本發(fā)明涉及淀粉糊精制備的方法，具體是指利用生物技術(shù)、膜過濾及柱層析相結(jié)合制備淀粉基腹膜透析液的方法。

背景技術(shù)：

淀粉基腹膜透析液艾考糊精是艾考糊精腹膜透析液中的主要活性成分。腎透析是一種簡單、有效、價(jià)廉的方法，適合幾乎所有ESRD病人，在我國香港及歐洲等國，80％以上的透析患者選擇腹透治療。艾考糊精(Icodextrin)是由谷物淀粉通過α-1,4和少于10％α-1,6糖苷鍵連接的水溶性葡萄糖聚合物，重量平均分子量為13000～19000Da，數(shù)量平均分子量為5000～6500Da。艾考糊精作為一個(gè)膠體滲透劑在長期腹膜透析留置期間完成超濾。在現(xiàn)有的關(guān)于艾考糊精腹膜透析液的文獻(xiàn)中，只有關(guān)于艾考糊精在腹膜透析液中的應(yīng)用，以及相對(duì)于其他滲透劑，這種大分子多糖滲透劑在藥物臨床上具有的一些優(yōu)勢(shì)和目前面臨的困難，但是并沒有對(duì)艾考糊精的制備提供具體的方法。中國發(fā)明專利2013104530981中有介紹艾考糊精的酸水解制備方法，但是該方法使用的是烏氏粘度計(jì)對(duì)重均分子量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定方法存在的誤差較大，并且沒有對(duì)數(shù)均分子量進(jìn)行測(cè)定，重點(diǎn)在于也沒有對(duì)α-1,6糖苷鍵的比例進(jìn)行調(diào)控。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于提供一種產(chǎn)率高，品質(zhì)好，成本相對(duì)低的淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制備方法，彌補(bǔ)了目前關(guān)于艾考糊精制備工藝的不足。

本發(fā)明聯(lián)合膜過濾與葡聚糖凝膠色譜柱進(jìn)行分離、提純，并且采用GPC對(duì)重均和數(shù)均分子量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，利用¹H-NMR對(duì)酶解產(chǎn)物的α-1,6糖苷鍵含量進(jìn)行了測(cè)定。經(jīng)過本發(fā)明制備方法所得到的艾考糊精分子量分布范圍更窄，更集中，且糖苷鍵的比例也嚴(yán)格符合產(chǎn)品要求，純度更高。

本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種淀粉基腹膜透析液用艾考糊精的制備方法，包括如下步驟：

1)將淀粉用磷酸鹽緩沖溶液配置成淀粉溶液，并調(diào)節(jié)pH值至5.8～7.8，置于密閉容器中，在95～99℃下攪拌糊化60～100min后，冷卻至70～95℃，加入α-淀粉酶，用量為每克干淀粉加入α-淀粉酶1～8U，酶解1～8min，調(diào)節(jié)pH值至2.5～3.0，并保持10～15min滅酶活，得到淀粉酶解液；

2)將步驟1)所得的淀粉酶解液在pH值為5.5～6.5，40～60℃條件下加入脫支酶，用量為每克干淀粉加入脫支酶2～10U，攪拌反應(yīng)30～60min后，加熱至90～100℃并保持10～15min；滅酶活，得到腹膜透析液粗酶解液；

3)將步驟2)中腹膜透析液粗酶解液先用乙醇溶液醇沉，靜置，離心分離后取其沉淀物，再用蒸餾水洗滌后離心分離，將分離所得的沉淀物干燥；

4)將步驟3)得到的沉淀物用蒸餾水配成溶液，采用孔徑10k-20kD超濾膜超濾后，將分子量在10000～20000Da之間的樣品經(jīng)葡聚糖凝膠色譜柱分離提純，得到不同組分的酶解液，測(cè)其重均和數(shù)均分子量，測(cè)定α-1,6糖苷鍵的含量；篩選得到重均分子量為13000～19000Da，數(shù)量平均分子量為5000～6500Da，淀粉中α-1,6糖苷鍵的摩爾比例低于10％的組分；

5)將步驟4)中的最終酶解組分進(jìn)行干燥，得到腹膜透析液用艾考糊精。

為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，優(yōu)選地，步驟1)所述淀粉為玉米淀粉、蠟質(zhì)玉米淀粉、小麥淀粉、木薯淀粉和馬鈴薯淀粉中的一種。

優(yōu)選地，所述脫支酶為普魯蘭酶或異淀粉酶。

優(yōu)選地，所述α-淀粉酶是耐高溫α-淀粉酶。

優(yōu)選地，步驟1)淀粉溶液的質(zhì)量百分比濃度為5％～15％。

優(yōu)選地，步驟3)所述乙醇溶液的體積分?jǐn)?shù)為40～50％。

優(yōu)選地，步驟3)所述靜置是在0-4℃冰箱中靜置12～24h。

優(yōu)選地，步驟4)所述溶液中沉淀物的質(zhì)量百分比濃度為10～30％。

優(yōu)選地，步驟5)中的干燥方法為常壓干燥、減壓干燥、噴霧干燥或冷凍干燥。

優(yōu)選地，利用凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定其重均和數(shù)均分子量，用¹H-NMR測(cè)定其α-1,6糖苷鍵的含量。

本發(fā)明先使用醇沉和超濾對(duì)樣品進(jìn)行粗分離，再使用葡聚糖凝膠色譜柱對(duì)樣品進(jìn)行精提純，這樣得到的樣品純度更高。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

1)利用淀粉酶和脫支酶對(duì)淀粉進(jìn)行酶解，現(xiàn)有技術(shù)已有一定的介紹；如中國發(fā)明專利2014102015745公開了淀粉基補(bǔ)鐵營養(yǎng)強(qiáng)化劑的制備方法。該方法先將淀粉原料配成淀粉乳，并調(diào)節(jié)pH，置于密閉容器中在95～99℃下攪拌糊化30～60min；糊化完成后，將糊化液冷卻，加入脫支酶，在45～65℃下攪拌反應(yīng)；調(diào)節(jié)pH至5.5～7.0，加入α-淀粉酶，在45～110℃下攪拌反應(yīng)，得直鏈淀粉溶液。但是現(xiàn)有技術(shù)基本是先用脫支酶酶解再用α-淀粉酶酶解，順序與本發(fā)明相反，目的也完全不同。現(xiàn)有技術(shù)大多是為了得到直鏈淀粉；而本發(fā)明為了得到艾考糊精，是有一定的支鏈的淀粉。而且由于數(shù)均分子量的范圍難以控制，分支度不容易通過酶解得以控制，很難在數(shù)均、重均分子量以及α-1,6糖苷鍵三方面同時(shí)滿足艾考糊精要求；現(xiàn)有技術(shù)尚未發(fā)現(xiàn)用酶解的方式制備艾考糊精；中國發(fā)明專利2013104530981就是用酸解的方式制備艾考糊精。

2)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)：先使用淀粉酶酶解α-1,4糖苷鍵，將原淀粉的主鏈分解成片段，再在脫支酶作用下，通過部分酶解淀粉溶液中的α-1,6糖苷鍵，將酶解產(chǎn)物中的α-1,6糖苷鍵比例協(xié)同控制在10％以下，關(guān)鍵是要合理控制酶解時(shí)間與加酶量以及溫度等工藝條件，通過脫支酶酶解α-1,6糖苷鍵，耐高溫α-淀粉酶酶解α-1,4糖苷鍵，將酶解產(chǎn)物的分支度進(jìn)行控制，繼而控制重均與數(shù)均分子量的范圍，最后通過篩選兩種酶的酶解條件使得重均分子量與數(shù)均分子量同時(shí)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。淀粉酶與脫支酶共同作用控制糖苷鍵比例和分散度的艾考糊精的現(xiàn)有技術(shù)還未見報(bào)道。

3)本發(fā)明所得艾考糊精具有特點(diǎn)范圍的重均分子量、數(shù)均分子量以及α-1,6糖苷鍵，但本發(fā)明聯(lián)合淀粉酶與脫支酶，且在特定反應(yīng)條件下控制酶解時(shí)間與加酶量分別控制α-1,4糖苷鍵與α-1,6糖苷鍵的酶解程度可獲得目標(biāo)產(chǎn)物，尤其是本發(fā)明方法得到的符合艾考糊精條件的酶解液產(chǎn)率高，艾考糊精粒度均勻，分子量分布集中。

4)本發(fā)明采用生物酶解技術(shù)對(duì)淀粉原料進(jìn)行降解，整合醇沉技術(shù)、膜過濾技術(shù)以及色譜分離技術(shù)獲得高純度的淀粉基腹膜透析液艾考糊精，該產(chǎn)品具有低于10％的α-1,6糖苷鍵，重量平均分子量為13000～19000Da，數(shù)量平均分子量為5000～6500Da的性質(zhì)，完全符合該類產(chǎn)品的國際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。與傳統(tǒng)的酸水解法相比，生物酶解的技術(shù)使得生產(chǎn)效率大大提高，且具有保護(hù)環(huán)境的優(yōu)點(diǎn)。

5)本發(fā)明制備的艾考糊精可以用于膠體滲透劑，以艾考糊精為主要活性成分的腹膜透析液可成為終末期腎衰竭患者有效的腎替代治療方法之一。

附圖說明

圖1為實(shí)施例1中淀粉最終酶解產(chǎn)物的分子量分布圖譜。

具體實(shí)施方式

為更好理解本發(fā)明，下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步地說明。本發(fā)明有許多成功的實(shí)施例，下面列舉五個(gè)具體的實(shí)施例，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于實(shí)施例表述的范圍。

凝膠滲透色譜是測(cè)定重均分子量和數(shù)均分子量的常用方法，具體測(cè)定方法為：稱取樣品1.5mg，用流動(dòng)相溶解并稀釋制成濃度為3mg/mL的溶液，使用漩渦振蕩儀振蕩5s，用0.45μm的水相過濾膜過濾后，于常溫下靜置2-3h，作為樣品溶液待測(cè)。測(cè)定的具體色譜條件為：TSK 5000色譜柱；流動(dòng)相為超純水(超聲20min后待用)；示差折光檢測(cè)器溫度為45℃；柱溫為45℃；流速為1mL/min；進(jìn)樣量為20μL。分別精確稱取上述葡聚糖系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液于凝膠色譜儀，記錄洗脫峰的保留時(shí)間，采用GPC軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)上述繪制的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品的分子量，進(jìn)而分析艾考糊精樣品中的分子量分布情況(如圖1)。

采用如下方法測(cè)定定重均分子量和數(shù)均分子量：將得到的酶解淀粉樣品取出1mg，加0.5mL氘代DMSO，使樣品充分溶解，放入核磁管中進(jìn)行測(cè)定。其中測(cè)定溫度70℃，掃描次數(shù)128次。計(jì)算方法如下：

α-1,4糖苷鍵對(duì)應(yīng)的化學(xué)位移為5.11ppm，α-1,6糖苷鍵對(duì)應(yīng)的化學(xué)位移為4.75ppm，α-1,6糖苷鍵含量就是淀粉的分支度(DB)。式中：DB為淀粉分支度(％)；I_α-1,6為α-1,6糖苷鍵化學(xué)位移處對(duì)應(yīng)的峰面積；I_α-1,4為α-1,4糖苷鍵化學(xué)位移處對(duì)應(yīng)的峰面積。

實(shí)施例1

(1)將玉米淀粉用磷酸鹽緩沖溶液配置成質(zhì)量百分比濃度為15％的淀粉溶液，并調(diào)節(jié)pH至7.8，置于密閉容器中，在99℃下攪拌糊化60min；糊化完成后，冷卻至95℃，加入耐高溫α-淀粉酶(Liquozyme Supra，Novozymes公司)，用量為每克干淀粉加入耐高溫α-淀粉酶8U，酶解1min，調(diào)節(jié)pH至2.5，并保持10min滅酶活，得到酶解后的淀粉溶液；

(2)將步驟(1)的酶解后的淀粉溶液在pH為5.5，60℃條件下加入普魯蘭酶(OPTIMAX L-1000,杰能科生物工程有限公司)，用量為每克干淀粉加入普魯蘭酶10U，攪拌反應(yīng)30min；加熱至100℃保持10min滅酶活，得到腹膜透析液粗酶解液；

(3)將步驟(2)中腹膜透析液粗酶解液先用體積分?jǐn)?shù)為40％的乙醇醇沉，于0-4℃冰箱中靜置12h，離心分離后取其沉淀物，再用蒸餾水洗滌后離心分離，將其沉淀物進(jìn)行冷凍干燥；

(4)將步驟(3)得到的樣品用蒸餾水配成質(zhì)量百分比濃度為10％的溶液，經(jīng)孔徑為10000Dal(SMU-460)與20000Dal(SMU-470)的超濾膜超濾，將分子量在10000～20000Da之間的樣品經(jīng)葡聚糖凝膠色譜柱分離提純，得到3種不同分子量的樣品液，依次為樣品液A(分子量在20000Da以上)；樣品液B(10000Da到20000Da之間)；樣品液C(10000Da以下)，利用凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定樣品液B的重均、數(shù)均分子量，¹H-NMR測(cè)定其α-1,6糖苷鍵的含量；

(5)將步驟(4)中的最終酶解產(chǎn)物進(jìn)行冷凍干燥，得到固體粉末樣品；

本實(shí)施例1所得艾考糊精重均分子量為15517Da，位于13000～19000Da之間，數(shù)均分子量為5530Da，位于5000～6500Da之間，α-1,6糖苷鍵比例為8.75％，低于10％，且根據(jù)GPC測(cè)定的分子量圖譜顯示，分子量分布較集中。

圖1是實(shí)施例1中所得艾考糊精的分子量分布，由圖1可知，該酶解產(chǎn)物的保留時(shí)間為29.200min，根據(jù)GPC軟件分析可得到表1，即該艾考糊精的重均分子量為15517Da，數(shù)均分子量為5530Da，并且根據(jù)圖1峰型可得，峰窄且高，說明經(jīng)過本實(shí)施例酶解組合、醇沉、膜過濾以及凝膠色譜柱分離后的酶解產(chǎn)物分子量分布集中，基本位于平均分子量附近。根據(jù)GPC圖譜中峰的寬度可以確定，本實(shí)施例得到的分子量圖譜峰面積比較集中，峰比較窄，可以認(rèn)為分子量分布集中，產(chǎn)率較高。

表1.GPC結(jié)果

實(shí)施例2

(1)將小麥淀粉用磷酸鹽緩沖溶液配置成質(zhì)量百分比濃度為5％的淀粉溶液，并調(diào)節(jié)pH至5.8，置于密閉容器中，在95℃下攪拌糊化100min；糊化完成后，冷卻至70℃，加入耐高溫α-淀粉酶(Liquozyme Supra，Novozymes公司)，用量為每克干淀粉加入耐高溫α-淀粉酶1U，酶解8min，調(diào)節(jié)pH至3.0，并保持15min滅酶活，得到酶解后的淀粉溶液；

(2)將步驟(1)的酶解后的淀粉溶液在pH為6.5，50℃條件下加入異淀粉酶(Pseudomonas sp,Sigma-Aldrich公司)，用量為每克干淀粉加入異淀粉酶2U，攪拌反應(yīng)30min；加熱至90℃保持15min滅酶活，得到腹膜透析液粗酶解液；

(3)將步驟(2)中腹膜透析液粗酶解液先用體積分?jǐn)?shù)為40％乙醇醇沉，于0-4℃冰箱中靜置12h，離心分離后取其沉淀物，再用蒸餾水洗滌后離心分離，將其沉淀物進(jìn)行減壓干燥；

(4)將步驟(3)得到的樣品用蒸餾水配成質(zhì)量百分比濃度為30％的溶液，經(jīng)超濾膜(孔徑10k-20kD)超濾，將分子量在10000(SMU-460)與20000Dal(SMU-470)的超濾膜超濾，將分子量在10000～20000Da之間的樣品經(jīng)葡聚糖凝膠色譜柱分離提純，得到3種不同分子量的樣品液，依次為樣品液A(分子量在20000Da以上)；樣品液B(10000Da到20000Da之間)；樣品液C(10000Da以下)，利用凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定樣品液B的重均、數(shù)均分子量，¹H-NMR測(cè)定其α-1,6糖苷鍵的含量(測(cè)定方法見實(shí)施例1)；

(5)將步驟(4)中的最終酶解產(chǎn)物進(jìn)行減壓干燥，得到固體粉末樣品；

本實(shí)施例2所得艾考糊精重均分子量為13942Da，數(shù)均分子量為5372Da，α-1,6糖苷鍵比例為8.93％，且分子量分布較集中。

實(shí)施例3

(1)將蠟質(zhì)玉米淀粉用磷酸鹽緩沖溶液配置成質(zhì)量百分比濃度為5％的淀粉溶液，并調(diào)節(jié)pH至7.0，置于密閉容器中，在95℃下攪拌糊化100min；糊化完成后，冷卻至95℃，加入耐高溫α-淀粉酶(Liquozyme Supra，Novozymes公司)，用量為每克干淀粉加入耐高溫α-淀粉酶8U，酶解3min，調(diào)節(jié)pH至2.7，并保持12min滅酶活，得到酶解后的淀粉溶液；

(2)將步驟(1)的酶解后的淀粉溶液在pH為5.8，40℃條件下加入普魯蘭酶(OPTIMAX L-1000,杰能科生物工程有限公司)，用量為每克干淀粉加入普魯蘭酶8U，攪拌反應(yīng)40min；加熱至95℃保持12min滅酶活，得到腹膜透析液粗酶解液；

(3)將步驟(2)中粗酶解液先用體積分?jǐn)?shù)50％乙醇醇沉，于0-4℃冰箱中靜置12h，離心分離后取其沉淀物，再用蒸餾水洗滌后離心分離，將其沉淀物進(jìn)行噴霧干燥；

(4)將步驟(3)得到的樣品用蒸餾水配成質(zhì)量百分比濃度為20％的溶液，經(jīng)超濾膜(孔徑10k-20kD)超濾，將分子量在1000010000(SMU-460)與20000Dal(SMU-470)的超濾膜超濾，將分子量在10000～20000Da之間的樣品經(jīng)葡聚糖凝膠色譜柱分離提純，得到3種不同分子量的樣品液，依次為樣品液A(分子量在20000Da以上)；樣品液B(10000Da到20000Da之間)；樣品液C(10000Da以下)，利用凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定樣品液B的重均、數(shù)均分子量，¹H-NMR測(cè)定其α-1,6糖苷鍵的含量(測(cè)定方法同實(shí)施例1)；

(5)將步驟(4)中的最終酶解產(chǎn)物進(jìn)行噴霧干燥，得到固體粉末樣品；

本實(shí)施例3所得艾考糊精重均分子量為18536Da，數(shù)均分子量為5550Da，α-1,6糖苷鍵比例為7.94％，且分子量分布較集中。

實(shí)施例4

(1)將馬鈴薯淀粉用磷酸鹽緩沖溶液配置成質(zhì)量百分比濃度為10％的淀粉溶液，并調(diào)節(jié)pH至6.5，置于密閉容器中，在98℃下攪拌糊化70min；糊化完成后，冷卻至85℃，加入耐高溫α-淀粉酶(Liquozyme Supra，Novozymes公司)，用量為每克干淀粉加入耐高溫α-淀粉酶3U，酶解3min，調(diào)節(jié)pH至2.8，并保持13min滅酶活，得到酶解后的淀粉溶液；

(2)將步驟(1)的酶解后的淀粉溶液在pH為6.5，50℃條件下加入普魯蘭酶(OPTIMAX L-1000,杰能科生物工程有限公司)，用量為每克干淀粉加入普魯蘭酶6U，攪拌反應(yīng)45min；加熱至98℃保持11min滅酶活，得到腹膜透析液粗酶解液；

(3)將步驟(2)中粗酶解液先用體積分?jǐn)?shù)為45％乙醇醇沉，于0-4℃冰箱中靜置12h，離心分離后取其沉淀物，再用蒸餾水洗滌后離心分離，將其沉淀物進(jìn)行常壓干燥；

(4)將步驟(3)得到的樣品用蒸餾水配成質(zhì)量百分比濃度為30％的溶液，經(jīng)超濾膜(孔徑10k-20kD)超濾，將分子量在1000010000(SMU-460)與20000Dal(SMU-470)的超濾膜超濾，將分子量在10000～20000Da之間的樣品經(jīng)葡聚糖凝膠色譜柱分離提純，得到3種不同分子量的樣品液，依次為樣品液A(分子量在20000Da以上)；樣品液B(10000Da到20000Da之間)；樣品液C(10000Da以下)，利用凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定樣品液B的重均、數(shù)均分子量，¹H-NMR測(cè)定其α-1,6糖苷鍵的含量(測(cè)定方法同實(shí)施例1)；

(5)將步驟(4)中的最終酶解產(chǎn)物進(jìn)行常壓干燥，得到固體粉末樣品；

本實(shí)施例4所得艾考糊精重均分子量為18536Da，數(shù)均分子量為5550Da，α-1,6糖苷鍵比例為7.94％，且分子量分布較集中。

實(shí)施例5

(1)將木薯淀粉用磷酸鹽緩沖溶液配置成質(zhì)量百分比濃度濃度為8％的淀粉溶液，并調(diào)節(jié)pH至6.8，置于密閉容器中，在96℃下攪拌糊化80min；糊化完成后，冷卻至80℃，加入耐高溫α-淀粉酶(Liquozyme Supra，Novozymes公司)，用量為每克干淀粉加入耐高溫α-淀粉酶5U，酶解4min，調(diào)節(jié)pH至2.5，并保持11min滅酶活，得到酶解后的淀粉溶液；

(2)將步驟(1)的酶解后的淀粉溶液在pH為6.0，40℃條件下加入普魯蘭酶，用量為每克干淀粉加入普魯蘭酶5U，攪拌反應(yīng)60min；加熱至100℃保持10min滅酶活，得到腹膜透析液粗酶解液；

(3)將步驟(2)中粗酶解液先用體積分?jǐn)?shù)為40％乙醇醇沉，于0-4℃冰箱中靜置12h，離心分離后取其沉淀物，再用蒸餾水洗滌后離心分離，將其沉淀物進(jìn)行冷凍干燥；

(4)將步驟(3)得到的樣品用蒸餾水配成質(zhì)量百分比濃度為20％的溶液，經(jīng)超濾膜(孔徑10k-20kD)超濾，將分子量在1000010000(SMU-460)與20000Dal(SMU-470)的超濾膜超濾，將分子量在10000～20000Da之間的樣品經(jīng)葡聚糖凝膠色譜柱分離提純，得到3種不同分子量的樣品液，依次為樣品液A(分子量在20000Da以上)；樣品液B(10000Da到20000Da之間)；樣品液C(10000Da以下)，利用凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定樣品液B的重均、數(shù)均分子量，¹H-NMR測(cè)定其α-1,6糖苷鍵的含量(測(cè)定方法同實(shí)施例1)；

(5)將步驟(4)中的最終酶解產(chǎn)物進(jìn)行冷凍干燥，得到固體粉末樣品；

本實(shí)施例5所得艾考糊精重均分子量為18353Da，數(shù)均分子量為5952Da，α-1,6糖苷鍵比例為8.93％，且分子量分布較集中。

中國發(fā)明專利2014102015745公開了淀粉基補(bǔ)鐵營養(yǎng)強(qiáng)化劑的制備方法。該方法先將淀粉原料配成淀粉乳，并調(diào)節(jié)pH，置于密閉容器中在95～99℃下攪拌糊化30～60min；糊化完成后，將糊化液冷卻，加入脫支酶，在45～65℃下攪拌反應(yīng)；調(diào)節(jié)pH至5.5～7.0，加入α-淀粉酶，在45～110℃下攪拌反應(yīng)，得直鏈淀粉溶液。但從上述實(shí)施例可知，利用淀粉酶和脫支酶對(duì)淀粉進(jìn)行酶解，現(xiàn)有技術(shù)已有一定的介紹；如但是現(xiàn)有技術(shù)基本是先用脫支酶酶解再用α-淀粉酶酶解，順序與本發(fā)明相反，目的也完全不同?，F(xiàn)有技術(shù)大多是為了得到直鏈淀粉；而本發(fā)明為了得到艾考糊精，是有一定的支鏈的淀粉。而且由于數(shù)均分子量的范圍難以控制，分支度不容易通過酶解得以控制，很難在數(shù)均、重均分子量以及α-1,6糖苷鍵三方面同時(shí)滿足艾考糊精要求；現(xiàn)有技術(shù)尚未發(fā)現(xiàn)用酶解的方式制備艾考糊精；中國發(fā)明專利2013104530981就是用酸解的方式制備艾考糊精。

本發(fā)明先使用淀粉酶酶解α-1,4糖苷鍵，將原淀粉的主鏈分解成片段，再在脫支酶作用下，通過部分酶解淀粉溶液中的α-1,6糖苷鍵，將酶解產(chǎn)物中的α-1,6糖苷鍵比例協(xié)同控制在10％以下，關(guān)鍵是要合理控制酶解時(shí)間與加酶量以及溫度等工藝條件，通過脫支酶酶解α-1,6糖苷鍵，耐高溫α-淀粉酶酶解α-1,4糖苷鍵，將酶解產(chǎn)物的分支度進(jìn)行控制，繼而控制重均與數(shù)均分子量的范圍，最后通過篩選兩種酶的酶解條件使得重均分子量與數(shù)均分子量同時(shí)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。淀粉酶與脫支酶共同作用控制糖苷鍵比例和分散度的艾考糊精的現(xiàn)有技術(shù)還未見報(bào)道。

以上所述實(shí)例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方法，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。