本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域和植物蟲害防治領(lǐng)域，具體涉及煙粉虱噻蟲嗪抗性基因及其啟動子。
背景技術(shù)：
：煙粉虱Bemisiatabaci(Gennadius)，是世界性的農(nóng)業(yè)害蟲，給生產(chǎn)帶了極大的危害。20世紀(jì)80年代以后，陸續(xù)分布于全球除南極洲外各大洲的90余個國家和地區(qū)，且寄住植物多達74科500多種。在中國，該害蟲在90年代末期成為我國重要的經(jīng)濟作物害蟲，主要為害種類為B生物型，由于其入侵性強危害性大又被冠以“超級害蟲”；Q生物型煙粉虱于2003年首次由本實驗室在云南地區(qū)花卉市場被發(fā)現(xiàn)，之后快速擴散到全國各地，目前這兩種生物型煙粉虱是我國蔬菜和花卉等作物上危害最大的生物型。煙粉虱不僅直接刺吸植物汁液，造成植株衰弱、干枯，而且還傳播植物病毒病。由煙粉虱作為傳毒媒介而引起的危害甚至使部分地區(qū)整棚番茄絕收，給生存帶來了極其嚴(yán)重的危害。鑒于煙粉虱直接危害和間接危害的嚴(yán)重性，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中煙粉虱的防治工作已經(jīng)到了刻不容緩的地步。煙粉虱主要以化學(xué)防治為主，殺蟲劑的過量使用，導(dǎo)致煙粉虱已對各種防治用藥產(chǎn)生了不同程度的抗性，尤其對防治煙粉虱使用最長、應(yīng)用范圍最廣的新煙堿類殺蟲劑抗藥性最強。噻蟲嗪是第二代全新結(jié)構(gòu)的新煙堿類殺蟲劑，自2000年進入中國市場后，一直是防治煙粉虱的首選。首次發(fā)現(xiàn)煙粉虱對新煙堿類殺蟲劑產(chǎn)生抗性是在西班牙南部的園藝生產(chǎn)區(qū)，后不久又在以色列和西班牙相繼發(fā)現(xiàn)接近1000倍的煙粉虱噻蟲嗪抗性種群，且高抗種群對其它煙堿類藥劑存在顯著交互抗性。近年來，我國的北京、江蘇、浙江、新疆、湖北等全國大多數(shù)省份也陸續(xù)有煙粉虱對新煙堿類藥劑產(chǎn)生抗性的報道，而且我國北至黑龍江、南至海南、西至青海、東到上海的大部分地區(qū)均有煙粉虱分布和危害，危害生物型主要為Q型和B型，且抗藥性普遍很高。因此抗藥性是導(dǎo)致煙粉虱大爆發(fā)且難以治理的主要原因之一。害蟲抗藥性治理依賴于害蟲抗性機制的闡明，但目前人們對煙粉虱抗新煙堿類殺蟲劑的抗性機制仍“知之甚少”。有關(guān)新煙堿類殺蟲劑的作用機制，人們普遍認(rèn)為，其主要作為后突觸煙堿乙酰膽堿受體（nAChRs）的激動劑，作用于昆蟲的中樞神經(jīng)系統(tǒng)而使昆蟲抽搐麻痹死亡。因此，關(guān)于新煙堿類殺蟲劑抗性機制研究一般集中在nAChRs，如在桃蚜、果蠅、稻飛虱、瘧蚊、以及蜜蜂等昆蟲中均發(fā)現(xiàn)nAChRs突變與新煙堿類殺蟲劑抗性有關(guān)。除靶標(biāo)不敏感性外，昆蟲對新煙堿類殺蟲劑的抗性機制也和代謝機制有關(guān)，如最近在桃蚜、家蠅、褐飛虱中均發(fā)現(xiàn)細胞色素P450氧化酶基因介導(dǎo)的代謝解毒與噻蟲嗪抗性有關(guān)。而在煙粉虱中，至今沒有發(fā)現(xiàn)nAChRs的突變與新煙堿類殺蟲劑抗性有關(guān)的報道，但是通過生化和分子生物學(xué)手段發(fā)現(xiàn)一種細胞色素P450基因（CYP6CM1）和吡蟲啉抗性有關(guān)。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明人利用轉(zhuǎn)錄組技術(shù)獲得大量P450基因片段序列，并以噻蟲嗪抗性和敏感品系為實驗材料進行熒光定量PCR進行表達量驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗性品系中P450基因CYP4C64的表達量顯著升高，并且通過田間樣品檢測發(fā)現(xiàn)該基因與噻蟲嗪抗性極其相關(guān)，在此基礎(chǔ)上進行了上游啟動子序列克隆，并且應(yīng)用雙熒光素酶系統(tǒng)進行分析，發(fā)現(xiàn)上游-603bp內(nèi)存在啟動子序列，國內(nèi)尚未有關(guān)于田間煙堿類殺蟲劑抗藥性基因CYP4C64啟動子分析相關(guān)報道。本發(fā)明提供一種編碼煙粉虱噻蟲嗪抗性蛋白的抗性基因，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；同時，本發(fā)明還提供所述的抗性基因編碼的煙粉虱噻蟲嗪抗性蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。本發(fā)明人通過煙粉虱基因組序列查找CYP4C64上游序列，設(shè)計引物，以煙粉虱總的DNA為模板PCR克隆相應(yīng)的片段序列。本發(fā)明還提供所述的抗性基因的表達載體或重組細胞系，將獲得的目的片段利用高保真酶transtartfastPFUflyDNApolymerasePCR獲得含有平末端的序列，然后連接到EcoRV單酶切（該酶為平末端酶）回收后的pGL4.10表達載體上，挑選克隆斑后進行菌液PCR驗證，測序連接方向正確后應(yīng)用天根無內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒進行質(zhì)粒提取備用。本發(fā)明所述的抗性基因的啟動子，其核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。本發(fā)明所述的抗性基因可用于檢測煙粉虱對吡蟲啉或噻蟲嗪的抗性基因，同時也為新的農(nóng)藥靶標(biāo)設(shè)計位點提供理論基礎(chǔ)。細胞色素P450廣泛參與新煙堿類殺蟲劑的抗藥性形成，對于抗藥性的機制研究有助于了解田間抗性形勢，及時監(jiān)測抗性動態(tài)，對田間殺蟲劑的選擇具有指導(dǎo)意義。同時對于上游調(diào)控序列的研究，有助于深入研究抗性形成的機制，并且為進一步以調(diào)控區(qū)域為靶標(biāo)對煙粉虱進行防治提供了理論基礎(chǔ)。附圖說明圖1pGL4.10載體圖譜。圖2pGL4.73載體圖譜。圖3CYP4C64基因上游區(qū)域的PCR圖片。圖4CYP4C64基因上游區(qū)域啟動子活性分析。具體實施方式供試?yán)ハxQ型煙粉虱噻蟲嗪抗性種群（thiamethoxam-resistantB.tabaciQstrain，THQR）于2011年8月從浙江杭州番茄田中采集，飼養(yǎng)在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉所日光溫室，維持飼養(yǎng)在辣椒（中椒#4；CapsicumannuumL.）上至今，期間一直用噻蟲嗪進行正向汰選以保存抗性。Q型煙粉虱噻蟲嗪田間敏感種群（thiamethoxam-susceptibleB.tabaciQstrain，THQS），田間噻蟲嗪抗性種群THQR在室內(nèi)進行反向汰選得到的相對敏感種群，在室內(nèi)溫室用辣椒（中椒#4；CapsicumannuumL.）飼養(yǎng)至今，未施用任何殺蟲劑。供試試劑RNA提取試劑Trizol：購自LifeTechnologiesCorporation公司；RACE試劑盒SMARTTMRACEcDNAAmplificationkit：購自Clontech公司；cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScript?RTreagentKit（REALTIME）：購自日本TaKaRa公司；Promega-Dual-Luciferase?ReporterAssaySystem：購自Promega公司；TaKaRaMiniBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0：購自TaKaRa公司；EndoFreeMiniPlasmidKitII無內(nèi)毒素質(zhì)粒小提中量試劑盒；DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)，蛋白酶K，X-Gal和IPTG：購自北京天根生化科技有限公司；Lipofectamine2000：購自Invitrogen公司；HyCloneSFX-InsectCellCultureMediaSFX-Insect（Liquid）：購自ThermoScientific公司芐青霉素；酵母提取物和胰蛋白胨：購自美國Amresco有限公司；PCR引物，Goldview和瓊脂糖：合成和購自北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司；瓊脂糖凝膠電泳緩沖液TBE配置：濃度高的貯存液5×TBE：Trisbase54.0g，硼酸27.5g，0.5M乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid，EDTA）20mL，用pH計精細調(diào)節(jié)pH為8.0，加ddH2O定容到1000mL；工作液為5×TBE儲存液稀釋10倍以后的0.5×TBE；PCREsTaq帶有6×LoadingBuffer的混合液：購自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司；Top10感受態(tài)細胞；PCR產(chǎn)物純化試劑盒，pEASY-T1載體，和transtartfastPFUflyDNApolymerase：購自全式金北京公司；LB培養(yǎng)基配置：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g，加入干凈的蒸餾水950mL，用1.0mol/LNaOH調(diào)pH至7.0，定容到1L，115℃高壓濕熱滅菌20分鐘，待用；其它實驗室常用化學(xué)試劑（分析純）均為市售。主要儀器ModulusII微孔板型多功能檢測儀：美國Progema熒光定量PCR儀：美國ABI7500；PCR儀器：Bio-RadS1000和Bio-RadC1000；水浴鍋和電泳槽：北京六一制造廠；高速離心機：德國Sigma3K15；核酸電泳系統(tǒng)和凝膠成像系統(tǒng)（GelDocEQ）：美國Bio-Rad公司；超純水儀：ZMQ55VOTIMiniQ純水儀；分子實驗用移液器：德國Eppendorf公司；超凈工作臺：蘇州凈化科技有限公司。濕熱高壓滅菌鍋：日本Sanyo公司；臺式冷凍振蕩器（THZ-C-1）：太倉市實驗設(shè)備廠；基因組DNA提取煙粉虱基因組DNA提取采用TaKaRaMiniBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0試劑盒，步驟參考操作說明，獲得的DNA-20℃保存。RNA提取及cDNA合成采用Triol方法提取煙粉虱總RNA，具體步驟如下：取生活狀態(tài)良好的煙粉虱成蟲50頭，盡量齡期一致，雌雄比例接近1:1。取完煙粉虱后立即放入液氮中冷凍，防止RNA降解。將煙粉虱樣品在超凈臺中放入1mL的180℃滅菌6h的勻漿器中，向其中加入1mL的Trizol進行充分勻漿，然后小心轉(zhuǎn)移至1.5mL的RNA專用離心管中，室溫靜置5分鐘。加入200μl氯仿，漩渦振蕩器劇烈振蕩30s，室溫靜置5分鐘，低溫離心，4℃12000rpm離心15分鐘。離心完畢后小心拿出離心管，輕輕吸取400μl的上清液，不要觸碰中間的蛋白質(zhì)層，轉(zhuǎn)移上清液到另一個干凈的離心管中，加入等體積預(yù)冷的異丙醇，輕輕顛倒混勻，冰上冷卻10分鐘后沉淀RNA，然后4℃12000rpm離心10分鐘，小心吸出上清液，加入1mL70%的無水乙醇進行漂洗，4℃8000rpm離心5分鐘。小心吸取乙醇，超凈臺中吹干5分鐘，加入適量預(yù)冷的DEPC水進行溶解，測定OD260/OD280的比值和含量，并且進行變性膠電泳檢測RNA質(zhì)量。采用TaKaRa公司的試劑盒PrimeScript?RTreagentKit進行cDNA合成。1)基因組DNA除去向RNA專用的PCR管中，小心加入5×gDNAEraserBuffer2.0μL；gDNAEraser1.0μL；TotalRNA1.0μg（依據(jù)提取RNA濃度換算需要加的體積）；RNaseFreeddH2O補充到10μL，迅速放入PCR儀中42℃，2分鐘。2)cDNA合成向已經(jīng)除去DNA的PCR管中加入5×PrimeScriptBuffer24.0μL；PrimeScriptRTEnzymeMix1.0μL；RTPrimeMix1.0μL；RNaseFreeddH2O4.0μL，然后迅速放入PCR儀中，37℃，15分鐘進行RNA反轉(zhuǎn)錄，85℃5秒種使得反轉(zhuǎn)錄酶失活，然后-20℃保存?zhèn)溆茫?80℃可長期保存）。CYP4C64基因克隆應(yīng)用SMARTTMRACEcDNAAmplificationkit進行CYP4C64基因全長克隆。首先提取高質(zhì)量的煙粉虱RNA，然后利用RACE試劑盒在煙粉虱總mRNA兩端加接頭，制備5’/3’-RACE-ReadycDNA，保存在-80℃。依據(jù)基因組和轉(zhuǎn)錄組序列，按照RACE試劑盒要求設(shè)計相應(yīng)的GSP和NGSP（表1），然后和接頭引物UMP進行PCR，反應(yīng)體系和程序見表2，PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠檢測，首先挑選比較長的較亮的條帶，利用全式金膠回收試劑盒進行回收后連接轉(zhuǎn)化，菌落PCR驗證得到陽性克隆斑后送北京擎科新業(yè)公司測序，分析測序結(jié)果，如果能找到GSP和UMP，并且重疊序列與目的基因序列一致，表明獲得該基因的全長序列。表1CYP4C64基因RACE引物表2RACE反應(yīng)體系以及反應(yīng)程序CYP4C64上游區(qū)域克隆通過煙粉虱基因組序列查找CYP4C64上游序列，設(shè)計引物，以煙粉虱總的DNA為模板PCR克隆相應(yīng)的片段序列，引物見表3。克隆序列連接轉(zhuǎn)化測序后與目的基因一致，表明克隆得到目的基因的上游序列。獲得目的片段后利用高保真酶transtartfastPFUflyDNApolymerasePCR獲得含有平末端的序列，然后連接到EcoRV單酶切（該酶為平末端酶）回收后的pGL4.10表達載體上（圖1），挑選克隆斑后進行菌液PCR驗證，測序連接方向正確后應(yīng)用天根無內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒進行質(zhì)粒提取備用。表3CYP4C64上游序列引物PrimernameForwardprimersequences（5′to3′）TM（℃）P4F4.1F-234AAGCGTTGGAAGGGTCTG55.5P4F4.1F-603TCATTATTGCCAGATTGTGCT55.9P4F4.1F-1072TCGCAGACTTCCTGTCATACT54.8P4F4.1F-1588ACTCCACCGTAACCTTGACTT54.8P4F4.1R-87GAGATAAGCAAGAGCGGAGC57.0果蠅S2細胞飼養(yǎng)與轉(zhuǎn)染果蠅S2細胞株惠贈于中國科學(xué)院動物研究所陳大華實驗室，細胞來源與果蠅胚胎晚期的類巨噬細胞。S2細胞培養(yǎng)于直徑15cm的大培養(yǎng)皿中，使用HyCloneSFX培養(yǎng)基，放置于無CO2的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度為27℃。S2細胞轉(zhuǎn)染采用脂質(zhì)體Lipofectamine2000（1ug/uL）進行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前取生長狀態(tài)良好的細胞，稀釋后密度達到1.5~2.0×106個，吸取適量到待轉(zhuǎn)染的細胞培養(yǎng)板中，搖晃混勻后靜置培養(yǎng)24h，移除培養(yǎng)基，加入無血清培養(yǎng)基，室溫靜置1h，在此期間配制轉(zhuǎn)染液：轉(zhuǎn)染液A：200μL的無血清培養(yǎng)基加入適量質(zhì)粒，輕輕混勻；轉(zhuǎn)染液B：200μL的無血清培養(yǎng)基加入適量Lipofectamine2000，輕搖混勻，室溫放置5min；混合轉(zhuǎn)染液A和轉(zhuǎn)染液B，輕輕搖勻，室溫放置20min，將混合液逐滴加入到細胞培養(yǎng)板中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6h以后更換新鮮培養(yǎng)基，24~48h后裂解細胞進行檢測。雙熒光素酶實驗應(yīng)用Promega-Dual-Luciferase?ReporterAssaySystem雙熒光素酶系統(tǒng)來檢測目的基因啟動基因表達情況，為了消除細胞間，轉(zhuǎn)染過程中等形成的差異，采用雙報告基因，分別為pGL4.10和pGL4.73（見圖2），前者發(fā)出的螢火蟲熒光用于檢測啟動子活性，其中后者含有海腎基因，產(chǎn)生熒光主要用于矯正背景差異。轉(zhuǎn)染細胞24~48h進行雙熒光素酶檢測：配置10×PBS緩沖液（2gKH2PO4，11.5gNa2HPO4，2gKCl，80gNaCl）母液，在使用時稀釋10倍成工作濃度。按照Promega-Dual-Luciferase?ReporterAssaySystem試劑盒說明書，配制1×PassiveLysisBufferPLB的裂解液：吸取適量的5×PLB進入干凈的離心管中，加入4倍體積的ddH2O，輕搖混合均勻，裂解液現(xiàn)用現(xiàn)配；同時配制1×Stop&Glo?Substrate工作液：將一定量50×Stop&Glo?Substrate加入到Stop&Glo?Buffer，使其成為1倍的工作濃度，這兩種試劑應(yīng)該室溫充分融化后使用；從培養(yǎng)箱中拿出待轉(zhuǎn)染的細胞培養(yǎng)板，輕輕移除細胞，用1×PBS輕輕洗滌細胞，廢棄清洗液；向培養(yǎng)板中加入一定量的1×PLB，放置于搖床上100rpm緩慢搖動15min，進行細胞裂解；吸取20μL的細胞裂解液進入ModulusII微孔板型多功能檢測儀熒光檢測專用的96孔板中，進行熒光素酶檢測。結(jié)果分析CYP4C64基因克隆依據(jù)煙粉虱轉(zhuǎn)錄組，應(yīng)用RACE試劑盒克隆得到CYP4C64基因全長的序列，通過Openreadingframe（OFR）分析得到長度為1533bp的基因序列（SEQIDNO:1），編碼510個氨基酸（SEQIDNO:2），預(yù)測的分子量為58969Da，等電點為6.70，該基因N端含有一個跨膜結(jié)構(gòu)，具有典型的P450保守結(jié)構(gòu)區(qū)域，如WxxxR結(jié)構(gòu)域（位于127–131），oxygen-binding結(jié)構(gòu)域（AGxxxT，位于326–331），heme-binding結(jié)構(gòu)域（PFxxGxxxCxG，位于447-457）。CYP4C64上游序列克隆通過基因組序列克隆CYP4C64上游區(qū)域，分別進行不同的截斷（-234bp;-603bp;-1072bp;-1588bp），克隆連接轉(zhuǎn)化連接進入pGL4.10表達載體上，進行雙熒光素酶實驗（見圖3）。啟動子區(qū)域雙熒光素酶分析應(yīng)用雙熒光素酶系統(tǒng)對CYP4C64上游區(qū)域進行分析，通過比較含有目的基因上游區(qū)域的pGL4.10載體和不含有目的基因上游區(qū)域pGL4.10空載體上的熒光素基因發(fā)出的熒光值來判斷是否存在啟動子區(qū)域。通過雙熒光素酶實驗表明含有CYP4C64基因上游-234到-603區(qū)域比pGL4.10空載體熒光值顯著升高，表明該區(qū)域存在能夠增強該基因表達的啟動子序列（見圖4）。通過克隆與煙粉虱新煙堿類藥劑相關(guān)的P450基因CYP4C64基因上游序列，然后應(yīng)用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測該基因上游的啟動子區(qū)域，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CYP4C64基因上游區(qū)域存在啟動子序列，如序列表SEQIDNO:3所示。序列表<110>中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所<120>煙粉虱噻蟲嗪抗性基因CYP4C64及其啟動子<160>3<210>1<211>1533<212>DNA<213>CYP4C64抗性基因<400>1ATGGAGTTGATTACCTTGATGCTGACAACCACGCTTTTAGCGTTTATAGTGATGTACTTTTTCACGCATGCTAATAAAAGGATACAACTAGTCCGGACGATGAATAAGTTACCCGGTCCAAAGGAATACCCTCTAGTCGGAAATTCATTGGAACTCGCAGTGCCACGAAATCAATTTTTCAAAATATTTGACGACAGGACGAGAAAATGGGGCCCAATTTTCAGGACTTGGGAGGGTCCGTTAGCTGTCTTACACATAACCAGGCCAGAGCATGCAGAGATCATTTTAGCAAGTTCGAAACACATCGACAAATCTCTAGTATACACTTTCCTCCATCCGTGGCTTGGAACAGGGCTTCTAACAGGAACAGGAGCCAAGTGGCATTCACACAGGAAAATGATCACCCCAACCTTCCACTTCAAGATCCTGGACATCTTCCAGGAAGTCTTCGTCGAGAAATGTCAACTGTTGGTCGAAAAACTCAAGAGCAAAGCTAACAACGAACCTTTCGACATCTATCCTTTCATCACCAGATGCGCGCTCGACATCATTTGTGAGACCGCTATGGGTACCGAAATTAACGCGCAAGAAAAAACCGACTCGGATTACGTCAGAGCTATTTACGATATCAGTGAGCTCACCCTCAAACGGTCCTTCCAACCATGGTTTTGGCCTGATTTAGTTTTCAATATGACTGACTACGGTAAACGTTATAGTGAATGTCTAAGCGTGCTCCACGGATTCACAACCAGGGTCATCAAGGAACGTAAAGCTTTGAGATCGTCGTCAAATGGAAAGCACATCGAGCAAACAGTTGACGAAGACGCAGAATTACTAGGCAAAAAGAAACGACTGGCATTTTTGGACCTCTTGCTAGAGGCATCAGAAAATTCAAACGGGTCCGCGCTCACAGACATTGAGATCAGAGAGGAAGTTGACACTTTCATGTTTGAGGGACACGATACAACCACAGCCGGTATCTGCTGGACCCTGTTCCTGCTGGGATCCCACCCTGAATATCAAGATAAGGTGGCAGAGGAGCTGAACAATATTTTTCAGGGTGATAATCGTCTTGCAACAATGAAAGACTTGAATGACATGAAGTACTTAGAAAGATGCATCAAGGATTCTTTGAGGCTTTTCCCTAGCGTCCCATTCATTGGCAGAACATTGAAAGAAGATACATCTTTTGATAATTACCAGGTGCCAAAGGGAACACTAGTCAACTTGCAAATTTATCATATCCATCGTTGTAAGGACCAATGGCCGAACCCTGAAAAGTTCGATCCTGACAATTTCCTGCCTGAGCGAATTTCAAAAAGGCACCCTTACGCCTATGTTCCTTTCAGTGCTGGCCCTAGGAATTGTATTGGTCAAAAGTTTGCCCTCCTCGAAGAGAAAACAATGCTGTCAGCCGTTTTACGGAACTATCGTGTTGAGTCACATGAGAAATTTGAAGATCTAACCTTGATGAACGAGCTTATTCTACGACCAGAATCTGGTATTATTCTGAAGCTAACTCCTAGGTCCTGA<210>2<211>510<212>氨基酸<400>2MELITLMLTTTLLAFIVMYFFTHANKRIQLVRTMNKLPGPKEYPLVGNSLELAVPRNQFFKIFDDRTRKWGPIFRTWEGPLAVLHITRPEHAEIILASSKHIDKSLVYTFLHPWLGTGLLTGTGAKWHSHRKMITPTFHFKILDIFQEVFVEKCQLLVEKLKSKANNEPFDIYPFITRCALDIICETAMGTEINAQEKTDSDYVRAIYDISELTLKRSFQPWFWPDLVFNMTDYGKRYSECLSVLHGFTTRVIKERKALRSSSNGKHIEQTVDEDAELLGKKKRLAFLDLLLEASENSNGSALTDIEIREEVDTFMFEGHDTTTAGICWTLFLLGSHPEYQDKVAEELNNIFQGDNRLATMKDLNDMKYLERCIKDSLRLFPSVPFIGRTLKEDTSFDNYQVPKGTLVNLQIYHIHRCKDQWPNPEKFDPDNFLPERISKRHPYAYVPFSAGPRNCIGQKFALLEEKTMLSAVLRNYRVESHEKFEDLTLMNELILRPESGIILKLTPRS<210>3<211>369<212>DNA<213>啟動子序列<400>3TCATTATTGCCAGATTGTGCTGAAGATTCGGCACATTTCCCCATACTATCCAGGTTATTCCACACAATTTGGCAATCTCGAGTTTAGTTCCCTGTTAGAAAATAAAACATGAGAGCAAATGAGGCAACATGAAATGTAGTTAGGCTGATTCCAGTTCAATCCGTTTCTAGTAGAATCGCGATTGATTGGTATTTTAAACCTTTCACTTCTTTCAAACTTTTAAATCCAAACCTTTAAGAGACGAATATCCGATTTGGTGGTGAAAGATTTTCGAATTTCGCGGGAAATTAAATGTAACAAGACCGCAAAATTGCTCTTGAAATTCCGAACAGGTAATCCCATCGAACCTGTGTCTGGACACCCATCGTT當(dāng)前第1頁1 2 3