本發(fā)明涉及腫瘤的藥物領域。具體地講，本發(fā)明涉及對上述疾病具有治療作用的一種含噻吩磺酰胺結構的新型苯并喹唑啉類衍生物的酪氨酸激酶抑制劑、其制備方法以及用途。
背景技術：
：腫瘤是嚴重威脅人類生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一，據(jù)WHO統(tǒng)計，全世界每年死于腫瘤的患者約690萬。由于生存環(huán)境和生活習性的改變，在不良環(huán)境和一些不利因素的作用下，腫瘤的發(fā)病率和死亡率近年呈快速上升趨勢。蛋白質(zhì)激酶組成人類酶的最大家族之一，并且通過添加磷酸基團到蛋白質(zhì)上來調(diào)節(jié)許多不同的信號傳導過程。特別地，酪氨酸激酶磷酸化蛋白質(zhì)在酪氨酸殘基的酚部分。酪氨酸激酶家族包括控制細胞生長、遷移和分化的成員。異常的激酶活性已經(jīng)涉及許多人類疾病，包括癌癥、自身免疫疾病和炎性疾病。由于蛋白質(zhì)激酶屬于細胞信號傳導的關鍵調(diào)節(jié)劑，它們提供用小分子激酶抑制劑來調(diào)節(jié)細胞功能的目標，并且因此成為了良好的藥物設計靶標。除了激酶介導的疾病過程的治療，激酶活性的選擇性和有效抑制劑還可用于研究細胞信號傳導過程和鑒定其它具有治療意義的細胞靶標。以往對腫瘤的治療是通過發(fā)現(xiàn)腫瘤并破壞來實現(xiàn)的，現(xiàn)在隨著對細胞信號傳導途徑研究的不斷深入，人們對腫瘤細胞內(nèi)部的癌基因及抗癌基因的作用了解的越來越深入，針對腫瘤的特異性分子靶點設計新的抗腫瘤藥物越來越受到關注，成為研究的熱點領域，而靶向抗腫瘤藥物作為一種新的治療方法也已經(jīng)應用于臨床，并在短短幾年內(nèi)得到了顯著的進展?，F(xiàn)在已知，蛋白酪氨酸激酶(Proteintyrosinekinases，PTK)信號通路與腫瘤細胞的增殖、分化、遷移和凋亡有密切關系，利用PTK抑制劑干擾或阻斷酪氨酸激酶通路可以用于腫瘤治療。PTK是在正常和異常增殖過程中起重要作用的癌蛋白和原癌蛋白家族中的成員，是一種能選擇性地使不同底物的酪氨酸殘基磷酸化的一種酶，它們催化ATP的γ-磷酸基轉移到許多重要蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基上，使酚羥基磷酸化。蛋白酪氨酸激酶分為受體酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase，RTK)，非受體酪氨酸激酶以及IR和Janus激酶等(RobinsonD.R.，etal，Oncogene，2000，19，5548-5557)，其中多數(shù)為受體型酪氨酸激酶(RTK)。RTK是一種具有內(nèi)源性蛋白酪氨酸激酶，參與多種細胞活動的調(diào)控，在啟動細胞復制的促有絲分裂信號的傳導中具有極其重要的地位，調(diào)控著細胞的生長與分化。所有的RTK都屬于I型膜蛋白，其分子具有相似的拓撲結構：一個大的糖基化的胞外配體結合區(qū)，一個疏水的單次跨膜區(qū)，以及一個細胞內(nèi)酪氨酸激酶催化結構域及調(diào)控序列。配體的結合(如表皮生長因子(EGF)與EGFR的結合)導致受體細胞內(nèi)部分編碼的受體激酶活性激活，使靶蛋白中的關鍵酪氨酸磷酸化，導致增生信號跨越細胞質(zhì)膜轉導。近年來，人們致力于抑制細胞信號轉導途徑以開發(fā)新型靶點抗腫瘤藥物。信號轉導抑制劑下調(diào)腫瘤的生存和增殖信號，促進細胞凋亡，而不是通過細胞毒作用，因此選擇性較高、毒副作用較小。目前已有十幾種信號轉導抑制劑應用于臨床治療腫瘤，主要為酪氨酸激酶抑制劑類抗腫瘤藥物，其中4-(取代苯胺基)喹唑啉結構類型的化合物開發(fā)的比較成熟，如針對EGFR酪氨酸激酶靶點的小分子抑制劑吉非替尼(Iressa)、埃羅替尼(Tarceva)和拉帕替尼(Lapatinib)等。吉非替尼(Gefitinib)，商品名Iressa(易瑞沙)，AstraZeneca開發(fā)的EGFR酪氨酸激酶抑制劑，是最早進入臨床研究的表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑，于2002年在日本上市，次年在美國上市，用于治療既往接受過化療的晚期或轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)。埃羅替尼(Erlotinib)，商品名Tarceva(特羅凱)，OSI公司開發(fā)的EGFR酪氨酸激酶抑制劑，受讓于Genentech和羅氏公司。2004年在美國上市，用于治療NSCLC和胰腺癌。屬于第一代治療NSCLC的苯胺喹唑啉類小分子抑制劑，也是目前唯一被證實的對晚期非小細胞肺癌具有生存優(yōu)勢的EGFR酪氨酸激酶抑制劑，對各類非小細胞肺癌患者均有效，且耐受性好，無骨髓抑制和神經(jīng)毒性，能顯著延長生存期，改善患者生活質(zhì)量。小分子酪氨酸激酶抑制劑作為新的靶向抗腫瘤藥物，為腫瘤的治療和預防打開了一扇新窗口，而且其副作用輕微，有良好的耐受性。雖然目前已有10多個小分子酪氨酸激酶抑制劑為臨床腫瘤治療作出了很大貢獻，但仍然需要發(fā)現(xiàn)一些較之現(xiàn)有的酪氨酸激酶抑制劑具有更好的體內(nèi)活性和/或改良的藥理學特性的另外的化合物。因此開發(fā)新的改進的或更高效的酪氨酸激酶抑制劑，更深入地了解該類藥物與已知靶蛋白之間的關系以及其發(fā)揮抗腫瘤作用的機理對腫瘤臨床治療具有重要的意義。本發(fā)明公開了一種含噻吩磺酰胺結構的新型苯并喹唑啉類酪氨酸激酶抑制劑，該化合物可用于制備治療腫瘤藥物。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個目的是提供一種具有式I的酪氨酸激酶抑制劑。本發(fā)明的另一個目的是提供制備具有式I的化合物的方法。本發(fā)明的再一個目的是提供含有式I的化合物作為有效成分，以及其在治療腫瘤方面的應用?，F(xiàn)結合本發(fā)明的目的對本
發(fā)明內(nèi)容進行具體描述。本發(fā)明具有式I的化合物具有下述結構式：本發(fā)明所述式I化合物可以通過以下路線合成：化合物II先用n-BuLi處理，得到的芳基鋰中間體與苯甲醛III反應，得到化合物IV；化合物IV與噻吩磺酰胺V在三苯基膦和偶氮二羧酸二乙酯存在下加熱反應，得到化合物I。本發(fā)明所述式I化合物具有酪氨酸激酶抑制作用，可作為有效成分用于制備腫瘤的治療藥物。本發(fā)明所述式I化合物的活性是通過體外抑制EGFR和HER2激酶和抑制細胞增殖實驗來驗證的。本發(fā)明的式I化合物在相當寬的劑量范圍內(nèi)是有效的。例如每天服用的劑量約在1mg-500mg/人范圍內(nèi)，分為一次或數(shù)次給藥。實際服用本發(fā)明式I化合物的劑量可由醫(yī)生根據(jù)有關的情況來決定。具體實施方式下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。需要說明的是，下述實施例僅是用于說明，而并非用于限制本發(fā)明。本領域技術人員根據(jù)本發(fā)明的教導所做出的各種變化均應在本申請權利要求所要求的保護范圍之內(nèi)。實施例1化合物I的合成步驟1.化合物IV-1的合成化合物II(2.25g，10mmol)溶于25mL干燥的THF中，氮氣保護下攪拌，用液氮-乙醇冷卻至-78℃，用注射器慢慢滴加1.6M的n-BuLi的正己烷溶液(6.25mL)，滴加完畢后，反應混合物在該溫度下繼續(xù)攪拌1h，而后再用注射器慢慢滴加III-1(1.39g，10mmol)溶于3mL干燥的THF制成的溶液。滴加完畢后，反應化合物在是室溫下繼續(xù)攪拌3小時，TLC顯示反應完成。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物IV-1，白色固體，ESI-MS，m/z＝330([M+H]+)。步驟2.化合物I的合成偶氮二羧酸二乙酯(DEAD，1.74g，10mmol)溶于20mL干燥的THF中，攪拌，冰水浴冷卻下慢慢滴加三苯基膦(2.62g，10mmol)溶于5mL干燥的THF制成的溶液，而后再加入化合物V(1.06g，6mmol)，混合物在該溫度下攪拌1小時，加入化合物IV-1(1.97g，6mmol)。反應混合物在室溫下反應過夜，然后再回流12小時。TLC顯示反應完成。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物I，白色固體，ESI-MS，m/z＝489([M+H]+)。實施例2化合物R-1的合成步驟1.化合物IV-2的合成化合物II(2.25g，10mmol)溶于25mL干燥的THF中，氮氣保護下攪拌，用液氮-乙醇冷卻至-78℃，用注射器慢慢滴加1.6M的n-BuLi的正己烷溶液(6.25mL)，滴加完畢后，反應混合物在該溫度下繼續(xù)攪拌1h，而后再用注射器慢慢滴加III-2(1.24g，10mmol)溶于3mL干燥的THF制成的溶液。滴加完畢后，反應化合物在是室溫下繼續(xù)攪拌3小時，TLC顯示反應完成。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物IV-2，白色固體。ESI-MS，m/z＝315([M+H]+)。步驟2.化合物R-1的合成偶氮二羧酸二乙酯(DEAD，1.74g，10mmol)溶于20mL干燥的THF中，攪拌，冰水浴冷卻下慢慢滴加三苯基膦(2.62g，10mmol)溶于5mL干燥的THF制成的溶液，而后再加入化合物V(1.06g，6mmoD，混合物在該溫度下攪拌1小時，加入化合物IV-2(1.89g，6mmol)。反應混合物在室溫下反應過夜，然后再回流12小時。TLC顯示反應完成。反應混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物R-1，白色固體。ESI-MS，m/z＝474([M+H]+)。實施例3化合物體外抑制EGFR和HER2分析可以使用以下實驗來測定本發(fā)明所述化合物在體外對erbB家族酪氨酸激酶(EGFR和HER2)的活性抑制作用。體外激酶分析用CellSignalingTechnology公司的HTScanEGFReceptorKinaseAssayKit和HTScanHER2/ErbB2KinaseAssayKit檢測。操作步驟參照試劑盒說明書，該方法在體外檢測待測化合物對EGFR或Her2受體酪氨酸激酶對底物肽磷酸化的抑制作用。室溫下激酶反應緩沖液中溫育ATP和底物肽以及待測化合物，孵育一段時間后，加入終止液終止反應并將樣品轉移到鏈霉親和素包被的96孔板中，洗板并用HRP標記的抗底物磷酸化抗體檢測底物肽上的磷酸化水平，用TMB顯色，2M硫酸中止反應。檢測450nm吸收波長，計算IC50值(nM)。結果見下表?；衔顴GFRIC50(nM)HER2IC50(nM)化合物R-15431化合物I9.08.3從上表結果可以看出，本發(fā)明的化合物對EGFR和HER2具有很強的抑制作用，可以作為制備抗腫瘤的藥物。實施例4化合物對細胞增殖的抑制作用細胞增殖抑制試驗采用人乳腺癌細胞BT474、人胃癌細胞系NCI-N87、人肺癌細胞Calu-3和人皮膚癌細胞A431，其中BT474高表達Her2受體，N87高表達EGFR和Her2受體。在含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中，在37℃、5％CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞，應用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)從細胞培養(yǎng)瓶中收獲細胞。細胞以4000/孔(0.1mL培養(yǎng)基)加入96孔細胞培養(yǎng)板貼壁過夜，加入0.1mL待測化合物的稀釋液，DMSO的最終濃度為0.25％，將細胞培養(yǎng)板在37℃，5％的CO2條件下溫育72h。然后在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化，然后每孔加入50％(質(zhì)量/體積)的三氯乙酸(TCA)50μL固定細胞。TCA的終濃度為10％，靜置5min后在4℃冰箱中放置1h，培養(yǎng)板各孔用去離子水沖洗5遍，以去除TCA，甩干，空氣干燥至無濕跡。每孔加0.4％(質(zhì)量/體積)的SRB100μL，室溫放置10min，棄去各孔內(nèi)液體后用1％乙酸沖洗5遍，空氣干燥后用pH為10.5，10mMTris(三羥甲基氨基甲烷)150μL萃取，檢測540nm的吸收波長。結果IC50值(nM)見下表。由上表可以看出，本發(fā)明的化合物對EGFR和HER2高表達的腫瘤細胞具有很高的抑制活性，可以作為制備抗腫瘤的藥物。當前第1頁1 2 3