行分離或分析。所述分離檢測包括但不限于色譜分離或分析，如液相色譜分離或分析，特別是高效液相色譜分離或分析。

根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述樣品溶液、除雜溶劑、脫附溶劑可以使用注射器加入整體柱，例如加入基于整體柱的過濾器。

作為示例性的實(shí)施方案，所述固相萃取方法包括如下步驟：

從注射器尾端注入待萃取樣品溶液，將此溶液推出后流經(jīng)所述基于整體柱的固相萃取過濾器，整體柱對目標(biāo)組分進(jìn)行吸附；

吸附完成后，將待萃取樣品溶液的溶劑推出，使用去離子水洗脫整體柱上吸附的雜質(zhì)，再從注射器尾端注入甲醇，將此溶液推出后收集，所得到的甲醇洗脫液直接用于高效液相色譜分離或檢測。

所述樣品可以是包含例如類固醇藥物的樣品，所述目標(biāo)組分可以是例如類固醇藥物。

所述類固醇藥物包括但不限于孕酮、睪丸素、醋酸甲地孕酮、醋酸環(huán)丙孕酮、左炔諾孕酮、已酸孕酮、丙酸睪丸酮中的一種或多種。

本發(fā)明還提供所述聚合物、整體柱、基于整體柱的過濾器或固相萃取裝置用于固相萃取的用途。

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供所述過整體柱，特別是基于整體柱的過濾器與其他分離或分析儀器，如液相色譜(lc)、高效液相色譜(hplc)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(lc-ms)等儀器中的一種或多種結(jié)合用于分離或分析的用途。

術(shù)語和定義

除非另有說明，本申請說明書和權(quán)利要求書中記載的基團(tuán)和術(shù)語定義，包括其作為實(shí)例的定義、示例性的定義、優(yōu)選的定義、表格中記載的定義、實(shí)施例中具體化合物的定義等，可以彼此之間任意組合和結(jié)合。這樣的組合和結(jié)合后的基團(tuán)定義及化合物結(jié)構(gòu)，應(yīng)當(dāng)屬于本申請保護(hù)的范圍內(nèi)。

本發(fā)明使用的“鹵素”指氟、氯、溴和碘。

本發(fā)明單獨(dú)使用或用作后綴或前綴的“烷基”意在包括具有1至20個，優(yōu)選1-6個碳原子(或若提供了碳原子的具體數(shù)目，則指該具體數(shù)目)的支鏈和直鏈飽和脂族烴基。例如，“c1-6烷基”表示具有1、2、3、4、5或6個碳原子的直鏈和支鏈烷基。烷基的實(shí)例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和己基。

本發(fā)明使用的術(shù)語“芳基”指由5至20個碳原子構(gòu)成的芳族環(huán)結(jié)構(gòu)。例如：包含5、6、7和8個碳原子的芳族環(huán)結(jié)構(gòu)可以是單環(huán)芳族基團(tuán)例如苯基；包含8、9、10、11、12、13或14個碳原子的環(huán)結(jié)構(gòu)可以是多環(huán)的例如萘基。芳環(huán)可在一個或多個環(huán)位置取代有上述那些取代基。術(shù)語“芳基”還包括具有兩個或更多個環(huán)的多環(huán)環(huán)系，其中兩個或更多個碳為兩個相鄰環(huán)所共有(所述環(huán)為“稠環(huán)”)，其中至少一個環(huán)是芳族的且其它環(huán)例如可以是環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基和/或雜環(huán)基。多環(huán)的實(shí)例包括但不限于2,3-二氫-1,4-苯并二氧雜環(huán)己二烯和2,3-二氫-1-苯并呋喃。

本發(fā)明使用的術(shù)語“環(huán)烷基”意在包括具有指定數(shù)目碳原子的飽和環(huán)基。這些術(shù)語可包括稠合或橋接的多環(huán)系統(tǒng)。環(huán)烷基在其環(huán)結(jié)構(gòu)中具有3至40個碳原子。在一個實(shí)施方案中，環(huán)烷基在其環(huán)結(jié)構(gòu)中具有3、4、5或6個碳原子。例如，“c3-6環(huán)烷基”表示例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基的基團(tuán)。

本發(fā)明使用的“雜芳基”指具有至少一個環(huán)雜原子(例如硫、氧或氮)的雜芳族雜環(huán)。雜芳基包括單環(huán)系統(tǒng)和多環(huán)系統(tǒng)(例如具有2、3或4個稠環(huán))。雜芳基的實(shí)例包括但不限于吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、呋喃基、喹啉基、異喹啉基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、異噁唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1,2,4-噻二唑基、異噻唑基、苯并噻吩基、嘌呤基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、氮雜苯并噁唑基、咪唑并噻唑基、苯并[1,4]二氧雜環(huán)己烯基、苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯基等。在一些實(shí)施方案中，雜芳基具有3至40個碳原子且在其它實(shí)施方案中具有3至20個碳原子。在一些實(shí)施方案中，雜芳基包含3至14個、4至14個、3至7個或5至6個成環(huán)原子。在一些實(shí)施方案中，雜芳基具有1至4個、1至3個或1至2個雜原子。在一些實(shí)施方案中，雜芳基具有1個雜原子。

本發(fā)明使用的術(shù)語“雜環(huán)基”指包含3至20個原子的飽和、不飽和或部分飽和的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)，其中1、2、3、4或5個環(huán)原子選自氮、硫或氧，除非另有說明，其可通過碳或氮來連接，其中-ch2-基團(tuán)任選被-c(o)-代替；及其中除非另有相反說明，環(huán)氮原子或環(huán)硫原子任選被氧化以形成n-氧化物或s-氧化物或環(huán)氮原子任選被季銨化；其中環(huán)中的-nh任選被乙酰基、甲酰基、甲基或甲磺?；〈?；及環(huán)任選被一個或多個鹵素取代。應(yīng)該理解的是，當(dāng)雜環(huán)基中s原子和o原子的總數(shù)超過1時(shí)，這些雜原子不彼此相鄰。若所述雜環(huán)基為二環(huán)或三環(huán)，則至少一個環(huán)可任選為雜芳族環(huán)或芳族環(huán)，條件是至少一個環(huán)是非雜芳族的。若所述雜環(huán)基為單環(huán)，則其一定不是芳族的。雜環(huán)基的實(shí)例包括但不限于哌啶基、n-乙?；哙せ?、n-甲基哌啶基、n-甲?；哙夯?、n-甲磺酰基哌嗪基、高哌嗪基、哌嗪基、氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁烷基、嗎啉基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、二氫吲哚基、四氫吡喃基、二氫-2h-吡喃基、四氫呋喃基、四氫噻喃基、四氫噻喃-1-氧化物、四氫噻喃-1,1-二氧化物、1h-吡啶-2-酮和2,5-二氧代咪唑烷基。

有益效果

1.與傳統(tǒng)疏水性固相萃取材料相比，本發(fā)明的整體柱及過濾器適用對象覆蓋面更廣。

2.與傳統(tǒng)填充型固相萃取小柱相比，本發(fā)明的整體柱及過濾器傳質(zhì)阻力小，能夠兼顧萃取分離速度和回收率，大大提高萃取分離效率。本發(fā)明過濾器的樣品回收率為85％以上，例如可以為92％以上、95％以上、98％以上、100％以上，如為85％～105％。

3.與毛細(xì)管等微型萃取裝置相比，本發(fā)明的過濾器規(guī)格選擇范圍廣，不僅能夠滿足樣品微量化的需求，而且能夠提高樣品吸附容量，因而更具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

4.本發(fā)明的整體柱及過濾器制備方法簡單，原料廉價(jià)易得，重復(fù)性良好，并且無需注射泵等復(fù)雜昂貴的裝置，大大簡化固相萃取分離的成本。

5.本發(fā)明的整體柱及過濾器可以根據(jù)使用需要，選擇不同的組分制備得到聚合物表面具有不同官能團(tuán)的整體柱及過濾器。此外，本發(fā)明的整體柱及過濾器可以根據(jù)分離樣品需要，選擇萃取待測目標(biāo)物或者雜質(zhì)。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1中聚合物的制備方法示意圖。

圖2為實(shí)施例1基于整體柱的固相萃取針式過濾器的裝置示意圖。其中各附圖標(biāo)記含義如下：1.基于整體柱的固相萃取針式過濾器；2.注射器。

圖3為實(shí)施例2基于整體柱的固相萃取過濾器對7種類固醇類藥物萃取分析的高效液相色譜圖。其中各附圖標(biāo)記含義如下：圖3(a)為未經(jīng)基于整體柱的固相萃取過濾器萃取分離樣品的高效液相色譜圖；圖3(b)為經(jīng)基于整體柱的固相萃取過濾器萃取分離樣品的高效液相色譜圖；1.左炔諾孕酮吸收峰；2.醋酸甲地孕酮吸收峰；3.醋酸環(huán)丙孕酮吸收峰；4.睪丸素吸收峰；5.孕酮吸收峰；6.丙酸睪丸酮吸收峰；7.已酸孕酮吸收峰。

具體實(shí)施方式

下文將結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的通式化合物及其制備方法和應(yīng)用做更進(jìn)一步的詳細(xì)說明。下列實(shí)施例僅為示例性地說明和解釋本發(fā)明，而不應(yīng)被解釋為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均涵蓋在本發(fā)明旨在保護(hù)的范圍內(nèi)。

除非另有說明，實(shí)施例中使用的原料和試劑均為市售商品，或可根據(jù)已知方法制備。

實(shí)施例1基于整體柱的固相萃取針式過濾器的制備

稱取10.0mg偶氮二異丁腈，300mg甲基丙烯酰乙基磺基甜菜堿，300mg甲叉雙丙烯酰胺，1.25ml二甲亞砜，1.25ml甲醇以及1.00ml正十二醇，超聲20min使其混合均勻，通過注射器將上述聚合液注入針式過濾器(13mmi.d.)中，然后依次用生料帶、封口膜、透明膠帶密封針式過濾器兩端，放入80℃水浴中靜置12h。待聚合反應(yīng)完成后(聚合反應(yīng)示意圖如圖1所示)，將針式過濾器與注射器連接(如圖2)，從注射器尾端注入一定量甲醇，將甲醇推出，使其流經(jīng)基于整體柱的固相萃取針式過濾器以便去除致孔劑和未反應(yīng)的組份。

實(shí)施例2使用基于整體柱的固相萃取過濾器對類固醇藥物進(jìn)行萃取分離

利用實(shí)施例1中所述的基于整體柱的固相萃取針式過濾器富集水相中微量的類固醇藥物：從注射器尾端加入10ml七種微量類固醇藥物的水溶液(0.550μg/ml孕酮，0.555μg/ml睪丸素，0.603μg/ml醋酸甲地孕酮，0.590μg/ml醋酸環(huán)丙孕酮，0.617μg/ml左炔諾孕酮，0.583μg/ml已酸孕酮，0.574μg/ml丙酸睪丸酮)，推出此溶液，待溶液全部流出后，另外推出1ml去離子水清洗整體柱上殘留的雜質(zhì)，然后推出1ml甲醇，得到洗脫液。最后，采用高效液相色譜儀對收集得到的洗脫液進(jìn)行分析。

色譜條件：色譜柱：xd6-c18(5μm，150mmx4.6mmi.d.,agilent)；流動相：甲醇/水(70/30,v/v)；流速：0.50ml/min，檢測波長：254nm。

所得類固醇藥物的高效液相色譜圖如圖3所示，未經(jīng)本發(fā)明過濾器處理的類固醇藥物溶液濃度很低，因而色譜圖3(a)中類固醇藥物的信號強(qiáng)度非常弱，經(jīng)過本發(fā)明過濾器萃取分離后，洗脫溶液中七種類固醇類藥物信號均明顯增強(qiáng)(圖3(b))，富集倍數(shù)約為未經(jīng)本發(fā)明過濾器處理的類固醇藥物信號強(qiáng)度的10倍，七種類固醇藥物的回收率為92.3％～108％。本發(fā)明提供的基于整體柱的固相萃取針式過濾器制備方法簡單，操作方便快速，具有良好的應(yīng)用前景。

以上，對本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行了說明。但是，本發(fā)明不限定于上述實(shí)施方式。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。