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NRAS基因突變檢測試劑盒的制作方法

文檔序號:11126245閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.用于NRAS基因突變檢測的Exon2、3和4三個外顯子的引物,引物序列分別是SEQ ID Nos:1-9。

2.NRAS基因突變檢測試劑盒,包括:

(1)用于擴增樣本中NRAS基因Exon2、3和4三個外顯子的特異性引物,引物序列分別是SEQ ID Nos:1-6;

(2)用于測序PCR的測序引物,分別用于對NRAS基因2、3和4三個外顯子進行測序分析,引物序列分別是SEQ ID Nos:7-9;

(3)3個裝有NRAS野生型質粒和突變型質粒按1:1質量比例混合的陽性質控品管和1個裝有PCR反應預混液的試管;其中突變型質粒分別是2號外顯子上c.34G>A,p.G12S突變位點;3號外顯子上c.181C>A,p.Q61K突變位點;4號外顯子c.436G>A,p.A146T突變位點。

3.權利要求2所述試劑盒,其特征在于,PCR反應預混液由以下組份組成:

組份體積(μl)10PCRbuffer2.55Qsolution525mM MgCl21.525mM dNTPs0.4H2O10.35

其中10× PCR buffer中含有500 mM KCl,100 mM Tris-HCl (pH 8.3),100 mM (NH4)2SO4,和15 mM MgCl2;5× Q solution 中含有1M Tricine [pH8.7(with KOH)],8% (v/v) Glycerol和5% (v/v) DMSO;25mM dNTPs中含有25mM dATPs、25mM dTTPs、25mM dCTPs和25mM dGTPs。

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