本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物，同時(shí)涉及該具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物的制備方法，及在制備人白血病HL-60細(xì)胞株，人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株，人肺癌A-549細(xì)胞株，人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株和人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株抑制劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
天然多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物（polycyclic polyprenylated acylphloroglucinols，簡(jiǎn)稱PPAPs）是一類由?；g苯三酚與多個(gè)異戊烯基相雜合的天然產(chǎn)物，這類化合物具有天然產(chǎn)物中少見的橋環(huán)、螺環(huán)乃至金剛烷等復(fù)雜的核心結(jié)構(gòu)，且往往帶有多個(gè)異戊烯基取代基。該類成分也是藤黃科植物獨(dú)有的特征性化學(xué)成分。目前已報(bào)道的天然 PPAPs 類化合物約300個(gè)左右，多具有植物次生代謝產(chǎn)物中少見的橋環(huán)、螺環(huán)和金剛烷等復(fù)雜、剛性的核心骨架。由于其結(jié)構(gòu)新穎，生物活性獨(dú)特，近年來在國際上廣受關(guān)注，例如，大葉藤黃醇(xanthochymol)和藤黃酮(guttiferone E)具有細(xì)胞毒和抑制微管蛋白的活性，nemorosone具有抗HIV的活性，貫葉金絲桃素(hyperforin)具有抗抑郁和抗腫瘤活性，garsubellin A具有抗老年癡呆的活性等等。值得關(guān)注的是藤黃中提取的藤黃酸已被開發(fā)成國家一類抗腫瘤新藥(藤黃酸注射劑)，目前正在二期臨床研究，這也使得從藤黃科中尋找PPAPs類抗腫瘤藥物成為一個(gè)研究熱點(diǎn)。藤黃科植物作為該類成分的主要來源（占到PPAPs類來源的70%），當(dāng)仁不讓的成為發(fā)現(xiàn)該類化合物的重點(diǎn)植物。
木竹子為藤黃科（Guttiferae）藤黃屬（Garcinia）植物。該屬植物約450種，產(chǎn)熱帶亞洲、非洲南部及波利尼西亞西部。我國有21種，產(chǎn)臺(tái)灣南部，福建，廣東，海南，廣西南部，云南南部、西南部至西部，西藏東南部，貴州南部及湖南西南部[中國植物志]。木竹子在民間用于消炎止痛，治燒傷，燙傷，濕疹，口腔炎，消化不良等等。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服上述缺點(diǎn)而提供的一種具有體外抗腫瘤活性，提取分離方法簡(jiǎn)易，原料容獲得的具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供該具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物的制備方法。
本發(fā)明的再一目的在于提供該具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物在制備人白血病HL-60細(xì)胞株，人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株，人肺癌A-549細(xì)胞株，人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株和人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株抑制劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的及解決其主要技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：
本發(fā)明的具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物，其結(jié)構(gòu)通式如下：
其中:
R1，R2可以為相同或不同，各自獨(dú)立的基團(tuán)為氫（–H），羥基（–OH）或者R1R2=氧橋（–O–）
R3，R4可以為相同或不同，各自獨(dú)立的基團(tuán)為氫（–H），羥基（–OH）或者R3R4=氧橋（–O–）
R5為2-羥基丙烷（–CH OH (CH3)2）或者羰基（–CO–）或者丙烯基（）R6，R7，R8可為相同或不同，各自獨(dú)立的基團(tuán)為氫（–H），或者R6R7 = 雙鍵（ ）或者R7R8 = 雙鍵（）。
上述的具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物，優(yōu)選具體化合物如下：
本發(fā)明的一種具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物的制備方法，包括以下步驟：
（1）取木竹子干燥枝葉，采用95%工業(yè)甲醇在溫度為70℃-80℃下對(duì)其回流提取3-5次后回收甲醇濃縮得浸膏，浸膏用水混溶成渾濁物，經(jīng)過乙酸乙酯等體積萃取、濃縮得乙酸乙酯層浸膏；
（2）乙酸乙酯層浸膏經(jīng)過300-400目硅膠柱層析，采用氯仿與乙酸乙酯體積比為60:1～0:1比例的洗脫劑梯度洗脫，點(diǎn)薄層板合并為4個(gè)部分：Fr 1 、Fr 2、 Fr 3、 Fr 4；
（3）對(duì)步驟2中Fr 2再次進(jìn)行硅膠柱層析，采用氯仿與乙酸乙酯體積比為40:1～1:1比例的洗脫劑梯度洗脫，再次被分成4個(gè)亞部分：Fr 2a 、Fr 2b 、Fr 2c、Fr 2d；Fr 2b經(jīng)過流動(dòng)相為甲醇的Sephadex LH-20凝膠柱層析,并經(jīng)過半制備高效液相色譜純化得到化合物1,2和3，其中半制備高效液相色譜的流動(dòng)相為甲醇:水體積比為88:12。
（4）對(duì)步驟2中Fr 3進(jìn)行硅膠柱層析，采用氯仿與乙酸乙酯體積比為40:1～1:1比例的洗脫劑梯度洗脫，再次被分成,5個(gè)亞部分：Fr 3a 、Fr 3b、 Fr 3c、 Fr 3d、Fr 3e，F(xiàn)r 3d經(jīng)過流動(dòng)相為甲醇的Sephadex LH-20凝膠柱層析,并經(jīng)過半制備高效液相色譜純化得到化合物4和5，其中半制備高效液相色譜的流動(dòng)相為甲醇:水體積比為78:22。
（5）對(duì)步驟2中Fr 4進(jìn)行硅膠柱層析，采用氯仿與乙酸乙酯體積比為20:1～1:1比例的洗脫劑梯度洗脫，再次被分成3個(gè)亞部分：Fr 4a 、Fr 4b、 Fr 4c，F(xiàn)r 4c經(jīng)過流動(dòng)相為甲醇的Sephadex LH-20凝膠柱層析,并經(jīng)過半制備高效液相色譜純化得到化合物6，其中半制備高效液相色譜的流動(dòng)相為甲醇:水體積比為73:27。
本發(fā)明的具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物在制備人白血病HL-60細(xì)胞株，人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株，人肺癌A-549細(xì)胞株，人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株和人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株抑制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有明顯的有益效果，從以上技術(shù)方案可知：本發(fā)明的制備方法包括甲醇提取，浸膏濃縮，硅膠柱層析，梯度洗脫，凝膠柱層析，半制備高效液相色譜純化，提取分離方法簡(jiǎn)易，其采用的原料容易大量獲得。采用MTT法測(cè)試從木竹子枝葉中分離得到的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物對(duì)人白血病HL-60細(xì)胞株的體外抗腫瘤作用，試驗(yàn)結(jié)果表明化合物在體外對(duì)人白血病HL-60細(xì)胞株具有顯著細(xì)胞毒作用，其IC50值分別為14.44 μM，2.47 μM，18.08 μM，2.93 μM，11.53 μM，13.90 μM；測(cè)試從木竹子枝葉中分離得到的化合物對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株的體外抗腫瘤作用，試驗(yàn)結(jié)果表明化合物在體外對(duì)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株具有顯著細(xì)胞毒作用，其IC50值分別為22.83 μM，16.45 μM，20.71 μM，15.36 μM，11.86 μM，14.82 μM；測(cè)試從木竹子枝葉中分離得到的化合物對(duì)人肺癌A-549細(xì)胞株的體外抗腫瘤作用，試驗(yàn)結(jié)果表明化合物在體外對(duì)人肺癌A-549細(xì)胞株具有顯著細(xì)胞毒作用，其IC50值分別為17.30 μM，24.82 μM，24.02 μM，15.44 μM，10.04 μM，10.24 μM；測(cè)試從木竹子枝葉中分離得到的化合物對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株的體外抗腫瘤作用，試驗(yàn)結(jié)果表明化合物在體外對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株具有顯著細(xì)胞毒作用，其IC50值分別為36.00 μM，17.10 μM，17.05 μM，11.92 μM，12.13 μM，14.57 μM；測(cè)試從木竹子枝葉中分離得到的化合物對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株的體外抗腫瘤作用，試驗(yàn)結(jié)果表明化合物在體外對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株具有顯著細(xì)胞毒作用，其IC50值分別為27.73 μM，7.78 μM，13.60 μM，7.62 μM，5.80 μM，8.84 μM。因此本發(fā)明從木竹子枝葉中分離得到的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物具有體外抗腫瘤活性，因而具有制備臨床腫瘤預(yù)防和治療藥物的前景，所得到的化合物為開發(fā)療效好且毒副作用小的新型抗腫瘤藥物創(chuàng)造了條件。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合較佳實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提出的具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物、其制備方法及應(yīng)用具體實(shí)施方式，詳細(xì)說明如后。
實(shí)施例1
一種具有抗腫瘤活性的多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物的制備方法，包括以下步驟：
（1）取貴州荔波產(chǎn)木竹子干燥枝葉，采用95%工業(yè)甲醇在溫度為70℃-80℃下對(duì)其回流提取3-5次后回收甲醇濃縮得浸膏，浸膏用水混溶成渾濁物，經(jīng)過乙酸乙酯等體積萃取、濃縮得乙酸乙酯層浸膏；
（2）乙酸乙酯層浸膏經(jīng)過300-400目硅膠柱層析，采用氯仿與乙酸乙酯體積比為60:1～0:1比例的洗脫劑梯度洗脫，點(diǎn)薄層板合并為4個(gè)部分：Fr 1 、Fr 2、 Fr 3、 Fr 4；
（3）對(duì)步驟2中Fr 2再次進(jìn)行硅膠柱層析，采用氯仿與乙酸乙酯體積比為40:1～1:1比例的洗脫劑梯度洗脫，再次被分成4個(gè)亞部分：Fr 2a 、Fr 2b 、Fr 2c、Fr 2d；Fr 2b經(jīng)過流動(dòng)相為甲醇的Sephadex LH-20凝膠柱層析,并經(jīng)過半制備高效液相色譜純化得到化合物1,2和3，其中半制備高效液相色譜的流動(dòng)相為甲醇:水體積比為88:12。
（4）對(duì)步驟2中Fr 3進(jìn)行硅膠柱層析，采用氯仿與乙酸乙酯體積比為40:1～1:1比例的洗脫劑梯度洗脫，再次被分成,5個(gè)亞部分：Fr 3a 、Fr 3b、 Fr 3c、 Fr 3d、Fr 3e，F(xiàn)r 3d經(jīng)過流動(dòng)相為甲醇的Sephadex LH-20凝膠柱層析,并經(jīng)過半制備高效液相色譜純化得到化合物4和5，其中半制備高效液相色譜的流動(dòng)相為甲醇:水體積比為78:22。
（5）對(duì)步驟2中Fr 4進(jìn)行硅膠柱層析，采用氯仿與乙酸乙酯體積比為20:1～1:1比例的洗脫劑梯度洗脫，再次被分成3個(gè)亞部分：Fr 4a 、Fr 4b、 Fr 4c，F(xiàn)r 4c經(jīng)過流動(dòng)相為甲醇的Sephadex LH-20凝膠柱層析,并經(jīng)過半制備高效液相色譜純化得到化合物6，其中半制備高效液相色譜的流動(dòng)相為甲醇:水體積比為73:27。
所述1-6化合物的結(jié)構(gòu)鑒定采用各種波譜技術(shù)：主要利用包括高分辨質(zhì)譜、核磁共振譜（1H NMR, 13C NMR, 2D-NMR），其結(jié)構(gòu)式如（1）~（6）所示：
化合物1：采用核磁質(zhì)譜分析化合物，其數(shù)據(jù)分析如下：Colorless crystals, m.p. 306–309 °C; [α]19 D–6.3 (c = 0.15, CH3OH + CHCl3 = 1:1); UV (CH3OH) λmax (log ε) 203 (4.52), 300 (3.69) nm; IR (KBr) vmax 3490, 3429, 2980, 2927, 2872, 1731, 1702, 1669, 1612, 1518, 1452, 1382, 1328, 1287, 1214, 1201, 1165, 1119, 1103, 1074 cm-1; positive ESI-MS [M + Na]+m/z 655; HR-ESI-MS [M + Na]+ m/z655.3236 (pred for C38H48O8Na, 655.3241);1H-NMR(400MHz,Pyridine-d5)δ:8.30(1H, d,J = 2.0 Hz, H-9), 7.23 (1H, d, J = 8.3 Hz, H-12), 7.96(1H, dd, J = 8.3 Hz, 2.0 Hz, H-13), 2.72 (2H, m, H-14), 5.53 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-15), 1.70 (3H, s, H-17),1.70 (3H, s, H-18),2.35 (1H, m, H-19α), 1.96 (1H, m, H-19β), 1.63 (1H, m, H-20), 1.81(3H, s, H-22), 1.91 (1H, m, H-23α), 2.02(1H, m, H-23β), 2.38 (1H, m, H-24α), 2.28(1H, m, H-24β), 5.02 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-25), 1.73(3H, s, H-27), 1.68(3H, s, H-28), 2.10(1H, m, H-29α), 2.21 (1H, m, H-29β), 2.18(1H, m, H-30), 0.90 (3H, s, H-32), 3.51 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-33α), 2.04 (1H, m, H-33β), 2.69(1H, m, H-34α), 2.00(1H, m, H-34β), 1.50(3H, s, H-37), 1.67(3H, s, H-38)。13C-NMR(100MHz, Pyridine-d5) δ:70.4 (C-1), 203.7 (C-2), 63.8 (C-3), 213.5 (C-4), 65.0 (C-5), 91.9 (C-6), 200.5 (C-7), 134.3 (C-8), 118.5 (C-9), 146.0 (C-10), 149.4 (C-11), 115.1 (C-12), 122.8 (C-13), 26.7 (C-14), 120.5 (C-15), 134.1 (C-16), 26.1 (C-17), 18.5 (C-18), 47.5 (C-19), 51.9 (C-20), 49.6 (C-21),22.7 (C-22),48.4 (C-23), 34.1 (C-24), 124.4 (C-25), 132.0 (C-26), 26.0 (C-27), 18.2 (C-28), 37.2 (C-29), 44.7 (C-30), 85.8 (C-31), 29.1 (C-32), 43.2 (C-33), 37.9 (C-34), 114.1 (C-35), 72.6 (C-36), 26.3 (C-37), 26.7 (C-38)。
化合物2：采用核磁質(zhì)譜分析化合物，其數(shù)據(jù)分析如下：yellow oil, [α]25 D–53.0 (c = 0.37, CH3OH); UV (CH3OH) λmax (log ε) 203 (4.05), 256 (3.57), 348 (3.24) nm; IR (KBr) vmax 3438, 2968, 2926, 2872, 2855, 1732, 1704, 1679, 1648, 1629, 1453, 1383, 1290, 1213, 1195, 1158, 1116, 1082, 1050 cm-1; positive ESI-MS [M + Na]+m/z 655; HR-ESI-MS [M + Na]+ m/z 655.3245 (calcd for C38H48O8Na, 655.3241).1H-NMR(600MHz, Pyridine-d5)δ:8.31(1H, overlap, H-9), 7.23 (1H, d, J= 8.1 Hz, H-12), 7.97(1H, overlap, H-13), 2.71 (2H, m, H-14), 5.53 (1H, t, J= 6.6 Hz, H-15), 1.70 (3H, s, H-17), 1.69 (3H, s, H-18), 2.40 (1H, dd, J = 9.0 Hz, 3.8 Hz, H-19α), 1.96 (1H, m, H-19β), 1.52 (1H, m, H-20), 1.78(3H, s, H-22), 1.89 (1H, m, H-23α), 2.01(1H, m, H-23β), 1.88 (1H, m, H-24α), 1.63(1H, m, H-24β), 2.03 (1H, m, H-25α),1.77 (1H, m, H-25β),4.82(1H, s, H-27),4.83(1H, s, H-27),1.74(3H, s, H-28), 2.16(1H, m, H-29α), 2.24 (1H, m, H-29β), 2.18(1H, m, H-30), 0.91 (3H, s, H-32), 3.52 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-33α), 2.07 (1H, m, H-33β), 2.68(1H, m, H-34α), 1.98(1H, m, H-34β), 1.65(3H, s, H-37), 1.45(3H, s, H-38)。13C-NMR(150MHz, Pyridine-d5) δ:70.8 (C-1), 204.2 (C-2), 64.2 (C-3), 213.9 (C-4), 65.4 (C-5), 92.2 (C-6), 200.9 (C-7), 134.8 (C-8), 118.9 (C-9), 146.5 (C-10), 149.8 (C-11), 115.5 (C-12), 123.2 (C-13), 27.2 (C-14), 120.9 (C-15), 134.5 (C-16), 26.5 (C-17), 18.5 (C-18), 48.0 (C-19), 51.8 (C-20), 50.1 (C-21),23.2 (C-22),48.8 (C-23), 34.0 (C-24), 36.9 (C-25), 146.6 (C-26), 110.8 (C-27), 23.1 (C-28), 37.7(C-29), 45.1 (C-30), 86.3 (C-31), 29.6 (C-32), 43.6 (C-33), 38.2 (C-34), 114.5 (C-35), 73.0 (C-36), 27.0 (C-37), 26.6 (C-38)。
化合物3：采用核磁質(zhì)譜分析化合物，其數(shù)據(jù)分析如下：yellow oil, [α]22 D–9.9 (c = 0.28, CH3OH); UV (CH3OH) λmax (log ε) 203 (4.37), 261 (3.90), 318 (3.72), 372 (3.79) nm; IR (KBr) vmax 3429, 2971, 2929, 2882, 1738, 1707, 1641, 1597, 1520, 1449, 1380, 1341, 1292, 1193, 1178, 1119, 1058, 1026, 990, 580 cm-1; positive ESI-MS [M + Na]+m/z 657; HR-ESI-MS [M + Na]+ m/z 657.3401 (calcd for C38H50O8Na, 657.3398).1H-NMR(600MHz, Pyridine-d5)δ:8.25(1H, overlap, H-9), 7.05 (1H, d, J = 7.9 Hz, H-12), 8.02(1H, overlap, H-13), 2.83 (1H, m, H-14α),2.99(1H, m, H-14β),5.64 (1H, t, J = 6.7 Hz, H-15), 1.68 (3H, s, H-17), 1.65 (3H, s, H-18), 2.18 (1H, m, H-19α), 1.85 (1H, m, H-19β), 1.72 (1H, m, H-20), 1.26 (3H, s, H-22), 1.69 (1H, m, H-23α), 2.73(1H, m, H-23β), 2.21 (2H, m, H-24), 5.02 (1H, t, J = 6.5 Hz, H-25), 1.67(3H, s, H-27), 1.49(3H, s, H-28), 2.68(1H, m, H-29α), 1.92 (1H, m, H-29β), 1.81(1H, m, H-30), 1.38 (3H, s, H-32), 3.64 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-33α), 2.72 (1H, m, H-33β), 2.20(1H, m, H-34α), 1.62(1H, m, H-34β), 3.73(1H, t,J = 6.7 Hz, H-35), 1.18(3H, s, H-37), 1.28(3H, s, H-38)。13C-NMR(150MHz, Pyridine-d5) δ:69.0 (C-1), 205.6 (C-2), 67.5 (C-3), 211.9 (C-4), 64.5 (C-5), 83.6 (C-6), 204.1 (C-7), 130.2 (C-8), 118.5 (C-9), 146.8 (C-10), 152.4 (C-11), 115.3 (C-12), 124.1 (C-13), 26.4 (C-14), 120.1 (C-15), 138.8 (C-16), 26.0 (C-17), 17.9 (C-18), 42.5 (C-19), 51.3 (C-20), 47.0 (C-21),19.0 (C-22),42.8 (C-23), 33.0 (C-24), 123.9 (C-25), 131.8 (C-26), 25.8 (C-27), 17.9 (C-28), 34.7(C-29), 41.9 (C-30), 84.9 (C-31), 27.9 (C-32), 42.9 (C-33), 36.3 (C-34), 81.7 (C-35), 70.1 (C-36), 26.6 (C-37), 26.9 (C-38)。
化合物4：采用核磁質(zhì)譜分析化合物，其數(shù)據(jù)分析如下：yellow oil, [α]25 D–5.0 (c = 0.24, CH3OH); UV (CH3OH) λmax (log ε) 204 (4.19), 241 (3.68), 262 (3.74), 316 (3.61), 373 (3.64), 487 (2.08), 563 (2.08) nm; IR (KBr) vmax = 3428, 2969, 2927, 2856, 1739, 1705, 1643, 1597, 1520, 1440, 1378, 1344, 1291, 1197, 1125, 1115, 1084, 1060, 1045 cm-1; positive ESI-MS [M + Na]+m/z 641; HR-ESI-MS [M + Na]+m/z 641.3446 (calcd for C38H50O7Na, 641.3449).1H-NMR(400MHz, Pyridine-d5)δ:8.70(1H, overlap, H-9), 7.15 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-12), 8.51(1H, overlap, H-13), 2.90 (1H, m, H-14α),3.18(1H, m, H-14β), 5.77 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-15), 1.71 (3H, s, H-17), 1.67 (3H, s, H-18), 2.19 (1H, m, H-19α), 1.88 (1H, m, H-19β), 1.72 (1H, m, H-20), 1.32(3H, s, H-22), 1.65 (1H, m, H-23α), 2.89(1H, m, H-23β), 2.33 (2H, m, H-24), 5.07 (1H, t, J = 6.5 Hz, H-25), 1.69(3H, s, H-27), 1.58(3H, s, H-28), 2.57(1H, m, H-29α), 2.18 (1H, m, H-29β), 1.34(1H, m, H-30), 1.33 (3H, s, H-32), 3.28 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-33α), 3.17 (1H, m, H-33β), 2.17(1H, m, H-34α), 2.06(1H, m, H-34β), 5.18(1H, t,J = 6.2 Hz, H-35), 1.67(3H, s, H-37), 1.47(3H, s, H-38)。13C-NMR(100MHz, Pyridine-d5) δ:72.4 (C-1), 208.0 (C-2), 67.6 (C-3), 211.2 (C-4), 67.6 (C-5), 84.8 (C-6), 205.2 (C-7), 130.0 (C-8), 118.5 (C-9), 146.8 (C-10), 152.6 (C-11), 115.7 (C-12), 124.9 (C-13), 27.0 (C-14), 120.6 (C-15), 133.3 (C-16), 26.1 (C-17), 17.9 (C-18), 44.0 (C-19), 51.9 (C-20), 47.3 (C-21),19.9 (C-22),42.3 (C-23), 33.8 (C-24), 124.4 (C-25), 131.8 (C-26), 25.9 (C-27), 18.2 (C-28), 31.7(C-29), 41.7 (C-30), 74.2 (C-31), 30.9 (C-32), 46.8 (C-33), 30.5 (C-34), 124.0 (C-35), 132.2 (C-36), 25.9 (C-37), 17.9 (C-38)。
化合物5：采用核磁質(zhì)譜分析化合物，其數(shù)據(jù)分析如下：yellow oil, [α]25 D–79.2 (c = 0.29, CH3OH); UV (CH3OH) λmax (log ε) 204 (4.24), 262 (3.80), 316 (3.68), 373 (3.67) nm; IR (KBr) vmax = 3431, 3076, 2966, 2929, 2856, 1739, 1705, 1645, 1597, 1520, 1448, 1377, 1292, 1198, 1126, 1116, 1086, 1044, 889 cm-1; positive ESI-MS [M + Na]+m/z 641; HR-ESI-MS [M + Na]+m/z 641.3449 (calcd for C38H50O7Na, 641.3449).1H-NMR(400MHz, Pyridine-d5)δ:8.72(1H, overlap, H-9), 7.15 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-12), 8.47(1H, overlap, H-13), 2.88 (1H, m, H-14α),3.20(1H, m, H-14β), 5.78 (1H, t, J = 7.5 Hz, H-15), 1.71 (3H, s, H-17), 1.66 (3H, s, H-18), 2.21 (1H, m, H-19α), 1.84 (1H, m, H-19β), 1.63 (1H, m, H-20), 1.29(3H, s, H-22), 1.64 (1H, m, H-23α), 2.89(1H, m, H-23β), 1.81 (1H, m, H-24α), 1.65(1H, m, H-24β), 2.05 (1H, m, H-29α),1.79 (1H, m, H-25β), 4.79(1H, s, H-27),4.78(1H, s, H-27), 1.70(3H, s, H-28), 2.59(1H, m, H-29α), 2.22 (1H, m, H-29β), 1.35(1H, m, H-30), 1.34 (3H, s, H-32), 3.28 (1H, d, J = 15.7 Hz, H-33α), 3.16 (1H, m, H-33β), 2.17(1H, m, H-34α), 2.09(1H, m, H-34β), 5.20(1H, t,J= 6.2 Hz, H-35),1.69(3H, s, H-37), 1.51(3H, s, H-38)。13C-NMR(100MHz, Pyridine-d5) δ:72.4 (C-1), 208.0 (C-2), 67.6 (C-3), 211.1 (C-4), 67.6 (C-5), 84.6 (C-6), 205.3 (C-7), 130.1 (C-8), 118.5 (C-9), 146.7 (C-10), 152.5 (C-11), 115.7 (C-12), 124.8 (C-13), 27.0 (C-14), 120.6 (C-15), 133.3 (C-16), 26.1 (C-17), 17.9 (C-18), 44.1 (C-19), 51.5 (C-20), 47.4 (C-21),20.0 (C-22),42.3 (C-23), 33.3 (C-24), 36.5 (C-25), 146.3 (C-26), 110.2 (C-27), 22.7 (C-28), 31.7 (C-29), 41.6 (C-30), 74.1 (C-31), 30.9 (C-32), 46.9 (C-33), 30.6 (C-34), 124.0 (C-35), 132.2 (C-36), 25.9 (C-37), 18.0 (C-38)。
化合物6：采用核磁質(zhì)譜分析化合物，其數(shù)據(jù)分析如下：yellow oil, [α]22 D–3.5 (c = 0.35, CH3OH); UV (CH3OH) λmax (log ε) 203 (4.44), 263 (4.07), 322 (3.89), 379 (4.03) nm; IR (KBr) vmax 3429, 2966, 2929, 2857, 1740, 1707, 1641, 1597, 1520, 1448, 1439, 1383, 1342, 1294, 1222, 1191, 1116, 1059, 1027, 931 cm-1; positive ESI-MS [M + Na]+ m/z 613; HR-ESI-MS [M + Na]+m/z 613.2780 (calcd for C35H42O8Na, 613.2772).1H-NMR(400MHz, Pyridine-d5)δ:8.39(1H, d, J = 1.4 Hz,, H-9), 7.13 (1H, d, J = 7.0 Hz, H-12), 8.11(1H, dd, J = 1.4 Hz,7.0 Hz, H-13), 2.83 (1H, m, H-14α),3.01(1H, m, H-14β), 5.66 (1H, t, J = 7.0 Hz, H-15), 1.71 (3H, s, H-17), 1.69 (3H, s, H-18), 2.21 (1H, m, H-19α), 1.88 (1H, m, H-19β), 1.81 (1H, m, H-20), 1.34 (3H, s, H-22), 1.74 (1H, m, H-23α), 2.89(1H, m, H-23β), 2.29 (2H, m, H-24), 5.06 (1H, t, J = 5.7 Hz, H-25), 1.68(3H, s, H-27), 1.52(3H, s, H-28), 2.46(1H, m, H-29α), 1.97 (1H, m, H-29β), 2.05(1H, m, H-30), 1.53 (3H, s, H-32), 3.80 (1H, d, J = 15.2 Hz, H-33α), 2.85 (1H, m, H-33β), 3.07(1H, m, H-34α), 2.17(1H, m, H-34β)。13C-NMR(100MHz, Pyridine-d5) δ:69.5 (C-1), 205.9 (C-2), 67.8 (C-3), 211.3 (C-4), 65.0 (C-5), 83.5 (C-6), 202.9 (C-7), 129.6 (C-8), 118.7 (C-9), 147.0 (C-10), 153.4 (C-11), 115.8 (C-12), 124.6 (C-13), 26.4 (C-14), 120.0 (C-15), 134.1 (C-16), 26.1 (C-17), 18.0 (C-18), 42.4 (C-19), 51.5 (C-20), 47.1 (C-21),18.7 (C-22),42.6 (C-23), 33.1 (C-24), 123.9 (C-25), 132.2 (C-26), 25.9 (C-27), 18.0 (C-28), 32.8(C-29), 40.1 (C-30), 89.0 (C-31), 29.6 (C-32), 41.7 (C-33), 39.0 (C-34), 175.1 (C-35)。
試驗(yàn)例：木竹子枝葉中六個(gè)多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物1-6的體外抗腫瘤活性
1．實(shí)驗(yàn)材料：
進(jìn)口96孔培養(yǎng)板，DEME培養(yǎng)液（美國HyClone公司生產(chǎn)），胎牛血清（杭州四季青公司生產(chǎn)），0.25% 胰酶（Trypsin）為美國HyClone 產(chǎn)品，四甲基偶氮唑藍(lán)( 3-( 4，5-Dimethyl-thiazol-2-yl-tetrazolium bromide；MTT) 購自Sigma 公司，二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide；DMSO）為北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品，Allegra X-15R臺(tái)式離心機(jī)（美國貝克曼公司），Axio Vert.A1倒置生物顯微鏡（德國卡爾蔡司公司），TS100雙目倒置相差生物顯微鏡(日本尼康公司），酶標(biāo)儀（美國BIOTEK公司。選用的腫瘤細(xì)胞株為：人白血病HL-60細(xì)胞株，人肝癌SMMC-7721細(xì)胞株，人肺癌A-549細(xì)胞株，人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株和人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株。藥物用DMSO（二甲基亞砜）溶解后配成儲(chǔ)存液，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
．試驗(yàn)過程
將凍存管內(nèi)的腫瘤細(xì)胞于37℃ 水浴箱中迅速解凍，離心收集細(xì)胞后，用含10% 胎牛血清及1%青霉素、1% 鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液，至37℃、5% CO2恒溫飽和濕度的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，隔天換液。當(dāng)細(xì)胞80% 匯合時(shí)進(jìn)行傳代，選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。取約80% 面積覆有細(xì)胞的培養(yǎng)皿，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管后，800 r/min離心5min，棄上清后加入新的培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至1×104個(gè)/ml密度接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔加入100μl細(xì)胞液，貼壁細(xì)胞提前12小時(shí)接種培養(yǎng)。加入待測(cè)化合物（本發(fā)明化合物1-6）溶液（固定濃度40μM初篩，在該濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率在50%附近的化合物設(shè)5個(gè)濃度進(jìn)入梯度復(fù)篩），每孔終體積200μl，每種處理均設(shè)3個(gè)復(fù)孔。于37℃繼續(xù)培養(yǎng)96小時(shí)后，每孔加入50μl MTT溶液于37℃孵化4小時(shí)后，棄取上清液，每孔加入200μl DMSO，室溫振蕩10min后，采用酶標(biāo)儀于570nm處檢測(cè)OD值，設(shè)A1（含200μl DMSO）為空白對(duì)照孔，以順鉑（cisplatin），紫杉醇（Taxol）為陽性對(duì)照。得到各組OD值后，按下列公式計(jì)算腫瘤細(xì)胞增殖抑制率（此部分實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次）：
生長(zhǎng)抑制率（%）=（空白組吸光度平均值-加藥組吸光度平均值）/ 空白組吸光度平均值 × 100%。所得結(jié)果帶入IC50計(jì)算軟件，求出IC50值。
試驗(yàn)結(jié)果
表1是多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類化合物1-6對(duì)五種人腫瘤細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用。
表1結(jié)果表明，化合物1-6在體外對(duì)多種人腫瘤細(xì)胞株均顯示出中等強(qiáng)度的細(xì)胞毒作用?；衔?對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC507.78μM）和對(duì)人白血病HL-60細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC502.47μM），與陽性對(duì)照之一順鉑對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC508.17μM）和對(duì)人白血病HL-60細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC502.06μM）基本相當(dāng)。
化合物4對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC5011.92μM）和對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC50 7.62μM）稍強(qiáng)于陽性對(duì)照之一順鉑對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC5013.93μM）和對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC50 8.17μM）。
化合物5對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC50 5.80μM），比陽性對(duì)照之一順鉑對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞株的細(xì)胞毒活性（IC50 8.17μM）相差1.4倍，活性較為顯著。
上述試驗(yàn)結(jié)果證明本發(fā)明化合物1-6具有很好的體外抗腫瘤的生物活性，為木竹子植物的綜合利用，治療癌癥藥物開發(fā)方面，提供了新藥物和新的途徑。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。