專利名稱：用酰化嘧啶核苷降低化療劑和抗病毒劑的毒性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及用非甲基化的嘧啶核苷的?；苌锾幚砘焺┖涂共《緞┑亩拘?。這些化合物能夠減輕對正接受抗病毒或抗腫瘤化療的動物的造血系統(tǒng)的損害。本發(fā)明還涉及保護(hù)其它受抗病毒或抗腫瘤化療影響的組織，這些組織包括胃腸上皮。
背景技術(shù)：
癌癥化療和抗病毒化療的一個主要的麻煩是損傷骨髓細(xì)胞或抑制它們的功能。特別是，化療會損傷主要存在于骨髓和脾臟中的造血前體細(xì)胞，妨礙新的血細(xì)胞(粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板等)的生成。比如，用5-氟尿嘧啶治療癌癥患者會減少他們的白細(xì)胞(淋巴細(xì)胞和/或粒細(xì)胞)的數(shù)目，并且會提高病人對感染的敏感性。很多患者死于化療后感染或造血失效所造成的其它后果?；焺┻€會使血小板的生成低于正常水平，由此又會出現(xiàn)出血的傾向。紅細(xì)胞生成的抑制會導(dǎo)致貧血。損害造血系統(tǒng)或其它主要組織的危險性在于它會妨礙化療劑的使用劑量大到足以發(fā)揮好的抗腫瘤或抗病毒效力的程度。
許多抗腫瘤或抗病毒的化療劑靠抑制核苷酸的生物合成、代謝或其功能來發(fā)揮作用，或者說實際上它們是核苷類似物，它們?nèi)〈撕怂嶂械恼：塑?，產(chǎn)生有缺陷的RNA或DNA。
5-氟尿嘧啶是一種臨床上非常重要的細(xì)胞還原抗腫瘤化療劑，它部分地是通過進(jìn)入RNA，產(chǎn)生有缺陷的RNA而發(fā)揮作用；用氟代脫氧尿苷的一磷酸鹽來抑制胸苷酸合成酶還可能提高5-FU的細(xì)胞毒性。5-FU的臨床應(yīng)用受其毒性(尤其是用在骨髓上)的限制。特別是，其臨床應(yīng)用受到治療比低的限制；治療比就是毒性劑量與有效劑量之比，高治療比意味著藥物具有低毒性的治療效力。
5-FU和許多其它化療劑還影響其它組織，特別是影響胃腸粘膜，造成粘膜炎、腹瀉和潰瘍。口炎(口腔粘膜的潰瘍)對患者來說特別麻煩，會使進(jìn)食和吞咽非常痛苦。
D.S.Martin等在Cancer Res.423964-70上報導(dǎo)，如果在施用5-FU幾小時后開始給小鼠施用大劑量的尿苷，則以毒性劑量給小鼠施用5-FU(具有強(qiáng)抗腫瘤活性)可以是無害的?，F(xiàn)已證明這種“補(bǔ)救”策略能增加5-FU在動物抗腫瘤模型中的治療指數(shù)，能容許使用大劑量、有毒性的5-FU，這樣大劑量的5-FU是使腫瘤消退或防止腫瘤生長所必須的，與此同時通過隨后施用尿苷以優(yōu)先保護(hù)正常組織(特別重要的是骨髓)(D.S.Martin等，Cancer Res.434653-61)。
由于尿苷自身生物學(xué)性質(zhì)的原因，包括施用尿苷在內(nèi)的臨床試驗非常復(fù)雜?？诜竽蜍瘴盏煤懿?；腹瀉是人體中的劑量限制因素(VanGroeningen等，Proceedings of the AACR 28195)。結(jié)果，為在臨床上顯著改變5-FU的毒性，需要非腸道使用尿苷，這需要使用一根靜脈內(nèi)導(dǎo)管，后來的早期臨床試驗表明，當(dāng)通過一根小的靜脈內(nèi)導(dǎo)管注入尿苷時，靜脈炎就已成為一個問題(Van Groeningen等，CancerTreat Rep.70745-50)。由于通過靜脈內(nèi)導(dǎo)管輸注需要很長時間，患者需要住院治療。另外，還存在使患者感到很不舒適和不方便的一些問題。
已研制出5FU的口服活性前體藥物，一般從腸道被吸收入血液后，它們會被酶或自動轉(zhuǎn)變?yōu)?FU。這就容許病人自己用藥，沒有靜脈給藥的不舒適感。此外，在一些化療方案中，嘗試了例如幾天或幾周內(nèi)恒定靜脈輸液，使腫瘤持續(xù)接觸5FU?？诜?FU前體藥物原則上可以使5FU持續(xù)接觸腫瘤。
5-氟-1-(四氫-2-呋喃基)尿嘧啶(FT)是5-氟尿嘧啶的口服有活性的前體藥物。主要在肝臟中，它被酶轉(zhuǎn)化為5-氟尿嘧啶。但是，肝臟中二氫嘧啶脫氫酶的相對濃度較高，它降解5FU，產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物不能用于癌癥的化療，此外卻提高了5-FU的毒性。
據(jù)信FT的活性代謝產(chǎn)物5FU的細(xì)胞毒性是它摻入核苷酸集中處的結(jié)果，其中某種合成代謝物具有毒性作用，例如5-氟脫氧尿苷一磷酸鹽抑制胸苷酸合成酶，從而減少細(xì)胞中用于DNA合成的胸苷，而5-氟尿苷三磷酸鹽摻入RNA會減弱它翻譯遺傳信息的正常功能。
為了抑制FT產(chǎn)生的5FU的分解代謝，與FT一起使用其它化合物。特別是，嘧啶尿嘧啶可抑制5FU的分解代謝而不抑制它的細(xì)胞毒性。最廣泛使用的FT臨床制劑含1∶4摩爾比的尿嘧啶。這可顯著降低達(dá)到治療效果所需FT的劑量。在不產(chǎn)生無法接受的毒性增加的前提下，其它嘧啶，包括尿苷、胸苷、胸腺嘧啶及胞嘧啶或是比尿嘧啶的作用弱或是不能更好地增強(qiáng)其抗腫瘤效果。二氫嘧啶脫氫酶(DHPDHase)的強(qiáng)力合成抑制劑也與FT或5FU一起使用。5-氯-2，6-二羥基吡啶(CDHP)是比尿嘧啶更強(qiáng)的DHPDHase抑制劑。但是，此化合物也提高了5FU的毒性，于是為了臨床使用，共同使用第三中組分1，4，5，6-四氫-4，6-二氧-1，3，5-三嗪-2-羧酸來降低腸毒性。
一些研究者把5FU和嘧啶一起使用，試圖改善此抗腫瘤劑的治療指數(shù)。在體內(nèi)，當(dāng)與5FU同時使用尿苷和胸苷時，同時增加了5FU的抗腫瘤效果和毒性，故治療指數(shù)無凈增長(Hartman和Bollag，Med.Oncol.&Tumor Pharmacother.，3111-118)。Burchenal等(Cancer Chemother.Rep.，61-5)全面總結(jié)了有關(guān)5FU和5-氟脫氧尿苷(FUDR)及嘧啶化合物的相互作用方面的研究。他們指出盡管實際上單獨的嘧啶和嘧啶核苷的使用劑量無活性，它們卻明顯增加了小劑量FUDR和FU的抗白血病作用，但是以其任何組合、以任何規(guī)律來顯著改善FU或FUDR單獨使用的最大耐受劑量所得到的結(jié)果是不可能的。同樣，Jato等(J.Pharm.Sci.，64943-945)研究了脫氧尿苷與5FU和FUDR的結(jié)合形式，指出結(jié)合治療的任何治療優(yōu)點可以通過使用高劑量的5FU或FUDR來重現(xiàn)。雖然脫氧尿苷通過抑制氟嘧啶的分解代謝降低氟嘧啶的使用劑量，但是與脫氧尿苷結(jié)合使用與FU或FUDR單獨使用相比，其抗腫瘤活性沒有改進(jìn)。
就尿苷而言，藥物口服后生物利用度很差這樣的問題限制了施用脫氧胞苷、胞苷和脫氧尿苷這幾種藥物來調(diào)節(jié)化療劑毒性的臨床使用價值。
阿糖胞嘧啶(Ara-C)是一種治療白血病的重要試劑，同時作為一種免疫抑制劑使用效果也很好?？梢酝ㄟ^使用脫氧胞苷來部分地預(yù)防使用Ara-C對骨髓(髓細(xì)胞和紅細(xì)胞)的毒性(Belyanchikova等，Bull.Exp.Biol.Med.，9183-85)，而脫氧胞苷對Ara-C對淋巴細(xì)胞毒性的減弱沒有那么強(qiáng)。在細(xì)胞培養(yǎng)物中，與白血細(xì)胞相比，正常的髓樣祖細(xì)胞可以更好地受到脫氧胞苷的保護(hù)，使其免受Ara-C的損害。(K.Bhalla等，Blood 70568-571)。脫氧胞苷還會緩解細(xì)胞培養(yǎng)液中5-氮雜-2’-脫氧胞苷和阿糖5-氮雜胞苷的毒性(K.Bhalla等，Leukmia1814-819)。建議用一根靜脈內(nèi)導(dǎo)管進(jìn)行長時間(5天)大劑量脫氧胞苷的輸注來作為臨床上實現(xiàn)用脫氧胞苷減輕Ara-C毒性的一種手段(K.Bhalla等，Leukmia 2709-710)。
N-膦?；阴；?L-天冬氨酸(PALA)是一種抗腫瘤劑，它抑制天冬氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶，這種酶間接參與嘧啶核苷酸的生物合成。PALA的副作用主要是對胃腸的毒性損傷和粘膜炎。吡唑呋喃菌素(一種碳連接的嘧啶類似物)、6-氮雜尿苷和6-氮雜胞苷都會妨礙嘧啶核苷酸的合成和代謝。
3’-疊氮脫氧胸苷( AZT)在臨床上用于受人免疫缺陷病毒(HIV，AIDS的傳染媒介)感染的病人。AZT延長了受HIV感染患者的壽命，但也損害了造血，造成白細(xì)胞減少和貧血。在細(xì)胞培養(yǎng)物中，尿苷降低了AZT對粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的祖細(xì)胞的毒性，同時并沒有降低AZT的抗病毒作用(Sommadossi等，Antimicrobial Agents andChemotherapy，32997-1001)；而胸苷同時降低了AZT的毒性和抗病毒活性。對小鼠以非腸道方式使用大劑量的尿苷可以在一定程度上緩解AZT導(dǎo)致的貧血，但研究中發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)尿苷劑量達(dá)到死亡率增加的程度才會有這樣的效果；較低的、無毒劑量的尿苷(500mg/kg/d)不會降低AZT所致的血液學(xué)毒性(A.Falcone等，Blood 762216-21)。Sommadossi和el Kouni在美國專利5077280中提出了用周期性靜脈注射的方法使用尿苷來降低AZT毒性。據(jù)Bhalla等報道，脫氧胞苷能保護(hù)活體外部的正常的人骨髓祖細(xì)胞免不受AZT細(xì)胞毒性的損害，同時又能保留其抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的活性(Blood 741923-1928)。
5-氟乳清酸酯是嘧啶核苷酸前體乳清酸的一種類似物，它對人類細(xì)胞具有抗增生的作用，不過它特別適用于治療瘧疾寄生蟲的感染，這些瘧疾寄生蟲比如約氏瘧原蟲或惡性瘧原蟲，這些瘧原蟲依賴于新的嘧啶生物合成。對用5-氟乳清酸治療過的小鼠使用尿苷會降低5-氟乳清酸酯的宿主毒性，這是由于后者不會破壞其抗瘧疾的活性(ZM Gomez andPK Rathod，Antimicrob.Agents Chemother，341371-1375)。
二脫氧胞苷(ddC)還可用于抗包括HIV在內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染，ddC的副作用包括引發(fā)周圍神經(jīng)病、口腔潰瘍、降低血小板計數(shù)。用脫氧胞苷可以緩解ddC對培養(yǎng)物中的人髓樣祖細(xì)胞的毒性，而且不會相應(yīng)損害ddC抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的效力(K Bhalla等，AIDS 4427-31)。
上述現(xiàn)有技術(shù)中已公開的、使用這些嘧啶核苷改善臨床處置中化療方法或者實用性差(通過一靜脈內(nèi)導(dǎo)管輸注脫氧胞苷或尿苷需要時間太長以至需要住院治療，存在被感染的危險性，患者感到不舒適)，或者不能令人滿意(口服尿苷吸收得很差，口服尿苷達(dá)到治療所需劑量時會出現(xiàn)腹瀉)。
共同擁有的美國專利申請流水號No.438,493說明了如何用胞苷和尿苷的?；苌飦硖岣哐褐邪栈蚰蜍盏暮俊?br> 現(xiàn)已合成出一些嘧啶核苷的?；苌?，用作寡核苷酸或核苷類似物合成過程中受保護(hù)的中間產(chǎn)物，例如，5’-O-苯甲酰尿苷、三乙酰胞苷和三乙酰尿苷。見Sigma化學(xué)公司1991年產(chǎn)品索引，第155、980和981頁。
發(fā)明目的本發(fā)明的一個主要目的是提供一種能有效預(yù)防或治療抗病毒或抗腫瘤化療的中毒癥狀的方法，這些癥狀包括但不限于對造血系統(tǒng)和對胃腸粘膜的損害。
本發(fā)明的一個進(jìn)一步的目的是提供一些能允許使用大劑量化療劑的化合物和方法。
本發(fā)明的一個進(jìn)一步的目的是提供一些通過口服一種或幾種化合物以提高尿苷和胞苷及它們相應(yīng)的脫氧核苷脫氧胞苷及脫氧尿苷在血液和組織中的含量的方法。
本發(fā)明的一個進(jìn)一步的目的是提供一種防止或緩解細(xì)胞毒性化療劑對胃腸上皮的損害的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明的這些目的和其它目的的實現(xiàn)是通過對動物，包括哺乳動物例如人等，口服或非腸道使用非甲基化的嘧啶核苷的?；苌?，如尿苷、脫氧尿苷、胞苷或脫氧胞苷的?；苌铽@得的。單獨或一同使用這些化合物有助于防止或緩解細(xì)胞破壞性化療對動物的毒性作用。
于是本發(fā)明的化合物，單獨或一同使用，有助于治療化療劑所致的造血失常；有助于配合癌癥和抗病毒化療；和有助于治療其它病理學(xué)癥狀。
本發(fā)明的一個重要方面是發(fā)現(xiàn)了非甲基化的嘧啶核苷的酰基衍生物有出人意料的治療性能。
本發(fā)明的化合物除專門指定以外的所有情形中，在本發(fā)明化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)中代表變化的取代基的字母和帶下標(biāo)的字母只能加在就位于該符號所述的位置之前的那個結(jié)構(gòu)上。
用于緩解抗癌或抗病毒試劑所致毒性的化合物的通用結(jié)構(gòu)如下(1)尿苷的酰基衍生物或其藥用鹽，前者的結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2、R3和R4可以相同或不同，和分別是氫原子或代謝產(chǎn)物的?；?，附加條件是所述的R取代基中至少一個不是氫原子。
(2)胞苷的?；苌锘蚱渌幱名}，前者的結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2、R3和R4可以相同或不同，和分別是氫原子或代謝產(chǎn)物的?；郊訔l件是所述的R取代基中至少一個不是氫原子。
(3)脫氧胞苷的?；苌锘蚱渌幱名}，前者的結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可以相同或不同，和分別是氫原子或代謝產(chǎn)物的?；?，附加條件是所述的R取代基中至少一個不是氫原子。
(4)脫氧尿苷的酰基衍生物或其藥用鹽，前者的結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可以相同或不同，和分別是氫原子或代謝產(chǎn)物的?；?，附加條件是所述的R取代基中至少一個不是氫原子。
本發(fā)明用于緩解抗癌或抗病毒化療劑毒性的化合物包括下列化合物(5)尿苷的?；苌?，結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可相同或不同，和分別是氫原子或下列物質(zhì)的?；?，這些物質(zhì)為a.一種含5至22個碳原子的無支鏈脂肪酸，b.一種氨基酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組氨基酸甘氨酸、L丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c.一種含3至22個碳原子的二元羧酸，d.一種羧酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組物質(zhì)中的一種或多種，這些物質(zhì)為乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、對氨基苯甲酸、β-羥丁酸、乳清酸以及肌酸。
(6)一種胞苷的酰基衍生物，結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2、R3和R4可相同或不同，和分別是氫原子或下列物質(zhì)的?；?，這些物質(zhì)為a.一種含5至22個碳原子的無支鏈脂肪酸，b.一種氨基酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組氨基酸甘氨酸、L-苯丙氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c.一種含3至22個碳原子的二元羧酸，d.一種羧酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組物質(zhì)中的一種或多種，這些物質(zhì)為乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、對氨基苯甲酸、β-羥丁酸、乳清酸以及肌酸。
(7)一種脫氧胞苷的?；苌锘蚱渌幱名}，前者結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可相同或不同，和分別是氫原子或源自下列物質(zhì)的?；?，這些物質(zhì)為
a.一種含3至22個碳原子的無支鏈脂肪酸，b.一種氨基酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組氨基酸甘氨酸、 L-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c.煙酸，d.一種含3至22個碳原子的二元羧酸，附加條件是R1、R2和R3不全是氫，并且當(dāng)R3不是氫時，R1和/或R2也可以是乙酰基。
(8)一種脫氧尿苷的?；苌锘蚱渌幱名}，前者結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可相同或不同，和分別是氫原子或下列物質(zhì)的一個?；@些物質(zhì)為a.一種含3至22個碳原子的直鏈脂肪酸，b.一種氨基酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組氨基酸甘氨酸、L丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c.煙酸，d.一種含3至22個碳原子的二元羧酸，附加條件是R1、R2和R3不全是氫，并且當(dāng)R3不是氫時，R1和/或R2也可以是乙?；?。
(9)一種尿苷的?；苌?，結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2或R3至少有一個是含2-26個碳原子的烴氧羰基部分，并且其余的R取代基彼此獨立地是烴氧羰基部分或烴基羰基部分或H或磷酸鹽。
(10)一種胞苷的?；苌?，結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2、R3或R4至少有一個是含2-26個碳原子的烴氧羰基部分，并且其余的R取代基彼此獨立地是烴氧羰基部分或烴基羰基部分或H或磷酸鹽。
(11)一種脫氧胞苷的?；苌?，結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2或R3至少有一個是含2-26個碳原子的烴氧羰基部分，并且其余的R取代基彼此獨立地是烴氧羰基部分或烴基羰基部分或H或磷酸鹽。
(12)一種脫氧尿苷的酰基衍生物，結(jié)構(gòu)式為
其中R1或R2至少有一個是含2-26個碳原子的烴氧羰基部分，并且其余的R取代基彼此獨立地是烴氧羰基部分或烴基羰基部分或H或磷酸鹽。
閱讀下列的詳細(xì)敘述部分并參考下列實施例中所討論實驗的所附結(jié)果，可以更清楚、全面地理解本發(fā)明及其它目的、特點和優(yōu)點。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及使用非甲基化的嘧啶核苷的?；苌?即尿苷、脫氧尿苷、胞苷或脫氧胞苷的酰化衍生物(如三乙酰尿苷，TAU)來緩解體內(nèi)化療和抗病毒劑的毒性。本發(fā)明還涉及對動物單獨或一同使用這些嘧啶核苷化合物，同時使用或不使用其它試劑。
對許多抗腫瘤或抗病毒劑的情形而言，受它們作用的細(xì)胞當(dāng)暴露于適當(dāng)?shù)奶烊缓塑諘r可以避免或緩解上述試劑對那些細(xì)胞的損害。本發(fā)明的化合物和方法使在維持抗病毒或當(dāng)腫瘤劑治療效力不變的同時降低其毒性成為可能。反過來，也使把毒性維持在一可接受水平的同時增大化療劑的劑量成為可能。
本發(fā)明提供了通過口服或非腸道使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌飦碇委熁蝾A(yù)防抗病毒或抗癌化療的中毒癥狀的化合物及方法。
A.定義本文中所用術(shù)語“非甲基化的嘧啶核苷”表示天然存在的核苷，而不是指胸苷(5-甲基脫氧尿苷)或5-甲基胞苷，及其它類似的天然存在的甲基化的核苷。非甲基化的嘧啶核苷的例子包括尿苷、胞苷、脫氧尿苷和脫氧胞苷。
本文中的術(shù)語“酰基衍生物”指一種非甲基化的嘧啶核苷的衍生物，其中由羧酸衍生出的一個基本無毒的有機(jī)?；〈ㄟ^酯鍵連接到一非甲基化的嘧啶核苷中的核糖部分的一個或多個自由羥基上，和/或這樣一個取代基通過一個酰胺鍵連接到胞苷或脫氧胞苷的嘧啶環(huán)的胺取代基上。這樣的酰取代基是從以下羧酸衍生的。這些羧酸包括但不限于選自下列物質(zhì)組成的一組化合物，這些物質(zhì)是脂肪酸、氨基酸、煙酸、二元羧酸、乳酸、對氨基苯甲酸和乳清酸，比較好的酰基取代基為存在于體內(nèi)的羧酸，它們或者作為食物構(gòu)成成分或者作為中間代謝產(chǎn)物。
術(shù)語“類似物”在本文中指通過不同于?；蜻B接其它生物不穩(wěn)定的取代基(如糖上羥基的磷酸化)的方法在嘧啶環(huán)或核糖(脫氧核糖)部分上經(jīng)過化學(xué)改性的一種核苷。本發(fā)明范圍中的核苷類似物特別指那些結(jié)構(gòu)與天然存在的核苷類似，但具有抗病毒、抗腫瘤或細(xì)胞毒性作用的藥物?？鼓[瘤核苷類似物的例子包括但不限于下列物質(zhì)5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-FU藥物前體(如喃氟啶、5’-脫氧氟尿苷、卡莫氟)、氟尿苷、2’-脫氧氟尿苷、氟尿苷或2’-脫氧氟尿苷的藥物前體衍生物、氟胞嘧啶、阿糖胞嘧啶、阿糖胞嘧啶藥物前體、環(huán)胞苷、5-氮雜-2’-脫氧胞苷、阿糖5-氮雜胞嘧啶、6-氮雜尿苷、阿扎利賓、6-氮雜胞苷、三氟-甲基-2’-脫氧尿苷、胸苷、以及3-脫氮雜尿苷?？共《竞塑疹愃莆锏睦影ǖ幌抻谙铝形镔|(zhì) 5-乙基-2’-脫氧尿苷、5-碘代-2’-脫氧尿苷、5-溴代-2’-脫氧尿苷、5-甲氨基-2’-脫氧尿苷、阿糖尿嘧啶、二脫氧尿苷、二脫氧胞苷、2’，3’二脫氧胞苷-2’-烯、3’-脫氧胸苷-2’-烯、3’-疊氮基-2’，3’-二脫氧尿苷以及3’-疊氮脫氧胸苷(AZT)。本術(shù)語還包括了嘧啶核苷前體的類似物，如N-膦酰乙?；?L-天冬氨酸(PALA)。
據(jù)認(rèn)為一些核苷類似物的結(jié)構(gòu)與特定的天然存在的核苷的結(jié)構(gòu)相似。在本發(fā)明化合物的范圍內(nèi)，如果核苷類似物在嘧啶環(huán)的4位有一個環(huán)外氨基(在該位置有一個氨基表明了胞苷和尿苷之間的區(qū)別)，則可把這些核苷類似物細(xì)分為胞苷類似物。專指胞苷類似物的那些核苷類似物包括但不限于氟胞嘧啶、阿糖胞嘧啶、阿糖胞嘧啶的藥物前體、環(huán)胞苷、5-氮雜2’-脫氧胞苷、阿糖5-氮雜胞嘧啶、6-氮雜胞苷和二脫氧胞苷。特指尿苷類似物的那些核苷類似物包括但不限于5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-FU的藥物前體(如喃氟啶、5’-脫氧氟尿苷、卡莫氟)、2’-脫氧氟尿苷、氟尿苷的藥物前體衍生物、2’-脫氧氟尿苷的藥物前體衍生物、三氟-甲基-2’-脫氧尿苷、6-氮雜尿苷、阿扎利賓、3-脫氮雜尿苷、5-乙基-2’-脫氧尿苷、5-碘代-2’-脫氧尿苷、5-溴代-2’-脫氧尿苷、5-甲氨基-2’-脫氧尿苷、阿糖尿嘧啶和二脫氧尿苷。一些細(xì)胞毒性核苷類似物也是特定的胸苷類似物，如AZT。
術(shù)語“藥用鹽”在本文中指該衍生物的藥用酸加成鹽，那些酸包括但不限于硫酸、鹽酸或磷酸。
術(shù)語“一同使用”在本文中指在一時間段內(nèi)至少使用兩種本發(fā)明的化合物，在這一段時間內(nèi)各藥物相應(yīng)的藥物活性期間相重疊。
術(shù)語“烴基羰基”在本文中指羧酸的一個?；?，其中與羰基碳原子相連的原子是另一個碳原子。母體羧酸比如可以是脂肪酸、芳香酸(如苯甲酸、煙酸或同類物)、氨基酸、環(huán)烷基羧酸或二元羧酸。
術(shù)語“烴氧羰基”在本文中指羧酸中的一個?；?，其中與羰基碳原子相鄰的是氧原子，該氧原子又與另一個碳原子共價連接。也可把該基團(tuán)看作是醇的碳酸酯的基團(tuán)。當(dāng)使用后從一種非甲基化的嘧啶核苷上斷裂開時進(jìn)一步降解為二氧化碳和一種醇。比較合適的醇應(yīng)是一些低毒性，特別是那些很容易進(jìn)入正常代謝或消除途徑的醇。
術(shù)語“脂肪酸”在本文中指含2-22個碳原子的脂族羧酸。這樣的脂肪酸可以是飽和的、部分飽和的或多不飽和的。
術(shù)語“氨基酸”在本文中指但不限于甘氨酸、L-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙胺酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸、羥基賴氨酸、肉堿以及其它天然存在的氨基酸。
術(shù)語“二元羧酸”在本文中指帶有第二個羧酸取代基的脂肪酸。
術(shù)語“治療有效量”在本文中指對一特定的條件和使用方法能達(dá)到治療效果的量。
B.本發(fā)明的化合物除專門指定以外的所有情形中，在本發(fā)明化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)中代表變化的取代基的字母和帶下標(biāo)的那些字母只能加在就位于該符號所述的位置之前的那個結(jié)構(gòu)上。
用于緩解抗癌或抗病毒劑所致毒性的化合物的通用結(jié)構(gòu)如下(1)尿苷的酰基衍生物或其藥用鹽，前者的結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2、R3和R4可以相同或不同，分別是氫原子或代謝產(chǎn)物的?；郊訔l件是所述的R取代基中至少有一個不是氫原子。
(2)胞苷的?；苌锘蚱渌幱名}，前者的結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2、R3和R4可以相同或不同，分別是氫原子或代謝產(chǎn)物的?；郊訔l件是所述的R取代基中至少有一個不是氫原子。
(3)脫氧胞苷的?；苌锘蚱渌幱名}，前者的結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可以相同或不同，和分別是氫原子或代謝產(chǎn)物的?；?，附加條件是所述的R取代基中至少有一個不是氫原子。
(4)脫氧尿苷的?；苌锘蚱渌幱名}，前者的結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可以相同或不同，而且分別是氫原子或代謝產(chǎn)物的?；?，附加條件是所述的R取代基中至少有一個不是氫原子。
本發(fā)明用于緩解抗癌或抗病毒化療劑毒性的化合物包括下列化合物(5)尿苷的?；苌铮Y(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可相同或不同，而且分別是氫原子或下列物質(zhì)的?；@些物質(zhì)為a.一種含5至22個碳原子的無支鏈脂肪酸，b.一種氨基酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組氨基酸甘氨酸、L-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c.一種含3至22個碳原子的二元羧酸，d.一種羧酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組物質(zhì)中的一種或多種，這些物質(zhì)為乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、對氨基苯甲酸、β-羥丁酸、乳清酸以及肌酸。
(6)一種胞苷的酰基衍生物，結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2、R3和R4可相同或不同，而且分別是氫原子或下列物質(zhì)的酰基，這些物質(zhì)為a.一種含5至22個碳原子的無支鏈脂肪酸，b.一種氨基酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組氨基酸甘氨酸、L-苯丙氨酸、丙氨酸纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c.一種含3至22個碳原子的二元羧酸，d.一種羧酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組物質(zhì)中的一種或多種，這些物質(zhì)為乙醇酸、丙酮酸、乳酸、烯醇丙酮酸、硫辛酸、泛酸、乙酰乙酸、對氨基苯甲酸、β-羥丁酸、乳清酸以及肌酸。
(7)一種脫氧胞苷的酰基衍生物或其藥用鹽，前者結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可相同或不同，而且分別是氫原子或源自下列物質(zhì)的?；@些物質(zhì)為a.一種含3至22個碳原子的無支鏈脂肪酸，b.一種氨基酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組氨基酸甘氨酸、L-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c.煙酸，d.一種含3至22個碳原子的二元羧酸，附加條件是R1、R2和R3不全是氫，并且當(dāng)R3不是氫時，R1和/或R2也可以是?；?br> (8)一種脫氧尿苷的?；苌锘蚱渌幱名}，前者結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2和R3可相同或不同，可以分別是氫原子或源自下列物質(zhì)的?；?，這些物質(zhì)為
a.一種含3至22個碳原子的無支鏈脂肪酸，b.一種氨基酸，選自由下列物質(zhì)組成的一組氨基酸甘氨酸、L-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、賴氨酸、組氨酸、肉堿和鳥氨酸，c.煙酸，d.一種含3至22個碳原子的二元羧酸，附加條件是R1、R2和R3不全是氫，并且當(dāng)R3不是氫時，R1和/或R2也可以是?；?。
(9)一種尿苷的?；苌?，結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2或R3至少有一個是含2-26個碳原子的烴氧羰基部分，并且其余的R取代基彼此獨立地是烴氧羰基部分或烴基羰基部分或H或磷酸鹽。
(10)一種胞苷的酰基衍生物，結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2、R3或R4至少有一個是含2-26個碳原子的烴氧羰基部分，并且其余的R取代基彼此獨立地是烴氧羰基部分或烴基羰基部分或H或磷酸鹽。
(11)一種脫氧胞苷的?；苌?，結(jié)構(gòu)式為
其中R1、R2或R3至少有一個是含2-26個碳原子的烴氧羰基部分，并且其余的R取代基彼此獨立地是烴氧羰基部分或烴基羰基部分或H或磷酸鹽。
(12)一種脫氧尿苷的?；苌铮Y(jié)構(gòu)式為
其中R1或R2至少有一個是含2-26個碳原子的烴氧羰基部分，并且其余的R取代基彼此獨立地是烴氧羰基部分或烴基羰基部分或H或磷酸鹽。
本發(fā)明還包括上述化合物的藥用鹽。
本發(fā)明有益的化合物為尿苷和脫氧胞苷的脂肪酸酯，特別是那些在酰基取代基中含4個或更少的碳原子的脂肪酸酯。特別有益的化合物是酰基取代基中含2個或3個碳原子的尿苷或脫氧胞苷的脂肪酸酯。
本發(fā)明中其它有益的化合物為尿苷和脫氧胞苷的烴氧羰基衍生物，特別是那些烴氧羰基部分含3-6個碳原子的衍生物。
在本發(fā)明的一個實施例中，通過把磷酸鹽連接到?；说姆羌谆奏ず塑盏娜┨遣糠稚系挠坞x羥基上，制備出了水溶性提高了的本發(fā)明化合物的藥物前體。
C.本發(fā)明的組合物本發(fā)明的組合物包括與藥用載體結(jié)合在一起的一種或多種上述化合物。
在另一個實施例中，除本發(fā)明的一種或多種化合物外，本發(fā)明的組合物還包括下列至少一種能增強(qiáng)造血作用的試劑羥基嘌呤核苷、羥基嘌呤核苷的同類物、羥基嘌呤核苷的?；苌锛捌渫愇?，如鳥苷或脫氧鳥苷的脂肪酸酯(見1991年2月8日申請的，流水號為653,882的美國專利申請，在此引入以供參考)，非離子表面活性劑、白細(xì)胞介素如IL-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7、-8(較好的為IL-1、3或6)，集落刺激因子例如粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)干細(xì)胞因子(SCF)、促紅細(xì)胞生成素(EPO)、葡聚糖、聚肌苷-聚胞苷或其它任何對造血有積極作用的試劑。
能提高造血作用并可任意與本發(fā)明的化合物一同使用的羥基嘌呤核苷的?；苌锏慕Y(jié)構(gòu)通式如下
RA＝H或含2至30個碳原子的羧酸的?；?，且RB＝H或含2至30個碳原子的羧酸的酰基，且Z＝H、OH、＝O或者NHRC，其中RC＝H或含2至30個碳原子的羧酸的?；?，且L＝H或ORD，其中RD＝H或含2至30個碳原子的羧酸的?；?，且M＝H或ORE，其中RE＝H或含2至30個碳原子的羧酸的酰基，附加條件是L和M至少一個是H，且Q＝H、鹵素、NHRF，其中RF為H或含1至10個碳原子的?；蛲榛?、S(S以二價鍵連接在碳上，在這種情況下，相鄰的碳氮雙鍵是單鍵并且H隨后接在那個N上)、SRG(其中RG是H或含1至10個碳原子的?；蛲榛?、O(O與C二價鍵合，在這種情況下相鄰的碳氮雙鍵為單鍵并且H隨后連接在那個N上)或者ORH(其中RH是H或含1至10個碳原子的?；蛲榛?，并且醛糖部分的2’和3’位置之間的C-C鍵可任選地存在。
在本發(fā)明的另一個實施例中，?；说姆羌谆奏ず塑张c一種能促進(jìn)核苷向細(xì)胞內(nèi)攝入和磷酸化的化合物如胰島素或一種能生成胰島素的碳水化合物配制在一起。
在本發(fā)明的另一個實施例中，所述組合物含有至少一種本發(fā)明的化合物和抗病毒或抗腫瘤劑(見下文中題為“本發(fā)明化合物和組合物的治療用途”部分中對這些試劑的詳細(xì)討論)。
在另一個實施例中，本發(fā)明的組合物含有尿苷或脫氧尿苷的?；苌锖湍芤种颇蜍樟姿峄傅幕衔铩Ｄ蜍樟姿峄甘且环N初級酶，參與尿苷的分解代謝，生成尿嘧啶和核糖磷酸酯。使用抑制尿苷磷酸化酶的化合物將提高尿苷或脫氧尿苷的藥物動力學(xué)和生物學(xué)活性，所述的尿苷和脫氧尿苷是通過對這兩種非甲基化的嘧啶核苷的?；苌镞M(jìn)行脫酰作用而生成的。尿苷磷酸化酶的合適的抑制劑的例子包括但不限于5-芐基巴比妥酸酯或5-亞芐基巴比妥酸酯衍生物包括5-芐基巴比妥酸酯、5-芐氧基芐基巴比妥酸酯、5-芐氧基芐基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸酯、5-芐氧基芐基乙?；?1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸酯和5-甲氧芐基乙?；鶡o環(huán)巴比妥酸酯、2’，2’-脫水-5-乙基尿苷以及無環(huán)尿苷類化合物，特別是被5-芐基取代的無環(huán)尿苷同類物包括但不限于芐基無環(huán)尿苷、芐氧基芐基無環(huán)尿苷、氨甲基-芐基無環(huán)尿苷、氨甲基-芐氧基芐基無環(huán)尿苷、羥甲基-芐基無環(huán)尿苷以及羥甲基-芐氧基芐基無環(huán)尿苷。另見WO89/09603和WO91/16315，在此引入以供參考。
在本發(fā)明的另一個實施例中，該組合物含有非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物及另一種化合物，該化合物能抑制細(xì)胞攝入或外泌非甲基化嘧啶核苷，進(jìn)而有助于在所使用的一定劑量的非甲基化嘧啶核苷?；苌锇l(fā)生酶促脫酰作用后，維持血液中核苷的含量。這樣的尿苷輸送或外泌調(diào)節(jié)劑包括但不限于潘生丁、雙醋嗪(dilazep)、丙磺舒、利多氟嗪(lidoflazine)或硝基芐基硫肌苷(nitrobenzylthioinosine)。
在本發(fā)明的另一個實施例中，該組合物中含有胞苷的酰基衍生物及能抑制尿苷磷酸化酶的化合物。因為當(dāng)胞苷的酰基衍生物經(jīng)脫酰作用后胞苷在血液中被部分脫氨，所以此酶的抑制有助于組織結(jié)合胞苷。
本發(fā)明的另一個實施例中，該組合物含有胞苷或脫氧胞苷的?；苌锖湍芤种泼撗醢彰摪被傅幕衔铩Ｍㄟ^抑制脫氧胞苷或胞苷的脫氨基作用，胞苷脫氨基酶或脫氧胞苷脫氨基酶的抑制劑(如四氫尿苷或四氫-2’-脫氧尿苷)，提高了胞苷或脫氧胞苷的?；苌锏男ЯΑＴ诒景l(fā)明的另一個實施例中，使用一種胞苷脫氨基酶或脫氧胞苷脫氨基酶的抑制劑來減輕抗病毒或抗癌核苷類似物的毒性(見實施例11)。
在本發(fā)明的另一個實施例中，特別是為預(yù)防或治療對胃腸粘膜的損害，該組合物含有非甲基化嘧啶核苷的?；苌锖鸵环N或多種用于幫助粘膜恢復(fù)或降低不舒適程度的試劑。這樣的試劑的例子包括但不限于硫糖鋁、兩種或多種1989年4月21日申請的、流水號為341,925的美國專利申請(在此引入以供參考)中所公開的脫氧核糖核苷組成的混合物、別嘌呤醇、抗菌素(如洗必泰葡糖酸鹽)或局部麻醉劑如苯佐卡因。
在本發(fā)明的另一個實施例中，該組合物含有非甲基化嘧啶核苷?；苌锖涂诜行У目鼓[瘤核苷類似物的組合形式。有利的組合是尿苷的酰基衍生物與口服有效的氟化嘧啶特別是5-氟尿嘧啶的藥物前體的組合。在這些組合物中，非甲基化嘧啶核苷的?；苌锱c抗腫瘤核苷類似物混合(或者一同用藥)，其摩爾比為1∶1至12∶1。摩爾比為2∶1至8∶1是有利的。適宜的口服有效氟化嘧啶包括喃氟啶、5’-脫氧氟尿苷、5-氟尿嘧啶、5-氟尿苷、2’-脫氧-5-氟尿苷，N4-三甲氧基苯甲?；?5’-脫氧-5-氟胸苷或它們的?；苌?。
根據(jù)所需的用途，可以把組合物制成液體、混懸液、片劑、膠囊、糖衣藥丸、注射溶液、局部使用的溶液或者栓劑等多種形式(見下文中制劑的討論)。
作為對含本發(fā)明的一種化合物和另一種活性試劑(如上所述)的組合物制劑的一種替換物，在另一個實施例中，本發(fā)明的化合物與其它活性試劑一同使用。
D.本發(fā)明化合物和組合物的治療用途本發(fā)明的化合物可用于防止或治療對動物體內(nèi)造血過程和免疫系統(tǒng)功能的損壞。這些化合物在抗病毒或抗腫瘤劑引起對骨髓的損傷或抑制之后通過將血細(xì)胞數(shù)的損失降至最低的方式來減小對造血過程的損害，所述抗病毒或抗腫瘤劑影響核苷酸的生物合成、代謝和利用。本發(fā)明的化合物可用于對人的治療；不過，本發(fā)明并不打算僅限于此，本發(fā)明期望能用來治療所有使用了本發(fā)明的活性化合物后效果良好的動物。
本發(fā)明還進(jìn)一步體現(xiàn)在分別或一同使用本發(fā)明的藥物化合物或組合物，以達(dá)到預(yù)防，減弱或減輕與使用能影響核苷酸的生物合成、代謝或利用的抗病毒或抗腫瘤劑有關(guān)的毒性的目的。
使用本發(fā)明的化合物，組合物和方法而獲益的特定情況包括造血系統(tǒng)已受到或很可能受到化學(xué)療法(特別是能影響核苷酸的生物合成，代謝或利用的化學(xué)療法)損害的情況。這樣的情況包括治療受到細(xì)胞減少性癌癥化學(xué)療法或抗病毒化學(xué)療法影響的動物如人類患者，此外，還特別包括需要保持血細(xì)胞數(shù)的獸藥上的應(yīng)用。
化合物和組合物還可用于預(yù)防或治療抗癌或抗病毒化療劑對其它組織包括-但不限于-胃腸上皮造成的損害。用于該目的時，可以任選口服、栓劑或非腸道方式使用這些化合物和組合物。
通過減輕抗癌或抗病毒化學(xué)療法對造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的損害，本發(fā)明的化合物和方法可降低對機(jī)會感染或二次感染(細(xì)菌，病毒或真菌感染)敏感度的危險。
通過與能促進(jìn)嘧啶核苷被細(xì)胞攝入和磷酸化的試劑一同使用，可以提高本發(fā)明化合物的效力。這樣的試劑包括造血生長因子(如G-CSF，GM-CSF，SCF，?；u基嘌呤核苷及其同類物，促紅細(xì)胞生成素，及白細(xì)胞介素)、胰島素，以及能生成胰島素的碳水化合物(如葡萄糖或葡萄糖聚合物)。
與抗癌化學(xué)療法有關(guān)的并發(fā)癥的治療用標(biāo)準(zhǔn)的抗腫瘤化療劑[如5-氟尿嘧啶、氟脫氧尿苷、長春花生物堿，環(huán)磷酰胺和其它氮芥子氣的烷化試劑、道諾紅霉素、道克紅霉素、阿霉素、氨甲喋呤、阿糖胞苷、6-巰基嘌呤、硫代鳥嘌呤、鬼臼毒、順鉑或者這些細(xì)胞減少劑的組合物]治療的病人的白細(xì)胞數(shù)特別是嗜中性白細(xì)胞數(shù))經(jīng)常會急劇減少。對靠影響核苷酸的生物合成、代謝或利用而發(fā)揮這種作用的細(xì)胞毒性劑的情形來說，每天使用(口服或非腸道給藥)有效劑量(如0.1-10.O克)的本發(fā)明的化合物如三乙酰尿苷(或尿苷、胞苷、脫氧胞苷或脫氧尿苷的其它?；苌?，連續(xù)使用幾天，可以降低嗜中性白細(xì)胞減少癥的嚴(yán)重程度，而這種病經(jīng)常在開始化學(xué)療法后幾天至幾周內(nèi)出現(xiàn)。這樣就減少了整個療程中病人受感染的可能性，使病人可能接受更大劑量的化療劑和/或接受比沒有使用尿苷衍生物的對照組的病人更頻繁的重復(fù)劑量藥物的治療。與此類似，通過使用本發(fā)明的化合物和組合物，可以彌補(bǔ)化療所致的其它類型血細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、血小板、紅細(xì)胞等)數(shù)目的變化。
與本發(fā)明的化合物和方法一起使用特別有用的抗腫瘤劑包括5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-FU的藥物前體(如喃氟啶、5’-脫氧氟尿苷、卡莫氟)、氟尿苷、2，-脫氧氟尿苷、氟尿苷或2’-脫氧氟尿苷的藥物前體衍生物、氟胞嘧啶(它還具有抗真菌活性)、阿糖胞嘧啶、阿糖胞嘧啶的藥物前體、環(huán)胞苷、5-氮雜-2’-脫氧胞苷、阿糖5-氮雜胞嘧啶、N-膦酰乙酰-L-天冬氨酸(PALA)、吡唑呋喃菌素、6-氮雜尿苷、阿扎利賓、6-氮雜胞苷、三氟-甲基-2’-脫氧尿苷、胸苷，以及3-脫氮雜尿苷。這樣的抗腫瘤劑以及各種其它治療用的核苷類似物通過影響核苷或核苷酸的生物合成，利用或代謝起作用，于是，可通過使用本發(fā)明的嘧啶化合物來降低它們的毒副作用。
除降低抗腫瘤核苷類似物的毒性外，非甲基化嘧啶核苷的?；苌镆脖挥脕斫档涂鼓[瘤劑的毒性，該抗腫瘤劑通過葡糖醛酸化作用從體內(nèi)清除。通過葡糖醛酸化作用清除的抗腫瘤劑包括但不限于表柔比星和喜樹堿如irinotecan及托泊替堪。在此過程中，葡糖醛酸與毒性化合物連接以利于將它們排除。葡糖醛酸與其它分子連接時需要尿苷二磷酸葡糖醛酸(UDPGA)。使用尿苷或胞苷的酰基衍生物提高了細(xì)胞中UDPGA的濃度并由此提高了毒性化合物的葡糖醛酸化作用。在這種情況下，在抗腫瘤劑給藥前或同時使用胞苷或尿苷的?；苌铩Ｔ诘湫偷呐R床情況下，在抗腫瘤化合物給藥前或給藥期間一次或分四次使用1至10g尿苷酰基衍生物。
可在使用抗腫瘤或抗病毒試劑過程之前，之中和/或之后使用本發(fā)明的化合物。典型的情況是，在使用了一定劑量的癌癥化療劑之后使用本發(fā)明的化合物，作為使用了有效劑量的抗腫瘤劑之后對正常組織的一個“補(bǔ)救”措施。
胃腸上皮對癌癥化療劑如氟尿嘧啶很敏感。胃腸粘膜的粘膜炎、口炎或潰瘍是癌癥化療的常見副作用，能導(dǎo)致不適、腹瀉、電解質(zhì)不平衡和消瘦。本發(fā)明的化合物和組合物可用于防止或治療由癌癥化療劑引起的對胃腸通道(包括口腔)的損害。為這種目的使用本發(fā)明的化合物和組合物時可以任選地把它們制成流體形態(tài)的溶液或懸浮液(作為漱口水、作為一種吞咽的組合物、或作為灌腸劑)，膠囊、糖衣藥丸、藥片、注射溶液或栓劑。系統(tǒng)使用本發(fā)明的化合物和組合物也能減輕抗癌或抗病毒核苷類似物對胃腸粘膜造成的損害。
局部使用本發(fā)明的化合物(如對頭皮)可用來預(yù)防化療所致的脫發(fā)癥。
尿苷的?；苌镉兄诜乐够蛑委熡捎诜蜞奏せ蚰蜍盏挠嘘P(guān)的氟化類似物(如氟尿苷或其藥物前體、氟脫氧尿苷或其藥物前體、喃氟啶、5’-脫氧氟尿苷)引起的毒性反應(yīng)。對于口服，有益的尿苷酰基衍生物是那些用短鏈脂肪酸(特別是醋酸)取代的衍生物，或者用短鏈二價碳基氧碳酸酯(如乙氧基碳酸酯)取代的衍生物。胞苷或脫氧胞苷的酰基衍生物也有助于治療氟尿嘧啶或有關(guān)的氟化嘧啶類似物引起的毒性反應(yīng)。
在典型的治療過程中，患者接受一定劑量的氟尿嘧啶，氟尿嘧啶可以作為一種單獨用的治療劑，或作為還包括使用其它抗腫瘤藥物(如氨甲喋呤、甲酰四氫葉酸、PALA或環(huán)磷酰胺)的治療方法中的一部分。使用5-FU幾小時至一天(即2-24小時)后，患者口服1至10g三乙酰尿苷。在隨后的1至4天的療程中患者每隔6至8小時口服一次同樣劑量的TUA?；颊哌€可每周或在更長時間間隔內(nèi)另外接受5-FU加TAU的治療。
為了治療人體腫瘤，在六周內(nèi)經(jīng)常每周快速濃注5FU。在這種治療方案中，5FU的正常最大耐受劑量為500至600mg/m2。隨后(5FU給藥后2至24小時)使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌锟蓪⒚恐?FU的劑量逐步提高到正常最大耐受劑量的1.5倍以上(即大于900mg/m2)，優(yōu)選900至2000mg/m2，更優(yōu)選1000至1600mg/m2。臨床上使用5FU的另一種方法是連續(xù)4或5天內(nèi)每天注射400至500mg/m2。這種給藥方案每三至四周重復(fù)一次。這種情況下，隨后使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌锿瑯邮?FU的劑量至少提高至正常耐受劑量的1.5倍，優(yōu)選600至1000mg/m2，更優(yōu)選700至900mg/m2。每天使用5FU的情況下，在每次5FU給藥后2至12小時接著使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌?。另一種給藥方案包括在24小時內(nèi)輸注總劑量為1800至2600mg/m2的5FU，每周至每三至四周重復(fù)一次。當(dāng)輸注(與快速濃注相比)5FU時，要使用高累積劑量，因為5FU被大量降解。5FU輸液24小時的情況下，在輸畢2至24小時后使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌铮?FU的劑量比正常耐受劑量提高至少1.5倍，優(yōu)選2800至4000mg/m2/24h。
使用高劑量5FU，隨后使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌锏牧硪环N方案是三周內(nèi)每周快速濃注5FU，隨后停藥一周至數(shù)周。這種方案與普通的每周注射，注射六周的上述方案相比，每周可使用更高劑量的5FU。在每周注射，注射3周的方案中，用非甲基化嘧啶核苷的?；苌飦斫档?FU的毒性，優(yōu)選濃注5FU劑量為1000至2400mg/m2。
在所有方案中，用隨后使用非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物的方法提高抗腫瘤核苷類似物的劑量，抗腫瘤核苷類似物的最大劑量是對患者的毒性達(dá)到最大臨床接受程度的劑量。
對5FU的臨床反應(yīng)是每周劑量強(qiáng)度的函數(shù)(Hryniuk等，Seminars in oncoligy，14(No.4；Suppl 4)3-11)。與非甲基化嘧啶核苷?；苌锖嫌檬?FU劑量的提高增強(qiáng)了5FU的抗腫瘤效果。5FU藥效的其它調(diào)節(jié)劑包括但不限于氨甲喋呤、曲美沙特、甲基巰基嘌呤核糖甙，PALA、甲酰四氫葉酸、5FU分解代謝的抑制劑，左旋噻咪唑、干擾素或順鉑可任選地與5FU和非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物合用。當(dāng)與5FU和非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物合用時，這樣的調(diào)節(jié)劑使用劑量和方案類似或等同于它們與5FU合用而不隨后使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌飼r確定的適宜的劑量和方案。一些這樣的調(diào)節(jié)劑也增加5FU的毒性，因此降低了可以給患者使用的最大耐受劑量。但在這種情況下，隨后使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌锱c不使用時相比，5FU的劑量提高了1.5倍以上。隨后使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌锿瑯邮蛊渌奏ぁ?FU藥物前體或其它細(xì)胞毒性核苷類似物的正常最大耐受劑量提高。
患者對5FU的敏感性存在個體差異。但是，對于任何個別患者，與5FU合用非甲基化嘧啶核苷的?；苌锸狗奏さ膭┝恐辽俦日Ｗ畲竽褪軇┝刻岣吡?.5倍。對于任何個別患者來說，5FU的正常最大耐受劑量，可以通過5FU免疫實驗、由醫(yī)生根據(jù)經(jīng)驗判斷，或者通過對參與5FU降解或合成代謝的酶的檢測來估計。
5FU本身可以與抑制5FU被二氫嘧啶脫氫酶(DPD)降解的化合物合用。DPD是5FU降解的初始酶，在肝臟中的濃度高。對此酶的抑制降低了5FU通過肝臟和其它組織從血流中的清除速率，于是可口服使用5FU。DPD抑制也降低了5FU代謝產(chǎn)物的形成，而代謝產(chǎn)物可能加強(qiáng)其毒性或可能降低其抗腫瘤效果。DPD抑制劑的例子包括但不限于5-乙炔基尿嘧啶、溴代乙烯基尿嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶或芐氧芐基尿嘧啶(BBU)。
在本發(fā)明的一個實施例中，5FU或5FU藥物前體與酶DPD的抑制劑合用。在此實施例中，DPD的抑制劑在5FU或其它細(xì)胞毒性氟化嘧啶使用前或同時使用。尿苷或胞苷的酰基衍生物在5FU使用后2至24小時給藥。尿苷或胞苷的?；苌锏碾S后給藥，使合用比正常耐受劑量高的5FU安全可靠，結(jié)果改善了其抗腫瘤效果。
尿苷其次是胞苷的?；苌镆灿幸嬗谥委熁蝾A(yù)防由N-膦?；阴?L-天冬氨酸(PALA)、吡唑呋喃菌素、6-氮雜尿苷、阿扎利賓、三氟-甲基-2’-脫氧尿苷和3-脫氮雜尿苷引起的毒性反應(yīng)。
為了調(diào)節(jié)口服有效的抗腫瘤藥物，特別是口服有效的氟化嘧啶或氟化嘧啶的藥物前體(如5’-脫氧氟尿苷衍生物，例如喃氟啶(5-氟-1-(四氫-2-糠基)尿嘧啶)、5’-脫氧氟尿苷或相關(guān)衍生物)的毒性和藥效，可用幾種方式使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌?。在本發(fā)明的一個實施例中，在氟尿嘧啶藥物前體如喃氟啶給藥幾小時或一天后使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌?，與上述氟尿嘧啶非腸道給藥的情況相似。在本文中，非甲基化嘧啶核苷的?；苌锏碾S后給藥導(dǎo)致氟化嘧啶對正常組織毒性的降低。在本發(fā)明的另一個實施例中，在口服有效的抗腫瘤試劑使用的同時或使用后約1小時內(nèi)進(jìn)行非甲基化嘧啶核苷的?；苌锏慕o藥。
喃氟啶是一種口服有效的5-氟尿嘧啶藥物前體，通常臨床上使用含摩爾比為4∶1的尿嘧啶和喃氟啶的制劑。在本文中，尿嘧啶提高了喃氟啶降解(在由腸道吸收進(jìn)血液中或之后)產(chǎn)生的5-氟尿嘧啶的抗腫瘤效果，原因是尿嘧啶與5-氟尿嘧啶競爭降解這兩種嘧啶分子的酶，即二氫嘧啶脫氫酶。但是，尿嘧啶也提高了5-氟尿嘧啶對正常組織(特別是腸道)的毒性。胃腸損害是喃氟啶和尿嘧啶混合物的主要限制劑量的毒性。與喃氟啶(或其它口服有效的抗腫瘤嘧啶類似物)一同使用非甲基化嘧啶核苷的?；苌飳?dǎo)致使如喃氟啶產(chǎn)生的5-氟尿嘧啶等的系統(tǒng)毒性所希望地提高，而不象尿嘧啶本身那樣急劇增強(qiáng)了對腸粘膜的毒性。非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物和口服有效的抗腫瘤核苷類似物給藥的方式、劑量及其摩爾比一般與尿嘧啶和口服有效抗腫瘤劑的相同。見美國專利4328229，在此引入以供參考。使用本發(fā)明的?；苌镆彩故褂幂^高劑量的口服有效的抗腫瘤劑成為可能。本發(fā)明的這個方案用試驗說明于下文中的實施例13和14。
脫氧胞苷的?；苌镉兄谥委熁蝾A(yù)防由抗腫瘤核苷類似物引起的毒性反應(yīng)，上述類似物特指胞苷的類似物，如阿糖胞嘧啶或其藥物前體、環(huán)胞苷、5-氮雜-2’-脫氧胞苷，阿糖5-氮雜胞嘧啶或6-氮雜胞苷。對口服的情形，脫氧胞苷有益的酰基衍生物為那些被短鏈脂肪酸特別是乙酸酯取代的衍生物。
在一個涉及使用阿糖胞嘧啶或有關(guān)的胞苷的抗腫瘤類似物(主要用它們治療白血病)的典型臨床過程中，在使用一定劑量Ara-C之前或之后或與其同時口服0.5-10克劑量的脫氧胞苷的?；苌?。此后每隔6至8小時繼續(xù)服用該劑量的脫氧胞苷的?；苌?至4天。根據(jù)臨床反應(yīng)，每星期或在更長的時間間隔內(nèi)重復(fù)這種治療方法。
我們的意圖是用該抗腫瘤劑來治療它們常用來治療的那些類型的腫瘤，比如，Ara-C及其有關(guān)的胞苷類似物對白血病有效，而氟尿嘧啶及其有關(guān)的氟化尿苷類似物則用于治療結(jié)腸，胃，胰腺，胸部以及頭頸部的腫瘤。在一個實施例中，用通常的劑量使用這些抗腫瘤劑，在這種情況下，本發(fā)明的化合物主要是緩解了毒副作用的程度。在另一個實施例中，服用高于通常劑量的抗腫瘤劑，在這種情況下非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物能保證使用這樣劑量較高的，療效積極的劑量抗癌藥物的安全。此外，由于使用本發(fā)明的化合物和組合物提高了抗癌劑的治療指數(shù)，可以使用一些特定的抗腫瘤試劑來治療目前的標(biāo)準(zhǔn)療法中不用它們來治療的那些腫瘤，包括但不限于黑素瘤、前列腺癌、腎癌、卵巢癌或肺癌。
一種鑒定腫瘤類型或鑒定對高劑量氟化嘧啶與非甲基化嘧啶核苷合用反應(yīng)概率高的個體腫瘤患者的方法，包括檢測血清或腫瘤活組織切片中脂肪酸合成酶(FAS)。FAS在很多癌癥中的表達(dá)較高，它可能的作用是為快速細(xì)胞分裂提供所需的脂(Kuhajda等，Proc.Nat.Acad.Sci.916379-6383)。FAS需要NADPH作輔助因子。用于脂肪酸合成的大部分NADPH由NADP通過葡萄糖代謝的己糖一磷酸酶分路(shunt)(HMP分路)途徑再生。HMP旁路由于細(xì)胞NADPH缺失而活化。NADPH通過HMP旁路產(chǎn)生的產(chǎn)物是核糖和多種磷酸核糖。為了細(xì)胞快速合成代謝高濃度的5FU，需要供應(yīng)磷酸核糖焦磷酸(PRPP)或核糖-1-磷酸(R-1-P)，具體依5FU是通過乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶還是通過尿苷磷酸化酶轉(zhuǎn)化為細(xì)胞內(nèi)氟尿苷一磷酸而定。血清或腫瘤活組織檢查中FAS的高濃度是腫瘤的標(biāo)記，它們有效地產(chǎn)生5FU有效的合成代謝所需的核糖，并對高劑量的5FU有特別的反應(yīng)性。
病毒感染引起的并發(fā)癥的治療受HIV感染的病人，特別是那些感染已經(jīng)發(fā)展到“獲得性免疫缺陷綜合征”(AIDS)的病人，會出現(xiàn)多種免疫系統(tǒng)嚴(yán)重受損引起的癥狀和疾病，而這些癥狀和疾病在一些情況下又進(jìn)一步加重了免疫系統(tǒng)嚴(yán)重受損的程度。這些病人中有很多都使用了抗病毒化療劑如AZT，這些試劑同時對人體的免疫功能和造血有不利影響，會進(jìn)一步降低人體對所有形式感染的抵抗力。使用本發(fā)明的化合物--口服、靜脈注射或非腸道注射--能提高因抗病毒化療劑特別是那些改變核苷酸的合成、代謝或利用的試劑，如AZT或二脫氧胞苷而降低的血細(xì)胞數(shù)。因為在AIDS病人的化療中貧血和對感染較高敏感度是限制劑量和限制速率的因素，所有用這些化合物治療病人會降低化學(xué)治療的副作用(進(jìn)而提高人的健康程度)，并且如果適合，允許采用強(qiáng)度更大的化學(xué)治療方法。AZT和二脫氧胞苷對骨髓以外的組織包括肌肉和周圍神經(jīng)系統(tǒng)有不利的副作用。本發(fā)明的化合物和組合物也可用于治療或預(yù)防這樣的副作用。
AZT和二脫氧胞苷以外的多種抗病毒核苷類似物都用于治療病毒感染，包括但不限于HIV、皰疹或肝炎。這樣的試劑的例子包括5-乙基-2’-脫氧尿苷、5-碘代-2’-脫氧尿苷、5-溴代-2’-脫氧尿苷、5-甲氨基-2’-脫氧尿苷、2’，3’-二脫氧胞苷-2’-烯、3’-脫氧胸苷-2’-烯、3’-疊氮基-2’，3’-二脫氧尿苷、阿糖尿嘧啶、二脫氧尿苷、2’，3’二脫氧-3’-氟胸苷以及(S)-1-(3-羥基-2-膦?；籽趸?胞嘧啶(HPMPC)；參見WO89/09603，在此引入以供參考。本發(fā)明的化合物可用來治療或預(yù)防這些和有關(guān)的其它抗病毒核苷類似物的有害副作用。
在治療或預(yù)防抗病毒化學(xué)療法引起的毒性反應(yīng)過程中，可以在使用抗病毒劑過程之前、之中和/或之后使用這些化合物和組合物。常用的抗病毒化學(xué)療法特別是用于治療慢性病毒感染如HIV感染的療法涉及每天(經(jīng)常是每天數(shù)次)使用一種或多種抗病毒劑。根據(jù)觀察到的臨床效果，本發(fā)明化合物的使用可以每天幾次，每天一次或次數(shù)更少。在所有的情形中，按通常的治療方法，用這些抗病毒藥物類來治療在臨床上已證實上述藥物對它們有效的那些類型的病毒感染。用抗病毒核苷類似物來治療病人，或者可以降低標(biāo)準(zhǔn)劑量藥物的副作用，或者可允許使用高于常規(guī)容許的或使用的劑量的抗病毒試劑。
為治療AZT引起的毒性反應(yīng)，可以使用尿苷和/或胞苷的?；苌锘蛘呙撗醢盏孽；苌?。脫氧胞苷的?；苌锾貏e有益。對口服使用方法來說，用短鏈脂肪酸(特別是乙酸酯)，或用短鏈二價碳基氧基碳酸酯(如乙氧碳酸酯)取代的脫氧胞苷、尿苷和胞苷的酰基衍生物較是有利的。
在通常的臨床條件下，患者每天需接受AZT2至4次，而且一般須無限期地使用下去。根據(jù)臨床反應(yīng)，可以每周一次直至每天經(jīng)4次口服1-10克劑量的尿苷、胞苷或脫氧胞苷(或者兩種或全部上述核苷混合物)的酰基衍生物。
脫氧胞苷的?；苌镉幸嬗谥委熁蚍乐苟撗醢找鸬亩拘苑磻?yīng)。
與瘧疾感染有關(guān)的并發(fā)癥的治療瘧疾寄生物如約氏瘧原蟲或惡性瘧原蟲，依賴于嘧啶核苷酸生物合成的從頭合成途徑；哺乳動物細(xì)胞一般能利用從頭合成途徑或“補(bǔ)救”途徑，通過這些途徑高級的核苷酸前體(如尿苷或胞苷)被結(jié)合進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的核苷酸集中處。
5-氟乳清酸酯，一種嘧啶核苷酸前體乳清酸的類似物，對依賴于從頭嘧啶生物合成的瘧疾寄生物有毒。其它從頭嘧啶生物合成的抑制劑如PALA、吡唑呋喃菌素或6-氮雜尿苷也對瘧疾寄生物有類似的毒性。嘧啶生物合成的抑制劑特別包括氟乳清酸酯也對哺乳動物有毒。不過對用5-氟乳清酸酯(或其它嘧啶生物合成的抑制劑)治療過的哺乳動物使用尿苷會減弱前者的宿主毒性而不會降低其抗瘧疾的活性。口服用的能提高血液中的尿苷含量的活性試劑是本文中尿苷的有益的來源。這樣的試劑包括本發(fā)明的尿苷或胞苷的?；苌?。在治療瘧疾過程中，使用了有效抗瘧疾劑量的氟乳清酸酯。在使用氟乳清酸酯之前、之后或與此同時，使用了尿苷或胞苷的?；苌?三乙酰尿苷特別有益)，其使用劑量足以減輕氟乳清酸酯的毒性。酰化尿苷或胞苷衍生物如三乙酰尿苷的常用劑量為1-10克，使用次數(shù)應(yīng)滿足使氟乳清酸酯的毒性降至最低的要求，如每天1至4次。根據(jù)需要還可以重復(fù)使用上述劑量的氟乳清酸酯或尿苷，以分別克服瘧疾感染和降低宿主毒性。
E.本發(fā)明化合物和組合物的使用和組成根據(jù)治療情況，可以采用口服，非腸道注射、靜脈注射、局部使用或其它方式使用本發(fā)明的化合物和組合物。
通過監(jiān)視治療效果，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以很容易地確定三乙酰尿苷(或尿苷、胞苷、脫氧胞苷或脫氧尿苷的其它酰基衍生物)的最佳劑量和服藥次數(shù)安排。
可以長期或間歇地使用本發(fā)明的化合物和組合物。根據(jù)化療劑的毒性特征，可以選擇在使用細(xì)胞減少性或抗病毒化療劑之前，之中或之后使用這些化合物和組合物。
用于口服的尿苷、胞苷、脫氧胞苷或脫氧尿苷的有益的酰基衍生物是那些核糖或脫氧核糖環(huán)上的羥基被短鏈(2-6個碳原子)脂肪酸取代的衍生物。用于口服的、有益的衍生物還有羥基被含3-7個碳原子的烴氧羰基取代的嘧啶核苷。
口服尿苷、胞苷、脫氧胞苷或脫氧尿苷的?；苌锏膭┝恳话阍诿刻?.5-20克之間，最常見的是在每天2-10克之間。
粉末狀的尿苷、胞苷、脫氧胞苷或脫氧尿苷的?；苌锸且阅z囊或藥片形式口服，盡管溶液、乳劑或懸浮液形式也可用于口服。
本發(fā)明的化合物可任選地在可生物降解?？缮锔g或其它逐漸釋放的基質(zhì)中配制而成，以便在口服或皮下注入后持續(xù)釋放這些化合物。對靜脈內(nèi)或肌內(nèi)注射的情形，可任選地在脂質(zhì)體中配制上述化合物。
將具有藥理學(xué)活性的化合物與適當(dāng)?shù)脑谒幬飳W(xué)上可接受的載體任選地結(jié)合到一起，上述載體包括使上述活性的化合物便于處理的賦形劑和助劑?？梢园阉鼈冎瞥伤幤?，糖衣藥丸，膠囊和栓劑來使用。組合物比如可以口服，經(jīng)直腸或陰道的方式使用，或通過口腔的頰囊釋放，并且可選地以溶液的形態(tài)注射、口服或局部使用。組合物可以含約0.1-99％(最好約50-90％)的活性化合物，并使它(們)與賦形劑(一種或多種)結(jié)合在一起。
對注射或靜脈內(nèi)輸注這樣的非腸道使用方法，活性化合物懸浮或溶解在水溶介質(zhì)(如無菌水或鹽水溶液)之中?？勺⑸涞娜芤夯驊腋∫嚎扇芜x地含表面活性劑，如聚氧乙烯脫水山梨醇酯、脫水山梨醇酯、聚氧乙烯醚或溶劑如丙二醇或乙醇。溶液通常含0.01-5％的活性化合物?；钚曰衔锟扇芜x地溶解在藥用級植物油中供肌肉內(nèi)注射。這樣的制劑在油中含約1-50％的活性化合物(一種或多種)。
合適的賦形劑包括填充劑以及粘合劑，填充劑比如可以是糖如乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨醇、纖維素制劑和/或酸鈣如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘合劑如淀粉糊如用玉米淀粉、小麥淀粉、水稻淀粉或馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮。
助劑包括流動調(diào)節(jié)劑和潤滑劑，比如硅石、滑石、硬脂酸及其鹽(比如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣)和/或聚乙二醇。糖衣藥丸的核心外有一適當(dāng)?shù)陌拢枰脑捤鼞?yīng)能抗胃液的腐蝕。為此，采用了濃縮的糖溶液，溶液可隨意含有阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦，漆溶液和適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑或溶劑混合物。為制備抗胃液腐蝕的包層，采用了適當(dāng)?shù)睦w維素制劑(如鄰苯二甲酸乙酰纖維素或鄰苯二甲酸羥基丙基甲基纖維素)的溶液。比如，也可任選地把染料或色素加入藥片或糖衣藥丸的包層中，用來區(qū)別或表征不同劑量化合物的特性。
制備本發(fā)明的藥物制劑的方法本身是眾所周知的，比如，可通過通常的混合、造粒、制造糖衣、溶解或凍干工藝來完成。于是，生產(chǎn)口服藥物制劑的方法是，使活性化合物(一種或多種)與固態(tài)賦形劑結(jié)合，并且如果想要或需要的話，在加入合適的助劑后可以任選地粉碎所得的混合物并加工粒狀的混合物，最后得到藥片或糖衣丸。
其它用于口服的藥物制劑包括明膠做的擠壓成形膠囊，以及用明膠和增塑劑例如甘油或山梨醇做的軟膠囊。擠壓成形的膠囊含有粒狀的活性化合物(一種或多種)，這些化合物可任選地與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉和/或潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂以及還可以有穩(wěn)定劑相混合。在軟膠囊中，活性化合物優(yōu)選溶解或懸浮在適當(dāng)?shù)囊后w如脂肪油、液態(tài)石蠟或聚乙二醇中。此外，也可任選地加入穩(wěn)定劑。
非腸道使用合適的試劑包括水溶性活性化合物如水溶性鹽的水溶液。此外，也可使用適于與油溶性注射懸浮液共容的活性化合物的懸浮液。適用的親油溶劑或媒介包括脂肪油如芝麻油或者合成的脂肪酸酯比如油酸乙酯或甘油三酯。水溶性注射懸浮液可任選地包括能提高懸浮液粘度的物質(zhì)，這些物質(zhì)比如可以包括羧甲基纖維素鈉，山梨醇和/或葡聚糖。懸浮液可任選地含有穩(wěn)定劑。
在另一個實施例中，活性化合物可以配制成皮膚洗劑的一部分，用于局部使用。適用的親油溶劑或媒介包括脂肪油如芝麻油或椰子油或者合成的脂肪酸酯比如油酸乙酯或甘油三酯。
在另一個實施例中，把活性化合物配在適用于直接治療胃腸粘膜疾病的載體中。這樣的例子包括漱口液，吞咽液體(溶液或懸浮液)，或粘性液體(如甲基纖維素、羧甲基纖維素、黃蓍膠等的溶液。這些液體是通過口服或通過直腸給藥的。
直腸給藥的其它藥物制劑特別是用于治療結(jié)腸和直腸的制劑包括如由活性化合物與一種栓劑的基質(zhì)結(jié)合而成的栓劑。適用的栓劑基質(zhì)比如可以是天然的或合成的甘油三酯、鏈烷烴、聚乙二醇或高級鏈烷醇。此外，也可用由活性化合物與一種基質(zhì)結(jié)合而成的明膠直腸膠囊。基質(zhì)材料比如可包括液體甘油三酯、聚乙二醇或鏈烷烴。
F.本發(fā)明化合物的合成通過使一種嘧啶核苷與一種被活化的羧酸反應(yīng)，可以合成非甲基化嘧啶核苷的?；苌铮换罨聂人崾且延眠m當(dāng)?shù)脑噭┨幚磉^的羧酸，處理后其羧酸鹽的C比原羧酸中的C對親核的侵襲更加敏感。用于合成本發(fā)明化合物的活性羧酸的例子為酰氯、酸酐、N-羥基丁二酰胺酯或者用BOP-DC活化的羧酸。作為另一種選擇，羧酸也可通過偶合劑如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)與嘧啶核苷相連接。
在制備本發(fā)明的酰基化合物的過程中，當(dāng)所需的?；苌锏乃醽碓磶в杏绊戸；磻?yīng)的基團(tuán)如羥基或氨基時，這些基團(tuán)在制備酐之前分別被保護(hù)基團(tuán)如叔丁基二甲基甲硅烷醚或t-BOC基團(tuán)保護(hù)。比如乳酸用叔丁基二甲基氯硅烷轉(zhuǎn)化成的2-叔丁基二甲基甲硅烷氧丙酸，然后所生成的甲硅烷酯被含水基質(zhì)水解。通過被保護(hù)酸與DCC反應(yīng)可以生成酐。采用標(biāo)準(zhǔn)工藝，用氨基酸制備出N-t-BOC或N-CBZ衍生物，然后N-t-BOC或N-CBZ又被DCC轉(zhuǎn)化為酐。在含有多于一個羧酸鹽基團(tuán)的酸(琥珀酸、富馬酸或己二酸)的參與下，所需的二元羧酸的酸酐與嘧啶核苷在嘧啶中或在嘧啶加二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺中反應(yīng)。
按照標(biāo)準(zhǔn)方法，在一適當(dāng)?shù)娜軇?，特別是在(i)二氯甲烷以及(ii)在二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺的混合物中使用DCC，使氨基酸與胞苷和脫氧胞苷的外向環(huán)氨基，及嘧啶核苷的醛糖部分上的羥基相偶合。
通過使核苷在溶劑例如嘧啶或嘧啶加二甲基甲酰胺中在無水條件下與適當(dāng)?shù)亩r碳基氯甲酸酯反應(yīng)，可以制備出非甲基化嘧啶核苷的二價碳基氧化羰基衍生物。在真空環(huán)境下排除溶劑，用柱色譜法提純殘余物。
對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說顯然清楚，用其它合成方法也可制備出本發(fā)明的化合物。
下列實施例說明了而不是限定本發(fā)明的方法和組合物。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的，在臨床治療中經(jīng)常遇到的多項條件和參數(shù)的其它適當(dāng)改進(jìn)及變化也應(yīng)包括在本發(fā)明的精神和保護(hù)范圍之中。
實施例實施例1口服三乙酰尿苷緩解5-氟尿嘧啶的血液學(xué)毒性目的進(jìn)行這項研究的目的是想確定口服TAU以使小鼠擺脫5-FU毒性影響的效果是否比口服尿苷本身更好。用骨髓細(xì)胞數(shù)和外周血細(xì)胞數(shù)作為5-FU毒性的指數(shù)。
方法在試驗開始那天的中午12時對45只雌性Balb/C小鼠(每只重20g)使用5-FU(150mg/kg，腹膜內(nèi)注射(i.P.))，然后將這些動物分為5組對照組(水，口服(P.O.))，口服尿苷400mg/kg/劑量，口服尿苷800mg/kg/劑量，非腸道使用(腹膜內(nèi)注射)尿苷400mg/kg/劑量以及口服TAU500mg/kg/劑量。
使用5-FU兩小時后，開始用尿苷或三乙酰尿苷進(jìn)行補(bǔ)救治療。各組在使用5-FU當(dāng)天下午2時、4時、6時以及次日上午9時、11時、下午1時、3時、和5時接受指定的治療。根據(jù)情況，每劑量的尿苷或TAU溶解在0.2ml水中用管飼法使用，或溶解在0.2ml鹽水中用腹膜內(nèi)注射法使用。
使用5-FU 7天后，從每組5個小鼠的眼眶之下的竇中采集0.2-0.3ml血，注入到EDTA中，供隨后血細(xì)胞分類計數(shù)用。用頸部脫位法處死小鼠，取下股骨，排出其中的細(xì)胞供計數(shù)用；取出脾并進(jìn)行稱重。使用5-FU13天后，對每組剩下的4只小鼠進(jìn)行放血、處死取出它們的脾臟。
結(jié)果第7天使用5-FU致使所有檢測到的類型血細(xì)胞數(shù)都下降。使用5-FU 7天后，通過口服TAU治療過的動物的嗜中性白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和血小板數(shù)都顯著地高于對照組的動物(表1)。特別值得注意的是接受了TAU的小鼠的白細(xì)胞數(shù)比腹膜內(nèi)注射同等摩爾數(shù)劑量的尿苷的小鼠高?？诜AU的小鼠的細(xì)胞數(shù)也比口服同樣摩爾數(shù)(400mg/Kg/劑量)或兩倍摩爾數(shù)(800mg/Kg/劑量)劑量的尿苷的小鼠高。
口服TAU及腹膜內(nèi)注射尿苷的小鼠中的血小板數(shù)在正常范圍內(nèi)(700-800K/μl)。血小板數(shù)在其它組中低于正常水平，在對照組小鼠中最低(表1)。
用口服FAU及非腸道使用尿苷法治療過的小鼠中的骨髓細(xì)胞數(shù)顯著高于其它組中的任何一個(表2)。
第11天一個重要的結(jié)果是，接受TAU的組中小鼠的嗜中性白細(xì)胞和RBC的含量高于用其它方法治療過的組，包括腹膜內(nèi)注射等摩爾數(shù)劑量尿苷的那些小鼠(表3)。
脾重是從骨髓損傷中恢復(fù)的小鼠造血活性的一個指數(shù)。使用5-FU11天后，口服TAU的小鼠的脾重顯著大于其它治療組，對照組中的脾重最小(表4)。
結(jié)論
這項研究的結(jié)果表明，口服TAU使小鼠從5-FU毒性中解救出來的效果好于口服同等摩爾數(shù)或兩倍摩爾數(shù)的尿苷，并且好于腹膜內(nèi)注射同等摩爾數(shù)劑量尿苷的效果。
表1.使用5-FU 7天后的血細(xì)胞數(shù)WBC嗜中性白細(xì)胞 淋巴細(xì)胞血小板 RBC對照3.4±.1 0.24±.053.18±.07 387±72K/μl 8.05±.11Urd400口服 4.4±.5*0.48±.233.01±.77 434±114 7.66±.12Urd800口服 4.6±.4*0.88±.22*3.76±.27 646±108 8.24±.26Urd400腹膜內(nèi)注射4.6±.4*0.83±.24*3.80±.30 773±54**8.06±.05TAU500口服 5.9±.4*1.20±.23**4.72±.36**723±57**8.27±.16除RBC的血細(xì)胞計數(shù)單位為M/μl外，其余皆為Kμl。
*＝大于對照值，P＜0.05**＝大于對照值，P＜0.01表2.使用5-FU 7天后髓細(xì)胞數(shù)和脾重髓細(xì)胞數(shù) 脾重對照 1.5±.2×106/股骨 71±2.6 mgurd400口服1.6±.2×10674±2.4urd800口服2.9±.9×10674±6.4urd400i.p.5.0±.7×106**78±5.5TAU500口服3.0±.5×106*78±3.5*＝大于對照值，P＜0.05**＝大于對照值，P＜0.01表3.使用5-FU 11天后的血細(xì)胞數(shù)
WBC嗜中性白細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 血小板RBC對照 5.2±.3 0. 0.48±.12 4.68±.11 2280±193 7.31±.05urd400口服4.6±.5 0.84±.19 3.65±.27 1940±177 7.44±.14urd800服 4.9±.4 0.82±.19 4.07±.38 2127±143 7.33±.16urd400i.p.5.1±.5 1.20±.21*3.84±.38 1706±887.78±.22TAU500口服5.4±.5 1.89±.12**3.29±.36 1446±160 8.05±.16**除RBC的血細(xì)胞計數(shù)單位為M/μl外，其余皆為K/μl。
*＝大于對照值，P＜0.05**＝大于對照值，P＜0.01表4.使用5-FU 11天后脾重脾重對照 76±7mgurd400服 103±15urd800口服 99±6*urd400i.p. 104±6*TAU500口服 143±11***＝大于對照值，P＜0.05**＝大于對照值，P＜0.01實施例2TAU按一種劑量依賴關(guān)系加速用5-FU治療過的動物的造血系統(tǒng)的恢復(fù)目的這項試驗的目的是為了證實和發(fā)展以前的一些發(fā)現(xiàn)，即口服TAU能加速用5-氟尿嘧啶(5-FU)治療過的小鼠中造血系統(tǒng)的恢復(fù)，以及觀察TAU劑量的增加與這些用5-UF治療過的小鼠的造血系統(tǒng)的響應(yīng)之間的關(guān)系。
方法在試驗開始的那天下午1時，對70只各重約20g的雌性Balb/C小鼠中的每一只腹膜內(nèi)(i.p.)注射5-FU(150mg/kg)。然后把這些動物分成5個不同的治療組對照組(水)以及劑量分別為100、250、500和1000mg/kg/治療的口服TAU組。在使用5-FU當(dāng)天下午3時、5時、7時30分、10時以及第二天的上午9時、11時、下午1時、3時、6時和10時使用試驗化合物；最后一次使用試驗化合物是在一次注射5-FU兩天后的上午11時。每次治療都是用管飼法與0.2ml體積的水同時口服，只有最大劑量的TAU和0.4ml水一次使用。
使用5-FU后的第7天和第11天，用眼眶后放血法從每組7只小鼠中采集0.2-0.3ml血并注入EDTA，供隨后血細(xì)胞分類計數(shù)用。用頸部脫位法處死小鼠，取出它們的右股骨，排出骨內(nèi)物質(zhì)供細(xì)胞計數(shù)用；取出它們的脾進(jìn)行稱重。
結(jié)果第7天隨著TAU劑量增加，骨髓中有核細(xì)胞的數(shù)量也增加。接受TAU100這一組中這樣的細(xì)胞數(shù)近似等于對照組中的細(xì)胞數(shù)，而與對照組相比，TAU500和TAU1000組中骨髓細(xì)胞構(gòu)成的差別顯然更大(表5)。
TAU劑量為500和1000mg/kg/治療的治療過程使其白細(xì)胞數(shù)顯著大于對照組。
總的嗜中性白細(xì)胞數(shù)也顯示出隨劑量的增加而增加，TAU1000組中的上述數(shù)量約達(dá)到對照組的3倍。
與對照組相比，TAU500和TAU1000組中的淋巴細(xì)胞數(shù)都顯著提高。
TAU250、500和1000組中的血小板數(shù)顯著提高。劑量響應(yīng)曲線在500mg/kg/治療處達(dá)到平直部分(表6)。
表5.TAU劑量增加對使用5-FU 7天后小鼠的造血的影響。所有的血小板計數(shù)單位為K/μl。
髓細(xì)胞 WBC嗜中性白細(xì)胞 淋巴細(xì)胞對照1.70±.35 2.46±.13 .026±.0112.43±.13TAU100 1.77±.18 2.47±.04 .014±.0082.46±.04TAU250 2.91±.48 2.76±.20 .027±.0122.71±.20TAU500 3.93±.39*4.06±.14*.037±.0203.99±.15*TAU1000 4.42±.34*3.57±.25*.071±.0273.44±.23*
*表示不同于對照組，P＜0.01表6.TAU劑量增加對使用5-FU 7天后小鼠的紅細(xì)胞(RBC)和血小板(PLT)的影響RBC(M/μl) PLT(K/μl)對照 8.38±.18 308±52TAU1008.20±.07 440±46TAU2508.51±.06 601±46**TAU5008.43±.16 712±42**TAU1000 8.65±.15 715±35****表示不同于對照組，P＜0.01第11天與對照組比較，每種劑量的TAU都使脾重有些增加，但僅在TAU250組中達(dá)到統(tǒng)計學(xué)上的顯著性(104.2±3.5mg比79.7±3.1；P＜0.05)。
與對照組相比，TAU250、500和1000組中的總的嗜中性白細(xì)胞數(shù)顯著提高。
對紅細(xì)胞數(shù)來說，與對照組(每微升7.90±0.09×106)相比，在TAU500組(每微升8.72±0.18×106)和TAU1000組(每微升8.63±0.16×106)中顯著增加了。血細(xì)胞比容遵循一種類似的模式(表7)。
表7.TAU劑量對使用50FU后第7天和第11天的小鼠中血細(xì)胞比容(HCT)的影響對照 T100 T250T500 T1000HCT 38.50±.8837.77±.37 40.04±.38 39.50±.61 40.84±.68(7天)HCT 36.94±0.51 36.80±.88 37.47±.83 41.16±.88 41.55±.77(11天) P＜.01P＜.001
結(jié)論本試驗的結(jié)果證實和發(fā)展了以前發(fā)現(xiàn)，即用TAU治療接受了5-FU化療劑的動物可以迅速扭轉(zhuǎn)5-FU對造血系統(tǒng)的有害作用，并且TAU的效果與使用的劑量有關(guān)。
實施例3尿苷的?；苌餃p輕了5-FU對骨髓的毒性目的本試驗的目的是試驗和比較尿苷和尿苷的衍生物對緩解化療劑5-氟尿嘧啶(5-FU)對小鼠造血系統(tǒng)損害的效力。
方法在研究開始的那天下午1時，對98只重約20g的雌性Balb/C小鼠中的每只進(jìn)行一次性腹膜內(nèi)注射5-FU150mg/Kg。然后把這些動物分為7組對照(鹽水)、尿苷(300 mg/Kg/治療)、三乙酰尿苷(TAU；455 mg/Kg/治療)、苯甲酰尿苷(BU；428mg/Kg/治療)、乙氧羰基(ECU，389mg/Kg/治療)、辛酰尿苷(OU，455mg/kg/治療)和戊酰尿苷(VU，403mg/Kg/治療)。所有這些劑量都是等摩爾數(shù)的，并且藥物溶于0.4ml水中通過腹膜內(nèi)注射使用。在開始日的下午330、600和830，用與其各自相應(yīng)的試劑治療這些組中的小鼠。次日上午930、中午1200、下午230和500使用這些化合物。再次日的上午1000進(jìn)行最后一次治療。
使用5-FU后的第7天和11天，用眼窩后放血法從每組7只小鼠中采集0.2-0.3ml血并注入EDTA，供隨后血細(xì)胞分類計數(shù)用。用頸部脫位法處死小鼠，取出它們的右股骨，排出骨內(nèi)物質(zhì)供細(xì)胞計數(shù)用；取出它們的脾進(jìn)行稱重。
結(jié)果第7天即使在這個第一時間點處，每一種尿苷衍生物都能加速造血系統(tǒng)的一方面或多方面從5-FU損傷中的恢復(fù)。這樣，與鹽水對照組相比，所有組中的脾重都提高了。尿苷(80.4±7.8mg)、ECU(75.7±5.0mg)和VU(69.1±1.7mg)組與對照(62.7±1.8)的差別達(dá)到了統(tǒng)計學(xué)上的顯著水平(P＜0.05)。
TAU的骨髓細(xì)胞數(shù)比對照值提高了40％(分別為每微升4.50±0.77×103和每微升2.78±0.45×103)。
對白細(xì)胞數(shù)而言，用ECU(每微升7.26±0.31×103，P＜.01)和VU(每微升6.57±.49×103，P＜.05)治療過的組顯著高于鹽水對照組(每微升4.60±0.70×103)的。
對血小板而言，與鹽水對照組(每微升523.2±71.4×103)相比，用尿苷(每微升785.3±57.5×103，P＜0.02)、BU(每微升829.6±×103，P＜0.01)和VU(每微升825.7±26.7×103，P＜.002)治療過的組要顯著地高。
與鹽水對照組(每微升0.013±0.009×103)相比，差不多所有的治療中的總的嗜中性白細(xì)胞數(shù)都有升高的趨勢，但只有VU組(每微升0.141±0.027×103)的提高確實在統(tǒng)計學(xué)上顯著較大(P＜.002)。
對淋巴細(xì)胞數(shù)而言，用ECU(每微升7.19±0.32×103，P＜.01)和VU(每微升6.42±0.49×103)治療過的組顯著大于鹽水治療的對照組(每微升4.59±0.70×103)。
僅就本試驗中所用的劑量而言，和任何其它衍生物相比碳鏈最長的辛酰尿苷被證明略帶毒性。本組中動物數(shù)量不足，無法提供第11天的數(shù)據(jù)。不過劑量最優(yōu)化研究(見例3A)表明使用較低劑量的辛酰尿苷對使用5-FU后造血的恢復(fù)具有非常有益的效果。
第11天通過利用本實驗中所用的尿苷衍生物的治療，事實上造血功能的每一個指數(shù)都得到顯著改善，這些指數(shù)包括脾重、白血細(xì)胞數(shù)、紅血細(xì)胞數(shù)、血細(xì)胞比容、嗜中性白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)(表8)。每個治療組的脾重都高于對照組(94.7±7.4)，其中尿苷組(121.6±9.7)，BU組(126.9±12.3)和VU組(139.4±8.0)與對照組的差別達(dá)到統(tǒng)計學(xué)上的顯著水平(P＜.05)。
結(jié)論本發(fā)明種類繁多的尿苷衍生物都有助于減輕使用化療劑5-FU所造成的損害。
表8.尿苷和尿苷衍生物對使用5-FU 11天后的小鼠造血的影響白血細(xì)胞數(shù)(WBC)、嗜中性白細(xì)胞數(shù)(Neut)和淋巴細(xì)胞數(shù)(Iym)的單位是K/μl；紅血細(xì)胞數(shù)(RBC)的單位是M/μl.
WBC RBC HCT％ Neut LymCon 3.37±.68 7.11±.132.97±0.4.09±.047 3.3±.7Urd 5.20±.47*7.32±.234.67±0.9.60±.180**4.6±.4TAU 6.23±.55**7.35±.235.01±1.2.55±.164**5.6±.4*BU 6.20±.49**7.62±.1**36.87±0.6**1.04±.295**5.1±.4*ECU 5.51±.64*7.65±.2*37.54±1.0**.66±.166**4.8±.5*VU 6.31±.42**7.83±.1**38.31±0.8**.97±.136**5.2±.4**表明不同于對照組，P＜.05**表明不同于對照組，P＜.01Con＝對照，Urd＝尿苷；TAU＝三乙酰尿苷；BU＝本甲酰尿苷；ECU＝乙氧羰基尿苷；VU＝戊酰尿苷實施例3A辛酰尿苷緩解了5-FU的血液學(xué)毒性目的本試驗的目的在于檢驗辛酰尿苷(Oct-U)緩解5-氟尿嘧啶(5-FU)對造血的毒性作用的效力。
方法在研究開始的當(dāng)天上午1100，對重約20g的14只Balb/C雌性小鼠中的每一只進(jìn)行一次腹膜內(nèi)注射5-FU 75mg/kg。隨后對這些動物中的一半進(jìn)行Oct-U治療(100mg/kg/治療，腹膜內(nèi)注射)，同時對另一半(對照)注射生理鹽水。在開始日的下午230、430和700以及次日上午930、中午12時、下午230和500使用Oct-U和鹽水。另外一組7只小鼠(基礎(chǔ))不接受5-FU，也不接受治療。
結(jié)果正如利用本研究中所采取的每一項和所有各項指數(shù)所測量的那樣，使用5-FU造成對造血系統(tǒng)具有統(tǒng)計學(xué)上顯著的損害，這些指數(shù)包括脾重、骨髓細(xì)胞數(shù)、WBC數(shù)、總嗜中性白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、RBC數(shù)、血細(xì)胞比容百分比和血小板數(shù)(表9和10)。隨后用Oct-U治療接受了5-FU的小鼠，結(jié)果使得造血功能的每一項以及各項參數(shù)都得到顯著的改善(表9和10)。
結(jié)論用辛酰尿苷治療接受了5-FU的小鼠可以緩解5-FU對造血的毒性作用。
表9.辛酰尿苷對使用5-FU 7天后的小鼠中骨髓細(xì)胞含量和骨髓細(xì)胞生成作用的影響骨髓細(xì)胞 白細(xì)胞嗜中性白細(xì)胞 淋巴細(xì)胞(WBC)(neut) (Lym)基礎(chǔ) 8.96±.32 6.89±.25 1.85±.24 4.78±.23對照 4.16±.40*4.04±.19*0.26±.03*3.74±.19*Oct-U 7.73±.68**5.96±.47**1.19±.22**4.62±.29***表明對基礎(chǔ)組P＜.01**表明對對照組P＜.01表10.辛酰尿苷對使用5-FU 7天后的小鼠紅細(xì)胞(RBC)、血小板(PLT)和脾重的影響RBC PLT 脾重(M/μl)(K/μl)(mg)基礎(chǔ) 8.56±.17 897±21 83.6±1.7對照 7.98±.13*963±13*75.4±2.4*Oct-U 8.13±.14 1243±59**87.2±3.7***表明對基礎(chǔ)組P＜.05**表明對對照組P＜.05實施例4使用尿苷的?；苌锖笱獫{尿苷含量方法在使用實施例3中用來減輕5-FU所致毒性的尿苷的?；苌锖蟮亩鄠€時間點(15分鐘、30分鐘、1小時和2小時)測定小鼠血漿的尿苷含量。小鼠分成(每種化合物每個時間點的n＝3)接受下列化合物的腹膜內(nèi)注射的組尿苷(300mg/kg)、三乙酰尿苷(TAU，455mg/kg/治療)、本甲酰尿苷(BU，428mg/kg/治療)、乙氧基羰基尿苷(ECU；389mg/kg/治療)、辛酰尿苷(OU，455mg/kg/治療)以及戊酰尿苷(VU，403mg/kg/治療)。尿苷的?；苌锏膭┝颗c300mg/kg尿苷的摩爾數(shù)相等。在適當(dāng)?shù)臅r間點，從小鼠的眼窩后的竇處取出血樣(200μl)并立刻進(jìn)行離心處理。離心處理后用2倍體積的甲醇對75μl所得的血漿進(jìn)行去蛋白，然后離心分離。對上清液進(jìn)行冷凍干燥和用50mM磷酸鈉緩沖液(pH6.0)重建，并且在反相(C13)柱上通過HPLC分析尿苷含量。用甲醇梯度法(15分鐘內(nèi)從2％至35％)將50mM磷酸鉀緩沖液(pH6.0)中的尿苷從其它血漿成分中分離出來。用260nM的UV吸收檢測并定量尿苷。
結(jié)果如表11所示，所有試驗的尿苷?；苌锒寄芴岣哐獫{尿苷含量。對照動物(沒有接受任何外來的尿苷和胞苷衍生物的小鼠)中的血漿尿苷含量為1.1±0.1μm。
表11.使用尿苷的?；苌锖笮∈蟮难獫{尿苷濃度時間 15分鐘 30分鐘 1小時 2小時化合物 血漿尿苷濃度(μM)尿苷 9114151855.3±35 ±86 ±21 ±1.5三乙酰尿苷66634824.5 15.1±70 ±28 ±7.5 ±1.6苯甲酰尿苷1160 3531788.6±45 ±87 ±54 ±1.7戊酰尿苷 1001 3472667.4±113 ±117 ±41 ±0.4辛酰尿苷 56 14 17 2.2±22 ±7.4 ±2.9 ±0.04乙氧羰基尿苷 25083 44 2.0±18 +0.1 ±12 ±1.6使用所有尿苷的?；苌锒寄芴岣哐獫{尿苷含量，通過逐漸地脫酰作用，由?；苌锍掷m(xù)不斷地形成尿苷。這也許不能從血漿尿苷含量中反映出來，因為當(dāng)通過?；蜍昭苌锏拿擋Ｗ饔枚赡蜍諘r，尿苷的細(xì)胞吸收能從循環(huán)中除去尿苷。重要的是應(yīng)注意到，酰化尿苷衍生物對緩解5-FU毒性的作用通常比等摩爾量的尿苷更好(見實施例3中的表8)。
實施例5提高了5-FU的治療指數(shù)(I)TAU對單獨將5-FU用于帶腫瘤小鼠的補(bǔ)救作用。
目的本試驗的目的在于評價和比較尿苷和TAU提高帶腫瘤小鼠模型中5-FU治療指數(shù)的能力。
方法對60只CD8F1(BALB/C×DBA/8)移植了第一代CD8F1自發(fā)乳腺癌雌性小鼠進(jìn)行每周一次化療，治療包括一次使用150mg/kg 5-FU，然后采取各種補(bǔ)救措施。化療開始時平均腫瘤大小是157mg。將這樣的每周一次化療過程重復(fù)三次。
為評價各種補(bǔ)救療法，將這些動物分成6組，每組10只，每一組的處理如下1. 鹽水 鹽水(沒有5-FU)2. 單獨用5-FU5-FU(150mg/kg i.p.)3. 5-FU+載體 5-FU(150mg/kg i.p.)+載體14. 5-FU+i.p.尿苷 5-FU(150mg/kg i.p.)±尿苷(3500mg/kg i.p.)5. 5-FU+口服尿苷 5-FU(150mg/kg i.p.)+尿苷(5000mg/kg口服)26. 5-FU+口服TAU 5-FU(150mg/kg i.p.)+TAU(7582mg/kg 口服)21.1∶1油水乳劑+2.5％土溫-802.7582mg TAU和5000mg尿苷為等摩爾數(shù)。
結(jié)果在這三周化療結(jié)束時，比較了每個組的死亡率，并且對足夠數(shù)量的存活動物，比較它們的體重和腫瘤大小。結(jié)果歸納在下面的表12中。表12.組合使用5-FU和TAU或尿苷的作用組別 死亡率 平均最終腫瘤重量(mg)1. 鹽水 3/10 7,3912. 只用5-FU 9/10 *3. 5-FU+載體10/10*4. 5-FU+i.p.尿苷1/10 1,6045. 5-FU+口服尿苷0/108966. 5-FU+口服TAU 1/10 1,013*由于死亡率高而變得沒有意義。
只接受鹽水的組中的死亡是由于疾病的發(fā)展，接受了5-FU但不接受補(bǔ)救措施的死亡是由于5-FU本身的毒性。
結(jié)論TAU和尿苷有補(bǔ)救帶腫瘤小鼠脫離5-FU毒害的作用。兩種試劑都提高了5-FU對帶腫瘤小鼠的治療指數(shù)，并容許使用更大劑量的藥物，抗癌效果相應(yīng)地提高。
實施例65-FU治療指數(shù)的提高(II)用TAU結(jié)合化療搶救帶腫瘤的小鼠目的本試驗的目的在于評價和比較TAU和尿苷在與膦酰基乙?；?L-天冬氨酸(PALA)、氨甲喋呤(MTX)和甲酸四氫葉酸(LV)一起使用時提高5-FU的治療指數(shù)的能力，采用的是一種能提高5-FU的細(xì)胞毒性潛力的藥物劑量投配方式。
方法對40只移植了CD8F1自發(fā)胸部腫瘤(初始腫瘤重量為155mg)的雄性CD8F1小鼠進(jìn)行下列方案的每周一次的治療PALA-19小時→MTX-2.5小時→5-FU-2小時→LV-19小時 →LV100mg/kg 300mg/kg150mg/kg300mg/kg 300mg/kg
為評價和比較TAU和尿苷的效力，將小鼠分成四組，每組10只。
1.對照 鹽水2.尿苷(腹膜內(nèi)注射)尿苷(3,500mg/kg)3.尿苷(口服) 尿苷(4,000mg/kg)4.TAU(口服) TAU(6,066mg/kg1)1與4000mg/kg尿苷同等摩爾數(shù)劑量在每周開始使用一定劑量的5-FU兩小時之后，每隔8小時使用一次鹽水、尿苷或TAU，共進(jìn)行5次這樣的治療。這樣每周一次的治療共連續(xù)進(jìn)行三周。在化療的第三個療程的一周之后，檢查每組的死亡率，對足夠數(shù)量的存活動物，測量它們的體重和腫瘤的重量。
結(jié)果表13.TAU對接受組合化療的帶腫瘤小鼠死亡率的影響組別死亡率 平均最終腫瘤重量(mg)對照10/10 **尿苷(腹膜內(nèi)注射)0/10110尿苷(口服) 5/10**TAU(口服) 1/10162**由于死亡率高而變得無意義對照組的死亡是由于5-FU的毒性。未治療小鼠在這個時間點的腫瘤重量平均約為3000mg。
結(jié)論TAU和尿苷提高了使用這樣的臨床相關(guān)組合的試劑的5-FU的治療指數(shù)?？诜AU與腹膜內(nèi)注射尿苷同樣有效，并且比口服同等摩爾數(shù)劑量的尿苷效果更好。
實施例7口服二乙酰脫氧胞苷緩解了阿糖胞嘧啶對造血系統(tǒng)的毒性目的本式驗的目的是試驗二乙酰脫氧胞苷(DAdC)和棕櫚酰脫氧胞苷(PdC)對緩解化療劑阿糖胞嘧啶(Ara-C)對造血系統(tǒng)的毒性作用的效力。
方法21只重約20g的Balb/C雌性小鼠中的每一只每天腹膜內(nèi)注射Ara-C 100mg/kg，共注射5天。將這些小鼠分成三個治療組口服水(對照組)；口服DAdC(411mg/kg/治療)以及腹膜內(nèi)注射PdC(200mg/kg/治療，在0.2％的土溫-80中使用)。在每天上午9時和下午6時兩次用水、DAdC或PdC治療小鼠。在每種情況下治療容量為0.2ml。另外7只小鼠不接受Ara-C，也根本不接受治療(基礎(chǔ)組)。
在使用5-FU后的第7天和第11天，用眼窩后放血法從每組7只小鼠中采集0.2-0.3ml血并注入EDTA，供隨后血細(xì)胞分類計數(shù)用。用頸部脫位法處死小鼠，取出它們的脾進(jìn)行稱重。
結(jié)果與基礎(chǔ)組小鼠相比，使用Ara-C顯著抑制了對照組小鼠的脾重、WBC數(shù)、總嗜中性白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)和血小板數(shù)(表14)。沒有發(fā)現(xiàn)Ara-C對促紅細(xì)胞生成作用本身(RBC數(shù)、血紅蛋白和血細(xì)胞比容)有任何毒性。
口服DAdC和腹膜內(nèi)注射PdC對小鼠進(jìn)行治療顯著扭轉(zhuǎn)了Ara-C對造血的毒害。其脾重、WBC數(shù)、總嗜中性白細(xì)胞數(shù)和血小板數(shù)都顯著高于對照組小鼠(表14)。
結(jié)論對接受Ara-C的小鼠使用DAdC或PdC緩解了Ara-C對造血系統(tǒng)的毒性作用。
表14.二乙酰脫氧胞苷(DAdC)或棕櫚酰脫氧胞苷(PdC)對接受阿糖胞嘧啶(Ara-C)達(dá)5天之久的小鼠的造血作用的治療效果。脾重以mg計，WBC、嗜中性白細(xì)胞數(shù)和血小板數(shù)以K/μl計。
脾重 WBC Neut PLT基礎(chǔ)93.0±2.5 8.66±.531.84±.12 854±30對照37.1±1.3 3.60±.550.04±.02 230±21DAdC87.8±3.5**5.00±.420.42±.05**728±64**PdC 126.0±5.3**5.20±.35*1.22±.27**327±30*
*表示相對于對照組P＜0.05**表示相對于對照組P＜0.001實施例8口服TAU緩解了飲用水中的抗病毒化療劑疊氮胸苷(AZT)對造血系統(tǒng)的有害作用目的本試驗的目的是檢驗口服三乙酰尿苷(TAU)對緩解抗病毒化療劑疊氮胸苷(AZT)對造血系統(tǒng)的損害的效力。
方法將每只重約19g的42只Balb/C雌性小鼠分成三個不同的組，每組14只。這三組分別為基礎(chǔ)組(不服用AZT，不接受治療)、對照組(AZT、水)以及TAU組(AZT、TAU的劑量為460mg/kg/治療)。在整個試驗過程中把AZT隨意放入飲用水中使用，濃度為1.5mg/ml。在所有治療組中所用的AZT溶液的量相似，平均每只小鼠每天2.25ml，AZT每天的劑量為每天約170mg/kg。在試驗的前24天里，水和TAU每天使用3次，每次用量0.2ml，以后改為每天兩次。
在試驗開始那天，每周一次以及就在處死前對所有的動物進(jìn)行稱重。在第24天和第35天對小鼠稱重后，用眼窩后放血法從每組7只小鼠中采集0.2-0.3ml血并注入EDTA，供隨后血細(xì)胞包括網(wǎng)織紅細(xì)胞分類計數(shù)用。用頸部脫位法處死小鼠，取出它們的右股骨，排出骨內(nèi)物質(zhì)供細(xì)胞計數(shù)用；取出它們的脾進(jìn)行稱重。
結(jié)果與基礎(chǔ)組動物(重19.78±0.38)相比，在第7天只接受了AZT的小鼠的體重顯著減少(17.55±0.47，P＜0.002)，而在同一時間點，用TAU治療過的小鼠的體重(19.51±0.38)卻與基礎(chǔ)組基本相同，并且顯著大于(P＜0.005)對照組。在第13天，雖然各組之間的數(shù)據(jù)無統(tǒng)計學(xué)上的顯著差別，仍可發(fā)現(xiàn)這種趨勢。在本試驗的第24天，AZT對照組的體重同樣在統(tǒng)計學(xué)上都低于基礎(chǔ)組(P＜0.001)和用TAU治療過的小鼠(P＜0.05)。在這一時間點，用TAU治療過的動物的體重也低于基礎(chǔ)組動物。
第24天只接受AZT的小鼠的RBC(8.49±0.16)顯著低于(P＜0.01)基礎(chǔ)組的(9.07±0.11)。用TAU治療過的動物的RBC數(shù)(9.01±0.09)與基礎(chǔ)組沒有明顯區(qū)別，并且顯著高于(P＜0.02)對照組。
只接受AZT的小鼠的總嗜中性白細(xì)胞數(shù)(0.67±0.09)也顯著低于(P＜0.02)基礎(chǔ)組的(1.02±0.08)。用TAU治療過的那些動物的嗜中性白細(xì)胞的量(0.91±0.06)與基礎(chǔ)組沒有顯著區(qū)別，并且顯著大于(P＜0.05)只接受AZT的組。
第35天基本上從這一時間點上所測得的每一參數(shù)中都可以看出AZT有明顯的有害作用。就象RBC數(shù)、血紅蛋白以及血細(xì)胞比容一樣，與基礎(chǔ)小鼠相比，骨髓細(xì)胞含量、WBC數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)也顯著減少(表15)。與基礎(chǔ)組小鼠相比，對照組小鼠的平均細(xì)胞體積、平均細(xì)胞血細(xì)胞比容和血小板數(shù)都顯著提高(表14)。所有這些參數(shù)都表明AZT造成了對造血系統(tǒng)的損害。
正象平均細(xì)胞體積、平均細(xì)胞血細(xì)胞比容和血小板數(shù)顯著低于對照組的值(表16)一樣，口服TAU的療法還使RBC數(shù)、血紅蛋白和血細(xì)胞比容顯著高于AZT對照組(表15)。
在對照組的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)(每微升0.256×106，P＜0.001)比基礎(chǔ)組數(shù)(每微升0.129×106)顯著提高的同時，用TAU治療過的那些小鼠的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)(每微升0.371×106)顯著高于基礎(chǔ)組(P＜0.001)和對照組(P＜0.01)。
結(jié)論從這些數(shù)據(jù)看出，口服TAU對AZT對動物的造血系統(tǒng)造成的損害有有益的治療效果。
表15.TAU緩解了AZT對小鼠紅細(xì)胞生成作用的有害作用。紅血細(xì)胞(RBC)數(shù)的單位為M/μl、血細(xì)胞比容(HCT)用百分比表示、血紅蛋白(HGB)的單位為gm/dl。
RBC HCT HGB基礎(chǔ)9.04±.08 42.52±.3415.57±.09對照7.53±.13 39.29±.5914.57±.26TAU 8.20+.20**41.26±.62*15.14±.12*
*表示相對于對照組P＜0.05**表示相對于對照組P＜0.01表16.TAU緩解了AZT所致的細(xì)胞損害。血小板數(shù)(PLT)單位為K/μl、平均細(xì)胞體積(MCV)的單位為f1、平均細(xì)胞血細(xì)胞比容(MCH)的單位為微微克(10-12g)。
PLT MCVMCH基礎(chǔ) 736±2447.03±.16 17.23±.13對照 903±1852.16±.37 19.37±.20TAU 809±06**50.41±.48*18.49±.28**表示相對于對照組P＜0.05**表示相對于對照組P＜0.01實施例9口服TAU緩解了腹膜內(nèi)注射AZT對造血系統(tǒng)的有害作用目的本試驗的目的在于檢驗口服TAU對扭轉(zhuǎn)非腸道使用疊氮胸苷(AZT)對造血系統(tǒng)造成的損害的效力。
方法在每天上午9時，下午4時和10時，對56個每只重約19克的雌性Balb/C小鼠使用AZT(100mg/Kg腹膜內(nèi)注射)三次。每天三次上午9時、下午4時和10時用口服劑量為230、460、或920mg/Kg/治療的水(對照)或TAU的方式治療這些動物。治療藥量為對于對照組和TAU460組0.2ml，對TAU230組0.1ml，對TAU920組0.4ml。另一組14只小鼠沒有接受AZT或任何治療(基礎(chǔ)組)。
在試驗開始日，第6天和第13天對小鼠稱重。在第6天和第13天稱重后，用眼窩后放血法從每組7只小鼠中采集0.2-0.3ml血并注入EDTA，供隨后血細(xì)胞包括網(wǎng)織紅細(xì)胞分類計數(shù)用。用頸部脫位法處死小鼠，取出它們的右股骨，排出骨內(nèi)物質(zhì)供細(xì)胞計數(shù)用；取出它們的脾進(jìn)行稱重。
結(jié)果
第6天用230mg/kg TAU治療過的組中的骨髓細(xì)胞含量(8.89±0.46)顯著高于(P＜.05)只接受AZT的組(7.54±0.23)。
基礎(chǔ)組中的白細(xì)胞數(shù)為每微升8.23±0.38×103。AZT使WBC數(shù)降低至每微升6.8±0.66×103，但如果除接受AZT外，還用TAU(920mg/kg)治療，則WBC的量恢復(fù)至基礎(chǔ)水平(每微升8.46±0.63×103).
使用AZT使RBC水平從每微升9.14±0.10×106(基礎(chǔ)組)降低到每微升8.80±0.31×106(對照組)。在接受TAU(460mg/kg/治療)和接受AZT的小鼠(每微升9.15±0.07×106)中沒有發(fā)現(xiàn)這樣幅度的下降。
第13天在這項研究中所用的每一個參數(shù)都可以成為那些只用AZT13天的小鼠的造血系統(tǒng)受到損害的有統(tǒng)計學(xué)意義的證據(jù)。于是，WBC數(shù)、RBC數(shù)、血紅蛋白、血細(xì)胞比容、網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)、總嗜中性白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)都顯著降低。同時，平均細(xì)胞血球容量和血小板數(shù)都顯著提高。對接受AZT和TAU的伴隨治療(460mg/kg/治療)的小鼠使所有這些測量值的每一個都出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)上顯著水平的提高(表17和18)。
結(jié)論用AZT和TAU對小鼠進(jìn)行的伴隨治療顯著改善了造血功能。這對白細(xì)胞和紅細(xì)胞都是如此。
表17.口服TAU緩解了AZT對小鼠中骨髓生成系統(tǒng)的損害。這些數(shù)據(jù)是在試驗的第13天得到的。
WBC 嗜中性白細(xì)胞 淋巴細(xì)胞 血小板K/μl K/μl K/μlK/μl基礎(chǔ)6.8 1.275.14 68040.6 ±0.11 ±0.33±30對照5.1*0.49*4.02*1025*±0.28±0.07 ±0.27±44TAU 7.0**0.626.06**863**±0.37±0.03 ±0.38±26
*不同于基礎(chǔ)組，P＜.05**不同于對照組，P＜.05表18.口服TAU緩解了AZT對小鼠中骨髓生成系統(tǒng)的損害。這些數(shù)據(jù)是在試驗的第13天得到的。
RBC HGB HCT 網(wǎng)織紅細(xì)胞M/μl G/dL ％ M/μl基礎(chǔ) 9.16 15.32 43.18 0.298±0.06 ±0.18 ±0.54 ±0.028對照 8.15*14.08*38.90*0.086*±0.07 ±0.13 ±0.43 ±0.007TAU 8.58**14.54**40.83**0.162**±0.08 ±0.13 ±0.37 ±0.014*不同于基礎(chǔ)組，P＜.05**不同于對照組，P＜.05實施例10口服二乙酰脫氧胞苷(DAdC)緩解了腹膜內(nèi)使用AZT對DBA小鼠造血系統(tǒng)所造成的毒性目的本試驗的目的在于試驗口服DAdC對扭轉(zhuǎn)非腸道使用抗病毒化療劑疊氮胸苷(AZT)對造血系統(tǒng)所造成的損害的作用方法在每天上午9時、下午4時和10時，對28只每只重約20g的雌性小鼠使用AZT(100mg/kg，i.P.)三次。每天上午9時、下午4時和10時，用管飼法對動物進(jìn)行三次水(對照)或者DAdC(411mg/kg/治療)的治療。治療藥量為0.2ml。另一組14只小鼠不接受AZT或任何治療(基礎(chǔ))。
在開始幾天治療過程中，共有8只小鼠死于口服水和DAdC過程中的意外情況。于是，在處死日時對照組和DAdC中的動物數(shù)目減少如下在第6天，在對照組中有4只小鼠，DAdC組中有5只小鼠；在第13天，在對照組中有7只小鼠，在DAdC組中有3只小鼠。在這兩個時間點，基礎(chǔ)組動物的數(shù)目都是7只。
在第6天和第13天，用眼窩后放血法從每組小鼠中采集0.2-0.3ml血并注入EDTA，供隨后血細(xì)胞包括網(wǎng)織紅細(xì)胞分類計數(shù)用。用頸部脫位法處死小鼠，取出它們的右股骨，排出骨內(nèi)物質(zhì)供細(xì)胞計數(shù)用；取出它們的脾進(jìn)行稱重。
結(jié)果第6天在第6天，使用AZT造成對造血系統(tǒng)的統(tǒng)計學(xué)上顯著的損害，特別是對那些沒有接受DadC的小鼠(對照組)更是如此。這樣，就象RBC數(shù)、血紅蛋白(HGB)、血細(xì)胞比容(HCT)和網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)一樣，對照組的WBC和淋巴細(xì)胞數(shù)也顯著低于基礎(chǔ)組(表17)。這些對照組小鼠中的血小板數(shù)顯著提高。與基礎(chǔ)組相比，對照組的骨髓細(xì)胞數(shù)還降低了23％。
與此相反，那些接受了AZT但也接受了DAdC治療的小鼠的骨髓細(xì)胞含量只略微(2.5％)降低，并且與基礎(chǔ)組相比沒有統(tǒng)計學(xué)上的區(qū)別。DAdC組中的RBC數(shù)、HGB、HCT和網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)與基礎(chǔ)組相比無區(qū)別，但顯著高于對照組(表19)。
第13天與基礎(chǔ)組動物相比，只接受AZT13天的小鼠幾乎在每個方面的數(shù)據(jù)都成為AZT對造血系統(tǒng)損害的在統(tǒng)計學(xué)意義上顯著的證據(jù)。正如在第6天數(shù)據(jù)中所看到的那樣，用DAdC對小鼠進(jìn)行的伴隨治療顯著緩解或扭轉(zhuǎn)了AZT所致的對促紅細(xì)胞生成作用的損害(表20)。用DAdC治療過的小鼠中的血小板數(shù)(769±32，P＜.02)相對于對照組動物(950±34)也顯著改善。
結(jié)論用DAdC治療接受了AZT的小鼠可以顯著改善其造血功能，特別是紅細(xì)胞生成作用。
表19二乙酰脫氧胞苷(DAdC)對接受了AZT達(dá)6天的小鼠的促紅細(xì)胞生成作用的治療作用
RBC HGB HCT 網(wǎng)織紅細(xì)胞基礎(chǔ) 9.47±.1813.93±.20 40.83±0.83 .326±.039對照 8.53±.33*12.60±.40*36.32±1.54*.017±.004*DAdC 9.49±.32**13.96±.40**40.84±1.35**.205±.075***不同于基礎(chǔ)組，P＜.05**不同于對照組，P＜.05表20.二乙酰脫氧胞苷(DAdC)對接受了AZT達(dá)13天的小鼠中促紅細(xì)胞生成作用的治療作用RBCHGB HCT 網(wǎng)織紅細(xì)胞基礎(chǔ)9.95±.13 14.83±.19 42.83±0.41.637±.044對照8.51±.05*13.06±.07*37.21±0.13*.365±.022*DAdC9.16±.32**13.97±.39**41.53±1.17**.814±.069***不同于基礎(chǔ)組，P＜.05**不同于對照組，P＜.05實施例11口服二乙酰脫氧胞苷(DAdC)或四氫尿苷(THU)緩解了腹膜內(nèi)注射AZT對Balb/C小鼠造血系統(tǒng)所造成的有害作用目的本試驗的月的在于檢驗口服DAdC或非腸道使用THU對扭轉(zhuǎn)非腸道使用抗病毒化療劑疊氮胸苷(AZT)對造血系統(tǒng)所造成的損害的效力。
方法在每天上午9時、下午4時和10時，對21只每只重約20g的雌性小鼠使用AZT(100mg/kg，i.P.)三次。每天上午9時、下午4時和10時，對7只動物進(jìn)行三次水(對照，口服)或者DAdC(300mg/kg/口服)或THU(12.5mg/kg/治療，在0.2％土溫-80中，腹膜內(nèi)注射)的治療。治療藥量為0.2ml。另一組7只小鼠不接受AZT及任何治療基礎(chǔ))。
在第13天，用眼窩后放血法從每組小鼠中采集0.2-0.3ml血并注入EDTA，供隨后血細(xì)胞包括網(wǎng)織紅細(xì)胞分類計數(shù)用。用頸部脫位法處死小鼠，取出它們的右股骨，排出骨內(nèi)物質(zhì)供細(xì)胞計數(shù)用；取出它們的脾進(jìn)行稱重。
結(jié)果用DAdC對小鼠進(jìn)行的伴隨治療顯著緩解或扭轉(zhuǎn)了AZT所致的對促紅細(xì)胞生成作用的損害(表21)。用DAdC治療過的小鼠中的嗜中性白細(xì)胞數(shù)(1.39±0.14，P＜.01)也顯著高于對照組動物(0.74±0.10)。
象紅細(xì)胞生成作用一樣，接受AZT并接受THU治療的小鼠的骨髓生成作用也比對照組有顯著改善。THU組中的總嗜中性白細(xì)胞數(shù)(6.06±0.35，P＜0.05)也顯著高于對照組(4.73±0.36)。此外還觀察到，用THU治療過的組中的總嗜中性白細(xì)胞數(shù)(1.16±0.15)與對照組(0.74±0.10)相比有顯著差別(P＜0.05)。淋巴細(xì)胞數(shù)也有增加，但在本試驗中其差別末達(dá)到統(tǒng)計學(xué)上的顯著水平。此外，THU治療過的組中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)(百分比和M/μl)也顯著高于(P＜0.05)對照組的。
結(jié)論用DAdC或THU治療接受AZT的Balb/C小鼠可以顯著改善其造血系統(tǒng)的功能。
表21.二乙酰脫氧胞苷(DAdC)對接受AZT 13天的小鼠促紅細(xì)胞生成作用的治療作用RBC HGB HCT網(wǎng)織紅細(xì)胞基礎(chǔ)8.63±.1115.37±.0841.01±0.52 .089±.009對照7.55±.11*13.71±.22*35.96±0.46*.039±.004*DAdC8.26±.13**14.97±.15**39.51±0.61**.059±.006***不同于基礎(chǔ)組，P＜.05**不同于對照組，P＜.05實施例12在有或沒有潘生丁參與的情況下口服尿苷或二乙酰脫氧尿苷(TAU)后的血漿尿苷水平目的本試驗的目的在于證明TAU是一種比尿苷本身更有效的提高血漿尿苷水平的口服有效試劑，并且還證明潘生丁(DPM)，一種核苷的攝入阻斷劑，還具有抗病毒活性，對使用TAU或尿苷后血漿尿苷水平的影響。
方法將重20g的雌性Balb/C小鼠分成4組，每組8只1. 尿苷(1000mg/kg)口服2. TAU (1500mg/kg)口服3. 尿苷(1000mg/kg)口服+DPM(25mg/kg腹膜內(nèi)注射)4. TAU (1500mg/kg)口服+DPM(25mg/kg腹膜內(nèi)注射)(1500mg/kg TAU與1000mg/kg尿苷為等摩爾數(shù)的劑量)在使用尿苷或TAU之前30分鐘用腹膜內(nèi)注射的方式使用潘生丁。
用管飼法口服尿苷的0.4ml水溶液。
用管飼法把TAU配制在一種乳劑載體(1∶1玉米油/水含2.5％土溫-80)中服用。
從每組取2只小鼠從眼眶下部血管網(wǎng)放血在使用TAU或尿苷后在效力每個時間點0(在TAU或尿苷使用前的基礎(chǔ)尿苷水平)、0.5、1、2和4小時。
加入0.2ml甲醇，對血漿樣品(0.1ml)進(jìn)行脫蛋白，然后進(jìn)行離心分離。對樣品進(jìn)行冷凍干燥并用HPLC緩沖溶液(100mM醋酸銨，pH6.5，供隨后借助254nm處的UV吸收測定通過反向HPLC來測定尿苷)進(jìn)行重建。
數(shù)據(jù)點為每個時間點處兩個樣品的平均值。
結(jié)果口服尿苷后，血漿中尿苷達(dá)到6微摩爾的峰值濃度。相反，口服等摩爾劑量的TAU使峰值血漿尿苷水平達(dá)到260微摩爾，這樣就證明了TAU作為一種提高血漿尿苷水平的口服有效試劑比尿苷出色得多。
潘生丁進(jìn)一步提高了(約2倍)口服TAU后血液中尿苷水平的幅度(峰值尿苷水平達(dá)460微摩爾)和作用時間。
類似地，潘生丁也提高了口服尿苷后血液尿苷水平的持久性，雖然水平比接受了TAU的相應(yīng)的小鼠低得多(峰值血漿尿苷水平為20微摩爾)。
這些結(jié)果歸納于表22中。
表22.在有或沒有潘生丁參與的情況下口服尿苷或TAU后的血漿尿苷濃度(μM)口服TAU或尿苷之后的血漿尿苷水平(μM)治療0小時 0.5小時 1小時2小時4小時尿苷 2 4642TAU 2 240 260 110 12尿苷+DPM 2 10 20 104TAU+DPM 2 280 460 440 32結(jié)論口服TAU后的血漿尿苷水平比口服尿苷后所觀察到的水平高得多。這樣TAU口服后就是一個比尿苷本身好得多的血漿尿苷源。潘生丁抑制了尿苷被攝入進(jìn)某些類型的細(xì)胞，這樣就提高了口服TAU或尿苷后其血漿濃度的幅度和作用時間。
實施例13用TAU和尿嘧啶調(diào)節(jié)口服喃氟啶的毒性目的喃氟啶(5-氟-1-(四氫-2-呋喃基)尿嘧啶)是口服有效的5-氟尿嘧啶的藥物前體；從腸道吸收進(jìn)血液期間或之后，它被酶轉(zhuǎn)化為5-FU。為了治療癌癥，喃氟啶一般以制劑的形式口服給藥，該制劑中也含有尿嘧啶，其中喃氟啶和尿嘧啶的摩爾比是1∶4；配有尿嘧啶的喃氟啶常用于人類的臨床治療。通過競爭性抑制降解5-FU的二氫尿嘧啶脫氫酶，尿嘧啶提高了由喃氟啶形成5-FU的活性。
高劑量的喃氟啶+尿嘧啶給藥后，小鼠的體重明顯降低，證明了胃腸道毒性?？诜o藥后，可以相信在喃氟啶通過腸道細(xì)胞進(jìn)入血流時，尿嘧啶提高了在腸道細(xì)胞中形成的5-FU的局部毒性。因此，需要與喃氟啶或其它口服有效的5-FU藥物前體一起使用抑制5-FU斷裂(換言之提高它的活性)的試劑，這種作用主要發(fā)生于循環(huán)中(吸收后)，而不是局限于消化道。
三乙酰尿苷(TAU)，如同本發(fā)明的其它尿苷和胸苷的?；苌镆粯?，在吸收進(jìn)入血液時或之后轉(zhuǎn)化為尿苷和尿嘧啶；當(dāng)它們與5-FU同時存在時，尿苷和尿嘧啶兩者都可以提高5-FU的細(xì)胞毒性。因此，對口服喃氟啶+尿嘧啶與喃氟啶+TAU的細(xì)胞毒性進(jìn)行評價。將血細(xì)胞計數(shù)作為在循環(huán)中5-FU的細(xì)胞毒性(且引伸為抗腫瘤效果)的指標(biāo)，體重降低用來作為胃腸道毒性的指標(biāo)。
方法三組小鼠通過口腔插管接收喃氟啶，劑量為400mg/kg/鼠。起初每組小鼠的體重為19.0±0.6g。這些組中的一組也接收尿嘧啶，它與喃氟啶的摩爾比是4∶1；另一組接收TAU，它與喃氟啶所摩爾比也是4∶1。監(jiān)測體重變化。喃氟啶給藥后第6天，采集血樣進(jìn)行細(xì)胞分類計數(shù)。
結(jié)果單獨以400mg/kg的劑量使用喃氟啶使嗜中性白細(xì)胞數(shù)明顯下降，但并不明顯影響血小板計數(shù)；體重與未治療(基礎(chǔ))動物比較只有輕微降低(7％)。與單獨使用喃氟啶相比喃氟啶+尿嘧啶使嗜中性白細(xì)胞數(shù)更嚴(yán)重降低，也降低血小板計數(shù)并引起體重的顯著降低(29％)。喃氟啶+TAU使血細(xì)胞計數(shù)的變化與喃氟啶+尿嘧啶的相近，但不引起體重的變化?？诜?TAU或喃氟啶+尿嘧啶后血細(xì)胞計數(shù)的變化與有效量的5-氟尿嘧啶(如150mg/kg)系統(tǒng)給藥的相近。但是，在本文中的癌癥治療中喃氟啶+尿嘧啶引起的體重降低是不能接受的。口服喃氟啶+TAU的優(yōu)異的系統(tǒng)細(xì)胞毒性(比單獨使用喃氟啶好并至少與喃氟啶+尿嘧啶相同)及體重不降低(特別是與接受喃氟啶+尿嘧啶引起的動物體重明顯降低相比)說明TAU有助于提高口服有效的氟尿嘧啶藥物前體的系統(tǒng)細(xì)胞毒性(即抗腫瘤效果)，而不相應(yīng)增加胃腸道毒性?？诜行У姆蜞奏に幬锴绑w與用非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物合用與用常規(guī)方法和組合物能獲得的相比，能允許更好地口服給藥有效治療量的抗腫瘤主藥氟尿嘧啶。
表23.尿嘧啶與TAU用于提高喃氟啶的細(xì)胞毒性的比較體重(g) 嗜中性白細(xì)胞 血小板(K/μl)基礎(chǔ) 19.6±0.5 2.60±0.510984±25喃氟啶-400 18.2±0.7 0.40±0.085*956±30喃氟啶-400+尿嘧啶14.0±0.3*0.02±0.002*448±31*FT-400+TAU 19.8±0.4 0.02±0.003*334±33**與基礎(chǔ)值的差異，P＜.01所有藥物以單一劑量口服給藥。給藥6天后采集血樣用于細(xì)胞計數(shù)；同時稱量體重。
實施例14喃氟啶和TAU與喃氟啶和尿嘧啶抗腫瘤效果的比較目的喃氟啶(FT)是口服有效的氟尿嘧啶藥物前體。適當(dāng)摩爾比4∶1的尿嘧啶提高了FT的抗腫瘤效果。FT-尿嘧啶合劑劑量限定的毒性是對腸粘膜的損害。FT-尿嘧啶的加大劑量也導(dǎo)致對造血的破壞。
本試驗的目的是比較FT與尿嘧啶或TAU合用時對患有Walder256癌肉瘤大鼠的抗腫瘤效果。本試驗基本的問題是FT+TAU是否象FT+尿嘧啶那樣抑制腫瘤生長，同時造成的腸道毒性(體重的變化)較低。也評價并比較了血細(xì)胞的損傷。
方法動物雄性Sprague-Dawley大鼠，起初體重約120g。
腫瘤從三個供體大鼠中收集含Walker 256細(xì)胞的濃腹水，密度為2.47×108細(xì)胞/毫升。在抗腫瘤效果試驗中，將含4.94×107個細(xì)胞的試樣在每只大鼠的右肋進(jìn)行皮下注射。這導(dǎo)致實體皮下腫瘤的形成。
治療以40、60及80mg/kg/天的劑量，與尿嘧啶或TAU摩爾比為1∶4，使用FT。使用的載體是1％羥丙基甲基纖維素。在腫瘤植入后5天開始治療(第一天)。通過管飼法，在7天(第一至7天)內(nèi)，每天口服載體和載體+藥物，用量為1.2毫升/100g體重。第8天原位測量腫瘤的大小。第10天采集血樣，將動物宰殺后，測定腫瘤的大小和重量。
治療組1.載體(對照組)2.FT40mg/kg+尿嘧啶3.FT60mg/kg+尿嘧啶4.FT80mg/kg+尿嘧啶5.FT40mg/kg+TAU6.FT60mg/kg+TAU7.FT80mg/kg+TAUn＝7只動物/組檢測治療前在第1、3、5及7天稱量體重。在第10天，在取樣并宰殺前稱量動物體重。體重以試驗過程中體重變化的百分?jǐn)?shù)來表示。
在第8天原位測量腫瘤的大小，然后用下列公式計算腫瘤體積
第10天宰殺后，將腫瘤暴露，原位測量大小，并用上式計算腫瘤體積。然后將腫瘤取出并確定其重量。腫瘤數(shù)據(jù)也用T/C％表示。T/C％為
用第10天宰殺前使用通過立即進(jìn)行心臟穿刺采集的血樣測定分類的完全血細(xì)胞數(shù)。
結(jié)果第8天評價FT+尿嘧啶及FT+TAU對腫瘤及體重的影響，見表24。數(shù)據(jù)表明，每次FT給藥時，F(xiàn)T+TAU較等量的FT+尿嘧啶具有較好的抗腫瘤效果，并能更好地保持體重。例如，對FT60的劑量，F(xiàn)T-TAU治療組的腫瘤體積和T/C百分?jǐn)?shù)比尿嘧啶治療組的一半還小。在同樣的劑量水平(FT60)，F(xiàn)T-TAU組的體重變化是52.1％，而FT-尿嘧啶組是7.8％。較高劑量的FT比低劑量的FT能更有效地阻止腫瘤的生長。
第10天獲得的腫瘤和體重的數(shù)據(jù)見表25。用FT-TAU治療比用FT-尿嘧啶治療的大鼠的腫瘤值--T/C百分?jǐn)?shù)，腫瘤體積和腫瘤重量，明顯低而體重的增加明顯大。
表26記錄了FT治療的造血效果。FT-TAU治療的動物，在FT所有的劑量水平，血小板計數(shù)不變，而FT-尿嘧啶治療組中隨FT劑量的增加血小板計數(shù)迅速下降。在FT-TAU組，對較高的、更有效的FT劑量，總白細(xì)胞數(shù)和淋巴細(xì)胞數(shù)也保持得較好。對FT40劑量，F(xiàn)T-TUA組與等量的FT-尿嘧啶組比較，中性白細(xì)胞數(shù)的減少并不比其嚴(yán)重。事實上，在每FT-TAU劑量水平中性白細(xì)胞數(shù)約是相應(yīng)的FT-尿嘧啶組觀察到的兩倍。
此試驗的結(jié)果表明使用口服TAU與FT合用比FT-尿嘧啶合用有更顯著的優(yōu)點。FT-TAU比等劑量的FT-尿嘧啶具有更大的抗腫瘤活性，同時引起的腸道和造血機(jī)能的破壞較小。
表24.對患有Walker 256癌肉瘤的大鼠，F(xiàn)T加尿嘧啶或TAU的抗腫瘤效果第8天組別腫瘤體積 T/C 體重(mm3±SE) (％) (％)對照組 3098±372 100.0 100.0FT40+尿嘧啶 1651±135 53.3 51.0FT60+尿嘧啶 1051±123 30.8 -1.7FT80+尿嘧啶 848±124 27.4 -26.0FT40+TAU1244±209 40.2 78.0FT60+TAU1006±114 32.5 52.0FT80+TAU557±49 18.0 23.7FT劑量＝mg/kg/天(共7天)FT/尿嘧啶＝1∶4(摩爾比)FT/TAU＝1∶4(摩爾比)表25
對患有Walker 256癌肉瘤的大鼠，F(xiàn)T加尿嘧啶或TAU的抗腫瘤效果第10天組別 腫瘤重量 T/C 體重(g±SE) (％) (％)對照組4.16±0.55 100.0100.0FT40+尿嘧啶 3.62±0.35 87.0 62.2FT60+尿嘧啶 2.80±0.28 67.3 39.0FT80+尿嘧啶 1.50±0.58 36.1 -7.5FT40+TAU 2.14±0.31 51.4 93.2FT60+TAU 2.18±0.42 52.4 58.9FT80+TAU 1.77±0.25 42.5 30.3FT劑量＝mg/kg/天(共7天)FT/尿嘧啶＝1∶4(摩爾比)FT/TAU＝1∶4(摩爾比)表26FT+尿嘧啶和FT+TAU給藥后血細(xì)胞計數(shù)第10天WBC 嗜中性白細(xì)胞淋巴細(xì)胞 血小板對照組 11.8±0.81.84±.24 9.9±0.8844±44FT40+尿嘧啶9.7±1.8 0.68±.18 8.5±1.5866±117FT60+尿嘧啶5.9±1.1 0.27±.11 5.6±1.0602±147FT80+尿嘧啶3.6±1.0 0.14±.12 4.3±1.1171±49FT40+TAU 8.2±0.9 0.91±.21 7.0±0.8913±117FT60+TAU 5.3±0.9 0.27±.05 5.0±0.9830±83FT80+TAU 5.6±0.8 0.12±.07 5.4±0.7534±136所有的血細(xì)胞計數(shù)單位為K/μlFT劑量＝mg/kg/天(共7天)FT/尿嘧啶＝1∶4(摩爾比)
FT/PN401＝1∶4(摩爾比)實施例155FU劑量逐步加大并隨后使用三乙酰尿苷改善了治療鼠結(jié)腸癌的效果鼠腫瘤Colon 26是一種結(jié)腸癌，它對5FU有較強(qiáng)的抵抗力。單獨用5FU或5FU加甲酰四氫葉酸的最大耐受劑量能延緩Colon26的生長，但不能使已長成的腫瘤消退，并且也不能完全防止宿主動物的與腫瘤有關(guān)的死亡。
小鼠用于所有試驗的雌性Balb/C小鼠鼠齡約8周，重約20g。在每周一次大量劑給藥×3的方案中，這些小鼠對5FU的最大耐受劑量為100mg/kg。
腫瘤Colon26得自Frederick Cancer Research and DevelopmentCenter(Frederick癌癥研究開發(fā)中心)，并通過以皮下實質(zhì)腫瘤的形式系列移植得以保持。為了研究抗腫瘤效果，將0.3ml的5％糊狀物皮下注射于左肋。用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長和寬，并按照以下公式計算腫瘤的體積體積＝L(mm)×W2(mm2)/2腫瘤生長10天長至100至200mm2，然后將小鼠分成每組10只小鼠，每只含腫瘤的大小的分布約相等。治療期間至少每周檢測一次腫瘤的體積；同時記錄體重。小鼠接收三周大劑量5FU(含或不含TAU)，在5FU最后一次給藥后，對腫瘤大小和體重的最終評價記錄進(jìn)行7天。
藥物將5-氟尿嘧啶溶解于鹽水中并通過腹膜內(nèi)注射給藥，給藥體積0.2ml。
用組織勻漿器，將TAU懸浮于0.75％羥丙基甲基纖維素中，濃度為200mg/ml。5FU給藥后兩小時，每隔8小時TAU以5個劑量給藥。
5FU劑量-反應(yīng)對于小鼠的進(jìn)展性結(jié)腸腫瘤，TAU對5FU劑量逐步增加的解毒作用。組別 腫瘤體積體重 死亡 消退*(mm3) (變化率％)PR CRA.對照組(不用5FU) 3406±263-5％ 3/10 … …B.5FU 100mg/kg1503±267 -7％ 4/10……C.5FU 150mg/kg+TAU691±256-1％ 0/101/10 …D.5FU 175mg/kg+TAU19±15 +2％ 0/109/10 4/10E.5FU 200mg/kg+TAU12±10 -1％ 0/1010/10 8/10*PR＝部分反應(yīng)；腫瘤大小的降低(包括CR)＞50％*CR＝完全反應(yīng)；未檢查到腫瘤腫瘤Colon26癌，起始大小198±14mm35FU腹膜內(nèi)注射，每周1次，共3次TAU5FU給藥后2小時，每隔8小時口服4000mg/kg，共服5次評價5FU最后一次給藥后7天內(nèi)討論當(dāng)5FU劑量提高到175mg/kg/周時，其抗腫瘤效果有很大的改進(jìn)。進(jìn)一步將劑量增加到200mg/kg增加了完全反應(yīng)的機(jī)率。重要的是注意到獲得消退的高發(fā)生率而無顯著毒性，毒性通過體重的降低衡量。5FU在正常最大耐受劑量下(100mg/kg)不能產(chǎn)生消退作用，只能抑制腫瘤生長的50％。
用175或200mg/kg的5FU治療，動物的壽命有實質(zhì)性的延長。腫瘤移植40天內(nèi)，A組和B組的所有動物都死于腫瘤惡化。甚至50天后，D和E組的動物依然存活并保持正常的體重。通過不存在可觸摸的腫瘤組織而確定的完全消退是持久的。在超過90天的隨后觀察中，這些動物的腫瘤不再復(fù)發(fā)。
實施例16用高劑量5-氟尿嘧啶和三乙酰尿苷治療B16黑素瘤小鼠用于本試驗的雌性C57BL/6小鼠鼠齡約8周，重約20g。在每周一次大劑量給藥×3的方案中，這些小鼠對5FU的最大耐受劑量為100mg/kg。
腫瘤鼠B16黑素瘤得自Frederick Cancer Research and DevelopmentCenter(frederick癌癥研究開發(fā)中心)，并通過以皮下實質(zhì)腫瘤的形式系列移植得以保持。為了研究抗腫瘤效果，將0.3ml的5％糊狀物皮下注射于左肋。用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長和寬，并按照以下公式計算腫瘤的體積體積＝L(mm)×W2(mm2)/2腫瘤生長10天長至約300mm2，然后將小鼠分成每組8只小鼠，每只含腫瘤的大小的分布約相等。治療期間至少每周檢測一次腫瘤的體積；同時記錄體重。小鼠接收三周大劑量5FU(含或不含TAU)，在5FU最后一次給藥后，對腫瘤大小和體重的最終評價記錄進(jìn)行7天。
藥物將5-氟尿嘧啶溶解于鹽水中并通過腹膜內(nèi)注射給藥，給藥體積0.4ml。
用組織勻漿器，將TAU懸浮于0.75％羥丙基甲基纖維素中，濃度為200mg/ml。5FU給藥后兩小時，每隔8小時TAU以5個劑量給藥。
TAU和劑量逐步增加的5FU對B16黑素瘤的生長和轉(zhuǎn)移的治療組別 腫瘤重量(g) 癌轉(zhuǎn)移的小鼠 每個肺上的轉(zhuǎn)移灶對照組(無5FU) 5.8+1.1 100％ 7.95FU100mg/kg(MTD) 4.7+1.4 86％5.65FU225mg/kg+TAU 0.9±0.312％0.38腫瘤皮下B16黑素瘤，初始大小344±58mg討論與人黑素瘤一樣，B16黑素瘤一般對化療有相當(dāng)?shù)牡挚沽Α?FU的正常最大耐受劑量100mg/kg對腫瘤的生長和向肺部的自發(fā)轉(zhuǎn)移幾乎不起作用。將每周5FU的劑量逐步提高到225mg/kg，在隨后用TAU降低了5FU的毒性，使腫瘤的生長得到了顯著的抑制，腫瘤向肺部的轉(zhuǎn)移也大大降低。因為黑素瘤一般對氟尿嘧啶無反應(yīng)，觀察到的5FU升高劑量加TAU的顯著活性表明本試驗對5FU不是正選藥物的腫瘤類型是有效的。
實施例17三乙酰尿苷改善了口服5FU和5FU降解抑制劑合用的療效口服5-氟尿嘧啶(5FU)的生物利用度低而不穩(wěn)定，因為5FU被二氫嘧啶脫氫酶(DPD)降解。此酶抑制劑的使用保證了5FU的口服給藥(Baccanari等，Proc.Nat.Acad.Sci.9011064-11068，1994)。因為非甲基化嘧啶核苷的?；苌锟诜行В鼈兣c口服5FU合用導(dǎo)致了療效和治療指數(shù)的提高。對某些癌癥的完全口服治療有降低醫(yī)療費用和方便的優(yōu)點。
口服5FU結(jié)合DPD的抑制劑的目的之一是提供類似連續(xù)靜脈輸液的5FU給藥方式。這包括每天(或更頻繁)使用5FU加DPD抑制劑?；蛘撸皖l率(如每周)使用大劑量的5FU。下面的試驗的設(shè)計目的是為了確定每周口服高劑量5FU并隨后口服TAU對抗腫瘤效果的影響。5-乙炔基尿嘧啶，一種強(qiáng)的、不可逆性DPD抑制劑，被用來保證5FU的口服給藥。
小鼠雌性Balb/C小鼠鼠齡約8周，重約20g。
Colon26得自Frederick Cancer Research and DevelopmentCenter(frederick癌癥研究開發(fā)中心)，并通過以皮下實質(zhì)腫瘤的形式系列移植得以保持。為了研究抗腫瘤效果，將0.3ml的5％糊狀物皮下注射于左肋。用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長和寬，并按照以下公式計算腫瘤的體積體積＝L(mm)×W2(mm2)/2腫瘤生長10天，長至100至200mm2，然后將小鼠分成每組10只小鼠的組，每只含腫瘤的大小的分布約相等。治療期間至少每周檢測一次腫瘤的體積；同時記錄體重。小鼠接收三周大劑量5FU(含或不含TAU)，在5FU最后一次給藥后，對腫瘤大小和體重的最終評價記錄進(jìn)行7天。
藥物將5-乙炔基尿嘧啶溶解在鹽水中并在5FU給藥1小時前，給小鼠口服0.2ml。
將5-氟尿嘧啶溶解于鹽水中并通過管飼法給藥，給藥體積0.2ml。
用組織勻漿器，將TAU懸浮于0.75％羥丙基甲基纖維素中，濃度為200mg/ml。5FU給藥后兩小時，每隔8小時TAU以5個劑量給藥。
用隨后使用TAU緩解5FU的劑量提升口服5FU和5-乙炔基尿嘧啶組別 腫瘤體積 體重 消退(mm3) (變化率％)CR PR對照組1230±154 -14 0/10 0/10EU+5FU 20mg/kg周×2 319±79 -6 0/10 2/10EU+5FU 50mg/kg+TAU周×2 15±11-3 4/10 5/10EU+5FU 2mg/kg天×9924±98 -7 0/10 0/10腫瘤Colon 26癌，初始大小82±9mm3EU+5FU5-乙炔基尿嘧啶(EU)2mg/kg 5FU給藥前1小時口服TAU5FU給藥后2小時，每隔8小時口服4000mg/kg×5評價第一次使用治療劑量后14天(腫瘤移植后第24天)消退CR＝完全消退；PR＝部分(＞50％)消退隨后口服TAU保證了5 FU劑量的逐步提升結(jié)合5FU降解抑制劑的合用。5FU的最大耐受劑量在DPD抑制劑存在時降低，因為5FU的廓清被抑制。一般來說，DPD降解了90％以上的5FU，使它們未進(jìn)入細(xì)胞核苷富集處。因此，5FU降解的抑制可能大大增加了5FU的毒性。每周給藥3次的方案中，用5-乙炔基尿嘧啶預(yù)處理小鼠對5FU的最大耐受劑量約是20mg/kg。隨后使用TAU使5FU的劑量升高至50mg/kg/周，而其抗腫瘤療效也隨之升高。每天使用較低劑量的5FU(9天內(nèi)使用2mg/kg/天)，這類似于5FU連續(xù)輸液，它對腫瘤生長的抑制不如5FU每周給藥方案有效。
實施例18乙氧羰基尿苷的合成將2.64mmol(1.5當(dāng)量)的氯甲酸乙酯滴加到0.5g 2’，3’-異亞丙基尿苷(1.76mmol)在10ml嘧啶的冰冷溶液中，加入時不斷攪拌?？梢园逊磻?yīng)加熱至室溫(25℃)下進(jìn)行，并整夜攪拌(18小時)直到TLC(9∶1；氯仿/甲醇)顯示出所有的起始物質(zhì)都轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N單一產(chǎn)品。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法在高真空下除去溶劑，得到一種淡米色漿體，此漿體被用于下面的脫蛋白步驟。
把漿體溶解在15ml的50％的甲酸中，在60-70℃下加熱2小時，直到TLC顯示出足量的異亞丙基已完全被除去。在高真空下蒸發(fā)除去水和甲酸，得到一種淡米色-粉色漿體，然后把它加入硅膠柱中，并用95∶5的氯仿/甲醇洗脫。收集、合并并蒸發(fā)含有產(chǎn)品的組分，得到一種略微粉紅色的玻璃狀產(chǎn)品。
上述內(nèi)容意在闡述本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。在不背離本發(fā)明真實精神和范圍的情況下本發(fā)明可以有各種變形和改進(jìn)。
權(quán)利要求
1.一種治療癌癥的方法，該方法包括(a)以大于正常最大耐受劑量的至少1.5倍使用嘧啶核苷類似物，和(b)使用藥學(xué)上有效量的非甲基化嘧啶核苷的?；苌铩?br> 2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嘧啶核苷類似物選自5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-FU藥物前體，包括喃氟啶和5’-脫氧氟尿苷、氟尿苷、2’-脫氧氟尿苷、氟尿苷的藥物前體衍生物或2’-脫氧氟尿苷的藥物前體衍生物、氟胞嘧啶、三氟-甲基-2’-脫氧尿苷、阿糖胞嘧啶、阿糖胞嘧啶藥物前體、環(huán)胞苷、5-氮雜-2’-脫氧胞苷、阿糖5-氮雜胞嘧啶、6-氮雜胞苷、N-膦酰基乙?；?L-天冬氨酸(PALA)、吡唑呋喃菌素、6-氮雜尿苷、阿扎利賓、胸苷以及3-脫氮雜尿苷。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嘧啶核苷類似物是5-氟嘧啶或5-氟嘧啶核苷類似物，而所述非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物是尿苷、胞苷或脫氧尿苷的?；苌铩?br> 4.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述5-氟嘧啶或5-氟嘧啶核苷類似物選自5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶藥物前體，包括喃氟啶和5’-脫氧氟尿苷、氟尿苷、2’-脫氧氟尿苷、氟尿苷的藥物前體衍生物、2’-脫氧氟尿苷的藥物前體衍生物、5-氟胞嘧啶，5-氟胞苷或5-氟胞苷的藥物前體衍生物。
5.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述5-氟嘧啶或5-氟嘧啶核苷類似物是5-氟尿嘧啶。
6.權(quán)利要求5所述的方法，其中所述給藥步驟(a)包括使用大劑量即900至2400mg/m2的5-氟尿嘧啶，而所述給藥步驟(b)包括在步驟(a)2至24小時后，使用1至10g的非甲基化嘧啶核苷的?；苌铮渲胁襟E(a)和(b)重復(fù)3-6次。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中步驟(a)每次重復(fù)的時間間隔是4至14天。
8.權(quán)利要求5所述的方法，其中所述給藥步驟(a)包括連續(xù)4至5天內(nèi)每天使用大劑量即600至1000mg/m2的5-氟尿嘧啶，而所述給藥步驟(b)包括在每個步驟(a)2至12小時后使用1至10g的非甲基化嘧啶核苷的?；苌?。
9.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嘧啶核苷類似物為N-膦?；阴；?L-天冬氨酸(PALA)、吡唑呋喃菌素、6-氮雜尿苷、阿扎利賓、三氟甲基-2’-脫氧尿苷或3-脫氮雜尿苷，并且所述非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物是尿苷或胞苷的?；苌铩?br> 10.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述非甲基化嘧啶核苷的?；苌锸悄蜍?、胞苷、脫氧胞苷或脫氧尿苷的?；苌?。
11.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述非甲基化嘧啶核苷的?；苌锸侨阴Ｄ蜍铡?br> 12.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述非甲基化嘧啶核苷的?；苌锸且已豸驶蜍?。
13.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述非甲基化嘧啶核苷的?；苌锸侨阴；铡?br> 14.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物是二乙?；撗醢?。
15.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嘧啶核苷類似物是胞苷的抗腫瘤類似物，而且所述非甲基化嘧啶核苷的酰基衍生物是脫氧胞苷的?；苌?。
16.權(quán)利要求15所述的方法，其中所述胞苷的抗腫瘤類似物是阿糖胞嘧啶或其藥物前體、環(huán)胞苷、5-氮雜-2’-脫氧胞苷、阿糖5-氮雜胞嘧啶或6-氮雜胞苷。
17.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嘧啶核苷類似物是尿苷類似物，所述非甲基化嘧啶核苷的?；苌锸悄蜍?、脫氧尿苷或胞苷的酰化衍生物，而所述給藥步驟(b)也包括使用一種尿苷磷酸化酶的抑制劑。
18.權(quán)利要求17所述的方法，其中所述磷酸化酶抑制劑選自芐基無環(huán)尿苷、芐氧基芐基無環(huán)尿苷、氨甲基-芐基無環(huán)尿苷、氨甲基-芐氧基芐基無環(huán)尿苷、羥甲基-芐基無環(huán)尿苷、羥甲基-芐氧基芐基無環(huán)尿苷、2，2’-脫水-5-乙基尿苷、5-芐基巴比妥酸酯、5-芐氧基芐基巴比妥酸酯、5-芐氧基芐基-1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸酯、5-芐氧基芐基乙?；?1-[(1-羥基-2-乙氧基)甲基]巴比妥酸酯及5-甲氧芐基乙?；鶡o環(huán)巴比妥酸酯。
19.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述非甲基化嘧啶核苷的?；苌锸前栈蛎撗醢盏孽；苌?，而所述給藥步驟(b)也包括使用胞苷脫氨基酶的抑制劑。
20.權(quán)利要求19所述的方法，其中所述胞苷脫氨基酶的抑制劑選自四氫尿苷或四氫-2’-脫氧尿苷。
21.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述非甲基化嘧啶核苷的酰化衍生物是尿苷、胞苷或脫氧胞苷的酰化衍生物，而所述給藥步驟(b)也包括使用核苷轉(zhuǎn)移的抑制劑。
22.權(quán)利要求21所述的方法，其中所述核苷轉(zhuǎn)移的抑制劑選自雙醋嗪、潘生丁、丙磺舒、利多氟嗪或硝基芐基硫肌苷。
23.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給藥步驟(b)也包括使用增強(qiáng)造血作用的試劑。
24.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給藥步驟(b)也包括使用能提高細(xì)胞對核苷的攝入及磷酸化的化合物。
25.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述給藥步驟(a)也包括使用AZT。
26.權(quán)利要求1所述的方法，其中氟化嘧啶與一種5-氟尿嘧啶效力的生化調(diào)節(jié)劑聯(lián)合給藥。
27.權(quán)利要求26所述的方法，其中所述調(diào)節(jié)劑是嘌呤生物合成的抑制劑，抗葉酸劑、嘧啶生物合成的抑制劑或5-氟尿嘧啶的降解抑制劑。
28.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述嘌呤生物合成的抑制劑是甲基巰基嘌呤核糖核苷。
29.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述抗葉酸劑是氨甲喋呤或曲美沙特。
30.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述嘧啶生物合成的抑制劑是PALA、brequinar、阿西維辛或6-氮雜尿苷。
31.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述5-氟尿嘧啶降解的抑制劑是二氫嘧啶脫氫酶的抑制劑。
32.權(quán)利要求31所述的方法，其中所述二氫嘧啶脫氫酶的抑制劑是5-乙炔基尿嘧啶、溴乙烯基尿嘧啶、CDHP、尿嘧啶、胸苷、胸腺嘧啶或芐氧基芐基尿嘧啶。
33.一種治療癌癥的方法，該方法包括(a)使用二氫嘧啶脫氫酶的抑制劑；(b)使用5-氟嘧啶或5-氟嘧啶核苷類似物；(c)使用藥學(xué)上有效量的非甲基化嘧啶核苷的?；苌?。
34.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述5-氟嘧啶或5-氟嘧啶核苷類似物選自5-氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶藥物前體包括喃氟啶和5’-脫氧氟尿苷、氟尿苷、2’-脫氧氟尿苷、氟尿苷的藥物前體衍生物、2’-脫氧氟尿苷的藥物前體衍生物、5-氟胞嘧啶、5-氟胞苷或5-氟胞苷的藥物前體衍生物。
35.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述二氫嘧啶脫氫酶的抑制劑是5-乙炔基尿嘧啶、溴乙烯基尿嘧啶、氰基二氫吡啶、尿嘧啶、胸苷、胸腺嘧啶或芐氧基芐基尿嘧啶。
36.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述給藥步驟(a)在給藥步驟(b)之前或與其同時進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明公開了用于化療劑和抗病毒劑所致的毒性的治療和預(yù)防的化合物、組合物及方法。所公開的是非甲基化嘧啶核苷的酰化衍生物。這些化合物能緩解接受了抗病毒或抗腫瘤化療的動物的造血系統(tǒng)受到的損害。
文檔編號C07H19/06GK1192149SQ96195929
公開日1998年9月2日 申請日期1996年6月6日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月7日
發(fā)明者R·W·范波爾斯特爾, M·K·巴馬特 申請人:普羅神經(jīng)細(xì)胞有限公司