專利名稱：雌激素劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作雌激素劑的新的3-4-(2-苯基-吲哚-1-基甲基)苯基-丙烯酰胺化合物和新的2-苯基-1-4-(氨基-1-基-烷-1-炔基)芐基-1H-吲哚-5-醇化合物，以及使用這些化合物的藥物組合物和治療方法。
背景技術(shù)：
激素替代治療用于預(yù)防絕經(jīng)后婦女的骨的損失早已為人所知。通常是用含有乙酸纖維素纖維，雌三醇，乙炔雌二醇的那些藥劑或從天然材料(從Wyeth-Ayerst中得到的馬雌激素)分離的絡(luò)合雌激素來滿足雌激素的供給。對(duì)于有些病人，由于非拮抗雌激素(不與孕激素聯(lián)合給藥的雌激素)對(duì)子宮組織引起的增生影響，這種治療是禁忌的。這種增生是與子宮內(nèi)膜異位和/或子宮內(nèi)膜癌癥的風(fēng)險(xiǎn)的增加相關(guān)的。非拮抗雌激素在乳房組織的作用還不甚清楚，但卻有些相關(guān)。雌激素的滿足可以保持骨的節(jié)省作用，同時(shí)又大大降低子宮和乳房的增生作用是明顯的。某些非甾體抗雌激素在卵巢切除鼠模型及人體臨床試驗(yàn)中均顯示有保持骨質(zhì)的作用。例如三苯氧胺，用于乳房癌癥治療中癥狀的減輕。已經(jīng)證明其在人骨中起到類雌激素拮抗劑作用。然而，它在子宮內(nèi)也是部分拮抗劑，這是有些相關(guān)的原因。那洛亞芬，一個(gè)苯并噻吩抗雌激素，在卵巢切除鼠中顯示刺激子宮生長的程度小于三苯氧胺同時(shí)保持骨節(jié)省的能力。組織選擇性雌激素的適宜綜述是Tissue-Selective Actions Of EstrogenAnalogs，Bone Vol.17，No.4，October 1995，181s-190S。
用吲哚作雌激素拮抗劑由Von Angerer在Chemical Abstracts，Vol.99，No.7(1983)，文摘號(hào)53886U，也見于J.Med.Chem.1990，33，2635-2640；J.Med.Chem.1987，30，131-136。也見于Ger.Offen.，DE 3821148A1 891228和WO 96/03375。此外，見于WO，A，9323374(Otsuka Pharmaceutical Factory，Inc)。 Yon An9erer的工作僅限于吲哚氮原子上聯(lián)接脂肪鏈和然后聯(lián)接堿性胺(或酰胺)或，芐基但不具有堿性胺。在Otsuka(日本)的世界專利中含有與本發(fā)明相關(guān)的除R3(如式I所示)定義為-SR其中R是烷基的化合物。此外，在其專利中吲哚氮原子沒有側(cè)鏈，這與本發(fā)明權(quán)利要求或?qū)嵤├o出的結(jié)構(gòu)相同。相關(guān)的專利WOA 9310741描述了5-羥基吲哚。WO A 9517383(kar Bio AB)描述了脂肪鏈化合物。
WO A 9517383(Karo Bio AB)描述了具有長直鏈的吲哚抗雌激素。另-個(gè)相關(guān)專利WO A 9310741描述了具有寬范圍側(cè)鏈的5-羥基吲哚。WO 93/23374(Otsuka Pharmacenticals，(日本)描述的化合物與本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)更相似，除了此處式I和II中關(guān)于R3在下面定義為硫代烷基的結(jié)構(gòu)之外，并且參考文獻(xiàn)中未公開那些與本發(fā)明化合物具有相同結(jié)構(gòu)的具有吲哚氮原子側(cè)鏈的化合物。
本發(fā)明描述式(I)和(II)所示的通用結(jié)構(gòu)類型的化合物是雌激素激動(dòng)劑/拮抗劑，用于治療與雌激素缺乏有關(guān)的疾病。本發(fā)明化合物顯示強(qiáng)的與雌激素受體的結(jié)合力。這些化合物被證明是沒有內(nèi)在的雌激素特性的抗雌激素。在三天卵巢切除鼠模型中，式(I)化合物在單獨(dú)給藥時(shí)能夠拮抗17β一雌二醇的作用同時(shí)又沒有子宮刺激。
本發(fā)明包括如下的式(I)和(II)化合物及其藥用鹽
其中R1選自H，OH或其C1-C4酯或烷基醚，或鹵素；R2，R3，R4，R5和R6獨(dú)立地選自H，OH或其C1-C4酯或烷基醚，鹵素，氰基，C1-C6烷基或三氟甲基，條件是，當(dāng)R1是H時(shí)，R2不是OH；n是2或3；X選自H，C1-C6烷基，氰基，硝基，三氟甲基，鹵素；Z選自
Y選自a)部分
其中R7和R8獨(dú)立地選自以下一組的基團(tuán)H，C1-C6烷基，苯基或由-(CH2)p-連接，其中p是整數(shù)2至6，以便形成環(huán)，環(huán)可選擇地被最多3個(gè)選自下列的取代基取代；氫原子，羥基，鹵素，C1-C4烷基，三鹵代甲基，C1-C4烷氧基，三鹵代甲氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞磺?；珻1-C4烷基磺?；?，羥基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONH(C1-C4)，-NH3，C1-C4烷基氨基，C1-C4二烷基氨基，-NHSO2(C1-C4)，-NHCO(C1-C4)，和-NO2。
b)五-，六-或七是飽和的，不飽和的或部分不飽和的雜環(huán)，該雜環(huán)含有至多兩個(gè)選自由-O-，-NH-，-N(C1-C4烷基)-，-N＝，和-S(O)m-(其中m是0-2的整數(shù))組中的雜原子，該雜環(huán)可選擇地被1-3個(gè)獨(dú)立地選自由下列基團(tuán)組成的取代基取代；氫原子，羥基，鹵素，C1-C4烷基，三鹵代甲基，C1-C4烷氧基，三鹵代甲氧基，C1-C4酰氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞磺?；?，C1-C4烷基磺?；?，羥基(C1-C4)烷基，被1至3個(gè)(C1-C4)烷基，-CO2H-，-CN-，-CONHR1-，-NH2-，(C1-C4)烷基氨基，二(C1-C4)烷基氨基，-NHSO2R1-，-NHCOR1-，-NO2-取代的苯基；c)由一個(gè)五或六員雜環(huán)與苯環(huán)稠合組成的二環(huán)環(huán)系，該雜環(huán)含有最多2個(gè)選自-O-，-NH-，-N(C1-C4烷基)-，和-S(O)m-(其中m是0-2的整數(shù))的雜原子，該雜環(huán)可選擇地被1-3個(gè)獨(dú)立地選自由下列基團(tuán)組成的取代基取代；氫原子，羥基，鹵素，C1-C4烷基，三鹵代甲基，C1-C4烷氧基，三鹵代甲氧基，C1-C4酰氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞磺?；珻1-C4烷基磺酰基，羥基(C1-C4)烷基，被1至3個(gè)(C1-C4)烷基，-CO2H-，-CN-，-CONHR1-，-NH2-，(C1-C4)烷基氨基，二(C1-C4)烷基氨基，-NHSO2R1-，-NHCOR1，-NO2取代的苯基。
上述通過連環(huán)的R7和R8形成的環(huán)可以包括但不限于為氮丙啶，氮雜環(huán)丁烷，吡咯烷，哌啶，或六亞甲基胺環(huán)。
更優(yōu)選的是，當(dāng)R7和R8連接在一起為-(CH2)p-時(shí)，這樣形成的環(huán)可選擇地被1-3個(gè)含有C1-C3烷基，三氟甲基，鹵原子，氫原子，苯基，硝基，-CN的取代基所取代。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物是那些含有上面式I或II結(jié)構(gòu)的化合物及其藥用鹽，其中R1是OH；R2-R6如上定義；X則選自Cl，NO2，CN，CF3，或CH3；和Y是部分
和R7和R8連接在一起為-(CH2)p-，其中p是4至6的整數(shù)，形成可選擇地被最多3個(gè)選自下列的取代基取代的環(huán)，這些取代基是氫原子，羥基，鹵素，C1-C4烷基，三鹵代甲基，C1-C4烷氧基，三鹵代甲氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞磺?；珻1-C4烷基磺?；u基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONH(C1-C4)烷基，-NH3，(C1-C4)烷基氨基，二(C1-C4)烷基氨基，-NHSO2(C1-C4)，-NHCO(C1-C4)烷基，和-NO2。
本發(fā)明包括與無機(jī)或有機(jī)酸通過加成反應(yīng)形成的藥用鹽。無機(jī)酸如鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硫酸，磷酸，硝酸可以使用，有機(jī)酸如乙酸，丙酸，檸檬酸，馬來酸，蘋果酸，酒石酸，鄰苯二甲酸，琥珀酸，甲磺酸，對(duì)甲苯磺酸，萘磺酸，樟腦磺酸，苯磺酸同樣也可使用。已知含有堿性氮原子的化合物可以與許多不同的酸(質(zhì)子酸和非質(zhì)子酸)配合并且本發(fā)明化合物優(yōu)選以其酸加成鹽形成服用。
本發(fā)明化合物是部分雌激素激動(dòng)劑并且具有與雌激素受體的高親和性。不同于許多雌激素，然而，這些化合物不引起子宮濕重量的增加。這些化合物在子宮中是抗雌激素的并且能全完拮抗雌激素激動(dòng)劑在子宮組織中的營養(yǎng)作用。這些化合物可用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物由雌激素不足引起的或與之有關(guān)的疾病狀態(tài)或癥狀。
本發(fā)明化合物通過降低膽固醇和預(yù)防骨的損失而具有類雌激素激動(dòng)劑的作用。因此，這些化合物可用于治療許多疾病包括骨質(zhì)疏松，前列腺肥大，不育癥，乳腺癌，子宮內(nèi)膜腫瘤，心血管疾病，避孕，阿耳茨海默氏疾病，黑素瘤。此外，這些化合物能用于絕經(jīng)后婦女激素的替代沿療或?qū)ζ渌萍に夭蛔銧顟B(tài)可使雌激素供給的補(bǔ)充。
本發(fā)明化合物也可用于骨的損失的治療方法中，這種骨損失是由于個(gè)體中新的骨組織的形成和老組織的再吸收的不平衡，而導(dǎo)致骨的凈損失。這種骨的缺失可導(dǎo)致大量個(gè)體，特別是絕經(jīng)后婦女，子宮切除后婦女，接受或已接受長期皮質(zhì)甾類治療的患者，性腺發(fā)育不全者，和患庫興氏綜合癥的患者。對(duì)于骨復(fù)位的特別需要可以給骨折，有缺陷骨架的患者，和那些接受與骨相關(guān)的外科手術(shù)和/或假體移植的患者使用這些化合物。除了上述這些問題，這些化合物還可用于治療關(guān)節(jié)炎，佩吉特疾病，骨軟化，骨質(zhì)缺乏，子宮內(nèi)膜癌癥，多發(fā)性骨髓瘤和其它形式的對(duì)骨組織有害影響的癌癥。此外所列的疾病的治療方法可以理解為包括給需要這種治療的患者服用藥學(xué)有效量的一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明化合物或其藥用鹽。本發(fā)明也包括使用一個(gè)或多個(gè)這些化合物，和/或其藥用鹽，與一個(gè)或多個(gè)藥用載體，賦形劑等的藥物組合物。
可以理解，這些化合物的服藥劑量，方案和方式將根據(jù)疾病和被治療的患者變化并且涉及醫(yī)師的判斷。優(yōu)選在服用此處的化合物時(shí)開始以低劑量并增加直至達(dá)到所需效果。
這些化合物的有效服用的劑量以大約0.1mg/天至大約1000mg/天。優(yōu)選地，服藥可以約50mg/天至600mg/天的單劑或以二或多個(gè)分劑量服用。這種劑量可以直接用活性化合物以多種方式服藥到患者的血流中，包括口服，非腸道給藥(包靜脈注射，腹腔注射和皮下注射)，和透皮給藥。
為了公開的目的，透皮給藥可以理解為包括所有通過體表或身體的內(nèi)通道包括上皮和粘膜組織的服藥。這種服藥可通過用這些化合物或其藥用鹽在洗液，乳劑，泡沫，碎片，懸浮液，溶液和栓劑(直腸或陰道)中來完成。
含有本發(fā)明化合物的口服制劑包括任何的常規(guī)使用的口服形式，包括片劑，膠囊，頰給藥形式，錠劑，糖錠和口服液，懸浮液或溶液。膠囊可以含有活性化合物與惰性充填劑和/或稀稀劑例如藥用淀粉(如玉米，馬鈴薯或木薯淀粉)，糖，人造甜味劑，粉沫纖維素，如晶體和微晶纖維素，面粉，明膠，樹膠等的混合物。可用的片劑可以通過常規(guī)的壓片。濕粒化或干?；椒ú⑹褂盟幱孟♂寗澈蟿?，潤滑劑，崩解劑，懸浮劑或穩(wěn)定劑，包括，但不限于硬脂酸鎂，硬脂酸，滑石，十二烷基硫酸鈉，微晶纖維素，羧甲基纖維素鈣，聚乙烯吡咯烷酮，明膠，藻酸，金合歡膠，黃原膠，檸檬酸鈉，復(fù)合硅膠，碳酸鈣，甘氨酸，糊精，蔗糖，山梨醇，磷酸二鈣，硫酸鈣，乳糖，高嶺土，甘露糖醇，氯化鈉，滑石，干淀粉和糖粉制成。此處的口服制劑可以用標(biāo)準(zhǔn)延遲或控時(shí)釋放制劑來改變活性化合物的吸收。栓劑可以用常規(guī)材料，包括可可油，加或不加蠟來改變栓劑的熔點(diǎn)，和甘油來制備。水溶性栓劑基質(zhì)，例如不同分子量的聚乙二醇也可使用。
本發(fā)明化合物一般可根據(jù)下列的反應(yīng)流程1和2來合成。流程

圖1
流程圖1中起始的吲哚的合成可通過在適宜的高沸點(diǎn)溶劑如DMF中被適當(dāng)取代的苯胺(1)和被適當(dāng)取代的α-溴代苯基苯丙酮(2)來完成。然后將產(chǎn)物用4-溴芐基溴化物進(jìn)行烷基化得取代的吲哚(3)。在這一點(diǎn)上，可將苯酚(如果出現(xiàn))去保護(hù)。通常，苯酚用芐醚保護(hù)并可常規(guī)地用TMSI去除?？梢栽贖eck反應(yīng)條件下用純Et3N或Et3N/CH3CN結(jié)合丙烯酰胺。流程圖2
流程圖2中起始的吲哚的合成可以在適當(dāng)?shù)母叻悬c(diǎn)溶劑如DMF中加熱被適當(dāng)取代的苯胺(1)與被適當(dāng)取代的α-溴代苯基烷基苯酮(2)而完成。然后可將產(chǎn)物用4-碘芐基溴化物烷基化而得到吲哚(3)。在這一點(diǎn)，可將苯酚(如果出現(xiàn))脫保護(hù)。通常，苯酚可以用芐醚保護(hù)并可常規(guī)地用TMSI去除。然后可以將炔丙胺結(jié)合到苯基碘化物上。炔丙胺一般可由炔基溴化物或甲苯磺酰炔基酯通過與適當(dāng)?shù)陌愤M(jìn)行取代來制備。取代反應(yīng)可以就地完成，不需分離炔丙胺。3-位不是烷基取代的化合物可以通過先合成3-位有H取代的吲哚來制備。然后可將吲哚進(jìn)行親電鹵化，甲?；龋玫狡渌?-位取代的化合物。
此處用于反應(yīng)的溶劑是不需進(jìn)一步純化的無水Aldrich Sure Seal TM。試劑一般為Aldrich的并不需進(jìn)一步純化便使用。所有反應(yīng)是在氮?dú)庵羞M(jìn)行。色譜中使用的是230-400目硅膠(Merck Grade 60，AldrichChemical Company)。薄層色譜用EM Science的硅膠60 P254板。1H NMR譜是用Bruker AM-400儀在DMSO中得到的并且化學(xué)位移以ppm表示。熔點(diǎn)用Thomas-Hoover儀測(cè)定并且未校正。IR譜是用Perkin-Elmer衍射光柵計(jì)或Perkin-Elmer 784分光光度計(jì)記錄的。質(zhì)譜是用Kratos MS 50或Finnigan 8230質(zhì)譜儀測(cè)定的。元素分析是用Perkin-Elmer2400元素分析儀測(cè)定的。分析值在0.4％理論值中。
本發(fā)明通過下列不依限制的實(shí)施例來進(jìn)一步說明。
實(shí)施例15-芐氧-2-(4-芐氧基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚在燒瓶中加入4-芐氧基苯胺(45g，0.23mol)，4’-芐氧-2-溴苯基苯丙酮(21g，O.066mol)，和DMF(50ml)。將反應(yīng)物回流加熱30分鐘然后冷卻至室溫，然后使其在EtOAc(250ml)和1N HCl(水溶液)(100mL)間分配。將EtOAc部分用NaHCO3(水溶液)和鹽水洗滌，用MgSO4干燥。將溶液濃縮并將殘余物用CH2Cl2提取并加入己烷沉淀出25g固體粗品。將固體溶于CH2Cl2中并在硅膠上蒸發(fā)再用CH2Cl2/己烷(1∶5)進(jìn)行色譜分離得到9.2g褐色固體(33％)MPt＝150-152℃；1H NMR(DMSO)10.88(s，1H)，7.56(d，2H，J＝8.8Hz)，7.48(d，4H，J＝7.9Hz)，7.42-7.29(m，6H)，7.21(d，1H，J＝7.0Hz)，7.13(d，2H，J＝8.8Hz).7.08(d，1H，J＝2.2Hz)，6.94(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，5.16(s，2H)，5.11(s，2H)，2.33(s，3H)IR(KBr)3470，2880，2820，1620cm-1；MS cI m/z419.
實(shí)施例25-芐氧-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-1H-吲哚類似地制備標(biāo)題化合物(3)Mp＝132℃，1HNMR(DMSO)11.0(s，1H)，7.68-7.64(m，2H)，7.49-7.47(m，2H)，7.41-7.31(m，5H)，7.23(d，1H，J＝8.8Hz)，7.10(d，1H，J＝2.4Hz)，6.82(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，5.11(s，2H)，2.34(s，3H)；MS EI m/z 331；CHN calcd for C22H18FNO。
實(shí)施例35-芐氧-2-(4-芐氧-苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴化物)-吲哚將60％ NaH(0.17g，7.1mmol)的DMF(20mL)溶液冷卻至0℃用在其中滴加芐氧吲哚1(2.5g，5.94mmol)的DMF(10m1)溶液來處理。15分鐘后，再滴加4’-溴芐基溴化物(1.63g，6.53mmol)的DMF(10mL)溶液。將反應(yīng)物在0℃攪拌5分鐘然后再在室溫20分鐘。將反應(yīng)混合物用乙醚(300mL)稀釋并用NH4Cl(2×25mL)然后NHCO3(1×25mL)，和鹽水(25mL)洗滌。將有機(jī)提取物用MgSO4干燥并濃縮。將殘余物用THF/己烷結(jié)晶得到2.7g(77％)2Mp＝144-146℃；1HNMR(CDCl3)7.51-7.36(m，8H)，7.34(d，4H，J＝8.6Hz)，7.20(d，2H，J＝8.8Hz)，7.15(d，1H，J＝2.4Hz)，7.03-7.00(m，3H)，6.89(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，6.80(d，2H，J＝8.6Hz)，5.14(s，2H)，5.12(s，2H)，5.09(s，2H)，2.25(s，3H)；IR(KBr)3400，3020，1600cm-1；MS eI m/z587.
實(shí)施例45-芐氧-2-(4-氟-苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴化物)-吲哚類似地制備標(biāo)題化合物化合物5。Mp＝139-139.5℃；1H NMR(DMSO)7.49-7.46(m，2H)，7.41-7.37(m，6H)，7.33-7.27(m，4H)，7.24(d，1H，J＝8.8Hz)，7.16(d，1H，J＝2.2Hz)，6.84(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz).6.73(d，1H，J＝8.6Hz)，5.2(s，2H)，5.12(s，2H)，2.15(s，3H)；IR(KBr)2920，1630cm-1；MS eI m/z(499/501，出現(xiàn)Br)；CHN calcd for C29H23BrFNO.
實(shí)施例52-(4-羥苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴化物)-引哚-5-醇將由5(0.5g，0.85mmol)和CH2Cl2(10mL)組成的溶液在室溫通過滴加3.5當(dāng)量TMSI(0.47mL，3.0mmol)處理。兩小時(shí)后，將反應(yīng)停止并于其中再加2.2當(dāng)量TMSI并將反應(yīng)物加熱回流5小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至0℃并緩慢加入甲醇以猝滅反應(yīng)。將反應(yīng)物用乙醚(25mL)稀釋并用NaHCO3(25mL)，10％Na2SO3(25mL)和鹽水洗滌。將乙醚層用MgSO4干燥并濃縮到硅膠上。用EtOAc/己烷(1∶4至1∶1)進(jìn)行色譜得到0.25g3(71％)；Mp＝83-86℃；1HNMR(CDCl3)苯酚上的2H寬峰(＞10)，s7.35(d，2H，J＝9.0Hz)，7.15(d，2H，J＝8.8Hz)，7.01(dd，1H，J＝2.4，0.4HZ)，6.86(d，2H，J＝8.8HZ)，6.80(d，1H，J＝8.6Hz)，6.72(dd，1H，J＝8.6，2.4Hz)，5.10(s，2H)，4.88(s，1H)，4.50(s，1H)， 2.21(s，3H)；MS eI m/z407/409含有Br；IR 3390，2900，1600cm-1；CHN calc′d for C22H18BrNO2+0.25EtOAc.
實(shí)施例62-(4-氟-苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴化物)-吲哚-5-醇類似地制備標(biāo)題化合物為化合物7并分離為泡沫1H NMR (DMSO)8.79(s，1H)，7.39-7.34(m，4H)，7.32-7.30(m，3H)，7.11(d，1H，J＝8.8Hz)，6.85(d，1H，J＝2.2Hz)，6.74(d，1H，J＝2.4Hz)，6.63(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz)，5.16(s，2H)，2.11(s，3H)；IR(KBr)3400，2900，1630cm-1；MS eI m/z 409/411 contains Br.吲哚丙烯酰胺的一般制備方法。
將實(shí)施例3在Et3N的溶液中用三-鄰-甲苯基膦(10mol％)和丙烯酰胺(1.25當(dāng)量)處理并加N2充分吹掃并加入Pd(OAc)2(2.5mol％)。將反應(yīng)物在密封管中加熱至100-110℃直至用TLC分析反應(yīng)完全。將粗反應(yīng)物濃縮并直接結(jié)晶或在硅膠上色譜純化。
實(shí)施例7(E)-N，N-二乙基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝160-165℃；1H NMR 9.67(s，1H)，8.72(s，1H)，7.50(d，2H，J＝8.1Hz)，7.37(d，1H，J＝15.4Hz)，7.17(d，2H，J＝8.3Hz)，7.06(d，1H，J＝8.8Hz)，6.97(d，2H，J＝15.4Hz)，6.86-6.82(m，5H)，6.58(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz)，5.19(brs，2H)，3.47-3.42(m，2H)，3.34-3.30(m，2H)，2.09(s，3H)，1.10(t，3H，J＝7.0Hz)，1.03(t，3H，J＝7.0Hz)；IR(KBr)3300，2950，1660，1580cm-1；MS(eI)m/z 454；CHN calc′d for C29H30N2O3+0.15CH2Cl2+0.30H2O.
實(shí)施例81(E)-N-叔丁基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝168-170℃；1H NMR 9.66(s，1H)，8.71(s，1H)，7.66(s，1H)，7.34(d，2H，J＝8.3Hz)，7.24(d，1H，J＝15.8Hz).7.15(d，2H，J＝8.3Hz)，7.05(d，1H，J＝8.6Hz)，6.85-6.82(m，5H)，6.59-6.56(m，1H)，6.55(d，1H，J＝16.0Hz)，5.18(s，2H)，2.11(s，3H)，1.28(s，9H)；IR(KBr)3350，2950，1660，1620；MS(eI)m/z 454；CHN calc′d for C29H30N2O3+0.4H2O實(shí)施例9(E)-吡咯烷基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝170-175℃；1H NMR 9.67(s，1H)，8.71(s，1H)，7.49(d，2H，J＝8.1Hz)，7.35(d，1H，J＝15.4Hz)，7.16(d，2H，J＝8.6Hz)，7.05(d，1H，J＝8.8Hz)，6.88-6.81(m，6H)，6.57(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz)，5.19(brs，2H)，3.56(t，2H，J＝6.6Hz)，3.35(m，2H)，2.11(s，3H)，1.87(p，2H，J＝7.0Hz)，1.77(p，2H，J＝7.0Hz)；MS m/z 452；CHN calc′d for C29H28N2O3+0.1MeOH+1.3H2O.
實(shí)施例10(E)-N，N-二甲基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝278-280℃；1H NMR(DMSO)9.65(s，1H )，8.70(s，1H)，7.50(d，2H，J＝8.1Hz)，7.33(d，1H，J＝15.4Hz)，7.15(d，2H，J＝8.6Hz)，7.07(d，1H，J＝15.6Hz)，7.05(d，1H，J＝8.8Hz)，6.85-6.80(m，5H)，6.57(dd，1H，J＝8.6，2.4Hz)，5.19(s，2H)，3.09(s，3H)，2.88(s，3H)，2.11(s，3H)；MS eI m/z 426；IR(KBr)3410，3220，1650，1580cm-1；CHN calc′d for C27H26N2O3+0.5H2O.
實(shí)施例11(E)-N，N-二丁基-3-[4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝126-128℃，1H NMR(DMSO)9.65(s，1H)，8.70(s，1H)，7.48(d，2H，J＝8.3Hz)，736(d，1H，J＝152Hz)，7.16(d，2H，J＝8.6Hz)，7.05(d，1H，J＝8.6Hz)，6.97(d，1H，J＝15.2Hz)，6.86-6.81(m，5H)，6.57(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，5.19(s，2H)，3.39(t，2H，J＝7.0Hz)，3.29(t，2H，J＝7.2Hz)，2.11(S，3H)，1.48-1.43(M，4H)，1.29-1.20(M，4H)，0.87(t，6H，J＝7.2Hz)；MS eI m/z510；IR(KBr)3300，2920，2900，2850，1650，1625，1580cm-1；CHN calc′d forC33H38N2O3.
實(shí)施例12(E)-N-丁基，N’-甲基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝240-242℃；1H NMR(DMSO)9.66(s，1H)，8.70(s，1H)，7.50(d，2H，J＝8.1Hz)，7.38-7.32(m，1H)，7.16(d，2H，J＝6.8Hz)，7.06-7.01(m，2H)，6.85-6.81(m，5H)，6.57(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz)，5.19(s，2H)，3.44，3.33(2t，2
H，J＝7.2Hz)，3.06，2.87(2s，3H)，2.11(s，3H)，1.45(m，2 H)，1.24(p，2H，J＝7.5Hz)，0.87(t，3H，J＝7.2Hz)；Ms eI m/z 468；IR(KBr)3300，1660，1590cm-1；CHN calcd for C30H32N2O3+0.2H2O.
實(shí)施例13(E)-嗎啉代-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝165-167℃，1H NMR(DMSO)9.66(s，1H)，8.71(s，1H)，7.52(d，2H，J＝8.1Hz)，7.39(d，1H，J＝15.4Hz)，7.15(d，2H.J＝8.6Hz)，7.12(d，1H，J＝15.4Hz)，7.06(d，1H，J＝8.6Hz)，6.85-6.81(m，5H)，6.57(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz)，5.19(s，2H)，3.65-3.64(m，2H)，3.59-3.53(m，6H)，2.11(s，3H)；IR(KBr)3330，1650，1620，1580cm-1；MS(FAB)m/z 469(M+H+)；CHN calc′d forC29H28N2O4+0.5H2O.
實(shí)施例14(E)-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝161-163℃，1H NMR(DMSO)9.65(s，1H)，8.70(s，1H)，7.48(s，1H)，7.37(d，2H，J＝8.35Hz)，7.30(d，1H，J＝15.8Hz)，7.14(d，2H，J＝8.35Hz)，7.04(d，2H，J＝8.6Hz)，6.85-6.81(m，5H)，6.57(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，6.48(d，1H，J＝15.8Hz)，5.18(s，2H)，2.10(s，3H)；IR(KBr)3320，3180，1660，1580cm-1；MS(FAB)m/z 399(M+H+)；CHN calc′d for C25H22N2O3+1.3H2O.
實(shí)施例15(E)-N，甲基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺
Mp＝155-158℃；1H NMR(DMSO)9.64(s，1H)，8.70(s，1H)，7.99(d，1H，J＝4.4Hz)，7.37(d，2H，J＝8.1Hz)，7.30(d，1H，j＝15.8Hz)，7.14(d，2H，J＝8.6Hz)，7.03(d，1H，J＝8.6Hz)，6.85-6.81(m，5H)，6.57(dd，1H，J＝8.6，2.4Hz)，6.48(d，1H，J＝15.8Hz)，5.18(s，2H)，2.66(d，3H，J＝4.6Hz)，2.10(5，3H)；IR(KBr)3400，1660，1620cm-1；MS eI m/z 412；CHN calc′d for C26H24N2O3+0.4H2O.
實(shí)施例16(E)-N，N-二丁基-3-{4-5-羥基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝180℃；1H NMR(DMSO)8.77(s，1H)，7.48(d，2H，J＝8.4Hz)，7.41-7.38(m，3H)，7.38-7.29(m，3H)，7.13(d，1H，J＝8.8Hz)，6.97(d，1H，J＝15.4Hz)，6.85(d，1H，J＝2.4Hz)，6.80(d，2H，J＝8.1Hz)，5.2(s，2H)，3.40-3.36(m，2H)，3.30-3.27(m，2H)，2.10(s，3H)，1.50-1.40(m，4H)，1.29-1.21(m，4H)，0.86(t，6H，J＝7.2Hz)；IR(KBr)3180，2950，2900，2850，1650，1590cm-1；MS eI m/z 512；CHN calcd for C33H37N2O2.
實(shí)施例17(E)-N-丁基，N’-甲基-3-{4-5-羥基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺Mp＝153-153.5℃；1H NMR(DMSO)8.77(s，1H)，7.50(d，2H，J＝8.1Hz)，7.42-7.36(m，2H)，7.35-7.28(m，3H)，7.13(d，1H，J＝8.8Hz)，7.03(dd，1H，J＝15.4，2.6Hz)，6.84(d，1H，J＝2.4Hz)，6.80(d，2H，J＝8.1Hz)，6.62(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，5.21(s，2H)，3.44，3.41(2t，2H，J＝7.0Hz)，3.06，2.87(2s，3H)，2.10(s，3H)，1.49-1.42(m，2H)，1.27-1.20(m，2H)，0.86(t，3H)；IR(KBr)3300，2950，2860，1645，1580cm-1；MS eI m/z 470；CHN calcd for C30H31FN2O2.
實(shí)施例185-芐氧基-2-(4-芐氧基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚在燒瓶中加入4-芐氧基苯胺(45g，0.23mol)，4’-芐氧基-2-溴苯基苯丙酮(21g，0.066mol)，和DMF(50mL)。將反應(yīng)物加熱回流30分鐘然后冷卻至室溫并使其在EtOAc(250mL)和1N HCl(水溶液)(100mL)間分配。將EtOAc部分用NaHCo3(水溶液)和鹽水洗滌，用MgSO4干燥。將溶液濃縮并將殘余物用CH2Cl2提取并加入己烷沉淀出25g固體粗品。將固體溶于CH2Cl2中并在硅膠上蒸發(fā)再用CH2Cl2/己烷(1∶5)色譜純化得到9.2g褐色固體(33％)Mpt＝150-152℃；1HNMR(DMSO)10.88(s，1H)，7.56(d，2H，J＝8.8Hz)，7.48(d，4H，J＝7.9Hz)，7.427.29(m，6H)，7.21(d，1H，J＝7.0Hz)，7.13(d，2H，J＝8.8Hz)，7.08(d，1H，J＝2.2Hz)，6.94(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，5.16(s，2H)，5.11(s，2H)，2.33(s，3H)；IR(KBr)3470，2880，2820，1620cm-1；MS eI m/z 419.
實(shí)施例195-芐氧基-2-(4-芐氧基-苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基碘化物)-吲哚將4(3.0g，7.4mmol)的DMF(25mL)溶液用NaH(60％分散液，0.21g，8.9mmol)處理并在室溫?cái)嚢?5分鐘。在其中加入4-碘溴化芐溴化物(2.2g，7.4mmol)并將反應(yīng)物攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾倒入水中并用EtOAc萃取，用MgSO4干燥并濃縮。粗品用乙醚研制得到2.2g白色固體產(chǎn)物Mpt＝153-156℃，1H NMR(DMSO)7.54(d，2H)＝8.6Hz)，7.52-7.45(m，4H)，7.37-7.29(m，6H)，7.27(d，2H，J＝8.8Hz)，7.17(d，1H，J＝9.0Hz)，7.13(d，1H，J＝2.2Hz)，7.10(d，2H，J＝8.8Hz)，6.81(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，6.60(d，2H，J＝8.3Hz)，5.18(s，2H)，5.12(s，2H)，5.11(s，2H)，2.15(s，3H)；MS eI m/z 635.
實(shí)施例202-(4-羥苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基碘化物)-吲哚-5-醇將4(2.2g，3.5mmol)的CHCl3溶液用碘化三甲基硅烷(1.04mL，7.0mmol)處理并將反應(yīng)物加熱至回流。2小時(shí)后，再加3當(dāng)量碘化三甲基硅烷并將反應(yīng)物室溫?cái)嚢?8小時(shí)。加入甲醇(5mL)猝滅反應(yīng)。有機(jī)層用10％的Na2SO3水溶液，HCl(1M)水溶液洗滌并用MgSO4干燥。將溶液濃縮并在硅膠上用EtOAc/己烷(3∶7)進(jìn)行色譜純化得到4a為泡沫(1.2g)1H NMR 9.65(s，1H)，8.71(s，1H)，7.54(d，2H，J＝8.3Hz)，7.12(d，2H，J＝8.3Hz)，7.02(d，1H，J＝8.6Hz)，6.84-6.80(m，3H)，6.61(d，2H，J＝8.3Hz)，6.57(dd，1H，J＝6.4Hz)，5.12(s，2H)，2.09(s，3H)；MS eI m/z 455.吲哚炔丙胺制備的一般方法實(shí)施例21-23的標(biāo)題化合物可以用將含有10倍摩爾過量的二級(jí)胺的DMF溶液冷卻至0℃并用炔丙溴化物(3當(dāng)量，80％的甲苯溶液)處理來制備。在0℃1小時(shí)后，將反應(yīng)物在室溫1小時(shí)。加入吲哚碘化物(4a，1當(dāng)量)接著加入Cu(I)I(0.1當(dāng)量)和Pd(PPh3)2Cl2(0.035當(dāng)量)。然后將反應(yīng)混合物攪拌16-48小時(shí)然后將其傾倒入水中并用EtOAc萃取。將EtOAc部分濃縮并在硅膠上用EtOAc/己烷為洗脫系統(tǒng)進(jìn)行色譜純化。
實(shí)施例212-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1-4-(3-N，N-二甲基-1-基-丙-1-炔基)-芐基-1H-吲哚-5-醇Mp＝173-176℃；1H NMR(DMSO)9.64(s，1H)，8.70(s，1H)，7.25(d，2H，J＝8.1Hz)，7.12(d，2H，J＝8.3Hz)，7.03(d，1H，J＝8.6Hz)，6.83-6.78(m，5H)，6.57(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，5.17(s，2H)，3.39(s，2H)，2.19(s，6H)，2.10(s，3H)；IR(KBr)3390，1490cm-1；MS esI 411(M+H+).
實(shí)施例222-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1-4-(3-哌啶-1-基-丙-1-炔基)-芐基-1H-吲哚-5-醇Mp＝118-123℃；1H NMR(DMSO)9.65(s，1H)，8.71(s，1H)，7.24(d，2H，J＝8.1Hz)，7.12(d，2H，J＝8.6Hz)，7.02(d，1H，J＝8.6Hz)，6.83-6.80(m，5H)，6.57(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz)，5.17(s，2H)，3.39(s，2H)，2.41(m，4H)，2.10(s，3H)，1.48(p，4H，J＝5.7Hz)，1.36-1.33(m，2H)；IR(KBr)3400，2920，1620，1420cm-1；MS EI m/z 450；CHN calc′d for C30H30N2O2+0.25H2O實(shí)施例232-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1-4-(3-吡咯烷-1-基-丙-1-炔基)-芐基-1H-吲哚-5-醇(5c)Mp＝174-176℃；1H NMR(DMSO)9.64(s，1H)，8.70(s，1H)，7.23(d，2H，J＝8.3Hz)，7.11(d，2H，J＝8.6Hz)，7.02(d，1H，J＝8.8Hz)，6.84(m，5H)，6.57(dd，1H，J＝8.6，2.2Hz)，5.17(s，2H)，3.53(s，2H)，2.53-2.51(m，4H)，2.09(s，3H)，1.69-1.66(m，4H)；IR(KBr)3400，2920，2900，1620c-1；MS cIm/z 436；CHN calcd for C29H28N2O2+0.7H2O.生物學(xué)方法體外雌激素受體結(jié)合測(cè)定受體的制備使超表達(dá)雌激素受體的CHO細(xì)胞在DMEM+10％活性炭包衣的葡聚糖，已脫色的胎牛血清中的150mm2盤上生長。將該盤用PBS洗滌兩次并用10mM Tris-HCl，pH7.4，1mM EDTA洗滌一次。通過刮面收集細(xì)胞然后將細(xì)胞懸液于冰中。在手提式電動(dòng)組織研磨機(jī)上用2個(gè)10-秒破裂將細(xì)胞破碎。將粗制品在12000g離心20分鐘接著在轉(zhuǎn)速100000g離心60分鐘得到核糖體游離胞質(zhì)溶膠。然后將胞質(zhì)溶膠在-80℃冷凍并儲(chǔ)藏。用參考標(biāo)準(zhǔn)蛋白進(jìn)行BCA測(cè)定以確定胞質(zhì)溶膠中的蛋白質(zhì)濃縮物。結(jié)合測(cè)定條件在與投入的3H-17β-雌二醇總量的結(jié)合＜2.0％的96-孔板(聚苯乙烯*)上進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定并且每個(gè)數(shù)據(jù)收集三份。將100uG/100μL的受體制品在每個(gè)孔上分成等份。將50uL體積的2.5nM3H17β-雌二醇十競(jìng)爭(zhēng)劑(或緩沖液)的飽和劑量加到初級(jí)競(jìng)爭(zhēng)中，而測(cè)定100×和500×競(jìng)爭(zhēng)劑時(shí)，則僅用0.8nM317β-雌二醇。將該板在室溫保溫2.5小時(shí)。在保溫時(shí)間結(jié)束時(shí)將150uL冰冷卻的活性炭包衣的葡聚糖(5％活性炭包衣0.05％ 69k葡聚糖)加入每個(gè)孔中并將該板立即在4℃99g離心5分鐘。將200μL上清液除去依閃爍計(jì)數(shù)。無論哪一個(gè)先出現(xiàn)，樣品計(jì)數(shù)2％或10分鐘。由于聚苯乙烯吸收少量3H17β-雌二醇，含有放射性和胞質(zhì)溶膠，但不用活性炭操作的孔包含定量有效同位素。同時(shí)，含有放射性但沒有胞質(zhì)溶膠的孔用活性炭操作以測(cè)定未除去的3H17β-雌二醇的DPM。使用Corning#25880-96，96-孔板，因?yàn)榻?jīng)證明它們結(jié)合雌二醇的量最少。結(jié)果分析通過Beckman LS7500閃爍計(jì)數(shù)儀用一套猝滅標(biāo)準(zhǔn)物將放射性的每分鐘計(jì)數(shù)(CPM)自動(dòng)轉(zhuǎn)變?yōu)槊糠昼娝プ?DPM)以使每個(gè)樣品產(chǎn)生一個(gè)H#。用下式計(jì)算在100倍或500倍競(jìng)爭(zhēng)劑存在時(shí)雌二醇結(jié)合的百分?jǐn)?shù)((DPM樣品-未用活性炭除去的DPM)/(DPM雌二醇-未用活性炭除去的DPM))×100％二雌二醇結(jié)合％為了得到IC50曲線，將結(jié)合％對(duì)化合物繪圖。IC50值是由在500×競(jìng)爭(zhēng)劑顯示＞30％競(jìng)爭(zhēng)的化合物濃度產(chǎn)生。對(duì)于該方法的描述，可見Hulme，E.C.，1992版。Receptor-Ligand Interactions；APractical Approach，IRL Press，New York(特別見第8章)。IShikawa細(xì)胞堿性磷酸酶測(cè)定細(xì)胞的保持和處理將Ishikawa細(xì)胞保持在含有苯酚紅+10％胎牛血清的DMEM/F12(50％∶50％)中并給培養(yǎng)基供給2mM Glutamax，1％ Pen/Strap和1mM丙酮酸鈉。在每個(gè)試驗(yàn)(處理細(xì)胞)前5天將培養(yǎng)基變成除去苯酚紅的DMEM/F12+10％活性炭包衣的10％葡聚糖的已脫色的血清。在試驗(yàn)的前一天，將細(xì)胞用0.5％胰蛋白酶/EDTA收集并置于密度為5×104細(xì)胞/孔的96-孔組織培養(yǎng)板上。試驗(yàn)化合物的劑量除10-6M(化合物)+10-9M17β-雌二醇外還有10-6，10-7和10-8M來評(píng)價(jià)化合物作抗雌激素的能力。測(cè)定前將細(xì)胞處理48小時(shí)。每個(gè)96-孔板含有一個(gè)17-β-雌二醇對(duì)照。每個(gè)劑量的樣品群為n＝8。堿性磷酸酶測(cè)定在48小時(shí)后抽吸培養(yǎng)基并將細(xì)胞用磷酸緩沖鹽水(PBS)洗三次。將50μL裂解緩沖液(0.1M Tris-HCl，pH9.8，0.2％Triton X-100)加入到每個(gè)孔中。將板置-80℃15分鐘。將板在37℃保溫接著在每個(gè)孔中加入150μL含有4mM磷酸對(duì)-硝基苯酯(pNPP)的0.1M Tris-HCl pH9.8(最終濃度，3mMpNPP)。
用KineticCalc Application程序(Bio-Tek，Instruments，Inc.，Winooski，VT)進(jìn)行吸光度和斜率的計(jì)算。在反應(yīng)動(dòng)力曲線(光密度每5分鐘讀取作30分鐘吸收讀取)的線性部分上平均，其結(jié)果表示為酶反應(yīng)(斜率)速率的平均+/-S.D.?；衔锝Y(jié)果概括為與1nM17β-雌二醇相關(guān)的響應(yīng)的百分?jǐn)?shù)。
用堿性磷酸酶法測(cè)定不同化合物的雌激素活性并計(jì)算相應(yīng)的ED50值(95％ C.I)。下列四條用作參考標(biāo)準(zhǔn)17β-雌二醇0.03nM17α-雌二醇1.42nM雌二醇 0.13nM雌酮 0.36nM該方法的描述可見Holinka，C.F.，Hata，H.Kuramoto，H.和Gurpide，E.(1986)的甾體激素和抗甾體對(duì)人體子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞(Ishikawa Line)的堿性磷酸酶活性的影響。Littlefield，B.A.Gurpide，E.Markiewicz，L.McKinley，B.的Cancer Research.462771-2774，和Hochberg，R.B.(1990)的Ishikawa細(xì)胞中基于刺激堿性磷酸酯的簡(jiǎn)單和敏感微量滴定板的雌激素生物測(cè)定；D5腎上腺甾體化合物的雌激素作用。Endocrinology，62757-2762。2X VIT ERE轉(zhuǎn)染測(cè)定細(xì)胞的保持和處理將用人體雌激素受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Chinese Hamster Ovary細(xì)胞(CHO)在DMEM+10％胎牛血清(FBS)中保持。處理前48小時(shí)將生長培養(yǎng)基換成沒有苯酚紅的DMEM+10％葡聚糖包衣的活性炭脫色PBS(處理培養(yǎng)基)。將細(xì)胞置于密度為5000細(xì)胞/孔的含有200μL培養(yǎng)基/孔的96-孔板上。磷酸鈣轉(zhuǎn)染將報(bào)道DNA(在基本胸苷激酶促進(jìn)劑前推動(dòng)螢光素酶基因的含有2個(gè)卵黃生成素ERE串聯(lián)拷貝的Promega質(zhì)粒p GL 2)與B-半乳糖苷酶表達(dá)質(zhì)粒pCH110(Pharmacia)和載體DNA(pTZ18U)以下列比率混合10uG 報(bào)道DNA5uG pCH110DNA5uG pTZ18U20uG DNA/1mL轉(zhuǎn)染液將DNA(20uG)溶解在500uL 250mM無菌CaCl2中并將其滴加到500uL 2×HeBs(0.28m NaCl，50mMHEPES，1.5mM Na2HPO4，pH7.05)中，然后在室溫保溫20分鐘。將20uL這種混合物加到每個(gè)細(xì)胞孔中并在細(xì)胞上保持16小時(shí)。保溫結(jié)束后除去沉淀，將細(xì)胞用培養(yǎng)基洗滌，換上新處理的培養(yǎng)基并將細(xì)胞用載體，1nM17β-雌二醇，1uM化合物或1μM化合物+1nM17β-雌二醇(用作雌激素拮抗試驗(yàn))處理。每一個(gè)處理?xiàng)l件作8孔(n＝8)，這些孔在進(jìn)行螢光素酶測(cè)定前保溫24小時(shí)。螢光素酶測(cè)定在暴露于化合物24小時(shí)后，將培養(yǎng)基除去并用2X沒有Mg++和Ca++的125uL的PBS洗滌每個(gè)孔。除去PBS后，將25uLPromega裂解緩沖液加到每個(gè)孔中并于室溫靜置15分鐘，接著于-80℃15分鐘和37℃15分鐘。將20uL裂解液轉(zhuǎn)移到不透明的96孔板進(jìn)行螢光素酶活性評(píng)價(jià)并用保持裂解液(5μl)進(jìn)行B-半乳糖苷酶活性評(píng)價(jià)(正態(tài)轉(zhuǎn)染)。將螢光素(luciferan)底物(Promega)加入用發(fā)光計(jì)自動(dòng)等份為100uL的每個(gè)孔中并將產(chǎn)生的光(相對(duì)光單位)在加入后讀取10秒鐘。B-半乳糖苷酶測(cè)定在保持5uL裂解液中加入45uL PBS。然后加入50uLPromega B-半乳糖苷酶2X測(cè)定緩沖液，將孔混合并于37℃保溫1小時(shí)。將含有標(biāo)準(zhǔn)曲線(0.1至1.5毫單位三份)的板用于每個(gè)試驗(yàn)。在Molecular Devices分光光度計(jì)板取器上在410nm分析這些板。將未知的光密度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上用數(shù)學(xué)外推法轉(zhuǎn)換成活性毫單位。結(jié)果分析將螢光素酶數(shù)據(jù)以在10秒測(cè)定期間累集的相對(duì)光單位(RLUs)形成得到并自動(dòng)轉(zhuǎn)移到JMP(SAS Inc)文檔中，該文檔已將背景RLUs扣除。B-半乳糖苷酶值被自動(dòng)輸入到該文檔中并且這些值被分成RLUs以得到歸一化數(shù)據(jù)。從n＝8的每個(gè)處理來確定平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差。每個(gè)板上將化合物活性與17β-雌二醇比較。用式％＝((雌二醇-對(duì)照)/(化合物值))×100來計(jì)算與17β-雌二醇活性比較的百分?jǐn)?shù)。這些技術(shù)見Tzukerman，M.T.，Esty，A.Santiso-Mere，D.Danielian，P.，Parker，M.G.Stein，R.B.，Pike，J.W.和Mc Donnel，D.P.的描述(1994)。人雌激素受體的轉(zhuǎn)激活能力是通過細(xì)胞的和推進(jìn)劑環(huán)境兩者決定的并通過兩個(gè)功能不同的分子內(nèi)區(qū)域介導(dǎo)的(見Molecular Endocrinology，821-30)。子宮營養(yǎng)/抗子宮營養(yǎng)鼠的生物測(cè)定在未成熟鼠子宮營養(yǎng)測(cè)定(4天)中確定化合物的雌激素和抗雌激素特性(見由L.J.Black和R.L.Goode，在Life Sciences，26，1453(1980)的在先描述)。將未成熟的Sprague-Dawley鼠(雌性，18天齡)分成六組用于試驗(yàn)。將動(dòng)物每日腹腔注射10uG化合物，100uG化合物，(100uG化合物+1uG17β-雌二醇)用于測(cè)定抗雌激素性，以及1uG17β-雌二醇，用50％ DMSO/50％鹽水作為注射載體。在第4天將動(dòng)物用CO2窒息法殺死動(dòng)物并剝離其子宮然后在過量脂質(zhì)中解吸，除去所有流體并確定其濕重。將一個(gè)角的一個(gè)小截面用于組織學(xué)而將其余部分用于分離總RNA以評(píng)價(jià)補(bǔ)體組分3的基因表達(dá)。生物學(xué)結(jié)果雌激素受體親和性(報(bào)道為RBA17β-雌二醇＝100)化合物 RBA那洛亞芬 200三苯氧胺 1.8實(shí)施例10 20實(shí)施例7 42實(shí)施例8 40實(shí)施例9 40實(shí)施例12 114實(shí)施例11 80實(shí)施例13 27實(shí)施例14 32實(shí)施例15 53實(shí)施例21 53實(shí)施例22 23傳染螢光素酶測(cè)定化合物 ％激活％1nM17β-雌二醇的激活17β-雌二醇 100％N/A雌三醇 38％ N/A三氧苯胺0％ 10％那洛亞芬0％ 0％實(shí)施例101％ 2％實(shí)施例7 4％ 8％實(shí)施例8 6％ 78％實(shí)施例9 6％ 8％實(shí)施例1213％ 24％實(shí)施例118％ 12％實(shí)施例138％ 17％實(shí)施例1419％ 57％實(shí)施例1515％ 31％實(shí)施例2134％ 34％實(shí)施例2217％ 19％Ishikawa堿性磷酸酶測(cè)定化合物 ％激活％激活(化合物+1nM17β雌二醇)17β-雌二醇 100％ N/A三氧苯胺0％45％那洛亞芬5％5％實(shí)施例106％19％實(shí)施例7 1％9％實(shí)施例8 10％ 22％實(shí)施例9 3％11％實(shí)施例127％16％實(shí)施例11 6％ 11％實(shí)施例13 7％ 9％實(shí)施例14 2％ 14％實(shí)施例15 0％ 5％實(shí)施例21 34％ 34％實(shí)施例22 27％ 23％3-天子宮切除鼠模型化合物 10μG 100μG三氧苯胺69.6mg71.4mg那洛亞芬47.5mg43.2mg對(duì)照＝42.7mg1μG17β-雌二醇＝98.2化合物 10μG 100μG 100μG加1μG-17β-雌二醇實(shí)施例7 47.8mg 64.8mg 75.4對(duì)照＝20.2mg 1μG17β-雌二醇＝80.2mg化合物 10μG 100μG 100μG加1μG-17β-雌二醇實(shí)施例1236.9mg 49.5mg 63.1對(duì)照＝31.4mg 1μG17β-雌二醇＝89.0mg化合物 10μG 100μG 100μG加1μG-17β-雌二醇實(shí)施例1139.3mg 59.8mg 81.0mg對(duì)照＝24.5mg 1μG17β-雌二醇＝90.8mg化合物 10μG 100μG 100μG加1μG-17β-雌二醇實(shí)施例1432.5mg 56.4mg79.8mg實(shí)施例1540.4mg 56.3mg69.3mg對(duì)照＝29.1mg 1μG17β-雌二醇＝95.5mg化合物 10μG 100μG100μG加1μG-17β-雌二醇實(shí)施例2156.0mg 84.0mg77.6mg對(duì)照＝32.1mg 1μG17β-雌二醇＝90.2mg實(shí)施例2255.6mg 71.3mg66.8mg對(duì)照＝21.7mg 1μG17β-雌二醇＝82.8mg
權(quán)利要求
1.具有下列結(jié)構(gòu)的化合物及其藥用鹽
其中R1選自H，OH或其C1-C4酯或烷基醚，或鹵素；R2，R3，R4，R5和R6獨(dú)立地選自H，OH，或其C1-C4酯或烷基醚，鹵素，氰基，C1-C6烷基，三氟甲基，條件是，當(dāng)R1為H時(shí)，R2是OH；n是2或3；X選自H，C1-C6烷基，氰基，硝基，三氟甲基，鹵素；Z選自
Y選自a)部分
其中R7和R8獨(dú)立地選自基團(tuán)H，C1-C6烷基，苯基或通過-(CH2)p-連接，其中p是2至6的整數(shù)，以便形成環(huán)，該環(huán)可選擇地被最多三個(gè)選自下列的取代基取代氫原子，羥基，鹵素，C1-C4烷基，三鹵代甲基，C1-C4烷氧基，三鹵代甲氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞磺?；?，C1-C4烷基磺酰基，羥基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONH(C1-C4)烷基，-NH2，C1-C4烷氨基，二(C1-C4)烷氨基，-NHSO2(C1-C4)烷基，-NHCO(C1-C4)烷基，和-NO2。b)五-，六-或七-元飽和的，不飽和的或部分不飽和雜環(huán)，該雜環(huán)含有最多2個(gè)選自下列基團(tuán)的雜原子-O-，-NH-，-N(C1-C4烷基)-，-N＝，和-S(O)m-，其中m是0-2的整數(shù)，該雜環(huán)可選擇地被1-3個(gè)獨(dú)立地選自下列的基團(tuán)取代；氫原子，羥基，鹵素，C1-C4烷基，三鹵代甲基，C1-C4烷氧基，三鹵代甲氧基，C1-C4酰氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞磺?；?，C1-C4烷基磺?；?，羥基(C1-C4)烷基，-CO2H-，-CN-，-CONHR1-，-NH2-，(C1-C4)烷氨基，二(C1-C4)烷氨基，-NHSO2R1-，-NHCOR1-，-NO2-和可選擇地被1至3個(gè)(C1-C4)烷基取代的苯基；c)含有與苯環(huán)稠合的五或六-員雜環(huán)的雙環(huán)系，該雜環(huán)含有最多2個(gè)選自下列基團(tuán)的雜原子-O-，-NH-，-N(C1-C4烷基)-，和-S(O)m-其中m是0-2的整數(shù)，并且該雜環(huán)可選擇地被1-3個(gè)獨(dú)立地選自由下列基團(tuán)的取代基取代；氫原子，羥基，鹵素，C1-C4烷基，三鹵代甲基，C1-C4烷氧基，三鹵代甲氧基，C1-C4酰氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞磺?；珻1-C4烷基磺?；?，羥基(C1-C4)烷基， -CO2H-，-CN-，-CONHR1-，-NH2-，(C1-C4)烷氨基，二(C1-C4)烷基氨基，-NHSO2R1-，-NHCOR1，-NO2和可選擇地被1至3個(gè)(C1-C4)烷基取代的苯基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1選自H，OH或C1-C4酯或烷基醚，鹵素；R2，R3，R4，R5和R6獨(dú)立地選自H，OH或其C1-C4酯或烷基醚，鹵素，氰基，C1-C6烷基，或三氟甲基，條件是，當(dāng)R1是H，R2不為OH；X選自H，C1-C6烷基，氰基，硝基，三氟甲基，鹵素；Y是部分
R7和R8獨(dú)立地選自H，C1-C6烷基，或通過-(CH2)p-連接，其中p是2至6的整數(shù)，以使形成環(huán)，該環(huán)可選擇地被最多3個(gè)選自下列的取代基取代；氫原子，羥基，鹵素，C1-C4烷基，三鹵代甲基，C1-C4烷氧基，三鹵代甲氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞磺?；?，C1-C4烷基磺?；?，羥基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONH(C1-C4)烷基，-NH3，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2(C1-C4)烷基，-NHCO(C1-C4)烷基，和-NO2。
3.權(quán)利要求3的化合物，其中R7和R8以-(CH2)p-連接在一起形成環(huán)，其中p為2至6的整數(shù)，該環(huán)可選擇地被1-3個(gè)選自下列基團(tuán)的取代基取代；C1-C3烷基，三氟甲基，鹵素，氫原子，苯基，硝基，或-CN。
4.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是5-芐氧基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基)-1H-吲哚。
5.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是5-芐氧基-2-(4-芐氧基-苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴化物)-吲哚。
6.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是5-芐氧基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴化物)-吲哚。
7.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是2-(4-羥苯基)-3-甲基)-1-基甲基-(4-苯基溴化物)-吲哚-5-醇。
8.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-N，N-二乙基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
9.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是1(E)-N-叔丁基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
10.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-吡咯烷基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
11.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-N，N-二甲基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
12.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-N，N-二丁基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
13.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-N-丁基，N’-甲基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
14.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-嗎啉代-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
15.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
16.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-N，甲基-3-{4-5-羥基-2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
17.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-N，N-二丁基-3-[4-5-羥基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
18.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是(E)-N-丁基，N’-甲基-3-{4-5-羥基-2-(4-氟-苯基)-3-甲基-吲哚-1-基甲基-苯基}-丙烯酰胺。
19.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1-4-(3-N，N-二甲基-1-基-丙-1-炔基)-芐基-1H-吲哚-5-醇或其藥用鹽。
20.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1-4-(3-哌啶-1-基-丙-1-炔基)-芐基-1H-吲哚-5-醇或其藥用鹽。
21.權(quán)利要求1的化合物，該化合物是2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1-4-(3-吡咯烷-1-基-丙-1-炔基)-芐基-1H-吲哚-5-醇或其藥用鹽。
22.治療和預(yù)防哺乳動(dòng)物骨損失的方法，該方法包括給有此需要的哺乳動(dòng)物用有效量的權(quán)利要求1化合物，或其藥用鹽。
23.治療和預(yù)防哺乳動(dòng)物由雌激素不足引起的或與其有關(guān)的疾病狀態(tài)或癥狀的方法，該方法包括給有此需要的哺乳動(dòng)物服用有效量的權(quán)利要求1的化合物，或其藥用鹽。
24.治療和預(yù)防哺乳動(dòng)物心血管疾病的方法，該方法包括給有此需要的哺乳動(dòng)物服用有效量的權(quán)利要求1化合物，及其藥用鹽。
25.含有權(quán)利要求1化合物，或其藥用鹽，和藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及用作雌激素劑的新的3-[4-(2-苯基-吲哚-1-基甲基)-苯基]-丙烯酰胺化合物和新的2-苯基-1-[4-(氨基-1-基-烷-1-炔基)-芐基]-1H-吲哚-5-醇化合物，以及使用這些化合物的藥物組合物和治療方法，這些化合物具有上列通式其中Z選自上式。
文檔編號(hào)C07D209/12GK1168373SQ9711125
公開日1997年12月24日 申請(qǐng)日期1997年4月18日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月19日
發(fā)明者C·P·米勒, M·D·科林尼, B·D·特恩 申請(qǐng)人:美國家用產(chǎn)品公司