本發(fā)明涉及一種類美登素衍生物及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：
類美登素是抑制微管蛋白聚合高度細(xì)胞毒化合物（Remillard等，Science189，1002-1005（1975））。美登素最早由Kupchan等從東非灌木Maytenusserrata分離得到（J.Am.Chem.Soc.94：1354-1356（1972））。類美登素，包括美登醇及美登醇C-3酯也可由某些微生物產(chǎn)生（U.S.Pat.No.4,151,042）。具有不同細(xì)胞毒性的美登醇的各種類似物也可由合成化學(xué)制備（forreviewseeChem.Pharm.Bull.52(1)1-26（2004））。類美登素的實(shí)例包括美登素﹑DM1﹑DM3及DM4。美登素為一種強(qiáng)有力的有絲分裂抑制劑并且在實(shí)體鼠源腫瘤模型中對(duì)多種腫瘤，包括路易斯（Lewis）肺癌和B-16黑素瘤展現(xiàn)顯著的抑制活性。據(jù)報(bào)道，美登素在濃度低至10-7μg/mL可以抑制人類急性淋巴細(xì)胞白血病C.E.M.系（Wolpert-DeFillippes等，Biochem.Pharmacol.1735-1738（1975））。業(yè)已證明，其細(xì)胞毒性比傳統(tǒng)化療試劑如甲氨蝶呤（methotrexate）﹑柔紅霉素（daunorubicin）和長(zhǎng)春新堿（vincristine）高100到1000倍（U.S.Pat.No.3,896,111）。由于其高毒性性質(zhì)及體外抗多種癌細(xì)胞系活性，類美登素有望能治療多種不同的癌癥。然而，其毒性也使得這類化合物在人類臨床試驗(yàn)中不是令人滿意的，因?yàn)槠涓弊饔脤?duì)很多患者是無法忍受的（Issel等，CancerTreat.Rev.199-207(1978））。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了可偶聯(lián)到抗原結(jié)合單元（Abu來自AntigenBindingUnit）的類美登素藥物衍生物，以及連有抗原結(jié)合單元的類美登素藥物(Drug-Linker-AntigenbindingUnit：D-L-Abu)?？贵w藥物偶聯(lián)物（ADC）由三個(gè)關(guān)鍵元素組成：抗體﹑連接子和藥物。特定抗體和藥物的選擇取決于特定疾病，其對(duì)藥物的有效性和安全性有重大影響。連接子的穩(wěn)定性及藥物偶聯(lián)到抗體的方法對(duì)ADC藥物開發(fā)成功或失敗起決定性作用?？贵w藥物偶聯(lián)物的療效部分取決于各種參數(shù)的組合，不僅包括抗體的特異性和藥物的藥效強(qiáng)度，而且包括連接子的穩(wěn)定性或其對(duì)斷裂的敏感性﹑細(xì)胞表面激發(fā)內(nèi)化﹑轉(zhuǎn)運(yùn)和隨后有效細(xì)胞毒性“彈頭”的釋放。因此，即便針對(duì)同一靶點(diǎn)，不同的藥物，或不同的連接子，或針對(duì)同一靶標(biāo)的不同抗體，ADC的應(yīng)用性和有效性顯著不一樣。本發(fā)明也提供D-L-Abu、D-L-Abu衍生物以及此類藥物偶聯(lián)物在治療癌癥和免疫失常中抗原陽性細(xì)胞的用途。抗原結(jié)合單元（Abu）如抗體或D-L-Abu中其它靶向部分能結(jié)合至致病細(xì)胞或組織的抗原上，偶聯(lián)至Abu的藥物對(duì)抗原表達(dá)細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒﹑抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或免疫抑制影響而治療或阻止抗原陽性癌癥或免疫異常的復(fù)發(fā)。本發(fā)明提供了類美登素衍生物化合物，其可通過對(duì)酸不敏感﹑對(duì)肽酶組織蛋白酶不敏感以及不含二硫鍵的連接子偶聯(lián)到抗原結(jié)合單元。此類衍生物也被稱為“藥物-連接子”（“drug-linkers”）。在一些實(shí)施方案中，連接子修飾的類美登素化合物為N2’-去乙?；?N2’-(6-馬來酰亞胺基-1-氧代-己基)美登素（N2’-deacetyl-N2’-(6-maleimido-1-oxo-hexyl)maytansine）或其衍生物，其中連接子對(duì)酸不敏感﹑對(duì)肽酶組織蛋白酶不敏感以及不含二硫鍵。此類連接子預(yù)期可為D-L-Abu在內(nèi)吞之前提供穩(wěn)定性，例如在體循環(huán)中，阻止D-L-Abu過早降解和釋放毒性藥物，因而將藥物的毒性作用最小化。本發(fā)明提供了式I或I-1，II或II-1的類美登素衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽：其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基﹑苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；Z獨(dú)立地為氫或C1-C4亞烴基，或兩個(gè)Z與其所連接的碳原子形成一個(gè)羰基；以及L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為（-CH2-）m，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基。本發(fā)明提供了包含上述類美登素化合物以及能被類美登素化合物偶聯(lián)的抗原結(jié)合單元的組合物。本發(fā)明提供了連有類美登素化合物的抗原結(jié)合單元，其中類美登素化合物通過對(duì)酸不敏感﹑對(duì)肽酶組織蛋白酶不敏感以及不含二硫鍵的連接子修飾并連接到抗原結(jié)合單元。本發(fā)明提供了式Ia或Ia-1，IIa或IIa-1的類美登素連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物：或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基﹑苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；p選自1﹑2﹑3﹑4﹑5﹑6﹑7﹑8﹑9以及10；L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為（-CH2-）m，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基；以及Abu為抗原結(jié)合單元。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了如下式的化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。本發(fā)明提供了一種包含如上所述類美登素連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物的組合物。本發(fā)明提供了一種制備如上所述類美登素連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物的方法，該方法包括連接抗原結(jié)合單元與一個(gè)或一個(gè)以上本文所述的可偶聯(lián)到抗原結(jié)合單元的類美登素化合物。本發(fā)明提供了式Ib或Ib-1，IIb或IIb-1的化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基、苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；Z獨(dú)立地為氫或C1-C4亞烴基，或兩個(gè)Z與其所連接的碳原子形成一個(gè)羰基；L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為（-CH2-）m，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基；以及AA為氨基酸，如半胱氨酸或巰基化的氨基酸如巰基化賴氨酸。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了如下式的化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。本發(fā)明涉及一種包含上述式Ib﹑Ib-1﹑IIb或IIb-1的類美登素化合物的組合物。本發(fā)明涉及一種將類美登素送達(dá)抗原陽性細(xì)胞或組織的靶向給藥方法，所述美登素與抗原結(jié)合單元偶聯(lián)。本發(fā)明涉及一種抗原結(jié)合單元為BAT0206，其包含一個(gè)氨基酸序列為SEQIDNO:1的抗EGFR輕鏈和氨基酸序列為SEQIDNO:2的抗EGFR重鏈。本發(fā)明涉及一種美登素與抗原結(jié)合單元偶聯(lián)的連接子，所屬抗原結(jié)合單元為BAT0206。本發(fā)明涉及所述類美登素化合物用于制備治療一些疾病的藥物的用途，這些疾病包括：增生性疾病，如腫瘤，感染或自身免疫疾病，如移植排斥。以及其他可以用靶療法治療的疾病，這些疾病的特征為：細(xì)胞生成一種抗原或靶點(diǎn)，該抗原能與抗原結(jié)合單元特異結(jié)合；所述化合物由抗原結(jié)合單元與一個(gè)或多個(gè)美登素的偶聯(lián)而成。附圖說明圖1顯示了SephadexG25(M)柱分離抗體藥物偶聯(lián)物Batansine-0206的圖譜。圖2顯示了SephadexG25(M)柱分離抗體藥物偶聯(lián)物Batansine-1206的圖譜。圖3顯示了PhenylSepharoseFF柱(GE公司XK26/15)分離抗體藥物偶聯(lián)物Batansine-0206的圖譜。圖4顯示了SephadexG25(M)柱分離抗體藥物偶聯(lián)物Batansine-0606的圖譜。圖5顯示了PhenylSepharoseFF柱(GE公司XK26/15)分離抗體藥物偶聯(lián)物Batansine-0606的圖譜。圖6顯示了前體藥物抗體美登素偶聯(lián)物其代謝產(chǎn)物對(duì)微管蛋白聚合的抑制作用。圖7顯示了Bat0206和Batansine-0206對(duì)EGFR陽性乳腺癌細(xì)胞系(MDA-MB-468)的生長(zhǎng)抑制作用。圖8顯示了未偶聯(lián)的抗體Bat0206、cetuximab（西妥昔單抗）、藥物偶聯(lián)的Batansine-0206對(duì)EGFR陰性細(xì)胞系BT474均無抑制作用。圖9顯示了藥物偶聯(lián)物D-Lmcc-Bat0206對(duì)EGRR陽性乳腺癌細(xì)胞系(MDA-MB-468)增殖的抑制作用。圖10顯示了未偶聯(lián)的抗體Bat0206、cetuximab（西妥昔單抗）、藥物偶聯(lián)物D-Lmcc-Bat0206對(duì)EGFR陰性細(xì)胞系BT474均無抑制作用。圖11和12顯示了D-Lmcc-Bat0206根除A431異種移植動(dòng)物模型腫瘤的結(jié)果。圖13顯示了D-Lmcc-Bat0206和D-Lspp-Bat0206對(duì)A431腫瘤細(xì)胞抑制作用。圖14顯示了D-Lmcc-Bat0206和D-Lspp-Bat0206對(duì)A549腫瘤細(xì)胞抑制作用。圖15A和15B顯示了抗EGFR抗體的氨基酸序列。圖16和17分別顯示了D-Lmcc-bat0606和Batanine-0606在制備過程中，通過SephadexG-25樹脂洗脫交換的純化過程。圖18和19分別顯示了D-Lmcc-bat0606和Batanine-0606通過尺寸排阻色譜測(cè)定聚集率。圖20顯示了抗Bat0606和Batanine-0606對(duì)HER2陽性乳腺癌細(xì)胞系(SK-BR-3)的生長(zhǎng)抑制作用。與未偶聯(lián)的抗Bat0606相比，藥物偶聯(lián)的Batanine-0606顯示出對(duì)HER2陽性細(xì)胞增殖顯著抑制作用增強(qiáng)。圖21顯示了未偶聯(lián)的抗體Bat0606與藥物偶聯(lián)的Batanine-0606，對(duì)HER2陰性細(xì)胞系A(chǔ)549均無抑制作用。圖22顯示了藥物偶聯(lián)物D-Lmcc-Bat0606抗體對(duì)HER2陽性乳腺癌細(xì)胞系(SK-BR-3)增殖的抑制作用。與未偶聯(lián)的Bat0606相比，D-Lmcc-Bat0606在較低的濃度即顯示出對(duì)HER2陽性細(xì)胞增殖顯著的抑制作用。圖23顯示了未偶聯(lián)的抗體Bat0606與藥物偶聯(lián)物D-Lmcc-Bat0606，對(duì)HER2陰性細(xì)胞系A(chǔ)549均無抑制作用。圖24顯示了抗CD20Bat1206和抗Batansine-1206對(duì)CD20陽性淋巴癌細(xì)胞Raji的生長(zhǎng)抑制作用。圖25顯示了Bat1206和Batansine-1206對(duì)CD20陰性細(xì)胞系A(chǔ)431均無抑制作用。圖26顯示了藥物偶聯(lián)物D-Lmcc-Bat1206對(duì)CD20陽性淋巴癌細(xì)胞Raji的生長(zhǎng)抑制作用。圖27顯示了用SEC-HPLC檢測(cè)純化后的Batansine-1206純度。圖28顯示了Bat1206、D-Lmcc-Bat1206非還原的SDS-PAGE圖。圖29顯示了Batansine0606根除NCI-N87異種移植動(dòng)物模型腫瘤的結(jié)果。圖30顯示了Batansine0606根除BT474異種移植動(dòng)物模型腫瘤的結(jié)果。圖31顯示了前體藥物Batansine-0606的代謝產(chǎn)物Batansine-Cysteine的質(zhì)譜圖。圖32顯示了前體藥物D-Lmcc-Bat0606的代謝產(chǎn)物MDC-MCC-Lysine的兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體的質(zhì)譜圖。具體實(shí)施方式定義除非另作說明，正如于此使用的那樣，單數(shù)形式“一（a，an）”和“所述（the）”，包括復(fù)數(shù)例證。因而，如提到“一個(gè)化合物”也包括其復(fù)數(shù)“一些化合物”。正如于此使用的那樣，“大約”為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解并且依據(jù)使用其上下文可在某種程度發(fā)生變化。如果有條款不為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所清楚，考慮其使用的上下文，“大約”意味著個(gè)別條款的加或減10%﹑或加或減5%﹑或加或減1%。正如于此使用的那樣，術(shù)語“包括”意指組合物和方法包括列舉的元素，但未將其他的排除在外。當(dāng)用來定義組成和方法時(shí)，“基本由組成”意指排除對(duì)這一組合具有本質(zhì)意義的其他元素。例如，正如于此定義的那樣，基本由某些元素組成的成分并不排除其它對(duì)所要求發(fā)明的基本和新穎特點(diǎn)沒有本質(zhì)影響的其它元素?！坝山M成”意味著排除超過所列舉的衡量的其它組分和本質(zhì)意義的方法步驟。每個(gè)過渡條款所界定的實(shí)施方案中在本發(fā)明范圍內(nèi)。。正如于此使用的那樣，“類美登素”指的是具美登素類似物，包括其立體異構(gòu)體。美登素可從美登木屬植物分離得到(參見美國(guó)專利3896111)，其結(jié)構(gòu)式為：類美登素為具有美登素的環(huán)結(jié)構(gòu)且其環(huán)上具有一個(gè)或一個(gè)以上取代基修飾的化合物?！巴榛敝傅氖蔷哂?到10個(gè)碳原子（優(yōu)選為1到6個(gè)碳原子）的單價(jià)飽和脂肪烴基。Cv烷基，其中v為整數(shù)表示具有v個(gè)碳原子的烷基。這一術(shù)語包括，例如，直鏈和支鏈的烴基如甲基（CH3-）﹑乙基（CH3CH2-）﹑正丙基（CH3CH2CH2-）﹑異丙基(CH3)2CH-）﹑正丁基（CH3CH2CH2CH2-）﹑異丁基（(CH3)2CHCH2-）﹑仲丁基（(CH3)(CH3CH2)CH-）﹑叔丁基（(CH3)3C-）﹑正戊基（CH3CH2CH2CH2CH2-）和新戊基（(CH3)3CCH2-）。“亞烴基”是具有1到10個(gè)碳原子（優(yōu)選為1到6個(gè)碳原子）的二價(jià)飽和脂肪烴基?！跋┗敝傅氖蔷哂?到6個(gè)碳原子（優(yōu)選為2到4個(gè)碳原子）并且具有至少1個(gè)（優(yōu)選為1到2個(gè)）位置的不飽和烯基（>C=C<）直鏈或支鏈烴基。這些基團(tuán)實(shí)例包括乙烯基﹑烯丙基和3-丁烯-1-基。順式和反式異構(gòu)體或這些異構(gòu)體的混合物包括在該范圍內(nèi)?！叭不敝傅氖蔷哂?到6個(gè)碳原子（優(yōu)選為2到3個(gè)碳原子）并且具有至少1個(gè)（優(yōu)選為1到2個(gè)）位置的不飽和炔基（-C≡C-）的直鏈或支鏈烴基。這些炔基的實(shí)例包括乙炔基(-C≡CH)和炔丙基（-CH2C≡CH）?！鞍被敝傅氖?NR’R”基團(tuán)，其中R’和R”獨(dú)立選自氫﹑烷基﹑取代烷基﹑烯基﹑取代烯基﹑炔基﹑取代炔基﹑芳基﹑取代芳基﹑環(huán)烷基﹑取代環(huán)烷基﹑環(huán)烯基﹑取代環(huán)烯基﹑雜芳基﹑取代雜芳基﹑雜環(huán)﹑取代雜環(huán)，以及如果R’和R”都不是氫，其中R’和R”可選地與結(jié)合的氮原子共同連接形成雜環(huán)或取代雜環(huán)（其中烷基﹑取代烷基﹑烯基﹑取代烯基﹑炔基﹑取代炔基﹑環(huán)烷基﹑取代環(huán)烷基﹑芳基﹑取代芳基﹑雜芳基﹑取代雜芳基﹑雜環(huán)﹑取代雜環(huán)定義如上）。當(dāng)R’為氫和R”為烷基，取代氨基有時(shí)稱作烷氨基。當(dāng)R’和R”為烷基，取代氨基有時(shí)稱作二烷氨基。-NH2有時(shí)稱作未取代氨基。當(dāng)提及單取代氨基，意為R’和R”兩者中任一個(gè)為氫，但并非兩者都是。當(dāng)提及二取代氨基，意為R’和R”兩者都不是氫。“氨基酸”指包含氨基和羧基的任何化合物，不論其為天然，非天然還是合成的。氨基酸的實(shí)例包括，但不限于甘氨酸（NH2CH2COOH）﹑半胱氨酸﹑丙氨酸﹑N-甲基丙氨酸，其包括D和L光學(xué)異構(gòu)體。“氨基酸側(cè)鏈”指取代甘氨酸亞甲基上一個(gè)氫原子的取代基。氨基酸側(cè)鏈實(shí)例包括，但不限于天然氨基酸側(cè)鏈﹑烷基﹑取代烷基﹑烯基﹑取代烯基﹑炔基﹑取代炔基﹑芳基﹑取代芳基﹑環(huán)烷基﹑取代環(huán)烷基﹑環(huán)烯基﹑取代環(huán)烯基﹑雜芳基﹑取代雜芳基﹑雜環(huán)基﹑取代雜環(huán)基?！胺蓟敝妇哂?到14碳原子的單價(jià)芳香族碳環(huán)基團(tuán)，其可為單一環(huán)系（如苯基）或多稠環(huán)（如萘或蒽），只要連接點(diǎn)在芳香碳原子上，這些稠環(huán)可以是或者不是芳香族的（如2-苯并噁唑酮﹑2H-1,4-苯并噁嗪-3（4H）-酮-7-基等）。優(yōu)選的芳基包括苯基和萘基。“羰基”指二價(jià)基團(tuán)-C(O)-，其等價(jià)于-C(=O)-?！棒然敝傅氖?COOH或CO2H，或其鹽。“羧酸”指含有至少一個(gè)羧基的化合物。“氰基”指–CN基團(tuán)。“環(huán)烷基”指具有3到10個(gè)碳原子的環(huán)狀烷基，可以是單個(gè)或多個(gè)環(huán)狀環(huán)，包括稠環(huán)﹑橋環(huán)和螺環(huán)系統(tǒng)。只要連接點(diǎn)是通過非芳香﹑非雜環(huán)碳環(huán)形的環(huán)，這些環(huán)中一個(gè)或多個(gè)可以是芳基﹑雜芳基或雜環(huán)基。合適的環(huán)烷基的實(shí)例包括，如：環(huán)丙基﹑環(huán)丁基﹑環(huán)戊基和環(huán)辛基。其它環(huán)烷基的實(shí)例包括雙環(huán)[2,2,2]辛基﹑降莰基和螺雙環(huán)如螺[4.5]癸-8-基：環(huán)烯指的是環(huán)狀的烯烴?！碍h(huán)烯基”指的是具有單個(gè)或多個(gè)環(huán)且含有至少一個(gè)>C=C<（優(yōu)選1到2個(gè)位置為>C=C<）的具有3到10個(gè)碳原子的非芳香環(huán)狀烷基?！胞u原子”或“鹵素”指的是氟﹑氯﹑溴和碘，優(yōu)選為氟或氯?！胞u代烷基”指的是被1到5﹑1到3或1到1個(gè)鹵原子取代的烷基，其中烷基和鹵原子定義如上?！傲u基”指的是-OH基團(tuán)?！半s芳基”指的是環(huán)中具有6到10個(gè)碳原子和1到4個(gè)雜原子（從氧﹑氮和硫原子選擇）的芳基。這些雜芳基可以是單一環(huán)（如吡啶基或呋喃基）或多個(gè)稠環(huán)（如吲哚基或苯并噻吩基)，其中只要連接點(diǎn)是通過雜芳基上的原子，稠環(huán)可以是或不是芳香族的和/或含有一個(gè)雜原子。在一個(gè)實(shí)施方案中，雜芳基為5或6元雜芳基，其具有5或6個(gè)環(huán)原子并具有1到4個(gè)雜原子。在一個(gè)實(shí)施方案中，雜芳基上的氮和/或硫環(huán)原子另外可氧化成氮-氧(N→O),或磺酰部分。優(yōu)選的雜芳基包括吡啶基﹑吡咯基﹑吲哚基和呋喃基。“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”或“雜環(huán)烷基”或“雜環(huán)基”指的是飽和的或部分飽和的，但不是芳香族的基團(tuán)，其具有3到10個(gè)環(huán)碳原子和1到4個(gè)環(huán)雜原子（由氮﹑硫或氧基團(tuán)選擇）。在一個(gè)實(shí)施方案中，雜環(huán)為5﹑6或7元雜環(huán)，其具有5﹑6或7個(gè)環(huán)原子，其中有1到4個(gè)雜原子。這些雜環(huán)包括單一環(huán)或多個(gè)稠環(huán)（包括稠橋和稠螺環(huán)系）。在稠環(huán)系中，只要連接點(diǎn)是通過非芳香環(huán)，一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以是環(huán)烷基﹑芳基或雜芳基。在一個(gè)實(shí)施方案中，雜環(huán)基上的氮和/或硫環(huán)原子另外可氧化成氮-氧(N→O)，或磺酰部分。雜環(huán)和雜芳基的實(shí)例包括但不限于吖丁啶﹑吡咯﹑吡唑﹑吡啶﹑吡嗪﹑嘧啶﹑噠嗪﹑吲嗪﹑異吲哚﹑吲哚﹑二氫吲哚﹑吲唑﹑嘌呤﹑喹嗪﹑異喹啉﹑喹啉﹑酞嗪﹑萘吡啶﹑喹喔啉﹑喹唑啉﹑噌啉﹑碟啶﹑咔唑﹑咔啉﹑菲啶﹑吖啶﹑菲啰啉﹑異噻唑﹑吩嗪﹑異噁唑﹑吩噁嗪﹑吩噻嗪﹑咪唑啉﹑哌啶﹑哌嗪﹑吲哚啉﹑鄰苯二甲酰亞胺﹑1,2,3,4-四氫異喹啉﹑4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩﹑噻唑﹑噻唑烷﹑噻吩﹑苯并[b]噻吩﹑嗎啉基﹑硫代嗎啉基﹑1,1-二氧代硫代嗎啉基﹑哌啶基,吡咯烷和四氫呋喃基?！叭〈榛暴p“取代烯基”﹑“取代炔基”﹑“取代環(huán)烷基”﹑“取代環(huán)烯基”﹑“取代芳基”﹑“取代雜芳基”或“取代雜環(huán)基”指的是各自被1到5個(gè)﹑特別是1到3個(gè)﹑優(yōu)選是1到2個(gè)取代基取代的烷基﹑烯基﹑炔基﹑環(huán)烷基﹑環(huán)烯基﹑芳基或雜環(huán)基，這些取代基選自烷基﹑鹵代烷基﹑-O-R20﹑-S-R20﹑烯基﹑炔基﹑氧代﹑-C(=O)R20﹑-C(=S)R20﹑-C(=O)OR20﹑-NR20C(=O)R21﹑-OC(=O)R21﹑-NR20R20﹑-C(=O)NR20R20﹑-C(=S)NR20R20﹑-NR20C(=O)NR20R20﹑-NR20C(=S)NR20R20﹑-OC(=O)NR20R20﹑-SO2NR20R20﹑-OSO2NR20R20﹑-NR20SO2NR20R20﹑-C(=NR20)NR20R20﹑芳基﹑-NR20C(=O)OR21﹑-OC(=O)OR21﹑氰基﹑環(huán)烷基﹑環(huán)烯基﹑-NR20C(=NR20)NR20R20﹑鹵素﹑羥基﹑雜芳基﹑雜環(huán)基﹑硝基﹑-SO3H﹑-SO2R21和-OSO2R21，其中R20獨(dú)立地為氫﹑烷基﹑烯基﹑炔基﹑芳基﹑環(huán)烷基﹑環(huán)烯基﹑雜芳基和雜環(huán)基，或兩個(gè)R20與其結(jié)合的原子形成一個(gè)雜環(huán)，R21為烷基﹑烯基﹑炔基﹑芳基﹑環(huán)烷基﹑環(huán)烯基﹑雜芳基和雜環(huán)基?！跋趸敝?NO2基團(tuán)。“氧代”指的為原子(=O)或(-O)。“螺環(huán)系”指的是雙環(huán)系，其中有一個(gè)單一環(huán)原子為兩個(gè)環(huán)所共有?！皫€基”指的是-SH基團(tuán)?！傲螋驶敝傅氖嵌r(jià)-C(S)-基團(tuán)，等同于-C(=S)-?！傲蛲敝傅氖窃?=S)。如上使用的“化合物”應(yīng)包括指明的分子式的立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體?！傲Ⅲw異構(gòu)體”指的是一個(gè)或多個(gè)立體中心的手性不同的化合物。立體異構(gòu)體包括對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體?！盎プ儺悩?gòu)體”指的是一個(gè)化合物其質(zhì)子的位置不同的變化形式，如烯醇-酮和亞胺-烯胺互變異構(gòu)體，或者雜芳基的互變異構(gòu)形式包括環(huán)原子連接到環(huán)-NH-部分和環(huán)=N-部分如吡唑﹑咪唑﹑苯并咪唑﹑三氮唑和四氮唑?！叭軇┖衔铩敝傅氖侨軇┮跃头绞胶突衔锞喓?。溶劑締合通常由于在化合物的合成﹑結(jié)晶和/或重結(jié)晶中使用溶劑?！叭軇┖衔铩卑ㄋ跃头绞胶突衔锞喓系乃衔铩！盎颊摺被颉敖邮軐?shí)驗(yàn)的對(duì)象”指的是哺乳動(dòng)物，其中包括人和非人類哺乳動(dòng)物?！八帉W(xué)上可接受的鹽”指的是化合物藥學(xué)上可接受的鹽，所述鹽產(chǎn)生該技術(shù)領(lǐng)域眾所周知的各種各樣的有機(jī)和無機(jī)抗衡離子，僅僅示例性鹽包括，當(dāng)分子含有酸性官能團(tuán)時(shí)，有機(jī)或無機(jī)鹽如鈉鹽﹑鉀鹽﹑鈣鹽﹑鎂鹽﹑銨鹽﹑異丙胺﹑三甲胺﹑二乙胺基﹑三乙胺﹑三丙胺﹑乙醇胺﹑2-二甲胺基乙醇﹑2-二乙胺基乙醇﹑二環(huán)己基胺﹑賴氨酸﹑精氨酸﹑組氨酸﹑咖啡因﹑普魯卡因﹑hydrabamine﹑膽堿﹑甜菜堿﹑乙二胺﹑葡糖胺﹑甲葡糖胺﹑可可堿﹑嘌呤﹑哌嗪﹑哌啶﹑N-乙基哌啶﹑多胺樹脂及四烷基銨鹽等；以及當(dāng)分子含有堿性官能團(tuán)時(shí)，有機(jī)或無機(jī)酸鹽如鹽酸鹽﹑氫溴酸鹽﹑酒石酸鹽﹑甲磺酸鹽﹑醋酸鹽﹑馬來酸鹽和草酸鹽。酸的其它非限制例子包括硫酸﹑硝酸﹑磷酸﹑丙酸﹑乙醇酸﹑丙酮酸﹑丙二酸﹑琥珀酸﹑富馬酸﹑酒石酸﹑檸檬酸﹑苯甲酸﹑肉桂酸﹑扁桃酸﹑甲磺酸﹑乙磺酸﹑對(duì)甲苯磺酸﹑水楊酸等?；颊呒膊　爸委煛敝傅氖牵?）阻止疾病在有傾向性或還沒表現(xiàn)疾病癥狀的患者中出現(xiàn)；（2）抑制疾病或阻止其發(fā)展；或（3）減輕疾病或致其退化?！坝行Я俊币庵富钚曰衔锘蛩巹┑牧?，其導(dǎo)致研究人員﹑獸醫(yī)﹑醫(yī)生或其他臨床醫(yī)生正尋求的組織﹑系統(tǒng)﹑動(dòng)物﹑個(gè)體以及人的生物或藥用響應(yīng)，這包含治療一種疾病。與抗原結(jié)合單元偶聯(lián)的藥物衍生物本發(fā)明公開了具有連接基團(tuán)的類美登素衍生物，其通過形成對(duì)酸不敏感﹑對(duì)肽酶組織蛋白酶不敏感以及不含二硫鍵的連接子可偶聯(lián)到抗原結(jié)合單元（Abu）。適于偶聯(lián)連接基團(tuán)的類美登素包括美登醇和美登醇類似物以及可以按照已知方法從天然源分離﹑使用生物技術(shù)制造（見如：Yu等，99PNAS7968-7973（2002））﹑或按照已知方法合成制備(見如：Cassady等，Chem.Pharm.Bull.52(1)1-26(2004))。適合的美登醇類似物的實(shí)例包括：(1)C-19-去氯（參見美國(guó)專利4256746）(由安絲菌素P2經(jīng)氫化鋰鋁還原制備)；(2)C-20-羥基（或C-20-去甲基）+/-C-19-去氯（參見美國(guó)專利4361650和4307016）（使用鏈霉菌（Streptomyces）或放線菌（Actinomyces）去甲基或使用氫化鋰鋁（LAH）去氯制備）；(3)C-20-去甲氧基、C-20-酰氧基（-OCOR）、+/-去氯（參見美國(guó)專利4294757）（使用酰氯通過?；苽洌?；(4)C-9-巰基（美國(guó)專利號(hào)4424219）(通過美登醇與H2S或P2S5反應(yīng)制備)；(5)C-14-羥甲基（CH2OH）或酰氧甲基（CH2OC(=O)苯基或CH2OC(=O)（C1-C5烷基））（參見美國(guó)專利4331598）(從諾卡氏菌（Nocardia）制備)；(6)C-15-羥基/酰氧基（參見美國(guó)專利4364866）（美登醇經(jīng)由鏈霉菌（Streptomyces）轉(zhuǎn)化而成）；(7)C-15-甲氧基（參見美國(guó)專利4313946和4315929）（從Trewianudlflora分離得到）；(8)C-18-N-去甲基（參見美國(guó)專利4362663和4322348）(美登醇經(jīng)由鏈霉菌（Streptomyces）去甲基制備)；以及(9)4,5-去氧（參見美國(guó)專利4371533）（美登醇經(jīng)由三氯化鈦/氫化鋰鋁還原制備）。取決于連接子類型，美登醇上的很多位置可用作連接位置。例如，對(duì)于形成酯鍵，C-3位置具有羥基﹑C-14位置為羥甲基修飾﹑C-15位置為羥基修飾以及C-20位置具有羥基都是合適的。在一些實(shí)施方案中，連接處為C-3位置。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式I或I-1的類美登素衍生物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基﹑苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；Z獨(dú)立地為氫或C1-C4亞烴基，或兩個(gè)Z與其所連接的碳原子形成一個(gè)羰基；以及L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為-（CH2）m-，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基。在一些實(shí)施方案中，式I的化合物為在一些實(shí)施方案中，式I-1的化合物為或在一些實(shí)施方案中，式I的化合物為異構(gòu)體：在一些實(shí)施方案中，式I-1的化合物為異構(gòu)體：在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式II或II-1的類美登素衍生物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基﹑苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；Z獨(dú)立地為氫或C1-C4亞烴基，或兩個(gè)Z與其所連接的碳原子形成一個(gè)羰基；以及L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為-（CH2）m-，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基。在一些實(shí)施方案中，式II的化合物為在一些實(shí)施方案中，式II-1的化合物為或在一些實(shí)施方案中，式II的化合物為異構(gòu)體：在一些實(shí)施方案中，式II-1的化合物為異構(gòu)體：在一些實(shí)施方案中，X為氫。在一些實(shí)施方案中，X為氯。在一些實(shí)施方案中，Y為氫。在一些實(shí)施方案中，R1為氫。在一些實(shí)施方案中，R2為甲基。在一些實(shí)施方案中，R3為甲基。在一些實(shí)施方案中，R4為羥基。在一些實(shí)施方案中，R7為氨基酸側(cè)鏈。在一些實(shí)施方案中，R7為甲基。在一些實(shí)施方案中，R8為甲基。在一些實(shí)施方案中，L為未被取代的C1-C20亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為被取代的C1-C20亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為未被取代的C1-C10亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為被取代的C1-C10亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為-(CH2)5-。在一些實(shí)施方案中，L為未被取代的C1-C20亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-。在一些實(shí)施方案中，L為被取代的C1-C20亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-。在一些實(shí)施方案中，提供式III或III-1的化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X為氫或氯；Y為氫或甲基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；以及L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為-（CH2）m-，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基。在一些實(shí)施方案中，化合物具有式IV或IV-1：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X為氫或氯；Y為氫或甲基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；以及m選自1到20之間的一個(gè)整數(shù)，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10。在一些實(shí)施方案中，化合物為N2’-去乙酰-N2’-(6-馬來?；?1-氧代-己基)美登素（命名為batansine）或其鹽，其中Batansine用式V描述：在一些實(shí)施方案中，式I或I-1的化合物選自：以及或其藥學(xué)上可接受的鹽。藥物連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物本發(fā)明公開了通過連接子偶聯(lián)至抗原結(jié)合單元（Abu）的類美登素化合物(藥物連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物)。在一些示范性實(shí)施方案中，藥物連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物為類美登素通過對(duì)酸不敏感﹑對(duì)肽酶組織蛋白酶不敏感以及不含二硫鍵的連接子偶聯(lián)到抗體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式Ia或Ia-1的類美登素連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物：或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基、苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；p選自1、2、3、4、5、6、7、8、9以及10；Z獨(dú)立地為氫或C1-C4亞烴基，或兩個(gè)Z與其所連接的碳原子形成一個(gè)羰基；L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為-（CH2）m-，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基；以及Abu為抗原結(jié)合單元。在一些實(shí)施方案中，式Ia的化合物為：在一些實(shí)施方案中，Ia-1的化合物為：在一些實(shí)施方案中，Ia的化合物為異構(gòu)體：在一些實(shí)施方案中，Ia-1的化合物為異構(gòu)體：在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式IIa或IIa-1的類美登素連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物：或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基、苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；p選自1、2、3、4、5、6、7、8、9以及10；Z獨(dú)立地為氫或C1-C4亞烴基，或兩個(gè)Z與其所連接的碳原子形成一個(gè)羰基；L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為-（CH2）m-，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基；以及Abu為抗原結(jié)合單元。在一些實(shí)施方案中，式IIa的化合物為：在一些實(shí)施方案中，IIa-1的化合物為：在一些實(shí)施方案中，式IIa的化合物為異構(gòu)體：式IIa-1的化合物為異構(gòu)體：在一些實(shí)施方案中，X為氫。在一些實(shí)施方案中，X為氯。在一些實(shí)施方案中，Y為氫。在一些實(shí)施方案中，R1為氫。在一些實(shí)施方案中，R2為甲基。在一些實(shí)施方案中，R3為甲基。在一些實(shí)施方案中，R4為–羥基。在一些實(shí)施方案中，R7為氨基酸側(cè)鏈。在一些實(shí)施方案中，R7為甲基。在一些實(shí)施方案中，R8為甲基。在一些實(shí)施方案中，L為未被取代的C1-C20亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為被取代的C1-C20亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為未被取代的C1-C10亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為被取代的C1-C10亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為-(CH2)5-。在一些實(shí)施方案中，L為未被取代的C1-C20亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基﹑-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-。在一些實(shí)施方案中，L為被取代的C1-C20亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基﹑-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式IIIa或IIIa-1的化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中X為氫或氯；Y為氫或甲基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；p選自1﹑2﹑3﹑4﹑5﹑6﹑7﹑8﹑9以及10；L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為-（CH2）m-，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基；以及Abu為抗原結(jié)合單元。在一些實(shí)施方案中，化合物具有式IVa或IVa-1：或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中X為氫或氯；Y為氫或甲基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；p選自1﹑2﹑3﹑4﹑5﹑6﹑7﹑8﹑9及10；m選自1到20之間的一個(gè)整數(shù)，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；以及Abu為抗原結(jié)合單元。在一些實(shí)施方案中，化合物具有式Va：或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。在一些實(shí)施方案中，式Ia或Ia-1的化合物選自：在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供類美登素連接子抗體偶聯(lián)化合物具有式XIVa：或其藥學(xué)上可接受的鹽。具有連接基團(tuán)可偶聯(lián)到抗原結(jié)合單元（Abu）的類美登素衍生物或類美登素連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物的類美登素組分也可由其它合適的細(xì)胞毒試劑例如：auristatin﹑DNA小溝結(jié)合試劑﹑DNA小溝烷基化試劑﹑烯二炔（enediyne）﹑lexitropsin﹑duocarmycin﹑紫杉烷（taxane）﹑嘌呤霉素（puromycin）﹑dolastatin及長(zhǎng)春花堿（vincaalkaloid）所取代。其它合適的細(xì)胞毒試劑包括抗微管蛋白試劑如：auristatin﹑長(zhǎng)春花堿（vincaalkaloid）﹑竹葉草霉素（podophyllotoxin）﹑紫杉烷（taxane）﹑漿果赤霉素衍生物（baccatinderivative）﹑cryptophysin﹑類美登素（maytansinoid）﹑combretastatin﹑或尾海兔素（dolastatin）。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞毒試劑為AFP﹑MMAF﹑MMAE﹑AEB﹑AEVB﹑auristatinE﹑長(zhǎng)春新堿（vincristine）﹑長(zhǎng)春花堿（vinblastine）﹑長(zhǎng)春地辛（vindesine）﹑長(zhǎng)春瑞濱（vinorelbine）﹑VP-16﹑喜樹堿（camptothecin）﹑紫三醇（paclitaxel）﹑多西紫杉醇（docetaxel）﹑埃博霉素A（epothiloneA）﹑埃博霉素B（epothiloneB）﹑諾考達(dá)唑（nocodazole）﹑秋水仙堿（colchicines）﹑colcimid﹑雌氮芥（estramustine）﹑西馬多丁（cemadotin）﹑圓皮海綿內(nèi)酯（discodermolide）﹑美登素（maytansine）﹑DM-1﹑DM-3﹑DM-4或eleutherobin。合適的免疫抑制劑包括如丙氧鳥苷（gancyclovir）﹑依那西普（etanercept）﹑環(huán)孢霉素（cyclosporine）﹑他克莫司（tacrolimus）﹑雷柏霉素（rapamycin）﹑環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide）﹑咪唑硫嘌呤（azathioprine）﹑霉酚酸酯（mycophenolatemofetil）﹑甲氨蝶呤（methotrexate）﹑氫化可的松（cortisol）﹑醛甾酮（aldosterone）﹑地塞米松（dexamethasone）﹑環(huán)氧酶抑制劑（cyclooxygenaseinhibitor）﹑5-脂氧合酶抑制劑（5-lipoxygenaseinhibitor）或白三烯受體拮抗劑（leukotrienereceptorantagonist）。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞毒試劑為AFP﹑MMAF﹑MMAE﹑AEB﹑AEVB﹑auristatinE﹑紫杉醇（paclitaxel）﹑多西紫杉醇docetaxel﹑CC-1065﹑SN-38﹑拓?fù)涮婵担╰opotecan）﹑嗎啉代阿霉素（morpholino-doxorubicin）﹑根霉素（rhizoxin）﹑氰基嗎啉代阿霉素（cyanomorpholino-doxorubicin）﹑尾海兔素-10（dolastatin-10）﹑棘霉素（echinomycin）﹑combretatstatin﹑卡里奇霉素（calicheamicin）﹑美登素（maytansine）﹑DM-1﹑DM-3﹑DM-4或紡錘霉素（netropsin）。具有連接基團(tuán)能偶聯(lián)到抗原結(jié)合單元（Abu）的類美登素衍生物或類美登素連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物的類美登素組分也可由其它合適的免疫抑制劑例如：丙氧鳥苷（gancyclovir）﹑依那西普（etanercept）﹑環(huán)孢霉素（cyclosporine）﹑他克莫司（tacrolimus）﹑雷柏霉素（rapamycin）﹑環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide）﹑咪唑硫嘌呤（azathioprine）﹑麥考酚酸酯（mycophenolatemofetil）﹑氨甲喋呤（methotrexate）﹑氫化可的松（cortisol）﹑醛固酮（aldosterone）﹑地塞米松（dexamethasone）﹑環(huán)氧酶抑制劑（cyclooxygenaseinhibitor）﹑5-脂氧合酶抑制劑（5-lipoxygenaseinhibitor）或白三烯受體拮抗劑（leukotrienereceptorantagonist）所取代。抗原結(jié)合單元所述抗原結(jié)合單元可以是目前已知的任何一種，或者是將要成為眾所周知的，包括肽和非肽。通常，這些可能是抗體（例如，單克隆抗體）、淋巴因子、激素、生長(zhǎng)因子、維生素、營(yíng)養(yǎng)運(yùn)輸分子（轉(zhuǎn)鐵蛋白），或其他細(xì)胞結(jié)合分子或物質(zhì)，這些物質(zhì)可以特異性結(jié)合靶點(diǎn)。這些與靶點(diǎn)結(jié)合的物質(zhì)可以來自抗體、抗體片段、細(xì)胞特異性配體，或者來自肽、碳水化合物、天然或合成的化合物，或者藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。所述抗原結(jié)合單元包括抗體碎片（多克隆抗體和單克隆抗體），如Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv（參見Parham,J.Immunol.131:2895-2902(1983);Springetal.,J.Immunol.113:470-478(1974);Nisonoffetal.,Arch.Biochem.Biophys.89:230-244(1960))；單域抗體（dAbs）和其抗原結(jié)合片段，包括駱駝抗體（參見Desmyteretal.,NatureStruct.Biol,3:752(1996)）、被稱作新型抗原受體的鯊魚抗體（IgNAR）（參見Greenbergetal.,Nature,374:168(1995);Stanfieldetal.Science305:1770-1773(2004)）。單克隆抗體技術(shù)使得抗原結(jié)合單元以特異性單克隆抗體的形式成為可能。用有研究意義的抗原，如從靶細(xì)胞中分離的腫瘤特異性抗原，免疫小鼠、大鼠或其他哺乳動(dòng)物來制備單克隆抗體已成為公知技術(shù)。另外一種制備抗原結(jié)合單元的方法是利用scFv的噬菌體庫(kù)（單鏈可變區(qū)），尤其是人scFv（參見Griffithsetal.,US5,885,793和5,969,108;McCaffertyetal.,WO92/01047;Limingetal.,WO99/06587），或者用酵母選擇系統(tǒng)制備域抗體（參見US7,195,595）。另外，如美國(guó)專利5,639,641中所公布的抗體人源化技術(shù)也可以用做嵌合抗體或人源化抗體。特異抗原結(jié)合單元的選擇要依據(jù)疾病的類型作為靶點(diǎn)的細(xì)胞和組織。在一些實(shí)施例中，抗原結(jié)合單元是人單克隆抗體?？乖Y(jié)合單元可以用于特異性結(jié)合腫瘤抗原。本文所述“腫瘤抗原”是指腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的靶點(diǎn)物質(zhì)。腫瘤抗原可以用于腫瘤細(xì)胞的鑒別，也可以成為腫瘤治療的潛在指示劑，或成為腫瘤治療的靶點(diǎn)。許多本領(lǐng)域熟知的腫瘤抗原和新的腫瘤抗原可以通過篩查而鑒別。腫瘤抗原的非限定性的例子包括EGFR、Her2、EpCAM、CD20、CD30、CD33、CD47、CD52、CD133、CEA、gpA33、粘蛋白、TAG-72、CIX、PSMA、葉酸結(jié)合蛋白、GD2、GD3、GM2、VEGF、VEGFR、整合素、αVβ3、α5β1、ERBB2、ERBB3、MET、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2、RANKL、FAP和肌腱蛋白。激素和細(xì)胞因子可能是腫瘤抗原。非限制性例子包括淋巴因子，如白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-6，激素，如胰島素、促甲狀腺激素釋放激素、黑色素細(xì)胞刺激激素，類固醇激素，如雄激素和雌激素；生長(zhǎng)因子和細(xì)胞集落刺激因子，如表皮生長(zhǎng)因子、TGF-alpha、FGF、VEGF、G-CSF和GM-CSF（參見Burgess,ImmunologyToday5:155-158(1984)）、轉(zhuǎn)鐵蛋白(參見O'Keefeetal.,J.Biol.Chem.260:932-937(1985))和維生素如葉酸?？乖Y(jié)合單元對(duì)腫瘤細(xì)胞表達(dá)的相應(yīng)的靶點(diǎn)或抗原具有特異性結(jié)合作用，而一般對(duì)相應(yīng)的非腫瘤細(xì)胞沒有特異性結(jié)合。所述的“相應(yīng)的非腫瘤細(xì)胞”是一種非腫瘤細(xì)胞，此細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的原始細(xì)胞屬于同一細(xì)胞類型。需說明的是這種蛋白并非一定不同于腫瘤抗原。非限定性例子包括癌胚抗原（CEA），其過量表達(dá)于多數(shù)結(jié)腸癌、直腸癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌和胃腸道癌癥；heregulin受體（HER-2neu或c-erbB-2），其常在乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、肺癌、前列腺癌和子宮頸癌中過量表達(dá)；EGFR，其大量表達(dá)于許多實(shí)體瘤，比如乳腺癌、頭頸部腫瘤、非小細(xì)胞肺癌和前列腺癌；asialoglvcoprotein受體；轉(zhuǎn)鐵蛋白受體；表達(dá)于肝細(xì)胞Serpin酶復(fù)合物受體；過量表達(dá)于胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞和很多其他腫瘤組織的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(FGFR)；用于抗血管生成靶點(diǎn)治療的VEGFR；葉酸受體，其選擇性過量表達(dá)于90%的非粘液性卵巢癌；類似于Glycocalyx細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)復(fù)合物；糖類受體；以及聚免疫球蛋白受體，其被用于基因治療方法以傳遞到呼吸道上皮細(xì)胞和被用于治療肺部疾病如囊性纖維化。抗原結(jié)合單元是可以修飾的。例如一種或多個(gè)氨基酸序列改變、增加、或減少，以增強(qiáng)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（ADCC）。例如，IgG2抗體可以被修飾成包括IgG1抗體的Fc和/或鉸鏈區(qū)以增強(qiáng)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用。增強(qiáng)IgG1-Fc抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用的例子，以及篩選增強(qiáng)IgG1-Fc抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用的抗體或其片斷的方法為已知技術(shù)（參見Stewartetal.ProteinEngDesSel.24(9):671-8,2011）。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，抗原結(jié)合單元BAT0206，具有增強(qiáng)了的抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用。BAT0206包含一個(gè)抗EGFR輕鏈氨基酸序列SEQIDNO:1和一個(gè)抗EGFR重鏈氨基酸序列SEQIDNO:2。在本發(fā)明的另一實(shí)施例中，抗原結(jié)合單元是西妥昔單抗，其是一種抗EGFR的人鼠嵌合單克隆抗體。西妥昔單抗的輕鏈和重鏈序列為SEQIDNO:3和4。另一種抗EGFR抗體是帕尼單抗，其是一種全人源化單克隆抗體。另一抗EGFR抗體是尼妥珠單抗，其輕鏈和重鏈序列為SEQIDNO:7和8。另一抗EGFR抗體是馬妥珠單抗，其輕鏈和重鏈序列為SEQIDNO:9和10，分別見表1。EGFR過量表達(dá)于許多腫瘤組織，如轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌和頭頸部癌癥。利妥昔單抗是一種抗CD20蛋白的嵌合單克隆抗體，首次發(fā)現(xiàn)于B細(xì)胞表面。利妥昔單抗特異性結(jié)合并破壞B細(xì)胞，因此，被用于治療B細(xì)胞過量或B細(xì)胞過量活化的疾病。這些疾病包括淋巴瘤、白血病、移植排斥和自身免疫性疾病。其輕鏈和重鏈序列為SEQIDNO:13和14，詳見表1。同樣，曲妥珠單抗（Trastuzumab）是一種抗蛋白Her2的嵌合單克隆抗體，從而抑制Her2/neu受體。曲妥珠單抗的輕鏈和重鏈序列分別見表1中SEQIDNO:11和12.在一些癌癥中，尤其是乳腺癌，Her2過量表達(dá)，并且引起乳腺細(xì)胞復(fù)制失控。曲妥珠單抗被用于治療特定乳腺癌和胃癌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗原結(jié)合單元和序列見表1，但抗原結(jié)合單元并非限制于此表。非抗體分子也能用作抗原結(jié)合單元與類美登素化合物偶聯(lián)，將藥物靶向特定細(xì)胞或疾病組織。例如，粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)與骨髓細(xì)胞結(jié)合，可以用于細(xì)胞結(jié)合劑靶向病變細(xì)胞的急性髓系白血病。另外，白介素2結(jié)合活化的T細(xì)胞，可以用于預(yù)防移植排斥反應(yīng)、用于治療和預(yù)防移植物抗宿主病和用于急性T細(xì)胞白血病的治療。黑色素細(xì)胞刺激素（MSH）與黑素細(xì)胞結(jié)合，可用于黑素瘤的治療。葉酸可用于靶向表達(dá)葉酸受體的卵巢癌和其他腫瘤。表皮生長(zhǎng)因子（EGF）可用于針對(duì)肺癌和頭頸部等鱗狀癌癥的治療。生長(zhǎng)抑素可以用于靶向神經(jīng)母細(xì)胞瘤和其他類型的腫瘤。乳房和睪丸的癌癥可以分別用細(xì)胞結(jié)合劑雌激素（或雌激素類似物）或雄激素（或雄激素類似物）針對(duì)性治療。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，所述偶聯(lián)物D-L-Abu，是一個(gè)或多個(gè)美登素與BAT0206的偶聯(lián)而成，所述BAT0206包含一個(gè)氨基酸序列為SEQIDNO:1的抗EGFR輕鏈和一個(gè)氨基酸序列為SEQIDNO:2的抗EGFR重鏈形成的抗EGFR抗體。表1.示例性抗原結(jié)合單元的氨基酸序列在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式Id或IId的類美登素BAT0206偶聯(lián)物：或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基、苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；p選自1﹑2﹑3﹑4﹑5﹑6﹑7﹑8﹑9及10；以及Lb選自任選被C1-C4烷基﹑-SO3H或-P(O)(OH)2取代的C1-C20亞烴基；任選被C1-C4烷基取代的C3-C8環(huán)亞烴基；以及任選被C1-C4烷基﹑-SO3H或-P(O)(OH)2取代的C1-C20亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、任選被一個(gè)或多個(gè)C1-C4烷基或氧代取代的3到8元雜環(huán)亞烴基﹑-O-﹑-S-﹑-S-S-﹑-NR8-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2；Bat0206為抗原結(jié)合單元。在一些實(shí)施方案中，Lb為任選被C1-C4烷基﹑-SO3H或-P(O)(OH)2取代的C1-C20亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：-S-﹑-S-S-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑以及在一些實(shí)施方案中，式Id的化合物選自：以及或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。在一些實(shí)施方案中，式Id的化合物選自：以及或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中X為氫或氯；Y為氫或甲基；R7為氫﹑C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；以及p選自1﹑2﹑3﹑4﹑5﹑6﹑7﹑8﹑9以及10。在一些實(shí)施方案中，式Id的化合物選自：（Batansine-0206），(D-Lmcc-BAT0206)以及（D-Lspp-BAT0206)，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物，其中Bat0206為抗原結(jié)合單元。藥物偶聯(lián)至抗原結(jié)合單元如上所述，化合物（例如：類美登素藥物衍生物）可以通過連接子偶聯(lián)至抗原結(jié)合單元。在一些實(shí)施方案中，抗原結(jié)合單元可以用適當(dāng)?shù)碾p官能團(tuán)修飾試劑修飾。在一些實(shí)施方案中，含有巰基（SH）的基團(tuán)可以引入到抗原結(jié)合單元上的氨基酸殘基側(cè)鏈，如賴氨酸側(cè)鏈。例如，抗原結(jié)合單元上賴氨酸殘基的氨基可以與2-亞氨基硫烷（Traut’sReagent）或與3-（2-吡啶二硫代）丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯（SPDP）﹑4-(2-吡啶二硫代)丁酸N-羥基琥珀酰亞胺酯（DPDB）等反應(yīng)接著用還原劑如2-巰基乙醇﹑二硫蘇糖醇（DTT）或三（2-羧乙基）膦（TCEP）還原轉(zhuǎn)化成含巰基基團(tuán)?？扇〈嚢彼釟埢蟼?cè)鏈氨基的含巰基基團(tuán)的非限制性實(shí)例包括-NHC(=NH)(CH2)nSH和-NHC(O)(CH3)nSH，其中n為1﹑2﹑3﹑4﹑5或6。當(dāng)含巰基基團(tuán)引入氨基酸殘基，氨基酸殘基被指為巰基化氨基酸。例如，當(dāng)賴氨酸側(cè)鏈氨基轉(zhuǎn)化成含巰基基團(tuán)，賴氨酸殘基被指為巰基化賴氨酸?？乖Y(jié)合單元上引入的游離巰基個(gè)數(shù)可以變化，比如在1和大約20之間，或者5到15，以及或者5到12。連接子或藥物-連接子可以與抗原結(jié)合單元上巰基化賴氨酸殘基的游離巰基（SH）成鍵。在一些實(shí)施方案中，與抗原結(jié)合單元上巰基化賴氨酸殘基成鍵的連接子或連接子-藥物個(gè)數(shù)在1和大約10之間。在一些實(shí)施方案中，如此成鍵個(gè)數(shù)至少是1，或至少為2﹑或3﹑或4﹑或5。在一些實(shí)施方案中，如此連接的個(gè)數(shù)為不超過10，或者不超過9﹑或8﹑或7﹑或6﹑或5﹑或4。在一些實(shí)施方案中，每個(gè)抗原結(jié)合單元平均與3到5個(gè)藥物分子偶聯(lián)。在另一實(shí)施方案中，藥物-連接子可以通過結(jié)合到半胱氨酸殘基上的巰基偶聯(lián)到抗原結(jié)合單元。每個(gè)抗原結(jié)合單元通常包含許多半胱氨酸，但是它們中很多，如果并非所有，彼此形成二硫鍵，因此無法用于如此偶聯(lián)。在一些實(shí)施方案中，因此，抗原結(jié)合單元上的一個(gè)或一個(gè)以上的二硫鍵通過與還原劑如2-巰基乙醇﹑二硫蘇糖醇（DTT）或三（2-羧乙基）膦（TCEP）反應(yīng)而斷裂形成游離巰基（SH）。該反應(yīng)可以跟蹤和/或控制以便足夠數(shù)量的二硫鍵斷裂而能偶聯(lián)，同時(shí)維持足夠數(shù)量的二硫鍵而保持抗原結(jié)合單元的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方案中，藥物-連接子和抗原結(jié)合單元上的半胱氨酸殘基之間成鍵個(gè)數(shù)為1到10。在一些實(shí)施方案中，此類鍵的個(gè)數(shù)至少為1，或至少為2﹑或3﹑或4﹑或5。在一些實(shí)施方案中，如此形成的鍵的個(gè)數(shù)不超過10，或者不超過9﹑或8﹑或7﹑或6﹑或5﹑或4。在一些實(shí)施方案中，每個(gè)抗原結(jié)合單元通過半胱氨酸平均與3到5個(gè)藥物分子偶聯(lián)。在一些實(shí)施方案中，藥物分子通過賴氨酸和半胱氨酸混合殘基偶聯(lián)到抗原結(jié)合單元。抗原結(jié)合單元可以通過修飾，引入偶聯(lián)位點(diǎn)。比如，位點(diǎn)特異突變以便引入額外的巰基化賴氨酸或半胱氨酸殘基而允許適當(dāng)?shù)呐悸?lián)。氨基酸修飾方法為該技術(shù)領(lǐng)域眾所周知。修飾過的抗原結(jié)合單元然后可以用實(shí)驗(yàn)方法考察其穩(wěn)定性和其抗原結(jié)合性能。在一些實(shí)施方案中，至少一個(gè)巰基化賴氨酸或半胱氨酸通過如此修飾而引入。在另一實(shí)施方案中，至少兩個(gè)巰基化賴氨酸或半胱氨酸通過如此修飾而引入。藥物負(fù)載抗原結(jié)合單元上藥物負(fù)載可以改變，這取決于很多因素如藥物的效力、大小、抗原結(jié)合單元的穩(wěn)定性、抗原結(jié)合單元上可用的能偶聯(lián)的基團(tuán)等。在一些實(shí)施方案中，1到10個(gè)類美登素藥物分子和1個(gè)抗原結(jié)合單元分子偶聯(lián)。在一些實(shí)施方案中，平均3到5個(gè)類美登素藥物分子和1個(gè)抗原結(jié)合單元分子偶聯(lián)。在一些實(shí)施方案中，平均3.5個(gè)類美登素藥物分子和1個(gè)抗原結(jié)合單元分子偶聯(lián)。藥物連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物的制備本發(fā)明提供了由式I﹑I-1﹑II﹑II-1﹑III﹑III-1﹑IV﹑IV-1和V的任一項(xiàng)的化合物與抗原結(jié)合單元制備類美登素藥物連接子抗原結(jié)合單元偶聯(lián)物化合物的方法。在一些實(shí)施方案中，式I﹑I-1﹑II﹑II-1﹑III﹑III-1﹑IV﹑IV-1和V的任一項(xiàng)的化合物與抗原結(jié)合單元溶于水溶液。在一些實(shí)施方案中，溶液包含緩沖溶液如磷酸鹽緩沖溶液。盡管不希望局限于任何理論，可以預(yù)期，式Ia到Va任一項(xiàng)化合物一旦內(nèi)吞，能被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶降解至具有細(xì)胞毒的類美登素部分組成的降解產(chǎn)物。本發(fā)明公開了式Ib或Ib-1的化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基、苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；Z獨(dú)立地為氫或C1-C4亞烴基，或兩個(gè)Z與其所連接的碳原子形成一個(gè)羰基；L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為-（CH2）m-，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基；以及AA為氨基酸，如半胱氨酸，或巰基化氨基酸，如巰基化賴氨酸。在一些實(shí)施方案中，式Ib或Ib-1的化合物分別為：或或者其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式IIb或IIb-1的化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X為氫或鹵素；Y選自氫﹑C1-C6烷基﹑C3-C6環(huán)烷基和-C(=O)R5；R1選自H﹑-OH﹑-OC(=O)R5和-OR5基團(tuán)；R2為H或C1-C6烷基；R3為甲基﹑-CH2OH或-CH2OC(=O)R6；R4為-OH或–SH；R5為C1-C6烷基或芐基；R6為C1-C6烷基﹑苯基或芐基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；Z獨(dú)立地為氫或C1-C4亞烴基，或兩個(gè)Z與其所連接的碳原子形成一個(gè)羰基；L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為-（CH2）m-，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基；以及AA為氨基酸，如半胱氨酸，或巰基化氨基酸，如巰基化賴氨酸。在一些實(shí)施方案中，X為氫。在一些實(shí)施方案中，X為氯。在一些實(shí)施方案中，Y為氫。在一些實(shí)施方案中，R1為氫。在一些實(shí)施方案中，R2為甲基。在一些實(shí)施方案中，R3為甲基。在一些實(shí)施方案中，R4為–羥基。在一些實(shí)施方案中，R7為氨基酸側(cè)鏈。在一些實(shí)施方案中，R7為甲基。在一些實(shí)施方案中，R8為甲基。在一些實(shí)施方案中，L為未被取代的C1-C20亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為被取代的C1-C20亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為未被取代的C1-C10亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為被取代的C1-C10亞烴基。在一些實(shí)施方案中，L為-(CH2)5-。在一些實(shí)施方案中，L為未被取代的C1-C20亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-。在一些實(shí)施方案中，L為被取代的C1-C20亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了如下化合物：在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式IIIb或IIIb-1的化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X為氫或氯；Y為氫或甲基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；L選自任選被取代的C1-C20亞烴基或C3-C8環(huán)亞烴基，其中一個(gè)或多個(gè)-CH2-基團(tuán)獨(dú)立地任選地被選自以下的基團(tuán)所替代：C3-C8環(huán)亞烴基、-O-﹑-S-﹑-NR8-﹑-C(O)-﹑-C(=O)NR8-﹑-NR8C(=O)-﹑-SO2NR8-或-NR8SO2-；優(yōu)選地，L為-（CH2）m-，其中m=1-20，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；優(yōu)選地，其中所述C1-C20亞烴基為被1到4個(gè)-SO3H﹑-P(O)(OH)2或R23取代的C1-C20亞烴基，其中R23各自獨(dú)立地為任選地被獨(dú)立地選自SH﹑S-C1-4烷基﹑-CONR11R11以及-NR11R11的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的C1-6烷基；以及AA為氨基酸，如半胱氨酸，或巰基化氨基酸，如巰基化賴氨酸。在一些實(shí)施方案中，化合物具有式IVb或IVb-1：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X為氫或氯；Y為氫或甲基；R7為氫、C1-6烷基或氨基酸側(cè)鏈；R8為氫或者C1-6烷基；m為1到20之間一個(gè)整數(shù)，優(yōu)選為1-10，更優(yōu)選為5-10；以及AA為氨基酸，如半胱氨酸，或巰基化氨基酸，如巰基化賴氨酸。在一些實(shí)施方案中，化合物具有式Vb：或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施方案中，AA為，但不限于或其中代表與分子其它部分的連接點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，式Ib的化合物選自：以及或其藥學(xué)上可接受的鹽。盡管不希望局限于任何理論，可以預(yù)期，式Ia到Va，Va到XIIa任一項(xiàng)化合物一旦內(nèi)吞，能被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶降解至具有細(xì)胞毒的類美登素部分組成的降解產(chǎn)物。本發(fā)明公開了式Vc的化合物：在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶降解至具有細(xì)胞毒的類美登素部分組成的降解產(chǎn)物的化合物，包括：以及在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種或多種化合物用于制備治療增殖、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，例如，所述化合物為式Ia-Va、Id和式Va-XIVc中任一種化合物。本發(fā)明化合物可以配制成藥物組合物和適于所選擇的給藥途徑的各種給藥形式，即，口服或靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、局部或皮下等腸胃外給藥?；衔锏牧繒?huì)有所不同，取決于藥物連接體的性質(zhì)、藥物負(fù)載、細(xì)胞表面引起內(nèi)化作用的程度、藥物的轉(zhuǎn)導(dǎo)和釋放、治療的疾病、病人的情況，如年齡、性別、體重等，并可以通過本領(lǐng)域公知的方法來確定，例如，見美國(guó)專利4938949，將最終由主治醫(yī)生或臨床醫(yī)生來決定。通常，合適的劑量范圍是約0.1～200毫克/千克，例如，連續(xù)52周中每1-4周每天靜脈輸注30-90分鐘，每千克體重用藥量為0.5毫克/千克～50毫克/千克、1.0毫克/千克～25毫克/千克、1.5毫克/千克～15毫克/千克或者1毫克/千克～10毫克/千克在一些實(shí)例中，劑量從約1.0毫克/天～100毫克/天，例如，從約2毫克/天至約5克/天，約10毫克/天至約1克/天，約20～500毫克/天，或在約50～100毫克/天。本發(fā)明化合物可以每日、每月用藥，例如一天一次，持續(xù)用藥1-3周或一個(gè)月。另一方面，本發(fā)明化合物可以周期給藥，如先每天給藥約5～21天，接下來1～7天不用藥，如此，循環(huán)給藥。在另一些實(shí)施例中，初始給藥量為1-4mg/kg靜脈輸注30-90分鐘,接下來的52周里每1-4周經(jīng)脈輸注30分鐘以上，藥量為1-2mg/kg。在另一些實(shí)施例中，初始給藥量為2-10mg/kg靜脈輸注30-90分鐘，接下來的52周里每1-4周經(jīng)脈輸注30-90分鐘，藥量為1-5mg/kg。在一些實(shí)施例中，所述化合物與其他療法聯(lián)合應(yīng)用。例如，所述化合物可與另外一種治療方法一起應(yīng)用于腫瘤的治療，例如，放射治療或本領(lǐng)域中已知的另一種抗癌劑。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式Ib化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途。所述式Ib的化合物，其特征在于：作為式Ia的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。所述代謝化學(xué)反應(yīng)是指身體內(nèi)部（如，細(xì)胞、機(jī)體）發(fā)生的反應(yīng)，一種化學(xué)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為另一種化學(xué)物質(zhì)。該轉(zhuǎn)化可以通過代謝和/或化學(xué)過程，并且可以發(fā)生在一個(gè)步驟中，或通過兩個(gè)或多個(gè)步驟。代謝的化學(xué)反應(yīng)包括蛋白質(zhì)或肽的降解反應(yīng)。組成一個(gè)美登木素生物堿連接抗原結(jié)合單位結(jié)合，如如通過在細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)的抗體或抗體片段。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式IIb化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式IIb的化合物是式IIa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式IIIb的化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式IIIb的化合物是式IIIa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式VIb化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式VIb的化合物是式VIa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式Vb化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式Vb的化合物是式Va的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在另一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式Vc化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式Vc的化合物是式Va、VIa或VIIa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式VIIIc的化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式VIIIc的化合物是式VIIIa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式IXc化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式IXc的化合物是式IXa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式Xc化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式Xc的化合物是式Xa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式XIc化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式XIc的化合物是式XIa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式XIIc化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式XIIc的化合物是式XIIa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供了式XIVc化合物用于制備治療增生、炎癥或免疫疾病的藥物的用途，所述式XIVc的化合物是式XIVa的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥后的代謝產(chǎn)物。治療的疾病，可以通過與抗原結(jié)合單元的結(jié)合來確定。在一些實(shí)施例中，所述疾病為增生性疾病，如，包括黑色素瘤、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、甲狀腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肥大細(xì)胞性白血病、生殖細(xì)胞瘤，小細(xì)胞肺癌、胃腸道間質(zhì)瘤、急性髓系白血病（AML）、慢性B型淋巴細(xì)胞性白血病(B-CLL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和胰腺癌等。在一些實(shí)施例中所述疾病為炎癥性疾病或者免疫疾病，如，移植排斥或自身免疫性疾病，如I型糖尿病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸。藥物組合物本發(fā)明提供了一些藥物組合物，包括如本文所述的一種或多種組合物，例如，式Ia-Va的任一種化合物的組合物，及其一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述組合物應(yīng)包含至少0.1％的活性化合物。組合物的百分比可以改變，可能是一個(gè)給定的單位劑量組成的重量的2～90％。所述治療效用的組合物中的活性化合物的量需要達(dá)到有效劑量水平。所述組合物的口服給藥方式包括，但不限于：口服片劑、口含片劑、錠劑、膠囊劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑、溶液劑、糯米紙劑等。適合于注射或輸液的組合物可以包括藥學(xué)上可接受的液體載體或賦形劑，如無菌水溶液或分散液，或適于臨時(shí)配制成無菌注射或難溶溶劑，任選地包封在脂質(zhì)體中的溶液或分散液含有活性成分的無菌粉末。藥物組合物的其他形式包括外用制劑，如凝膠、軟膏、霜?jiǎng)?、洗劑或貼劑等所述藥物組合物，除本文中提到的以外，還包括本領(lǐng)域公知、藥學(xué)上可接受的載體;例如，雷明頓，藥劑科學(xué)和實(shí)踐，第20版，2000年，利平科特·威廉斯＆威爾金斯，(Editors:Gennaro,A.R.,etal.)。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供了一種制備藥物組合物的方法，其特征在于：包括所述化合物的混合物，例如，分子式Ia-Va和Id的中任一項(xiàng)的化合物及其藥學(xué)上可接受的載體?；旌系幕钚猿煞峙c藥學(xué)上可接受的載體的方法在本領(lǐng)域中是公知技術(shù)，例如，將活性化合物與液體或細(xì)碎的固體載體或兩者按規(guī)定比例均勻混合，然后，如果有必要，將所得混合物做成所需的形狀。在一些實(shí)施例中，式Ia-Va和Id任一種化合物制備成注射劑，例如，在藥物濃度為2-50mg/ml的水溶液中含有4-10mg/mL的氯化鈉和/或5-12mg/ml的醋酸鈉，或者在藥物濃度為2-50mg/ml的水溶液中含有5-10mg/ml的氯化鈉、1-5mg/mL的磷酸氫二鈉七水合物、0.1～0.5mg/ml的磷酸二氫鈉一水合物。在另一些實(shí)施例中，式Ia-Va和Id任一種化合物制備成注射劑，例如，在藥物濃度為2-100mg/ml的水溶液中含有0.5-1.0%mg/mL的氯化鈉、0.05-0.10％的磷酸二氫鈉二水合物、1.0～2.0％的磷酸氫二鈉二水合物、0.01～0.05％的檸檬酸鈉、0.10-0.20％的檸檬酸一水合物、1.0-2.0％的甘露醇、0.1％～0.2的聚山梨酯80和注射用水（參見USP標(biāo)準(zhǔn)），氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值。方法本發(fā)明的化合物可以由容易得到的起始物用如下常規(guī)方法和操作加以制備。其中給定的典型或優(yōu)選方法條件（如反應(yīng)溫度﹑時(shí)間﹑反應(yīng)物摩爾比﹑溶劑﹑壓力等），除非另有說明，可以理解為其它方法條件也可以使用。最佳反應(yīng)條件可能隨所用的特定反應(yīng)物或溶劑而變化，但是這些條件可由熟悉該技術(shù)領(lǐng)域的科技人員用常規(guī)優(yōu)化程序確定。此外，顯而易見，對(duì)熟悉該技術(shù)領(lǐng)域的科技人員，常規(guī)的保護(hù)基對(duì)避免某些官能團(tuán)參與不想要的反應(yīng)可能是必要的。各種官能團(tuán)的合適保護(hù)基以及特定官能團(tuán)保護(hù)和去保護(hù)合適條件為該技術(shù)領(lǐng)域的科技人員眾所周知。例如由Greene,T.W.和Wuts,G.M.,《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》（ProtectingGroupsinOrganicSynthesis），第三版，1999，Wiley，NewYork中所述的很多保護(hù)基及其中所引用的參考文獻(xiàn)。此外，本發(fā)明的化合物可能包含一個(gè)或一個(gè)以上手性中心。因此，若需要，此類化合物可以制備或分離得到純立體異構(gòu)體，即為單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體或?yàn)榱Ⅲw異構(gòu)體富集的混合物。除非另有特別說明，所有這些立體異構(gòu)體（及其富集的混合物）都包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。純的立體異構(gòu)體（或其富集混合物）可以使用如本技術(shù)領(lǐng)域熟知的光學(xué)活性起始物或立體選擇性試劑加以制備?；蛘?，此類外消旋混合物也可使用如手性柱色譜，手性差分試劑等加以分離。下述反應(yīng)的起始物質(zhì)通常為已知化合物或者可以通過已知步驟或通過其明顯的修改方案進(jìn)行制備。例如，很多起始物可從供貨商如AldrichChemicalCo.（Milwaukee,Wisconsin,USA）﹑Bachem（Torrance,California,USA）﹑Emka-Chemce或Sigma（St.Louis,Missouri,USA）買到。其它起始物可以通過標(biāo)準(zhǔn)參考書如FieserandFieser'sReagentsforOrganicSynthesis,1-15卷（JohnWileyandSons）（1991）﹑Rodd'sChemistryofCarbonCompounds,1-5卷及補(bǔ)卷（ElsevierSciencePublishers)（1989）﹑OrganicReactions,1-40卷（JohnWileyandSons)（1991）﹑March'sAdvancedOrganicChemistry，第四版（JohnWileyandSons）﹑及Larock'sComprehensiveOrganicTransformations（VCHPublishersInc.）（1989）所述的步驟或其明顯的修改方案進(jìn)行制備。于此所述的各種起始物﹑中間體和化合物（包括立體異構(gòu)體）可以用適當(dāng)?shù)某Ｒ?guī)技術(shù)如沉淀﹑過濾﹑結(jié)晶﹑蒸發(fā)﹑蒸餾和色譜分離和純化。這些化合物可以通過常規(guī)方法如熔點(diǎn)﹑質(zhì)譜﹑核磁共振和各種其它光譜分析方法加以鑒定。偶合試劑包括基于碳二亞胺﹑銨鹽和鏻鹽試劑。碳二亞胺型試劑包括碳二亞胺如N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)﹑N,N'-二異丙基碳二亞胺(DIC)和1-乙基-3-（3’-二甲氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)等。銨鹽包括N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮雜苯并三氮唑-1-基)六氟磷酸脲(HATU)﹑N,N,N',N'-四甲基-O-(苯并三氮唑-1-基)六氟磷酸脲(HBTU)﹑N,N,N',N'-四甲基-O-(6-氯苯并三氮唑-1-基)六氟磷酸脲（HCTU）﹑N,N,N',N'-四甲基-O-(苯并三氮唑-1-基)四氟硼酸脲(TBTU)﹑N,N,N',N'-四甲基-O-(6-氯苯并三氮唑-1-基)四氟硼酸脲(TCTU)。鏻鹽包括7-氮雜苯并三氮唑-1-基-氧基三（吡咯烷基）磷鎓六氟磷酸鹽(PyAOP)和苯并三氮唑-1-基-氧基三（吡咯烷基）磷鎓六氟磷酸鹽(PyBOP)。酰胺形成步驟可以在極性溶劑如二甲基甲酰胺（DMF）中進(jìn)行并且也可包含有機(jī)堿如二異丙基乙胺（DIEA）或二甲氨基吡啶（DMAP）。下面實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的某些方面和幫助熟悉該技術(shù)領(lǐng)域的科技人員實(shí)行本發(fā)明。這些實(shí)施例絕不是被認(rèn)為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例在以下實(shí)例及貫穿整個(gè)專利申請(qǐng)，下述縮略語意義如下。如果沒有界定，這些術(shù)語具有普遍公認(rèn)的意義。ACN=乙腈Ala=丙氨酸aq.=水溶液brs=寬的單峰calc.=計(jì)算值d=雙峰DCM=二氯甲烷dd=雙二重峰DIC=N,N'-二異丙基碳二亞胺DMA=N,N-二甲基乙酰胺DMAP=二甲基氨基吡啶DMF=二甲基甲酰胺DMSO=二甲基亞砜DTT=二硫蘇糖醇EDTA=乙二胺四乙酸鹽Et=乙基EtOAc=乙酸乙酯g=克h=小時(shí)HCl=氫氯酸HPLC=高效液相色譜法Hz=赫茲J=偶合常數(shù)LC-MS=液相色譜質(zhì)譜法m=多重峰MDC=美登醇Me=甲基MeOH=甲醇MHz=兆赫min=分鐘mL=毫升mm=毫米m.p.=熔點(diǎn)OTf=三氟甲磺酸鹽N=標(biāo)準(zhǔn)的r.t.=室溫PBS=磷酸鹽緩沖液Rt=保留時(shí)間s=單峰t=三重峰TLC=薄層色譜法vol=體積μL=微升μm=微米材料和方法：核磁共振譜由BrukerAM400(400MHz)光譜儀測(cè)量。CDCl3中的化學(xué)位移（ppm）以殘留的CHCl3為內(nèi)標(biāo)。紫外可見光譜由BeckmanDU-640分光光度計(jì)測(cè)量。質(zhì)譜通過ThermoFinniganLCQDECAXP+儀使用電噴霧電離獲得。HPLC使用AgilentHPLC1100系統(tǒng)（配置二級(jí)陣列檢測(cè)器和Kromasil反相5μm,250x4.6mm碳-18柱）,用乙腈：水進(jìn)行梯度洗脫（50-95%乙腈0-10min，95%乙腈10-15min，流速=1.0mL/min）?？焖僦鶎游鲇霉枘z來自青島海洋化工廠分廠。美登醇按以前方法（Widdison等（2006）J.Med.Chem.49：4392-4408）由安絲菌素P-3制備。安絲菌素P-3由微生物珍貴橙色速絲放線菌（Actinosynnemapretiosum）發(fā)酵所得。二氯甲烷經(jīng)由氫化鈣蒸餾干燥。二甲基甲酰胺經(jīng)由氫化鈣減壓蒸餾干燥。所有其它試劑為試劑級(jí)或HPLC級(jí)。實(shí)施例1美登醇（MDC）與Fmoc-N-甲基-L-丙氨酸的酯化反應(yīng)（合成Fmoc-N-Me-D/L-Ala-MDC）稱取美登醇（0.600g，1.062mmol），F(xiàn)moc-N-甲基-L-丙氨酸（6.911g，21.24mmol），三氟甲磺酸鈧（0.314g，0.637mmol）和DMAP（0.389g，3.186mmol）置于250毫升Schlenck瓶，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入二氯甲烷（100mL），在-8°C攪拌0.5小時(shí)。逐滴加入DIC（2.949g，23.37mmol），繼續(xù)在-8°C攪拌反應(yīng)0.5h，慢慢升溫至室溫，過濾回收催化劑，濾液用稀鹽酸淬滅，二氯甲烷萃取，依次用飽和碳酸氫鈉和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋干溶劑。柱層析（硅膠，CH2Cl2/MeOH30:1）得到非對(duì)映異構(gòu)體混合物Fmoc-N-Me-D/L-Ala-MDC，白色固體（0.8385g，產(chǎn)率90.5%）。進(jìn)一步柱層析（硅膠，CH2Cl2/MeOH100:1到20:1）得到兩個(gè)純的非對(duì)映異構(gòu)體組分。Rf較大的組分確定是D-氨?；シ菍?duì)映異構(gòu)體（Fmoc-N-Me-D-Ala-MDC），Rf較小的組分確定是L-氨?；シ菍?duì)映異構(gòu)體（Fmoc-N-Me-L-Ala-MDC）。Fmoc-N-Me-L-Ala-MDC:白色固體（0.4262g，產(chǎn)率46.0%），1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ0.77（3H，s）,1.22-1.32(6H，m)，1.40-1.48(1H，m),1.63(3H，s)，2.13(1H,dd,J=14.4，2.8Hz)，2.53(1H，dd,J=14.4,10.8Hz),2.64(3H，s),2.88(3H，s),3.00(1H，d，J=9.6Hz)，3.07(1H，d，J=12.4Hz),3.35(3H，s),3.48(1H，d，J=8.8Hz),3.59(1H，d，J=11.2Hz),3.97(3H，s),4.13-4.19(1H，m),4.15(1H，s),4.24(1H，t，J=10.8Hz),4.72-4.77(2H，m)，5.03(1H，q，J=6.8Hz)，5.65(1H，dd，J=15.2，9.2Hz)，6.29(1H，br)，6.41(1H，dd，J=15.2，11.2Hz)，6.52(1H，d，J=1.2Hz)，6.70(1H，d，J=10.8Hz)，6.79(1H，d，J=1.2Hz)，7.33(1H，t，J=7.6Hz)，7.36(1H，t，J=7.6Hz)，7.39(1H，d，J=7.6Hz)，7.49(1H，d，J=7.6Hz)，7.70(1H，d，J=7.6Hz)，7.72(1H，d，J=7.6Hz)。LC-MS(M+Na+)計(jì)算值:894.3，實(shí)測(cè)值：894.3。Fmoc-N-Me-D-Ala-MDC：白色固體（0.3993g，產(chǎn)率43.1%）,1HNMR（400MHz,CDCl3）：δ0.84（3H，s），1.22-1.27（3H，m）,1.40-1.48（1H，m）,1.51（3H，d，J=7.6Hz），1.67（3H，s），2.20（1H，dd，J=14.4，2.8Hz），2.63（1H，dd，J=14.4，12.4Hz），2.85（1H，d，J=9.6Hz），2.96（3H，s），3.17（3H，s），3.20（1H，s），3.24（3H，s），3.40（1H，d，J=9.2Hz），3.51（1H，d，J=12.8Hz），3.99（3H，s），4.20-4.28（2H，m），4.38-4.43(2H，m)，4.80-4.98(2H，m)，5.80(1H，dd，J=15.2，11.2Hz)，6.18(1H，s)，6.25(1H，d，J=10.8Hz)，6.40(1H，dd，J=15.2，11.2Hz)，6.79(1H，d，J=1.6Hz)，6.84（1H，d，J=1.6Hz），7.32(2H，t，J=7.6Hz)，7.41（2H，t，J=7.6Hz），7.61(2H，d，J=7.6Hz)，7.77(2H，d，J=7.6Hz)。LC-MS（M+Na+）計(jì)算值：894.3，實(shí)測(cè)值：894.3。實(shí)施例2去保護(hù)Fmoc-N-Me-D/L-Ala-MDC(合成N-Me-D/L-Ala-MDC)Fmoc-N-Me-D/L-Ala-MDC(0.463g,0.5307mmol)溶在乙腈（200mL），加入哌啶（0.865g,10.15mmol），室溫?cái)嚢?小時(shí)，加水淬滅，二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋蒸除去溶劑，干燥得粗品。不需進(jìn)一步純化用于下步反應(yīng)。LC-MS（M+H+）計(jì)算值:650.3,實(shí)測(cè)值:650.3。Rt:3.96min。實(shí)施例3去保護(hù)Fmoc-N-Me-L-Ala-MDC（合成N-Me-L-Ala-MDC）Fmoc-N-Me-L-Ala-MDC(0.463g,0.5307mmol)溶在乙腈（200mL），加入哌啶（0.865g,10.15mmol），室溫?cái)嚢?小時(shí)，加水淬滅，二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋蒸除去溶劑，干燥得粗品。不需進(jìn)一步純化用于下步反應(yīng)。LC-MS（M+H+）計(jì)算值:650.3，實(shí)測(cè)值:650.3。Rt:3.96min。實(shí)施例4N-Me-D/L-Ala-MDC與6-馬來酰亞胺基己酸（MA-ACP）縮合(合成D-3AA-MDC和L-3AA-MDC)將上步制備的粗品N-Me-D/L-Ala-MDC（0.5307mmol）以及MA-ACP（0.448g,2.123mmol）溶于DMF（25mL），冰水浴冷卻，加入EDC（0.407g,2.123mmol）。反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜，加水淬滅，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋蒸除去溶劑。柱層析（硅膠，CH2Cl2/MeOH30:1）得到粗品。制備HPLC（YMCC-18柱,250x20mm,S10μm）進(jìn)一步純化得純的兩個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體（Rt=6.59min和6.98min）。Rt較大的組分確定是D-氨?；シ菍?duì)映異構(gòu)體（D-3AA-MDC，45.2%），Rt較小的組分確定是L-氨?；シ菍?duì)映異構(gòu)體（L-3AA-MDC,54.8%）。L-3AA-MDC:白色固體（0.1364g，兩步總產(chǎn)率30.5%），1HNMR（400MHz,CDCl3）:δ0.79（3H，s），1.17-1.32（3H，m），1.27（3H，s）,1.29（3H，s），1.40-1.76（7H，m），2.12-2.23（2H，m），2.31-2.45（1H，m），2.59（1H，t，J=12.8Hz），2.82（3H，s），3.01（1H，d，J=9.6Hz），3.10（1H，d，J=8.8Hz），3.17（3H，s），3.34（3H，s），3.42（2H，t，J=6.8Hz），3.48（2H，d，J=6.8Hz），3.62（1H，d，J=12.8Hz），3.97（3H,s），4.27（1H，t，J=11.2Hz），4.76（1H，d，J=11.6Hz），5.36（1H，q，J=6.8Hz），5.65（1H，dd，J=15.2，9.2Hz），6.25（1H，s），6.41（1H，dd，J=15.2，11.2Hz），6.64（1H，s），6.65（2H，s），6.72（1H，d，J=11.2Hz），6.82（1H，s）。LC-MS（M+Na+）計(jì)算值：865.3，實(shí)測(cè)值：865.3。Rt：6.59min。D-3AA-MDC：白色固體（0.1128g，兩步總產(chǎn)率25.2%），1HNMR（400MHz，CDCl3）：δ0.86（3H，s），1.22-1.38（4H，m），1.25（3H，d，J=9.2Hz），1.38-1.45（1H，m），1.48（3H，d，J=7.6Hz），1.56-1.70（4H，m），1.68（3H，s），1.75（1H，d，J=13.6Hz），2.19（1H，dd，J=14.4，2.8Hz），2.28-2.36（2H，m），2.65（1H，dd，J=14.2，12.0Hz）,2.80（1H，d，J=9.6Hz），3.01（3H，s），3.19（1H，d，J=13.2Hz），3.32（3H，s），3.42（1H，d，J=9.6Hz），3.47-3.54（3H，m），3.98（3H，s），4.29（1H，t，J=10.4Hz），4.88（1H，dd，J=11.8，3.2Hz），5.07（1H，q，J=7.6Hz），5.84（1H，dd，J=15.2，9.2Hz），6.23(1H，d,J=11.2Hz)，6.27(1H，s)，6.41(1H，dd，J=15.2，11.2Hz)，6.69（2H，s），6.79(1H，d，J=1.2Hz)，6.84(1H，d，J=1.2Hz)。LC-MS（M+Na+）計(jì)算值：865.3，實(shí)測(cè)值：865.3。Rt：6.98min。實(shí)施例5N-Me-L-Ala-MDC與MA-ACP縮合(合成L-3AA-MDC)將上步制備的粗品N-Me-L-Ala-MDC（0.5307mmol）以及MA-ACP（0.448g,2.123mmol）溶于DMF（25mL），冰水浴冷卻，加入EDC（0.407g,2.123mmol）。反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢柽^夜，加水淬滅，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，旋蒸除去溶劑。柱層析（硅膠，CH2Cl2/MeOH30:1）得到預(yù)期的產(chǎn)品L-3AA-MDC:白色固體（0.280g,兩步總產(chǎn)率62.6%）1HNMR（400MHz,CDCl3）:δ0.79（3H，s）,1.17-1.32（3H，m）,1.27（3H，s）,1.29（3H，s），1.40-1.76（7H，m），2.12-2.23（2H，m），2.31-2.45（1H，m），2.59（1H，t，J=12.8Hz），2.82（3H，s），3.01（1H，d，J=9.6Hz），3.10（1H，d，J=8.8Hz），3.17（3H，s），3.34（3H，s），3.42（2H，t，J=6.8Hz），3.48（2H，d，J=6.8Hz），3.62（1H，d，J=12.8Hz），3.97（3H,s），4.27（1H，t，J=11.2Hz），4.76（1H，d，J=11.6Hz），5.36（1H，q，J=6.8Hz），5.65（1H，dd，J=15.2，9.2Hz），6.25（1H，s），6.41（1H，dd，J=15.2，11.2Hz），6.64（1H，s），6.65（2H，s），6.72（1H，d，J=11.2Hz），6.82（1H，s）。LC-MS（M+Na+）計(jì)算值：865.3，實(shí)測(cè)值：865.3。Rt：6.59min。實(shí)施例6前體藥物抗體美登素偶聯(lián)物其代謝產(chǎn)物在體外對(duì)微管蛋白聚合的影響3AA-MDC、206-3AA-MDC、以及前體藥物抗體美登素偶聯(lián)物其代謝產(chǎn)物Cys-3AA-MDC和Lys-mcc-MDC體外對(duì)微觀蛋白聚合的影響是使用HTS-TubulinPolymerizationAssay檢測(cè)試劑盒（BK004P，美國(guó)）評(píng)價(jià)的。按照試劑盒說明書，檢測(cè)用96孔板放入37℃烘箱進(jìn)行預(yù)熱，同時(shí)設(shè)置酶標(biāo)儀（SpectraMax，美國(guó)分子儀器）的各項(xiàng)參數(shù)（波長(zhǎng)：405nm；溫度：37℃；每1分鐘讀一次，持續(xù)30分鐘）。配制藥物稀釋緩沖液G-PEM（990μlGeneralTubulinBuffer+10μlGTPStock），并且在冰上預(yù)冷。然后用G-PEM配制4mg/mltubulin、1μM3AA-MDC（N2’-去乙?；?N2’-(6-馬來酰亞胺基-1-氧代-己基)美登素）、1μM206-3AA-MDC、1μMCys-3AA-MDC、1μMLys-MCC-MDC、100μMPaclitaxel以及100μMNocodazole。將10μlG-PEM、3AA-MDC、206-3AA-MDC、Cys-3AA-MDC、Lys-MCC-MDC、Paclitaxel以及Nocodazole加入96孔板，然后快速在每個(gè)孔內(nèi)加入100μl4mg/mltubulin，并馬上放入酶標(biāo)儀中讀數(shù)。與PBS緩沖液相比，3AA-MDC、206-3AA-MDC、Cys-3AA-MDC、Lys-MCC-MDC非常顯著地抑制了微管蛋白的聚合。抑制劑Nocodazole在此作為負(fù)對(duì)照。代謝產(chǎn)物Cys-3AA-MDC通過3AA-MDC與半胱氨酸在堿二異丙基乙胺于二氯甲烷中反應(yīng)制備。LC-MS（M+H+）計(jì)算值：964.5，實(shí)測(cè)值：964.2。Rt：12.97min。代謝產(chǎn)物L(fēng)ys-MCC-MDC通過SMCC-MDC與賴氨酸在堿二異丙基乙胺于二甲基甲酰胺中反應(yīng)制備。LC-MS（M+H+）計(jì)算值：1103.7，實(shí)測(cè)值：1103.2。Rt：13.00以及13.18min。實(shí)施例7重組抗體表達(dá)和純化參照Woodetal.,JImmunol.145:3011(1990)等的方法，特異性的單克隆抗體在CHO細(xì)胞產(chǎn)生。含抗體基因的表達(dá)載體分別用常規(guī)的分子生物學(xué)方法構(gòu)建。CHO-k1細(xì)胞的一種衍生細(xì)胞系作為宿主細(xì)胞。高產(chǎn)穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建過程簡(jiǎn)單描述如下：宿主細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)于CD-CHO培養(yǎng)基，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的宿主細(xì)胞離心，重懸于新鮮的CD-CHO培養(yǎng)基，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞密度到1.43×107個(gè)/毫升，取600μl上述細(xì)胞懸液加入電擊杯，然后加入已線性化的質(zhì)粒40μg，用移液槍吸打使細(xì)胞與質(zhì)?；旌暇鶆?。用Bio-rad電轉(zhuǎn)儀電擊轉(zhuǎn)化，儀器參數(shù)設(shè)定為：電容：960μFD,電壓：300V。通常電擊時(shí)間為15-20毫秒為正常。把電擊后的細(xì)胞立即重懸于37℃預(yù)熱的CD-CHO培養(yǎng)基，每孔100μl分裝于96孔板，2-3天后加入等量的篩選培養(yǎng)基。測(cè)定96孔板細(xì)胞培養(yǎng)上清來測(cè)定抗體的表達(dá)水平。表達(dá)水平較高的克隆從96孔板轉(zhuǎn)移到24孔板，待細(xì)胞生長(zhǎng)到一定數(shù)量，把細(xì)胞轉(zhuǎn)入6孔板，使每孔5ml培養(yǎng)基含2×105個(gè)細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞的抗體產(chǎn)量和產(chǎn)率。通常20-30個(gè)克隆被轉(zhuǎn)到搖瓶做進(jìn)一步評(píng)價(jià)。最后5-8個(gè)表達(dá)量最高的克隆進(jìn)行亞克隆和進(jìn)一步的表達(dá)檢測(cè)。收獲料液，通過低速離心使細(xì)胞和培養(yǎng)基分離，把離心上清高速離心進(jìn)一步澄清。用蛋白A親和純化和離子交換純化，使用的介質(zhì)分別是GE公司生產(chǎn)的MabSelectSuRe和CaptoS。實(shí)施例8SMCC-MDC與抗EGFR抗體的偶聯(lián)抗體抗EGFR抗體（抗表皮生長(zhǎng)因子受體的抗體）用溶液A（50mM磷酸鉀，50mMNaCl和2mMEDTA，pH為6.5）稀釋至2.5mg/mL。加入SMCC-MDC，使SMCC-MDC與抗體的比率為7:1（摩爾當(dāng)量）。然后，加入DMA至總體積的15％，室溫?cái)嚢?小時(shí)使反應(yīng)物混勻。多余的未反應(yīng)的或水解的試劑和過量的SMCC-MDC使用G25在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）平衡的凝膠過濾柱，純化得到D-Lmcc-抗EGFR抗體。然后將偶聯(lián)物用pH為7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）中透析過夜，然后0.22微米的過濾器過濾，保存。每個(gè)抗表皮生長(zhǎng)因子受體的抗體最終偶聯(lián)SMCC-MDC的分子的數(shù)目通過測(cè)定偶聯(lián)物在252和280nm處的吸光度，這兩個(gè)波長(zhǎng)處SMCC-MDC和抗體使用公知的消光系數(shù)。美登素藥物與抗體的比率為3.5:1。實(shí)施例9抗EGFR抗體與3AA-MDC的偶聯(lián)抗體抗EGFR抗體（抗表皮生長(zhǎng)因子受體的抗體）用溶液B（50mM磷酸鉀，50mMNaCl和2mMEDTA，pH為8.0）稀釋至8.0mg/mL，然后用DTT（6摩爾當(dāng)量）不完全還原。在37℃孵育60分鐘后，用溶液A經(jīng)SephadexG-25樹脂洗脫交換。巰基抗體值通過測(cè)定吸光度確定，通過硫基與DTNB（5,5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸），Aldrich公司）的反應(yīng)物，然后測(cè)定412nm處的吸收值來確定硫基的濃度。偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)DMA的濃度為10%。3AA-MDC（3AA-MDC）按實(shí)例4、5方法制備。3AA-MDC與巰基數(shù)的比率為1.5:1.0（摩爾當(dāng)量）。將3AA-MDC加入已還原的抗體中，室溫?cái)嚢?小時(shí)后，加入5mM半胱氨酸繼續(xù)攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物經(jīng)超濾后，用G25在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）平衡的凝膠過濾柱純化。然后用0.22微米的濾器過濾，-80°C保存。batansine-0206抗體用DTNB測(cè)定未反應(yīng)的巰基數(shù)可得到藥物/抗體比率，通常，該方法可獲得的藥物/抗體比率為3.5:1.0。batansine-0206抗體可以通過紫外吸收測(cè)得濃度，通過尺寸排阻色譜測(cè)定聚集率，通過反向高效液相色譜法測(cè)定殘留的游離藥物。本發(fā)明所用的所有單克隆抗體和ADCs均為超過98%的單體蛋白。實(shí)施例10batansine-0206抗體偶聯(lián)物的特性我們使用EGFR陽性乳腺腫瘤細(xì)胞系MDA-MB-468和EGFR陰性細(xì)胞系BT474（購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心）評(píng)價(jià)了batansine-0206抗體對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制。簡(jiǎn)言之，MDA-MB-468和BT474用0.25％（體積/體積）的胰蛋白酶消化，使細(xì)胞剝離，然后懸浮于100μL完全培養(yǎng)基，10,000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板進(jìn)行培養(yǎng)。37℃過夜貼壁生長(zhǎng)，然后加入100μL含有不同濃度的抗EGFR抗體Bat0206和batansine-0206抗體的培養(yǎng)基。72小時(shí)后，用PBS（pH7.5）洗板兩次，用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8，日本同仁化學(xué)）試劑進(jìn)行相對(duì)細(xì)胞增殖分析。batansine-0206抗EGFR抗體和已經(jīng)上市的抗體藥Cetuximab能更為有效的抑制細(xì)胞的增殖(圖7)。而無論是裸抗抗EGFR抗體、Cetuximab、還是抗體藥物偶聯(lián)物batansine-0206抗體對(duì)EGFR表達(dá)陰性的BT474細(xì)胞沒有生長(zhǎng)抑制作用(圖8)。實(shí)施例11抗體藥物偶聯(lián)物:D-Lmcc-Bat0206抗體的制備抗體抗EGFR抗體bat0206用溶液A（50mM磷酸鉀，50mMNaCl和2mMEDTA，pH為6.5）稀釋至2.5mg/mL。加入SMCC-MDC，使SMCC-MDC與抗體的比率為7:1（摩爾當(dāng)量）。然后，加入DMA至15％，室溫?cái)嚢?小時(shí)使反應(yīng)物混勻。多余的未反應(yīng)的或水解的試劑和過量的SMCC-MDC使用G25在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）平衡的凝膠過濾柱，純化得到D-Lmcc-抗EGFR抗體。下一步是將偶聯(lián)物在pH為7.4的磷酸鹽緩沖液中透析過夜，然后0.22微米的過濾器過濾，保存。利用SMCC-MDC和抗體在兩個(gè)不同波長(zhǎng)的消光系數(shù)，通過測(cè)定偶聯(lián)物在252和280nm處的吸光度來測(cè)定每個(gè)抗表皮生長(zhǎng)因子受體的抗體最終偶聯(lián)SMCC-MDC的分子的數(shù)目。通常得到的抗體與美登素藥物的比率為1比3-5。D-Lmcc-Bat0206對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用是通過使用EGFR陽性乳腺腫瘤細(xì)胞系MDA-MB-468和EGFR陰性細(xì)胞系BT474來評(píng)價(jià)的。簡(jiǎn)言之，MDA-MB-468和BT474用0.25％（體積/體積）的胰蛋白酶消化，使細(xì)胞剝離，然后懸浮于100μL完全培養(yǎng)基，10,000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板。37℃過夜貼壁生長(zhǎng)，然后加入100μL含有不同濃度的Bat0206和D-Lmcc-Bat0206的培養(yǎng)基。72小時(shí)后，用PBS（pH7.5）洗板兩次，用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）試劑進(jìn)行相對(duì)細(xì)胞增殖分析。藥物偶聯(lián)物D-Lmcc-Bat0206與非偶聯(lián)的Bat0206相比，能更為有效的抑制表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）陽性細(xì)胞的增殖（圖9）。無論是未偶聯(lián)的抗體抗EGFR抗體Bat0206或者西妥昔單抗，還是藥物偶聯(lián)的D-Lmcc-Bat0206對(duì)表皮生長(zhǎng)因子受體陰性細(xì)胞系BT474的生長(zhǎng)均無抑制作用（圖10）。實(shí)施例12D-Lmcc-Bat0206抗體抗腫瘤特性D-Lmcc-Bat0206的抗腫瘤特性是通過對(duì)人A431腫瘤細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)抑制效果來評(píng)價(jià)的。簡(jiǎn)單描述如下：A431細(xì)胞(ATCC,CRL-7907)生長(zhǎng)于含10%的胎牛血清和添有2mM谷氨酰胺的DMEM培養(yǎng)基。收集A431細(xì)胞重懸于PBS，使100μl體積含有4x106細(xì)胞，取4-6周齡的雌性裸鼠，在其右腋注射100μl上述細(xì)胞懸液。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到80-200mm3時(shí)開始分組給藥，每組12只?？笶GFR抗體Bat0206和D-Lmcc-Bat0206抗體按每公斤體重5mg抗體量的劑量每三天一次總共給藥8次，給藥方式是腹腔注射，注射體積為每次100μl。腫瘤體積每三天測(cè)定一次。最后一次給藥并測(cè)定腫瘤體積大小后（第一次給藥24天后），動(dòng)物被立即以無痛至死，腫瘤被剝離并稱重。如圖11和12所示，在5mg/kg劑量下，Bat0206和D-Lmcc-Bat0206都顯著抑制了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。但與未偶聯(lián)的Bat0206相比，D-Lmcc-Bat0206抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的效果更明顯。實(shí)施例13抗體藥物偶聯(lián)物:D-Lspp-Bat0206的制備抗體抗EGFR抗體（抗表皮生長(zhǎng)因子受體的抗體）用溶液A（50mM磷酸鉀，50mMNaCl和2mMEDTA，pH為6.5）稀釋至8mg/mL。加入N-琥珀酰亞胺基-4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP)，SPP與抗體的比率為8:1（摩爾當(dāng)量）。反應(yīng)在5%DMA（v/v）中室溫?cái)嚢?小時(shí)使反應(yīng)物混勻，反應(yīng)液呈白色懸濁。使用G25在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）平衡的脫鹽柱純化抗體?？贵w的巰基化程度通過測(cè)定加入DTT前后，抗體在280nm和343nm吸光值的變化來測(cè)定。加入1.7倍摩爾量的N2'-脫乙?；?N2'-(3-巰基-1-氧代丙基)-美登素，調(diào)整巰基化的Bat0206濃度到2.5mg/mL。反應(yīng)在5%DMA（v/v）中室溫?cái)嚢?7小時(shí)。偶聯(lián)物通過離心澄清，使用SephadexG25在pH6.5的磷酸鹽緩沖液（水溶液）平衡的脫鹽柱純化抗體。純化的抗體經(jīng)0.22μM濾膜除菌(Millex-GV)。通過測(cè)定280nm和252nm的吸光值，每個(gè)抗EGFR抗體分子偶聯(lián)藥物的數(shù)大約為4.5。分子篩測(cè)定抗體偶聯(lián)物單體含量超過96%。D-Lspp-Bat0206和Bat0206對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制特性是使用EGFR陽性的A431和帶有KRAS突變的A549細(xì)胞來評(píng)價(jià)的。簡(jiǎn)言之，A431和A549細(xì)胞用0.25％（體積/體積）的胰蛋白酶消化，使細(xì)胞剝離，然后重懸于完全培養(yǎng)基，2000/孔的A431細(xì)胞和1500/孔的A549細(xì)胞分別接種于96孔板，每孔100μL培養(yǎng)基，37℃過夜貼壁生長(zhǎng)，然后加入100μL含有不同濃度的抗Bat0206和D-Lspp-Bat0206的培養(yǎng)基。72小時(shí)后，用PBS（pH7.5）洗板兩次，用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）試劑進(jìn)行相對(duì)細(xì)胞增殖分析。藥物偶聯(lián)物D-Lspp-Bat0206比Bat0206更加顯著地抑制EGFR陽性細(xì)胞A431的增殖（圖13）。此外，D-Lspp-Bat0206抗體也抑制k-ras突變的EGFR陽性的A549細(xì)胞，而未偶聯(lián)的抗EGFR抗體對(duì)A549細(xì)胞沒有抑制作用(圖14)。應(yīng)用了幾種不同的細(xì)胞來驗(yàn)證抗EGFR抗體藥物偶聯(lián)體的細(xì)胞殺傷功能，驚奇的發(fā)現(xiàn)，這些美登素化合物以不同的連接體通過不同的偶聯(lián)方法偶聯(lián)在同一抗體的不同部位，這些抗EGFR抗體藥物偶聯(lián)體對(duì)不同的腫瘤細(xì)胞有不同的選擇性和敏感性。例如，3AA-MDC-抗EGFR抗體對(duì)A431細(xì)胞比D-Lmcc-抗EGFR抗體提高100倍以上。而在HCT116細(xì)胞，D-Lspp-抗EGFR抗體比D-Lmcc-抗EGFR抗體提高50倍以上。實(shí)施例14Batansine-0606抗體抗乳腺癌細(xì)胞系BT474特性Batansine-0606的抗乳腺癌特性是通過對(duì)Her2表達(dá)陽性的人BT474腫瘤細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)抑制效果來評(píng)價(jià)的。簡(jiǎn)單描述如下：BT474細(xì)胞(ATCC,HTB-20)生長(zhǎng)于含10%的胎牛血清和添有2mM谷氨酰胺的RPMI-1640培養(yǎng)基。收集BT474細(xì)胞重懸于PBS,使100μl體積含有5×107細(xì)胞，取8-9周齡的雌性裸鼠，在其右腋注射200μl上述細(xì)胞懸液。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到150-200mm3時(shí)開始分組給藥，每組10只。Batansine-0606和BAT0606分別按每公斤體重5、15mg抗體量的劑量每三周一次總共給藥3次，對(duì)照抗體（利妥昔單抗）按每公斤體重15mg抗體量的劑量每三周一次總共給藥3次。給藥方式是靜脈注射，注射體積為每次100μl。腫瘤體積每周測(cè)定兩次。最后一次給藥繼續(xù)觀察一周并測(cè)定腫瘤體積大小后（第一次給藥49天后），動(dòng)物被立即以無痛至死。在同等劑量下，Batansine-0606比BAT0606更能顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。至第10天，Batansine-060615mg/kg劑量下已檢測(cè)不到腫瘤。實(shí)施例15SMCC-MDC與抗HER2抗體Bat0606的偶聯(lián)Bat0606用溶液A（50mM磷酸鉀，50mMNaCl和2mMEDTA，pH為6.5）稀釋至2.5mg/mL。加入SMCC-MDC，使SMCC-MDC與抗體的比率為7:1（摩爾當(dāng)量）。然后，加入DMA至總體積的15％，室溫?cái)嚢?小時(shí)使反應(yīng)物混勻。多余的未反應(yīng)的或水解的試劑和過量的SMCC-MDC使用G25在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）平衡的凝膠過濾柱，純化得到D-Lmcc-Bat0606。然后將偶聯(lián)物用pH為7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）中透析過夜，然后0.22微米的過濾器過濾，保存。每個(gè)Bat0606的抗體最終偶聯(lián)SMCC-MDC的分子的數(shù)目通過測(cè)定偶聯(lián)物在252和280nm處的吸光度，這兩個(gè)波長(zhǎng)處SMCC-MDC和抗體使用公知的消光系數(shù)。美登素藥物與抗體的比率為3.5:1。實(shí)施例16Bat0606與Batansine的偶聯(lián)Bat0606用溶液B（50mM磷酸鉀，50mMNaCl和2mMEDTA，pH為8.0）稀釋至8.0mg/mL，然后用DTT（6摩爾當(dāng)量）不完全還原。在37℃孵育60分鐘后，用溶液A經(jīng)SephadexG-25樹脂洗脫交換。巰基抗體值通過測(cè)定吸光度確定，通過硫基與DTNB（5,5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸），Aldrich公司）的反應(yīng)物，然后測(cè)定412nm處的吸收值來確定硫基的濃度。偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)DMA的濃度為10%。Batansine按實(shí)例4、5方法制備。Batansine與巰基數(shù)的比率為1.5:1.0（摩爾當(dāng)量）。將Batansine加入已還原的抗體中，室溫?cái)嚢?小時(shí)后，加入5mM半胱氨酸繼續(xù)攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物經(jīng)超濾后，用G25在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）平衡的凝膠過濾柱純化。然后用0.22微米的濾器過濾，-80°C保存。Batansine-0606用DTNB測(cè)定未反應(yīng)的巰基數(shù)可得到藥物/抗體比率，通常，該方法可獲得的藥物/抗體比率為3.5:1.0。Batansine-0606可以通過紫外吸收測(cè)得濃度，通過尺寸排阻色譜測(cè)定聚集率，通過反向高效液相色譜法測(cè)定殘留的游離藥物。本發(fā)明所用的所有單克隆抗體和ADCs均為超過98%的單體蛋白。實(shí)施例17Batansine-0606的特征研究我們使用HER2陽性乳腺腫瘤細(xì)胞系SK-BR-3和HER2陰性細(xì)胞系A(chǔ)549（購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心）評(píng)價(jià)了Batansine-0606對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制。簡(jiǎn)言之，SK-BR-3和A549用0.25％（體積/體積）的胰蛋白酶消化，使細(xì)胞剝離，然后懸浮于100μL完全培養(yǎng)基，10,000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板進(jìn)行培養(yǎng)。37℃過夜貼壁生長(zhǎng)，然后加入100μL含有不同濃度的Bat0606和Batansine-0606的培養(yǎng)基。72小時(shí)后，用PBS（pH7.5）洗板兩次，用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8，日本同仁化學(xué)）試劑進(jìn)行相對(duì)細(xì)胞增殖分析。Batansine-0606比抗Bat0606能更為有效的抑制HER2陽性細(xì)胞系SK-BR-3的增殖(圖20)。而無論是裸抗Bat0606、還是抗體藥物偶聯(lián)物Batansine-0606對(duì)HER2表達(dá)陰性的A549細(xì)胞沒有生長(zhǎng)抑制作用(圖21).實(shí)施例18D-Lmcc-Bat0606的功能D-Lmcc-Bat0606對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用是通過使用HER2陽性乳腺腫瘤細(xì)胞系SK-BR-3和HER2陰性細(xì)胞系A(chǔ)549來評(píng)價(jià)的。簡(jiǎn)言之，SK-BR-3和A549用0.25％（體積/體積）的胰蛋白酶消化，使細(xì)胞剝離，然后懸浮于100μL完全培養(yǎng)基，10,000個(gè)細(xì)胞接種于96孔板。37℃過夜貼壁生長(zhǎng)，然后加入100μL含有不同濃度的Bat060和D-Lmcc-Bat0606的培養(yǎng)基。72小時(shí)后，用PBS（pH7.5）洗板兩次，用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）試劑進(jìn)行相對(duì)細(xì)胞增殖分析。藥物偶聯(lián)物D-Lmcc-Bat0606與抗Bat0606相比，更為有效的抑制HER2陽性細(xì)胞系SK-BR-3的增殖（圖22）。無論是未偶聯(lián)的Bat0606，還是藥物偶聯(lián)的D-Lmcc-Bat0606抗體對(duì)HER2陰性細(xì)胞系A(chǔ)549的生長(zhǎng)均無抑制作用（圖23）。實(shí)施例19大鼠中血清穩(wěn)定性通過Sprague-Dawley大鼠對(duì)Batansine-0606的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。于第0天，通過一側(cè)尾靜脈為動(dòng)物施用單次10mg/kgBatansine-0606。在給藥后0（給藥前）、10和30分鐘；1、2、4、8、24和36小時(shí)；和2、3、4、7、14、21、28天的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集大約200μL全血，離心（14，000×g，3分鐘）后分離血清。用ELISA方法分別測(cè)定血清中抗HER2抗體以及Batansine-0606的濃度。血清中抗HER2抗體測(cè)定方法如下：將HER2ECD蛋白用包被液(碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖液，pH9.6)稀釋到一定濃度(2μg/ml)后包被于96孔板上，于4℃放置過夜。棄去孔中液體，甩干后加入封閉液(PBS，1％BSA，0.05%Tween20)，室溫放置1小時(shí)，再用PBST（PBS，0.05%Tween20）清洗，甩干。用稀釋液PBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品至一定濃度，表達(dá)上清根據(jù)情況適當(dāng)稀釋，分別加樣至96孔板中，37℃孵育2小時(shí)后，PBST清洗，甩干。用稀釋液PBS稀釋酶聯(lián)抗體(HRP-鼠抗人IgG特異性抗體)至適當(dāng)濃度，加至96孔板中，37℃下反應(yīng)2小時(shí)，棄液，PBST清洗，甩干。每孔加入四甲基聯(lián)苯胺顯色劑，37℃孵育10min。每孔加入1N硫酸終止液，終止反應(yīng)。在490nm處讀取吸收值OD。血清中Batansine-0606測(cè)定方法如下：HER2ECD蛋白包被以及標(biāo)準(zhǔn)品、血清樣品的處理如上所述。樣品孵育2小時(shí)后，PBST清洗，甩干。每孔加入兔抗maytansine抗體，37℃下反應(yīng)1小時(shí)，棄液，PBST清洗，甩干。用稀釋液PBS稀釋酶聯(lián)抗體(HRP-羊抗鼠IgG特異性抗體)至適當(dāng)濃度，加至96孔板中，37℃下反應(yīng)1小時(shí)。顯色反應(yīng)及吸收值OD測(cè)定如上所述。用WinNonlin軟件的非房室模型模塊分析了藥物代謝的動(dòng)力學(xué)參數(shù)。Batansine-0606的抗原結(jié)合部分的半衰期為571.07小時(shí)，Batansine-0606抗體偶聯(lián)的藥物部分半衰期為88.36小時(shí)。實(shí)施例20Batansine-0606抗胃癌特性Batansine-0606的抗胃癌特性是通過對(duì)Her2表達(dá)陽性的人NCI-N87腫瘤細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)抑制效果來評(píng)價(jià)的。簡(jiǎn)單描述如下：NCI-N87細(xì)胞(ATCC,CRL-5822)生長(zhǎng)于含10%的胎牛血清和添有2mM谷氨酰胺的RPMI-1640培養(yǎng)基。收集NCI-N87細(xì)胞重懸于PBS,使100μl體積含有5×106細(xì)胞，取4-8周齡的雌性裸鼠，在其右腋注射200μl上述細(xì)胞懸液。當(dāng)腫瘤體積達(dá)到100-200mm3時(shí)開始分組給藥，每組10只。Batansine-0606分別按每公斤體重5mg或15mg抗體量的劑量每周一次總共給藥5次。把頭分別按每公斤體重5mg或15mg抗體量的劑量每周一次總共給藥3次，然后每周1次用Batansine-0606分別按每公斤體重5mg或15mg抗體量的劑量給藥兩次。對(duì)照抗體（利妥昔單抗）按每公斤體重15mg抗體量的劑量每周一次總共給藥5次。給藥方式是靜脈注射，注射體積為每次100μl。腫瘤體積每周測(cè)定兩次。最后一次給藥繼續(xù)觀察一周并測(cè)定腫瘤體積大小后（第一次給藥35天后），動(dòng)物被立即以無痛至死。Batansine-06065mg/kg或15mg/kg，從第11天開始，該組動(dòng)物腫瘤體積快速減小。至第24天，Batansine-060615mg/kg已檢測(cè)不到腫瘤。與未偶聯(lián)的抗體BAT0606相比，Batansine-0606顯著抑制了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。實(shí)施例21SMCC-MDC與抗CD20抗體Bat1206的偶聯(lián)Bat1206抗體用溶液A（50mM磷酸鉀，50mMNaCl和2mMEDTA，pH為6.5）稀釋至2.5mg/mL。加入SMCC-MDC，使SMCC-MDC與抗體的比率為7:1（摩爾當(dāng)量）。然后，加入DMA至總體積的15％，室溫?cái)嚢?小時(shí)使反應(yīng)物混勻。多余的未反應(yīng)的或水解的試劑和過量的SMCC-MDC使用G25在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）平衡的凝膠過濾柱，純化得到D-Lmcc-Bat1206。然后將偶聯(lián)物用pH為7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）中透析過夜，然后0.22微米的過濾器過濾，保存。每個(gè)抗CD20的抗體最終共軛SMCC-MDC的分子的數(shù)目通過測(cè)定偶聯(lián)物在252和280nm處的吸光度，這兩個(gè)波長(zhǎng)處SMCC-MDC和抗體使用公知的消光系數(shù)。美登素藥物與抗體的比率為3.5:1。實(shí)施例22Bat1206與Batanine的偶聯(lián)Bat1206抗體用溶液B（50mM磷酸鉀，50mMNaCl和2mMEDTA，pH為8.0）稀釋至8.0mg/mL，然后用DTT（6摩爾當(dāng)量）不完全還原。在37℃孵育60分鐘后，用溶液A經(jīng)SephadexG-25樹脂洗脫交換。巰基抗體值通過測(cè)定吸光度確定，通過硫基與DTNB（5,5'-二硫代雙（2-硝基苯甲酸），Aldrich公司）的反應(yīng)物，然后測(cè)定412nm處的吸收值來確定硫基的濃度。偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)DMA的濃度為10%。Batanine按實(shí)例4、5方法制備。Batanine與巰基數(shù)的比率為1.5:1.0（摩爾當(dāng)量）。將Batanine加入已還原的抗體中，室溫?cái)嚢?小時(shí)后，加入5mM半胱氨酸繼續(xù)攪拌1小時(shí)。反應(yīng)混合物經(jīng)超濾后，用G25在pH值7.4的磷酸鹽緩沖液（水溶液）平衡的凝膠過濾柱純化。然后用0.22微米的濾器過濾，-80°C保存。Batanine-1206用DTNB測(cè)定未反應(yīng)的巰基數(shù)可得到藥物/抗體比率，通常，該方法可獲得的藥物/抗體比率為3.5:1.0。Batanine-1206可以通過紫外吸收測(cè)得濃度，通過尺寸排阻色譜測(cè)定聚集率，通過反向高效液相色譜法測(cè)定殘留的游離藥物。本發(fā)明所用的所有單克隆抗體和ADC均為超過98%的單體蛋白。實(shí)施例23使用CD20陽性Raji細(xì)胞系評(píng)價(jià)Batanine-1206抗體偶聯(lián)物的生長(zhǎng)抑制特性。簡(jiǎn)言之，10,000/孔的Raji細(xì)胞接種于96孔板，每孔100μL培養(yǎng)基，37℃過夜生長(zhǎng)，然后加入100μL含有不同濃度的抗Bat1206抗體和Batanine-1206偶聯(lián)物的培養(yǎng)基。72小時(shí)后，用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8（CCK-8）試劑進(jìn)行相對(duì)細(xì)胞增殖分析。如圖25所示，Batanine-1206比未偶聯(lián)的抗Bat1206更有效的抑制了Raji細(xì)胞的生長(zhǎng)。實(shí)施例24藥物與抗體的偶聯(lián)物作為前體藥物在細(xì)胞內(nèi)代謝釋放有效化合物的檢測(cè)3AA-MDC與抗體的偶聯(lián)物在細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物的分析參照Erickson等在CancerRes66:4426-4433(2006)的方法。簡(jiǎn)單描述如下：離心收集A431、BT474、Raji等細(xì)胞，分別重懸于含有10-7mol/L抗體藥物偶聯(lián)物的3ml培養(yǎng)基。置于37℃培養(yǎng)箱3-30小時(shí)。通過離心(2,000g,5分鐘)使細(xì)胞和培養(yǎng)基分離。棄去上清，細(xì)胞重懸于3mLHBBS緩沖液，向細(xì)胞懸液中加入0.6ml丙酮后，樣品放于-80℃至少1小時(shí)。離心，小心取上清，棄去管底的蛋白沉淀。向上清中加入少許醋酸（5%v/v），并把酸化了的樣品冷凍干燥。把干燥好的樣品溶解于0.12ml的含有0.025%的三氟乙酸的乙腈（20%v/v）中。取該溶液0.1ml上樣進(jìn)行LC-MS分析。Batansine-0206的代謝產(chǎn)物：LC-MS（M+H+）計(jì)算值：964.5，實(shí)測(cè)值：964.2。D-Lmcc-Bat0206的代謝產(chǎn)物：LC-MS（M+H+）計(jì)算值：1103.7，實(shí)測(cè)值：1103.3。