1.一種快速批量提取魚組織總RNA的方法,其特征是步驟如下:
(1)處理前準備:取研磨珠,用乙醇溶液浸泡15-30分鐘后晾干;取若干2mL凍存管,每個凍存管中均添加研磨珠,并加入1mL Trizol;
(2)魚的前處理:解剖魚,取得魚組織20-100mg,經(jīng)焦碳酸二乙酯DEPC處理過的水漂洗后,剪碎組織塊,迅速投入步驟(1)處理過的凍存管中,旋上管蓋,投入液氮冷凍;
(3)研磨:取步驟(2)處理后的樣品1-50個,裝入高通量組織研磨儀,以100-120次/分的速度研磨5-10分鐘;
(4)離心:取步驟(3)處理后的若干樣品室溫放置4-6分鐘,分別轉(zhuǎn)移至1.5mL的離心管中,每支離心管加入0.2mL氯仿,劇烈振蕩15-30秒,室溫放置2-4分鐘;2-8℃、10000×g離心14-16分鐘;
(5)二次離心:取步驟(4)所得清液轉(zhuǎn)移到新管中,加入等量異丙醇,室溫放置10分鐘;2-8℃、10000×g離心10分鐘,移去上清,得到RNA沉淀;
(6)干燥:用1mL乙醇溶液洗滌步驟(5)所得RNA沉淀,2-8℃、7500×g離心5分鐘,棄去上清,得到RNA沉淀;
(7)溶解:室溫放置干燥或真空抽干步驟(6)所得RNA沉淀,加入20-200μL無RNase的水,-70℃保存。
2.如權(quán)利要求1所述快速批量提取魚組織總RNA的方法,其特征是:所述乙醇溶液的質(zhì)量濃度為70%-75%。
3.如權(quán)利要求1所述快速批量提取魚組織總RNA的方法,其特征是:步驟(1)所述研磨珠為2mm的氧化鋯珠,每個2mL凍存管中加入研磨珠2-4顆。